09e01050 PDF

PERBEDAAN DAYA HAMBAT KITOSAN BLANGKAS
(Lymulus polyphemus) BERMOLEKUL TINGGI DENGAN

PELARUT GLISERIN DAN VCO (Virgin Coconut Oil)
TERHADAP Fusobacterium nucleatum ATCC 25586
(PENELITIAN IN-VITRO)
SKRIPSI
Diajukan untuk memenuhi tugas dan melengkapi
syarat guna memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Gigi
Oleh :
FANIA MAULANI RAHMY

NIM : 050600096
FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
MEDAN
2009
Fania Maulani Rahmy : Perbedaan Daya Hambat Kitosan Blangkas (Lymulus polyphemus) Bermolekul Tinggi
Dengan Pelarut Gliserin Dan VCO (Virgin Coconut Oil) Terhadap Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 (Penelitian
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
LEMBAR PENGESAHAN
SKRIPSI INI TELAH DISETUJUI UNTUK DISEMINARKAN PADA

TANGGAL 19 MARET 2009
OLEH :
Pembimbing
Prof. Trimurni Abidin,drg.,M.Kes.,Sp.KG(K)

NIP : 130 702 230
Mengetahui
Ketua Departemen Ilmu konservasi Gigi
Fakultas Kedokteran Gigi
Universitas Sumatera Utara
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
NIP : 130 702 230
PERNYATAAN PERSETUJUAN
Skripsi berjudul
PERBEDAAN DAYA HAMBAT KITOSAN BLANGKAS (Lymulus

polyphemus) BERMOLEKUL TINGGI DENGAN PELARUT GLISERIN DAN
VCO (Virgin Coconut Oil) TERHADAP Fusobacterium nucleatum ATCC 25586
(PENELITIAN IN-VITRO)
Yang dipersiapkan dan disusun oleh :
FANIA MAULANI RAHMY

NIM : 050600096
Telah dipertahankan didepan tim penguji

pada tanggal 19 Maret 2009
dan dinyatakan telah memenuhi syarat untuk diterima
Susunan Tim Penguji Skripsi
Ketua Penguji

NIP : 130 702 230
Anggota tim penguji lain
Cut Nurliza,drg.,M.Kes Wandania Farahanny,drg

NIP : 131 123 786 NIP : 132 306 493
Medan, 19 Maret 2009

Departemen Ilmu Konservasi Gigi
Ketua,
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Prof. Trimurni Abidin,drg., M.Kes., Sp.KG(K)
NIP : 130 702 230
Departemen Ilmu Konservasi Gigi
Tahun 2009
Fania Maulani Rahmy
Perbedaan Daya Hambat Kitosan Blangkas (Lymulus polyphemus)
Bermolekul Tinggi Dengan Pelarut Gliserin dan VCO (Virgin Coconut Oil)
Terhadap Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 (Penelitian In-Vitro)
xii + 70 halaman
Menurut Sundqvist (1992) Fusobacterium nucleatum merupakan salah satu
spesies yang paling umum diisolasi dari infeksi endodontik. Terapi endodontik
bertujuan untuk mengeliminasi mikroorganisme yang menginfeksi saluran akar.
Penggunaan bahan dressing yang semakin berkembang memberikan kesempatan
untuk mengaplikasikan material yang lebih aman dan tidak menimbulkan efek
samping terhadap jaringan. Karena itu, dikembangkan suatu material biologi sebagai
bahan dressing yang bersifat alami, biodegradabel, biokompatibel dan memiliki efek
antibakteri yakni kitosan blangkas.
Gomes et al., 2002 menyatakan bahwa peran pelarut viscous ketika
dimanipulasi dengan bahan dressing Ca(OH)2 diantaranya adalah gliserin lebih baik
dalam menciptakan konsistensi pasta sehingga lebih mudah dimasukkan ke dalam
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
saluran akar, sedangkan dengan pelarut oily lebih bermakna dalam membentuk zona
hambat terhadap bakteri. Atas dasar inilah peneliti mengaplikasikan pelarut gliserin
(viscous) dan VCO (oily) dengan kitosan blangkas untuk mengetahui efektifitas
keduanya sebagai antibakteri terhadap Fusobacterium nucleatum.
Penelitian ini dilakukan untuk membedakan daya hambat kitosan blangkas
dengan pelarut gliserin dan VCO pada konsentrasi yang sama yaitu 1%; 0,5% dan
0,25%. Metode yang digunakan ialah Drop Plate Miles Misra, yaitu dengan
menanam bahan coba pada media perbenihan sehingga dapat dihitung jumlah bakteri
yang hidup pada media tersebut. Sebanyak 40 sampel dari bahan coba kitosan
blangkas 1 gr; 0,5gr dan 0,25gr diencerkan dengan asam asetat 1%, lalu ditambahkan
dengan pelarut gliserin dan VCO. Selanjutnya, bahan tersebut dicampurkan bersama
biakkan murni Fusobacterium nucleatum. Bahan coba hasil pencampuran ditanam
pada media Mueller Hinton Agar dan diinkubasi pada inkubator CO2 dengan suhu
37oC selama 24 jam.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa hanya kitosan blangkas pada konsentrasi
1% dan 0,5% dengan pelarut gliserin yang memiliki daya hambat terhadap bakteri
F.nucleatum. Bahan ini terbukti lebih efektif dalam menghambat Fusobacterium
nucleatum daripada bahan coba kitosan blangkas dengan pelarut VCO yang tidak
mampu menghambat pertumbuhan bakteri pada ketiga konsentrasi yang diuji.
Daftar Rujukan : 50 ( 1986-2009 )
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis ucapkan kehadirat Allah SWT yang telah memberikan
segala limpahan rahmat, karunia serta kekuatan bagi penulis sehingga skripsi ini telah
disusun dengan sebaik mungkin sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan gelar
Sarjana Kedokteran Gigi.
Rasa terima kasih secara khusus penulis tujukan kepada kedua orang tua
tersayang yaitu Papa (H. Erry Achyar) dan Mama (Nelma) yang selalu mendoakan,
menyayangi, membimbing, memberi semangat serta motivasi dan mendukung secara
moril dan materil kepada penulis sehingga penulis dapat mengecap masa pendidikan
hingga selesai di Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara Medan dan
menyelesaikan skripsi ini dengan baik.
Penulis mengucapkan terima kasih kepada keluarga yang telah banyak
membantu, baik moril maupun materil atas penyelesaian studi dan skripsi ini. Penulis
juga mengucapkan rasa terima kasih yang tidak terhingga atas dukungan, perhatian,
dan semangat dari kakakku Vidya Rahmy dan kedua adikku Rezky Muhammad Arief
dan Randi Wiranata.

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Dalam penulisan skripsi ini penulis juga telah mendapat banyak bimbingan,
pengarahan, saran-saran dan bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dengan
penuh ketulusan dan kerendahan hati penulis ingin mengucapkan terima kasih
kepada:
1. Prof. H. Ismet D. Nasution, drg., Sp.Pros(K)., Ph.D selaku Dekan Fakultas
Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara.
2. Prof. Trimurni Abidin,drg.,M.Kes.,Sp.KG(K) selaku Ketua Departemen Ilmu
Konservasi Gigi dan dosen pembimbing yang telah meluangkan waktu, tenaga
dan pikiran untuk membimbing penulis baik dalam studi dan penulisan skripsi
ini sehingga dapat diselesaikan dengan baik.
3. Seluruh staf pengajar dan pegawai khususnya di Depertemen Ilmu Konservasi
Gigi Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan bantuan selama
penyelesaian skripsi ini.
4. Ariyani, drg selaku dosen pembimbing akademik yang telah membimbing
penulis selama menjalani pendidikan di Fakultas Kedokteran Gigi Universitas
Sumatera Utara.
5. Dr. Wahyu Hidayatiningsih S.Si., M.Kes selaku peneliti pada Laboratorium
Tropical Disease Centre, Universitas Airlangga yang telah banyak membantu
peneliti terutama dalam kegiatan penelitian di laboratorium.
6. Dr. Harry Agusnar, drs., MSc., MPhil selaku Kepala Bagian Laboratorium
Pusat Penelitian FMIPA USU atas bimbingannya dalam penelitian ini.
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
7. Dr. Dwi Suryanto, M.Si selaku Kepala Bagian Laboratorium Biologi FMIPA
USU yang telah banyak membantu dan memberi masukan sehingga skripsi ini
dapat terselesaikan dengan baik
8. Teman-teman seperjuangan Jilly, Defrina, Anita, Mia, Anna, Roza, Lia, Riris,
Putri, Bunga, Sri, Anggun, Mira, Yulia, Ulfa, Nuni, Pipit, Ririn dan semua
teman-teman stambuk 05 yang tidak dapat disebutkan satu persatu, terima
kasih atas segala motivasi, dorongan dan semangat persaudaraan yang telah
terjalin selama ini
9. Terkhusus untuk temen-teman U-36; Fresty, Darnita, Ninna, Onna, Tiwi,
Ratih, Iyang, Viska, Vina, Neysia, K.Jannah, K.zee, Huda, Syafiqa terima
kasih atas segala dukungan dan semangat yang telah diberikan selama ini.
10. Kepada senior penulis Feby SKG, Sanny SKG, drg. Rida, Arini SKG, drg.
Darmayanti dan senior-senior lainnya yang telah banyak membantu. Untuk
adik-adik junior stambuk 06, 07 dan 08 yang telah banyak memberi semangat
kepada penulis.
Akhirnya terima kasih penulis kepada semua pihak yang telah membantu baik
secara langsung maupun tidak, mudah-mudahan segala bantuannya menjadi amal
ibadah di sisi Allah SWT dan penulis memohon maaf jika selama proses penyelesaian
skripsi ini terdapat kesalahan baik yang disengaja maupun tidak.
Medan, 19 Maret 2009

Penulis,
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
(Fania Maulani Rahmy)
NIM : 050600096
DAFTAR ISI
Halaman
HALAMAN JUDUL ................................................................................. i
HALAMAN PERSETUJUAN ................................................................... ii
HALAMAN TIM PENGUJI SKRIPSI ....................................................... iii
KATA PENGANTAR ............................................................................... iv
DAFTAR ISI ............................................................................................. vii
DAFTAR TABEL ..................................................................................... ix
DAFTAR GAMBAR ................................................................................. x
DAFTAR LAMPIRAN .............................................................................. xii
BAB 1 PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang ...................................................................... 1
1.2 Perumusan Masalah ............................................................... 6
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
1.3 Tujuan Penelitian ................................................................... 6
1.4 Manfaat Penelitian ................................................................. 7
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Mikrobiologi saluran akar ...................................................... 8
2.2 Fusobacterium nucleatum sebagai salah satu bakteri yang
terdapat pada infeksi endodontik ................................................. 10
2.3 Kitosan sebagai bahan dressing saluran akar .......................... 14
2.4 Pelarut (vehicle)..................................................................... 22
BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL PENELITIAN............................. 28
BAB 4 METODOLOGI PENELITIAN

4.1 Rancangan Penelitian............................................................. 32
4.2 Sampel dan besar sampel ....................................................... 32
4.3 Variabel Penelitian ............................................................... 33
4.4 Defenisi operasional .............................................................. 35
4.5 Alat dan Bahan Penelitian ...................................................... 37
4.6 Tempat dan waktu penelitian ................................................. 39
4.7 Prosedur pengambilan dan pengumpulan data ........................ 39
BAB 5 HASIL PENELITIAN ................................................................. 46
BAB 6 PEMBAHASAN ......................................................................... 52
BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN .................................................... 58
DAFTAR RUJUKAN ................................................................................ 59
LAMPIRAN
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
DAFTAR TABEL
Tabel Halaman
1. Bakteri yang diisolasi dari saluran akar gigi dengan lesi apikal.......... 10
2. Perhitungan jumlah bakteri untuk bahan coba kitosan blangkas

dengan pelarut gliserin ...................................................................... 48
3. Perhitungan jumlah bakteri untuk bahan coba kitosan blangkas

dengan pelarut VCO.......................................................................... 50
4. Perhitungan jumlah bakteri untuk kontrol gliserin 100% dan

VCO 100% ....................................................................................... 50
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
DAFTAR GAMBAR
Gambar Halaman
1. Gambaran mikroskop elektron F. nucleatum tampak berbentuk batang

menyerupai filamen dengan tepi ujung yang tajam ............................... 12
2. Struktur bangun chitin dan kitosan .................................................... 16
3. Lymulus polyphemus ........................................................................ 18
4. Struktur kimia gliserin ....................................................................... 24
5. VCO (Virgin Coconut Oil) komersil .................................................. 25
6. Media Mueller Hinton Cair ............................................................... 38
7. Kitosan Blangkas (Trimurni et al.,2006)............................................ 38
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
8. VCO komersil (Laurica, Indonesia) ................................................... 38
9. Gliserin ............................................................................................. 38
10. Autoclave (Tomy, Japan)................................................................... 39
11. Mikropipet dan tips(Gilson, France) ................................................. 39
12. Inkubator CO2 (Sanyo, Japan)........................................................... 40
13. Kaca pembesar (Ootsuka ENV-CL, Japan) ........................................ 41
14. Tabung gas CO2 (Japan) .................................................................. 41
15. Biakan Fusobacterium nucleatum pada petri dish yang telah tumbuh
subur ................................................................................................. 41
16. Electronic balance (Ohyo JP2 6000, Japan) ...................................... 42
17. Vorteks (Iwaki TM-100, Japan)......................................................... 42
18. Lar. Kitosan Blangkas 0,5% .............................................................. 46
19. Hasil peletakkan tetesan kitosan blangkas 1% dan 0,5% dengan

pelarut gliserin pada media padat setelah diinkubasi selama 24 jam... 47
20. Hasil peletakkan tetesan kitosan blangkas 0,25% dengan

pelarut gliserin pada media padat setelah diinkubasi selama 24 jam... 47
21. Hasil penanaman bahan coba kitosan blangkas 1% dengan pelarut

VCO pada media MHA setelah diinkubasi 24 jam ............................. 49
22. Hasil peletakkan tetesan kitosan blangkas 1% dan 0,5% dengan

pelarut VCO pada media padat setelah diinkubasi selama 24 jam ...... 49
23. Hasil peletakkan tetesan kitosan blangkas 0,25% dengan

pelarut VCO pada media padat setelah diinkubasi selama 24 jam ...... 50
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
DAFTAR LAMPIRAN
Halaman
1. Skema alur pikir............................................................................. 64
2. Skema alur penelitian..................................................................... 67
3. Data hasil perhitungan jumlah bakteri pada penentuan perbedaan

daya hambat kitosan blangkas 1%; 0,5% dan 0,25% dengan
pelarut gliserin dan VCO serta kontrol pelarut gliserin 100% dan
VCO 100%..................................................................................... 70
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
BAB 1
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Masalah
Semua penyakit endodontik baik pada pulpa maupun periapeks berhubungan
langsung maupun tidak langsung terhadap keberadaan mikroorganisme. Pintu
gerbang bagi bakteri untuk memasuki pulpa paling sering terjadi melalui karies.1
Infeksi bakteri pada pulpa menyebabkan kerusakan pulpa dan selanjutnya akan
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
merangsang respon sel inflamasi serta penghancuran tulang pada bagian periapeks.
Beberapa bukti telah menunjukkan bahwa infeksi saluran akar merupakan infeksi
polimikroba yang didominasi oleh bakteri anaerob.2 Menurut Sundqvist (1992), pada
gigi yang mengalami nekrosis pulpa dan lesi periapikal, 90% bakteri yang diisolasi
merupakan bakteri anaerob dengan jenis spesies yang berbeda.3
Pada penelitian Sundqvist et al, (1989) dan Gomes et al, (2004) menunjukkan
bahwa Prevotella intermedia dan Fusobacterium nucleatum merupakan bakteri gram
negatif yang ditemukan pada penyakit pulpa dan periapikal.4 Begitu juga pada
penelitian Bolstad et al. (1996), Dahln dan Mller (1992) dan Moraes et al. (2002)
menyatakan bahwa Fusobacterium nucleatum merupakan bakteri yang sering
ditemukan pada infeksi endodonti.5
Selama proses infeksi, Fusobacterium nucleatum berperan sebagai penghasil
asam butirat dari proses metabolisme dan mengubah treonin menjadi asam
propionat.6 Asam butirat, propionat dan ion ammonium yang dihasilkan oleh
Fusobakterium nucleatum dapat menghambat proliferasi fibroblast gingiva. Selain
itu, asam butirat juga berperan sebagai bahan yang dapat mengiritasi jaringan.
F.nucleatum juga mampu mengakumulasi glukosa untuk membentuk glukan
interseluler yang berguna sebagai sumber energi ketika jumlah glukosa dalam
keadaan terbatas. Hal ini memungkinkan bakteri lain seperti Porphyromonas
gingivalis beragregasi dengan F. nucleatum untuk menghasilkan enzim proteolitik.7
Keberhasilan perawatan endodonti secara langsung dipengaruhi oleh
kemampuan untuk mengeliminasi miroorganisme yang terdapat pada saluran akar

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
yang terinfeksi.8 Preparasi biomekanikal dan irigasi saluran akar sangat penting untuk
mengurangi jumlah bakteri selama perawatan endodonti. Hal ini juga perlu ditunjang
dengan pemberian bahan dressing karena akan sangat membantu untuk
mengeliminasi bakteri yang masih tertinggal setelah dilakukan preparasi atau
setidaknya menghambat infeksi berulang pada saluran akar diantara kunjungan.9
Bahan dressing yang paling umum digunakan saat ini ialah kalsium
hidroksida (Ca(OH2)). Bahan ini digunakan sebagai dressing selama kunjungan terapi
endodonti dan memiliki sifat antibakterial yang sangat baik. Sjogren et al., (1991)
menyatakan bahwa sifat antibakteri kalsium hidroksida ini disebabkan oleh
penguraian ion-ion Ca2+ dan OH-.10 Namun, menurut Tam et al., (1989) kalsium
hidroksida juga memiliki beberapa kelemahan, diantaranya kekuatan kompresif yang
rendah sehingga dapat berpengaruh pada kestabilan kalsium hidroksida terhadap
cairan di dalam saluran akar yang akhirnya dapat melarutkan bahan dressing.11 Selain
itu, Haapasalo et al dan Portenier et al melaporkan bahwa dentin dapat meng-
inaktifkan aktifitas antibakteri kalsium hidroksida. Begitu juga pada penelitian Peters
et al., 2002 menunjukkan jumlah saluran akar yang positif mengandung bakteri
meningkat setelah perawatan saluran akar dengan kalsium hidroksida.12 Oleh karena
itu, sangat diharapkan berkembangnya aplikasi bahan dressing yang berasal dari alam
dan lebih kompatibel terhadap jaringan, namun tetap memiliki kemampuan
antibakteri yang sama dengan bahan non-biologi.
Bahan alami yang sedang berkembang saat ini dan dapat digunakan sebagai
alternatif bahan dressing adalah kitosan blangkas. Kitosan (poly--1,4-glucosamine)

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
merupakan biopolymer alami yang mempunyai rantai linier dengan rumus kimia
(C6H11NO4)n dan merupakan turunan utama kitin. Kitosan pertama kali ditemukan
oleh C. Rouget pada tahun 1859 dan merupakan produk dari proses deasetilasi kitin
yang berasal dari ekstrak kulit hewan laut yang keras seperti udang, rajungan,
kepiting dan ditemukan juga pada dinding sel jamur jenis Zygomycetes serta kulit
serangga.13-14
Kitosan blangkas merupakan hasil proses deasetilasi kitin yang diperoleh dari
cangkang udang blangkas. Berdasarkan penelitian Trimurni et al., 2006, kitosan
blangkas memiliki derajat deasetilisasi dan Berat Molekul (BM) yang tinggi yakni
84,20% dan 893.000. Kitosan mempunyai derajat kereaktifan yang tinggi disebabkan
adanya gugus amino bebas sebagai gugus fungsional. Sifat-sifat kitosan dihubungkan
dengan adanya gugus amino dan hidroksil yang terikat. Gugus-gugus tersebut
menyebabkan kitosan dapat berperan sebagai amino pengganti (amino exchanger).
Selain itu, kitosan juga dapat berinteraksi dengan zat-zat organik lainnya, seperti
protein sehingga kitosan relatif banyak digunakan dalam bidang kesehatan. 13
Penggunaan kitosan di bidang kedokteran gigi telah diteliti oleh Sapeli et al.
(1986) dan Muzzarelli et al. (1989) yang menggunakan kitosan dalam bentuk powder
dan membran untuk perawatan saku gigi dengan poket periodontal infraboni yang
luas dan dalam prosedur bedah mukogingiva. Aplikasi kitosan berat molekul rendah
dilaporkan dalam penelitian Tarsi et al. (1997), dimana kitosan dengan berat molekul
rendah dapat menghambat aktivitas Streptococcus mutans yang berperan dalam
adsorpsi hidroksiapatit dan mengurangi jumlah kolonisasi Streptococcus mutans

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
dalam rongga mulut. Trimurni et al., (2006) secara in-vivo pada tikus wistar berhasil
meneliti penggunaan kitosan blangkas (893.000 Mv) dan kitosan komersil (870.000)
sebagai bahan pembanding pada perawatan kaping pulpa. Dari hasil penelitian
tersebut menunjukkan keduanya lebih mampu menstimulasi pembentukan dentin
reparatif dan dengan jumlah sel-sel inflamasi yang lebih sedikit dibandingkan dengan
kontrol yaitu kalsium hidroksida.13
Pelarut terbagi atas tiga jenis yaitu larutan aqueous, viscous dan oily.15 Pelarut
gliserin merupakan jenis pelarut viscous yang umum digunakan di bidang kedokteran
gigi, baik digunakan sendiri maupun dikombinasikan dengan bahan lain.16 Gliserin
ditemukan pada tahun 1779 oleh Schele, yang berasal dari proses saponifikasi minyak
zaitun. Gliserin merupakan jenis alkohol dengan rumus kimia C3H5[OH]3, bersatu
dengan asam lemak seperti palmitat, oleat, stearat untuk menghasilkan trigliserida
atau lemak. Gliserin sifatnya jernih, tidak berwarna, tidak berbau, cair seperti sirup,
manis, dapat larut dengan air dan alkohol dan akan sedikit panas jika dirasa.17
VCO (virgin coconut oil) merupakan minyak yang dihasilkan dari buah
kelapa segar. Berbeda dengan minyak kelapa biasa, VCO dihasilkan tidak melalui
penambahan bahan kimia ataupun proses yang melibatkan panas yang tinggi. VCO
mengandung banyak asam lemak rantai menengah (Medium Chain Fatty
Acid/MCFA). MCFA memiliki sifat yang mudah diserap oleh mitokondria sehingga
mampu meningkatkan metabolisme tubuh. MCFA yang paling banyak terkandung
dalam VCO adalah asam laurat (CH3(CH2)10COOH).18
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Asam laurat yang terkandung pada VCO terbukti memiliki daya antibakteri,
antivirus, antijamur dan antiprotozoa. Asam laurat pertama kali ditemukan oleh John
J Kabra pada tahun 1960an. Asam laurat mampu membunuh berbagai macam jenis
mikroba yang membran selnya berasal dari asam lemak (lipid coated
microorganism). Sifat asam laurat dapat melarutkan membran virus berupa lipid
sehingga akan mengganggu kekebalan virus dan membuat virus inaktivasi.19
Pada penelitian Banurea dan Trimurni (2008) kitosan blangkas bermolekul
tinggi yang digunakan ialah dalam bentuk powder20, namun pemakaian bahan powder
di klinik sulit dalam manipulasi ke dalam saluran akar secara klinis. Oleh karena itu,
dalam penelitian ini akan diuji daya hambat kitosan blangkas yang dimanipulasi
dengan pelarut gliserin dan VCO pada konsentrasi yang sama yaitu 1%; 0,5% dan
0,25%.
Pemilihan konsentrasi ini didasarkan oleh beberapa penelitian sebelumnya
yang menunjukkan bahwa kitosan sudah memiliki efek antibakteri pada konsentrasi
yang cukup rendah. Pada penelitian Fernandes et al., 2008 yang menggunakan
kitosan bermolekul tinggi dan sedang pada konsentrasi 0,5% terbukti efektif
membunuh bakteri Staphylococcus aureus dan E. Coli.21 Begitu pula pada penelitian
Sano et al., 2003 yang membuktikan bahwa pada konsentrasi 0,5%, kitosan mampu
mengurangi jumlah pembentukan plak dan kandungan bakteri Streptococcus mutans
alam saliva.22 Pada penelitian lainnya, menurut Ramisz et al., 2005 kitosan mampu
menghambat pertumbuhan bakteri Escherichia coli pada konsentrasi 1%.23
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Pada penelitian ini bahan coba dan kultur bakteri diinkubasi pada suhu 37o C
karena pada suhu tersebut adalah suhu optimal untuk pertumbuhan F.nucleatum dan
dilakukan selama 24 jam karena merupakan waktu yang optimal untuk pertumbuhan
F.nucleatum. 24
1.2 Perumusan Masalah
Hingga saat ini belum dilakukan penelitian untuk melihat perbedaan daya
hambat kitosan blangkas bermolekul tinggi dengan pelarut gliserin dan VCO terhadap
Fusobacterium nucleatum sebagai bakteri yang paling sering ditemukan dalam
saluran akar gigi yang terinfeksi. Oleh karena itu, timbul permasalahan sebagai
berikut :
1. Apakah kitosan blangkas bermolekul tinggi dengan pelarut gliserin dan VCO
memiliki daya hambat terhadap Fusobacterium nucleatum jika akan
digunakan sebagai pengembangan bahan dressing saluran akar?
2. Apakah terdapat perbedaan daya hambat kitosan blangkas dengan pelarut
gliserin dan kitosan blangkas dengan pelarut VCO terhadap Fusobacterium
nucleatum?
Tujuan Penelitian
1. Untuk mengetahui daya hambat kitosan blangkas bermolekul tinggi dengan
pelarut gliserin dan VCO terhadap Fusobacterium nucleatum jika akan
digunakan sebagai pengembangan bahan dressing saluran akar
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
2. Untuk melihat perbedaan daya hambat kitosan blangkas dengan pelarut
gliserin dan kitosan blangkas dengan pelarut VCO terhadap pertumbuhan
Fusobacterium nucleatum
Manfaat Penelitian
1. Sebagai dasar penelitian lebih lanjut untuk mengembangkan penggunaan
kitosan blangkas sebagai bahan dressing di bidang endodonti.
2. Meningkatkan pemanfaatan bahan alami yang bersifat biokompatibel dan
biodegradable terhadap jaringan periapikal sebagai material kedokteran gigi
3. Sebagai informasi bagi dokter gigi dalam memilih vehicle (pelarut) bahan
dressing yang tepat
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
BAB 2
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Mikrobiologi Endodonti
Keberadaan mikroorganisme erat kaitannya dengan penyakit endodonti yang
meliputi pulpa dan periradikular baik secara langsung maupun tidak langsung. Dalam
penelitian Miller (1890) menemukan hubungan antara mikroorganisme dengan
penyakit pulpa dan periapikal yang menunjukkan adanya perbedaan antara bakteri
yang ditemukan pada kamar pulpa dengan bakteri di saluran akar.1 Hubungan ini juga
diteliti oleh Kakehashi et al, (1965) 1,2 yang menunjukkan bahwa bakteri merupakan
agent penyebab terjadinya infeksi pulpa dan berkembangnya lesi periapikal.1
Invasi bakteri ke dalam kamar pulpa sering dihubungkan dengan terjadinya
karies dan penyebaran bakteri ke sistem saluran akar merupakan penyebab utama
terjadinya lesi pulpa dan periapikal. Tahap perkembangan infeksi saluran akar
dimulai dengan invasi bakteri, multiplikasi dan adanya aktivitas patogen. Kebanyakan
aktivitas patogen dipengaruhi oleh respon host. Bakteri akan memasuki dan
memperbanyak diri di dalam tubulus dentin, hal ini dikarenakan diameter tubulus
dentin sekitar 1-4 m sedangkan sebagian besar diameter bakteri lebih kecil dari 1
m. Selain itu, jika enamel atau sementum hilang, maka bakteri dapat masuk ke pulpa
melalui dentin yang terpapar. Pergerakan bakteri pada tubulus dentin dibatasi oleh
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
proses odontoblastik, mineralisasi kristal dan berbagai makromolekul yang terdapat
di dalam tubulus.25
Pada infeksi polimikroba peranan bakteri dalam proses infeksi ini tidak
terlepas dari keberadaan fili (fimbriae) dalam berinteraksi dan berikatan dengan
permukaan bakteri lain. Lipopolisakarida yang ditemukan pada permukaan bakteri
gram negatif memiliki sejumlah efek biologi ketika dilepaskan dari sel dalam bentuk
endotoksin. Endotoksin dihubungkan dengan terjadinya inflamasi periapikal dan
aktivasi komplemen. Enzim yang dihasilkan oleh bakteri dapat menyebarkan faktor
penyebab infeksi. Enzim pada neutrofil yang berubah dan pecah membentuk eksudat
juga memiliki efek yang merugikan bagi jaringan sekitarnya. Ini menunjukkan bahwa
bakteri dan produknya memiliki efek langsung terhadap jaringan pulpa walaupun
tanpa berkontak secara langsung.25
Sebagian besar bakteri yang ditemukan pada infeksi endodontik merupakan
jenis bakteri anaerob.1-3,8,9,25,26 Seperti yang ditemukan oleh Sundqvist et al., (1989)
saat mengkultur saluran akar yang utuh, menyatakan bahwa 91% mikroba yang
berhasil diisolasi merupakan jenis anaerob. Bakteri anaerob hanya tumbuh di
lingkungan yang tidak ada oksigen tetapi sensitifitasnya terhadap oksigen dapat
berubah.25 Baumgartner et al (1991) yang mengkultur gigi pada bagian 5 mm apikal
saluran akar dan sudah mengalami karies, menemukan 68% bakteri anaerob dari total
50 bakteri yang diisolasi.26
Bakteri anaerob umumnya menghasilkan ikatan asam lemak rantai pendek
termasuk propionate, butirat dan asam isobutirat. Asam-asam ini dapat

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
mempengaruhi neutrophil chemotaxis, degranulasi, chemiluminens dan fagositosis.
Asam butirat telah menunjukkan daya hambat yang besar terhadap blastogenesis T-
sel dan merangsang pembentukan interleukin-1, yang berhubungan dengan
penyerapan tulang. Tabel 1. menunjukkan persentase jumlah bakteri yang berhasil
diisolasi dari saluran akar secara utuh yang diambil dari Sundqvist (1994). 25
Tabel 1. Bakteri yang dikultur dan diidentifikasi dari saluran akar gigi dengan lesi apikal25
Bakteri Insiden bakteri (%)
Fusobacterium nucleatum 48
Streptococcus sp 40
Bacteroides sp 35
Prevotella intermedia 34
Peptostreptococcus micros 34
Eubacterium alactolyticum 34
Peptostreptococcus anaerobius 31
Lactobacillus sp 32
Eubacterium lentum 31
Fusobacterium sp 29
Campylobacter sp 25
Peptostreptococcus sp 15
Actinomyces sp 15
Eubacterium timidum 11
Capnocytophaga ochracea 11
Eubacterium brachy 9
Selenomonas sputigena 9
Veillonella parvula 9
Porphyromonas endodontalis 9
Prevotella buccae 9
Prevotella oralis 8
Proprionibacterium propionicum 8
Prevotella denticola 6
Prevotella loescheii 6
Eubacterium nodatum 6
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
2.2 Fusobacterium nucleatum sebagai salah satu bakteri yang terdapat pada
infeksi endodonti
Fusobacterium nucleatum merupakan tipe spesies dari genus Fusobacterium,
yang berasal dari famili Bacteroidaceae. Bakteri ini normal ditemukan di rongga
mulut manusia yang sehat maupun sakit.7,27,28 Secara morfologi F. nucleatum ialah
bakteri berbentuk batang yang panjangnya 5-10 m dengan kedua ujung yang tajam.7
Bakteri ini dikelompokkan ke dalam jenis gram negatif yang hidup pada suasana
anaerob namun masih dapat tumbuh sampai kadar oksigen 6%. Fusobacterium
nucleatum tidak dapat membentuk spora dan tidak bergerak.7,27,.28
Menurut Sundqvist (1992) Fusobacterium nucleatum merupakan salah satu
spesies yang paling umum diisolasi dari infeksi endodontik. Baumgartner dan Falkler
(1991) dalam penelitiannya pada 5 mm apikal gigi yang mengalami infeksi saluran
akar menemukan 30% Fusobacterium nucleatum dari sampel yang diambil.
Penelitian ini tidak jauh berbeda dengan hasil yang didapatkan oleh Siqueira et al.,
(2004) yang menemukan F.nucleatum sebanyak 26% dari sampel apikal saluran
akar.26
Fusobacterium nucleatum merupakan salah satu bakteri yang sering
ditemukan pada plak subgingival baik dalam bentuk inaktif maupun aktif dari
gingivitis maupun periodontitis.28,29 Tidak hanya itu, bakteri ini juga banyak
ditemukan di luar rongga mulut dan bersama bakteri lain menjadi penyebab infeksi
polimikroba. Fusobacterium nucleatum dapat dibagi menjadi beberapa subspesies,
diantaranya subspesies nucleatum, vincentii, polymorphum, fusiforme dan animalis.

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Subspesies nucleatum dan vincentii dipercaya berhubungan dengan penyakit
periodontal.29
Fusobacterium nucleatum memiliki karakteristik membran luar bakteri gram
negatif. Pelindung sel terdiri atas lapisan luar dan lapisan dalam (sitoplasma) yang
dipisahkan oleh ruang periplasma yang terdiri atas lapisan peptidoglikan. Pada
umumnya, lapisan dalam bakteri gram negatif mengandung lapisan fosfolipid yang
simetris dengan kadar fosfolipid dan protein dalam jumlah yang sama. Lapisan luar
membran berfungsi sebagai penyaring molekul dan merupakan membran asimetris
yang terdiri atas fosfolipid, lipopolisakarida (LPS), lipoprotein, dan protein. Maka,
sepertiga dari massa lapisan luar fusobacterium ialah protein.7
Gambar 1. (A) F.nucleatum dilihat melalui mikroskop electron, (B dan C) Melalui mikroskop
elektron terlihat Outer membran (OM), Periplasmik (P) dan Cell membrane (CM)7
Dalam pertumbuhannya Fusobacterium memerlukan suatu media yang baik
dan biasanya akan tumbuh subur pada media yang mengandung trypticase, peptone,
atau ekstrak ragi.7,28 Fusobacterium nucleatum merupakan salah satu spesies bakteri
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
anaerob nonspora yang menggunakan asam amino dalam proses katabolisme untuk
menghasilkan energi dan beberapa strain F.nucleatum memerlukan peptida untuk
proses pertumbuhan. F.nucleatum memerlukan glukosa untuk proses biosintesis
molekul intraselular tetapi bukan untuk metabolisme energi. 7,27,28
Produk utama dari hasil metabolisme pepton atau karbohidrat ialah butirat
tetapi ditemukan juga produk lain yaitu asetat, laktat, dan sedikit propionat. Butirat,
propionate dan ion amoniun yang dihasilkan oleh F.nucleatum dapat menghambat
proliferasi fibroblast gingiva,7,29 mampu menembus epitel gingival dan keberadaanya
dapat meningkatkan jumlah plak sehingga berperan sebagai penyebab periodontitis.7
F.nucleatum berperan dalam desulfurasi sistein dan methionin sehingga
menghasilkan ammonia, hydrogen sulfida, asam butirat dan methyl mercapthan.7
Bakteri ini menunjukkan aktivitas biologis yang berhubungan dengan penyebab
inflamasi gingiva, penyakit mulut, bau nafas, menghasilkan asam butirat dan bahan
sulfur yang mudah menguap (Kostelc et al., 1980).30
Kemampuan patogenesis F.nucletum tidak hanya sebagai bakteri tunggal
namun dapat dikaitkan dengan keberadaan bakteri lain. Adanya interaksi F.nucleatum
dengan jenis bakteri lain berhubungan dengan beberapa hal, diantaranya ialah
kemampuan mengumpulkan glukosa dalam bentuk glukan intraseluler yang dapat
digunakan sebagai sumber energi. Apabila jumlah glukosa berkurang, maka glukosa
yang ada dapat diekskresikan dari sel bakteri. Hal ini memungkinkan bakteri lain
mendekati permukaan Fusobacterium dan selanjutnya berikatan dengan dinding sel
Fusobacterium (Kolenbrander et al., 1992).7,28

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Kemampuan koagregasi F.nucleatum dengan Candida albicans terjadi
melalui ikatan protein permukaan sel bakteri dengan residu karbohidrat pada
permukaan C.albicans (Bagg., 1986). Selain itu, F.nucleatum mampu berkoagregasi
dengan P.gingivalis karena adanya ikatan karbohidrat yaitu galaktosa pada
permukaan P.gingivalis dan protein lapisan luar pada F.nucleatum. (Kinder et al.,
1983).7
Kombinasi antara F.nucleatum dengan bakteri berpigmen hitam Prevotella
intermedia dan Porphyromonas gingivalis menghasilkan virulensi yang lebih tinggi
dibandingkan jika bakteri tersebut dikultur secara murni (Baumgartner., 1992).
Kombinasi ini mampu melawan fagositosis, mendegradasi immunoglobulin dan
meningkatkan kemampuan patogenesis (Sundqvist et al., 1985). Kemampuan
patogenesis dihubungkan dengan adanya lipopolisakarida (LPS) pada membran luar
bakteri gram negatif. Dengan adanya LPS pada saluran akar dan jaringan
periradikular dikaitkan dengan keparahan penyakit (Horiba et al., 1991). LPS
(endotoksin) dilepaskan selama proses multiplikasi dan kematian sel. Ketika
melepaskan endotoksin maka akan terjadi biological effect yang menyebabkan
inflamasi dan terjadinya resorpsi tulang periapikal (Nelson-filho et al., 2002 dan
Yamasaki et al., 1992).1
2.3 Kitosan sebagai bahan dressing saluran akar
Terapi endodontik atau perawatan saluran akar bertujuan untuk mengeliminasi
mikroorganisme yang menginfeksi saluran akar. Namun, pada banyak kasus
walaupun telah dilakukan instrumentasi secara mekanik dan desinfeksi saluran akar,
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
mikroorganisme masih dapat kembali (Gomes et al., 1996; Molander et al., 1998)4
dan beberapa bakteri masih tertinggal di dalam tubulus dentin (Bystrm et al.,
1985)31. Kembali atau masih tertinggalnya bakteri di saluran akar karena didukung
oleh adanya ramifikasi dan tubulus dentin radikuler, karena itu penggunaan dressing
saluran akar diindikasikan untuk mengeliminasi bakteri yang tidak hilang atau
setidaknya menghambat terjadinya infeksi berulang pada saluran akar (Siqueira.,
1997).3,9
Penggunaan bahan dressing yang semakin berkembang memberikan
kesempatan untuk mengaplikasikan material atau bahan lain yang lebih aman dan
dapat diterima oleh jaringan tanpa menimbulkan efek samping. Seperti yang
diketahui bahwa material non-biologi yang biasa digunakan sebagai bahan dressing
diantaranya kalsium hidroksida (Ca(OH)2), cyanoacrylate, semen zinc-oxide dan
fosfat. Walaupun memiliki kemampuan antibakterial yang baik namun bahan-bahan
ini masih memiliki efek samping bagi jaringan tubuh yang perlu dipertimbangkan.13
Sehubungan dengan itu, dikembangkan suatu material biologi sebagai bahan dressing
yang bersifat alami, biodegradabel, biokompatibel dan memiliki efek antibakteri
yakni kitosan blangkas.20
2.3.1 Definisi dan komposisi Kitosan
Kitosan (poly--1,4-glucosamine) merupakan biopolymer karbohidrat
(polisakarida) dari glukosamin yang dihasilkan dari proses N-deasetilasi kitin. Bahan
ini pertama kali ditemukan oleh Rouget (1859). Kitosan merupakan polimer alam
yang memiliki rantai linear dengan rumus struktur (C6H11NO4)n. Kitosan dapat
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
diperoleh dari hewan berkulit keras terutama yang berasal dari laut seperti kulit
udang, rajungan, kepiting, cumi-cumi (Allan et al., 1979), dari jenis serangga (insect)
dan jamur (fungi). 13,32-36 Kitosan hanya dapat larut dalam pelarut asam seperti asam
asetat, asam formiat, asam laktat, asam sitrat dan asam hidroklorat. Kitosan tidak
larut dalam air, alkali dan asam mineral encer kecuali dibawah kondisi tertentu yaitu
dengan adanya sejumlah pelarut asam sehingga dapat larut dalam air, methanol,
aseton dan campuran lainnya.13,36 Salah satu pelarut asam ialah asam asetat yang
memiliki struktur kimia CH3COOH. Sifat kelarutannya disebabkan oleh kemampuan
disosiasi menjadi ion H+ dan CH3COO- sehingga berperan sebagai salah satu pereaksi
kimia dan bahan baku industri yang penting. 37
Kitosan merupakan polymer alami terbesar kedua setelah selulosa (Ruiz-
Herra, 1978) dan struktur keduanya juga hampir sama. Perbedaannya hanya pada
gugus rantai C-2 pada selulosa mengandung gugus hidroksida (OH) sedangkan pada
kitosan diganti dengan gugus amina (NH2).33,34,36
CHITIN CHITOSAN
n n
Gambar 2. Struktur Chitin dan Chitosan36
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Berdasarkan struktur kimianya, kitin dan kitosan memiliki susunan yang
sama. Kitin terbentuk dari ikatan linear asetilglukosamin sedangkan kitosan
dihasilkan dari perpindahan gugus asetil (CH3-CO) agar molekul dapat larut pada
sebagian besar pelarut asam, proses ini disebut deasetilasi. Perbedaan yang nyata
antara kitin dan kitosan ialah kandungan asetil dari polimer tersebut. Faktanya,
terdapat dua kelebihan kitosan dibandingkan kitin. Dalam proses melarutkan, kitin
memerlukan pelarut toksik seperti lithium chloride dan dimethylacetamide sedangkan
kitosan cepat larut dalam pelarut asam asetat. Kelebihan yang kedua ialah kitosan
memiliki gugus amino bebas yang merupakan bagian aktif yang dapat berikatan
dalam banyak reaksi kimia (Knaul et al., 1999)36
Kitosan memiliki muatan molekul positif (NH3+) yang dapat berikatan secara
kimia dengan muatan negatif yang dimiliki oleh lemak, lipid, kolesterol, ion-ion
metal, protein dan makromolekul (Li et al., 1992). Kitin dan kitosan mengalami
peningkatan secara komersial sehingga sesuai digunakan sebagai sumber material
karena memiliki sifat yang sangat baik yakni biokompatibilitas, biodegradabilitas,
kemampuan adsorpsi, dapat membentuk film dan sebagai chelating agent ion metal
(Rout, 2001).36
Menurut viskositasnya, berat molekul kitosan dibagi atas tiga yaitu kitosan
bermolekul tinggi, sedang dan rendah. Kitosan bermolekul tinggi biasanya berasal
dari hewan laut bercangkang keras misalnya kepiting, kerang dan blangkas dengan
berat molekul 800.000-1.100.000 Mv sedangkan kitosan bermolekul sedang dengan
berat molekul 400.000-800.000 Mv dan bermolekul rendah dengan berat molekul

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
dibawah 400.000 Mv berasal dari hewan laut dengan cangkang atau kulit yang lunak
misalnya udang, cumi-cumi dan rajungan.20
2.3.2 Kitosan blangkas
Kitosan blangkas merupakan kitosan yang diperoleh dari kulit blangkas
(Limulus Polyphemus). Kitin yang diproses dari kulit blangkas didapat dengan hasil
30,60%. Kitosan dihasilkan melalui proses deasetilasi kitin dengan menggunakan
larutan alkali (NaOH). Proses pembuatan kitosan blangkas dilakukan dengan 2 (dua)
tahap yaitu proses deproteinasi dengan pemberian NaOH 2 M untuk mengurangi
protein pada kulit udang dan proses demineralisasi dengan pemberian HCl 2 M
sehingga kandungan mineral CaCO3 hilang dari kulit udang.13
(a) (b)
Gambar 3. Limulus polyphemus (a) dilihat dari atas (b) dilihat dari bawah38
Olsen et al (1992) dalam penelitiannya menyatakan bahwa kitosan dengan
berat molekul tinggi akan menghasilkan koagulan yang padat dibandingkan dengan
kitosan berat molekul rendah. Kitosan bermolekul tinggi juga memiliki sifat yang
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
mudah berdifusi sehingga mampu menstimulasi regenerasi sel-sel jaringan lunak
(Muzzarelli et al., 1986) dan pada situasi khusus seperti terbukanya pulpa, bahan ini
mampu mengadakan regenerasi jaringan dentin. Keadaan ini dibuktikan oleh Pang et
al (2005) dalam penelitiannya yang memperlihatkan bahwa kitosan dapat
mengadakan regenerasi jaringan tulang.13
2.3.3 Kitosan sebagai antibakterial
Studi terbaru mengenai aktifitas antibakterial kitosan menyatakan bahwa
kitosan efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Sifat antibakterial kitosan
tergantung pada berat molekul dan jenis bakterinya. Menurut Chen et al., (2002)
antibakteri kitosan lebih efektif terhadap bakteri gram negatif daripada bakteri gram
positif. Begitu juga dengan Chung et al., (2004) yang menyatakan bahwa penyerapan
kitosan oleh bakteri gram negatif lebih besar daripada bakteri gram positif. Menurut
penelitian tersebut, penyerapan kitosan juga berhubungan dengan lingkungan sekitar
yaitu nilai pH dan derajat deasetilisasi. Ini terbukti pada suasana yang lebih asam (pH
4) dan derajat deasetilasi yang tinggi (95%) kitosan akan bermuatan lebih positif dan
lebih mudah mengangkut gugus amino (NH3+) yang akan mempermudah penyerapan
bakteri terhadap kitosan dibandingkan dengan suasana pH 5 dan derajat deasetilasi
yang rendah (75%).35
Berdasarkan penelitian Banurea dan Trimurni (2008) kitosan blangkas dan
kitosan komersil (Harry, 2005) yang memiliki berat molekul tinggi, mampu
menghambat pertumbuhan bakteri Fusobacterium nucleatum pada konsentrasi 10%.20
Dalam sebuah penelitian untuk melihat aktivitas antimikroba kitosan terhadap bakteri
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
E.coli, Tsai dan Su (1999) menggunakan kitosan yang diambil dari kulit udang dan
menemukan bahwa temperatur yang tinggi serta pH asam pada makanan dapat
meningkatkan aktivitas antibakteri kitosan. Mereka menerangkan bahwa mekanisme
antibakteri kitosan ini melibatkan ikatan silang antara polikation dari kitosan dan
anion yang terdapat pada permukaan bakteri yang mengalami perubahan
permeabilitas.36 Berdasarkan penelitian Cheng dan Li (2000) kekuatan kitin, kitosan
atau pada keseluruhan kulit udang tidak efektif dalam beberapa test tapi larutan
kitosan dalam asam asetat mampu menghambat bakteri dan jamur. Allan dan
Hadwiger (1974) menemukan bahwa larutan 1% kitosan dalam 1% asam asetat dapat
menghambat pertumbuhan Candida tropicalis. 23
2.3.4 Mekanisme antibakterial kitosan
Sifat-sifat kitosan berhubungan dengan adanya gugus-gugus amino dan
hidroksil yang terikat. Gugus-gugus ini menyebabkan kitosan mempunyai reaktifitas
kimia yang tinggi dan menyumbangkan sifat polielektrolit kation sehingga berperan
sebagai amino pengganti (amino exchanger).13 Keberadaan kation yang dimiliki oleh
kitosan (pKa=6,3) disebabkan oleh adanya muatan positif NH3+ yang merupakan grup
glukosamin yang menjadi faktor utama dalam proses interaksi dengan muatan negatif
permukaan sel bakteri sehingga dapat mengganggu aktivitas bakteri (Je et al., 2006;
Zakrzewska et al., 2005; Halender et al 2001; Muzzarelli et al., 1990)14, menekan

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
pertumbuhan bakteri dengan merusak proses pertukaran dengan media, kemampuan
berikatan dengan ion metal dan menghambat enzim (Aleksandra et al., 2005).23,34
Sehubungan dengan kemampuan interaksi kitosan dengan DNA mikroba,
mekanisme antibakteri kitosan terjadi karena kitosan mampu berikatan dengan DNA
yang selanjutnya akan merusak mRNA dan mengganggu sintesa protein. Kitosan
akan bereaksi langsung dengan membran sel sehingga mengganggu permeabilitas
membran dan menyebabkan kebocoran materi protein sel (Hardjito, 2006).33
Menurut Chung et al., 2000 daya antibakteri kitosan dapat diperoleh dengan
menciptakan suasana asam dengan derajat deasetilasi tinggi yang dapat menyebabkan
jumlah ion NH3+ yang bebas menjadi lebih banyak sehingga memudahkan
penyerapan bakteri terhadap kitosan. Hal ini berdampak pada perubahan struktur
permukaan sel dan gangguan permeabilitas membran sehingga berlanjut menjadi
kematian sel bakteri.35
2.3.5 Aplikasi kitosan di bidang Kedokteran Gigi
Multiguna kitosan tidak terlepas dari sifat alaminya, terutama sifat kimia
kitosan yaitu polimer poliamin berbentuk linear dan mempunyai gugus amino dan
hidroksil yang aktif.13 Kitosan dianggap sebagai polisakarida yang potensial karena
memiliki gugus amino bebas yang berperan sebagai polikation, chelating agent, dan
sebagai bahan dispersi jika telah dilarutkan terlebih dahulu dalam pelarut asam asetat.
Kitosan memiliki kualitas kimia dan biologi sangat baik yang dapat digunakan secara
luas dibidang industri maupun bidang kesehatan.36

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Menurut Howling et al., (2001) kitosan dapat bermanfaat dalam
menyembuhkan luka karena memberi efek terhadap proliferasi sel fibroblast kulit
manusia dan sel keratinosit secara in-vitro. Efek stimulasi dalam proliferasi sel
fibroblast ini tergantung pada derajat deasetilasi kitosan yang lebih tinggi. Tidak
hanya berperan secara tunggal, kitosan juga dapat bermanfaat jika digabungkan
dengan bahan lain. Diantaranya ialah gabungan kitosan dengan alginat sebagai
pembalut luka dengan membentuk kompleks membran polielektrolit yang akan
mempercepat penyembuhan luka pada binatang percobaan dibandingkan pembalut
luka konvensional (Paul et al., 2004), gabungan semen kalsium fosfat dengan kitosan
dan asam sitrat sebagai material pengganti tulang (Yokoyama et al., 2002), kitosan
dan asam poliakrilat dengan polimer sebagai mucoadhesive dapat menghantarkan
obat secara transmukosa yang telah diteliti secara in-vitro (Ahn et al., 2002).32
Aplikasi kitosan di bidang kedokteran gigi dapat berpotensi dalam proses
differensiasi sel osteoprogenitor dan dapat memfasilitasi pembentukan tulang (Lee et
al., 2000a). Sebagai faktor pertumbuhan, khususnya sel T yang dapat meningkatkan
regenerasi periodontal apabila digabungkan dengan bahan yang bersifat biodegradasi
sehingga mampu membentuk konsentrasi therapeutik selama proses reaksinya (Lee at
al., 2000b). Sedangkan menurut Ikinci et al., (2002) yang meneliti kitosan dalam
bentuk gel maupun film, mampu melawan periodontal patogen yakni Porphiromonas
gingivalis.39 Dalam penelitian Trimurni et al., (2006) kitosan berperan dalam
dentinogenesis, dimana kitosan yang digunakan ialah kitosan blangkas bermolekul
tinggi dan kitosan komersial sebagai bahan kaping pulpa direk pada gigi tikus wistar
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
secara in-vivo. Dengan keadaan pulpa terbuka dan mengalami inflamasi reversible,
kitosan mampu membentuk jaringan keras osteotipic irregular yang terlihat pada
peletakan kitosan selama 14 hari dan 1 bulan dan dapat dilihat sel-sel pulpa
dentinoblast tersusun bersekatan dengan bahan coba.13
2.4 Pelarut (Vehicle)
Berdasarkan penelitian Fava dan Saunders (1999), pelarut memegang peranan
penting dalam aktifitas antibakteri bahan dressing.15 Jenis pelarut yang digunakan
untuk suatu bahan dressing akan menghasilkan perbedaan kecepatan disosiasi ion
sesuai dengan jenis pelarutnya. Berdasarkan pelarut yang digunakan, bahan dressing
juga akan menghasilkan kekentalan berbeda yang menggambarkan besar gesekan
dalam cairan. Daya alir suatu larutan sangat baik apabila tingkat kekentalannya
rendah.31
Pelarut umumnya terbagi atas tiga yaitu : 15,31
a. Pelarut aqueous, yaitu sterile distilled water, sterile water, larutan anestesi,
larutan Ringer, methylcellulose dan carboxymethylcellulose dan larutan anorganik
detergent seperti sodium lauryl diethyleneglycol atau sodium lauryl sulfate. 15
Pelarut aqueous bersama Ca(OH)2 cepat berdisosiasi sehingga meningkatkan
kelarutan ketika berkontak dengan cairan dan lebih mudah direabsorbsi oleh
makrofag.31
b. Pelarut viscous, yaitu gliserin, polyethyleneglycol dan propyleneglycol. 15
Beberapa pelarut jenis ini dapat larut dalam air tetapi kemampuan disosiasinya lebih
lambat daripada pelarut aqueous. Karena itu pelarut ini cocok digunakan bersama
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
bahan dressing karena dapat bertahan dan terikat dengan baik dengan bahan
dressing.15,31
c. Pelarut oily, yaitu camphorated paramonochlorophenol (CMCP), olive oil,
metacresylacetat dan eugenol. 15
Pelarut ini tidak larut dalam air sehingga menyebabkan kemampuan dissosiasi ion
dan daya larutnya sangat rendah, karena itu aplikasi pelarut oily bersama bahan
dressing sangat terbatas.15,31 Namun pada penelitian Gomes et al., (2002), Ca(OH)2
bersama pelarut oily (CMCP) memiliki zona hambat yang sangat baik terhadap
bakteri dibandingkan pelarut lainnya, namun penggunaannya tidak disarankan karena
berpotensi mengiritasi jaringan. 15
2.4.1 Gliserin
Gliserin ditemukan oleh Scheele pada tahun 1779 dari hasil saponifikasi
minyak zaitun dan dikenal dengan sebutan lemak dasar yang manis. Kemudian
diteliti lagi oleh Chevreul dan memberi nama glyserin. Selanjutnya mulai
digunakan dalam bidang pengobatan dan farmasi sekitar tahun 1846.40 Gliserin
memiliki rumus kimia C3H5[OH]3.16,17,40,41 Gliserin merupakan trihidrik alkohol yang
memiliki 2 primer dan 1 sekunder gugus hidroksil (OH) yang berpotensi untuk
berikatan dengan zat-zat lain.41 Sifatnya jernih, tidak berwarna, konsistensi seperti
sirup, berupa minyak jika disentuh, tidak berbau, sangat manis dan sedikit panas jika
dirasa.16,17,40
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Gambar 4. Struktur kimia Gliserin42
Pemanfaatan gliserin sebagai humectant, plastisizer, solvent dan agen tonisity-
adjusting (Anon, 2003). Gliserin juga digunakan sebagai emulsifier dan pelarut untuk
bahan bubuk, lebih baik daripada ethanol karena tidak mudah menguap.40 Pelarut
gliserin jika dicampur dengan bahan dressing (Ca(OH)2) tidak memiliki efek
antimikroba. Gliserin sangat baik sebagai pelarut bahan dressing, hal ini terbukti pada
penelitian Gomes et al., (2002) gliserin dicampur dengan Ca(OH)2 menghasilkan
zona hambat yang lebih besar daripada pelarut aqueous. Ini disebabkan karena
kemampuan disosiasi gliserin terhadap ion Ca+ dan OH- lebih lambat daripada pelarut
aqueous sehingga dapat bertahan lebih lama di saluran akar.15
2.4.2 VCO (virgin coconut oil)
Virgin coconut oil atau yang lebih dikenal dengan sebutan minyak kelapa
murni merupakan hasil dari buah kelapa segar. Berbeda dengan minyak kelapa biasa,
VCO dihasilkan tidak melalui penambahan bahan kimia ataupun proses yang
melibatkan panas yang tinggi. Penyebutan nama pada minyak kelapa jenis ini dengan
penambahan atribut murni mengindikasikan terdapat beberapa perbedaan pada
penampakan, sifat fisik dan prinsip proses pengolahan VCO dengan jenis minyak
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
kelapa biasa. Warna minyak kelapa murni ini relatif lebih bening dan tidak berwarna.
Kadar air dalam minyak kelapa murni yang rendah menyebabkan minyak ini tidak
mudah berbau tengik. Kelebihan lainnya ialah kandungan kimiawi yang berbeda
dengan minyak kelapa biasa, dimana VCO mengandung asam lemak jenuh yang
tinggi ( 90%). Asam lemak jenuh ini memiliki potensi kegunaan yang sangat besar
baik bagi dunia kesehatan, industri farmasi, kosmetika maupun sebagai pendukung
industri pangan. 18
Zat yang dominan pada VCO ialah asam laurat, kandungannya mencapai
50,33%, dan kandungan lainnya berupa 14,32% asam kaproat, 10,25% asam kaprat,
12,91% asam miristat dan 4,92% asam palmitat.43 Kandungan ini dapat berbeda
tergantung VCO yang dihasilkan.
Gambar 5. VCO (Virgin Coconut Oil) komersil (Laurica, Indonesia)
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Asam laurat dalam tubuh manusia akan dipecah menjadi monolaurin. 18,19,44-46
Menurut beberapa penelitian, monolaurin terbukti sebagai antibakteri, antivirus,

18,19,43-47
antiprotozoa dan anti jamur VCO menjadi populer karena manfaatnya untuk
kesehatan tubuh. Hal ini disebabkan karena banyaknya kandungan asam lemak rantai
menengah (Medium Chain Fatty Acid). MCVC yang paling banyak terkandung dalam
VCO ialah asam laurat. Sifat MCFC yang mudah diserap sampai ke mitokondria akan
meningkatkan metabolisme tubuh. Manfaat lain dari VCO adalah mampu
meningkatkan daya tahan terhadap penyakit serta mempercepat proses penyembuhan.
Hal ini disebabkan karena adanya peningkatan proses metabolisme tubuh sehingga
menyebabkan sel-sel tubuh bekerja lebih efisien.18,45
Mekanisme kerja antibakteri VCO berasal dari asam laurat yang dipecah
menjadi monolaurin. Monolaurin ini ditubuh akan berperan aktif menembus dinding
sel mikroorganisme sehingga cairan akan disedot keluar dan terjadilah pengerutan sel
yang mengakibatkan matinya mikroorganisme.43-47 Menurut Holland et al., (1994)
monolaurin mampu menurunkan pertumbuhan Staphylococcus aureus dan produksi
toksin dari syndrom shok toksin-l. Terhadap jamur, monolaurin juga mempengaruhi
pertumbuhan Candida albicans (Issacs et al., 1991).47
Proses pengolahan VCO dapat dilakukan dengan beberapa cara, diantaranya
ialah dengan pengolahan VCO konvensional dan aplikasi teknologi membran. Untuk
pengolahan VCO konvensional dapat dilakukan dengan 2 cara yaitu : 18
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
a. Fermentasi
Cara pengolahan VCO dengan metode fermentasi ialah dengan menambahkan
mikroba dalam proses pengolahan yang bertujuan untuk membantu penggumpalan
protein agar terpisah dengan minyak.
b. Sentrifugasi
Pengolahan ini awalnya tidak berbeda dengan cara fermentasi, hanya berbeda
dalam teknik pengambilan minyaknya. Sentrifugasi memanfaatkan beda berat jenis
komponen dalam santan. Dengan melakukan sentrifugasi santan akan membentuk 3
lapisan, dimana lapisan atas berupa minyak merupakan produk hasil yang diinginkan
yaitu VCO.
Perkembangan teknologi membran menjadi alternatif proses lain dari produksi
VCO. VCO yang dihasilkan dengan melibat teknologi membran ini diharapkan dapat
mempermudah produksi VCO dengan spesifikasi produksi yang berkualitas sangat
tinggi. Pengolahan VCO ini dilakukan dengan memanfaatkan perbedaan berat
molekul. Prosesnya terdiri atas pemisahan daging buah dan tempurung, pemarutan,
pemerasan, penyaringan dan pemisahan. Prosedur yang berbeda ialah pada tahap
pemisahan dimana terbagi atas 2 (dua) bagian yaitu : 18
Ultrafiltrasi, untuk memisahkan protein dari air dan minyak
Reverse osmosi, untuk memisahkan minyak dari air
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
BAB 3
KERANGKA KONSEP PENELITIAN DAN HIPOTESIS PENELITIAN
3.1 KERANGKA KONSEP PENELITIAN
Dressing intrakanal
Kitosan blangkas
Kitosan + Gliserin Kitosan + VCO
Kitosan derajat deasetilasi dan Kitosan derajat deasetilasi dan

suasana asam gugus amino (NH3+) >> suasana asam gugus amino (NH3+)
penyerapan kitosan oleh bakteri >> penyerapan kitosan oleh bakteri
permeabilitas membran sel terganggu dan permeabilitas membran sel terganggu
terjadi kebocoran materi bakteri sel lisis dan terjadi kebocoran materi bakteri
Daya antibakteri (+) sel lisis Daya antibakteri (+)
Gliserin pelarut viscous memiliki VCO pelarut oily mengandung as.
gugus hydroksil (-OH) mudah berikatan Laurat Monolaurin menembus
dengan bahan lain tetapi Daya dinding sel bakteri cairan sel keluar
antibakteri (-) sel lisis Daya antibacteria (+)
Kitosan + gliserin membentuk Kitosan + VCO membentuk campuran
campuran yang tidak meningkatkan daya dengan daya antibakteri (++) dan dapat
antibakteri kitosan, namun dapat mempermudah manipulasi bahan ke
mempermudah proses manipulasi bahan ke dalam saluran akar
dalam saluran akar Hasil reaksi kitosan (C6H11NO4)n dan
Hasil reaksi (C6H11NO4)n dan C3H5[OH]3 asam laurat (CH3(CH2)10COOH)
membentuk Lar. Kitosan Gliserin yang membentuk Lar. Kitosan VCO yang
merupakan interaksi antara gugus hidroksil merupakan interaksi antara gugus
kitosan dengan gugus karbonil gliserin hidroksil kitosan dengan gugus karbonil
asam laurat
(??)
Fusobacterium nucleatum
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Sel lisis
Diagram diatas menunjukkan mekanisme kitosan bermolekul tinggi yakni

Sel mati
kitosan blangkas yang dimanipulasi dengan bahan pelarut (vehicle) gliserin dan VCO
(virgin coconut oil) dalam menghambat pertumbuhan bakteri Fusobacterium
nucleatum sebagai bakteri penyebab infeksi intrakanal. Kitosan bermolekul tinggi
yang digunakan pada penelitian ini ialah kitosan blangkas (Trimurni et al., 2006)
yang mengandung gugus amino (NH2) dengan derajat deasetilisasi dan Berat Molekul
(BM) yang tinggi yakni 84,20% dan 893.000. Kitosan akan bermuatan positif (NH3+)
dan secara ionik akan reaktif terhadap muatan negatif dinding sel bakteri.
Gugus glukosa secara langsung akan merangsang bakteri untuk menyerap
kitosan dalam metabolisme membran interseluler dan kitosan akan semakin
merangsang penyerapan yang kuat dari bakteri. Hal ini menyebabkan seluruh
permukaan membran sel F.nucleatum dilapisi oleh kitosan sehingga F.nucleatum
tidak dapat berkontak dengan lingkungan luar sel (fungsi pengkelat). Selanjutnya
ikatan ionik yang terbentuk antara kitosan dan membran sel F.nucleatum akan
mengganggu permeabilitas membran dan menyebabkan kitosan mampu menembus
membran sel F.nucleatum. Kitosan akan dibawa masuk ke ruang interseluler dan
berikatan dengan DNA F.nucleatum yang kemudian akan mengganggu mRNA dan
sintesa protein. Selanjutnya akan terjadi gangguan fungsi sel, diikuti dengan
kebocoran protein sel karena kitosan memenuhi ruang interseluler, diikuti lisisnya
F.nucletum dan kematian F.nucleatum.

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Pada penelitian sebelumnya oleh Banurea dan Trimurni (2008), bentuk
sediaan bahan dressing intrakanal yang digunakan berupa bubuk, sehingga
manipulasinya ke dalam saluran akar sulit untuk dilakukan. Karena itu, pada
penelitian ini akan digunakan bahan pelarut yaitu gliserin dan VCO (virgin coconut
oil). Selain untuk mempermudah manipulasi, penggunaan pelarut ini juga untuk
mengetahui daya hambat kitosan blangkas jika dimanipulasi dengan pelarut dan
perbedaan efek kedua pelarut ini terhadap daya hambat kitosan blangkas sebagai
antibakteri Fusobacterium nucleatum.
Gliserin merupakan jenis pelarut viscous yang umum digunakan di bidang
kedokteran gigi terutama endodonti. Campuran bahan dressing Ca(OH)2 dengan
pelarut gliserin lebih baik dalam membentuk konsistensi pasta daripada pelarut
aqueous sehingga mempermudah penempatan pada saluran akar. Campuran kitosan
dan gliserin sebagai bahan dressing saluran akar belum pernah dicobakan.
Berdasarkan uraian diatas, kemungkinan campuran kitosan dengan pelarut gliserin
tidak akan meningkatkan daya hambat kitosan sebagai antibakteri, namun dapat
mempermudah manipulasi kitosan ke dalam saluran akar. Hasil pencampuran
keduanya membentuk larutan kitosan gliserin yang merupakan hasil interaksi antara
gugus hidroksil (-OH) kitosan ([C6H11NO4]n) dengan gugus karbonil gliserin
(C3H5[OH]3).
Pada penelitian ini juga digunakan pelarut jenis oily yakni VCO (virgin
coconut oil). VCO merupakan minyak kelapa murni yang sebagian besar terdiri dari
asam laurat (CH3(CH2)10COOH) dengan efek antibakterial yang baik. Asam laurat ini
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
akan dipecah menjadi monolaurin sehingga dapat dengan mudah menembus dinding
sel bakteri yang terdiri atas lemak, selanjutnya cairan akan tersedot keluar dan terjadi
pengerutan sel sehingga akhirnya bakteri lisis.
Aplikasi pelarut oily sebagai pelarut bahan dressing saluran akar masih
terbatas penggunaannya. Salah satunya ialah CMCP (camphorated
monochlorophenol) yang penggunaannya tidak direkomendasikan karena dapat
menyebabkan iritasi jaringan. Campuran kitosan dengan pelarut VCO sebagai bahan
dressing juga belum pernah dicobakan sehingga belum diketahui daya hambatnya
terhadap bakteri F.nucleatum.
Pada beberapa penelitian kandungan asam laurat pada VCO terbukti memiliki
sifat antibakteri, karena itu penggunaannya sebagai pelarut oily diharapkan dapat
meningkatkan daya hambat kitosan terhadap bakteri F.nucleatum dan membantu
manipulasi bahan dressing ke dalam saluran akar. Hasil pencampuran kedua bahan
ini akan membentuk larutan kitosan VCO yang merupakan hasil interaksi antara
gugus hidroksil (-OH) kitosan ([C6H11NO4]n) dengan gugus karbonil asam laurat
(CH3(CH2)10COOH) sebagai kandungan utama pada VCO.
3.2 HIPOTESIS PENELITIAN
Dari uraian tersebut diatas maka dapat ditegakkan hipotesa :
1. Kitosan blangkas bermolekul tinggi dengan pelarut gliserin dan VCO
memiliki daya hambat terhadap Fusobacterium nucleatum jika akan
digunakan sebagai pengembangan bahan dressing saluran akar.

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
2. Terdapat perbedaan daya hambat antara kitosan blangkas dan pelarut gliserin
dengan kitosan blangkas dan pelarut VCO terhadap pertumbuhan
Fusobacterium nucleatum.
BAB 4
METODE PENELITIAN
4.1 Rancangan penelitian : Posttest Only Control Group Design
Jenis penelitian : Eksperimental murni laboratorium
4.2 Sampel dan besar sample
4.2.1 Sampel : Koloni bakteri Fusobacterium nucleatum
ATCC 25586 yang telah dibiakkan pada
petri dish yang berisi Mueller Hinton Agar
(MHA).
4.2.2 Besar sample
Penentuan besar sampel didasarkan pada penelitian sebelumnya yang
dilakukan oleh Banurea dan Trimurni (2008). Dalam penelitian ini bahan yang
digunakan dibagi atas 3 kelompok yaitu 2 (dua) kelompok bahan coba dan 1 (satu)
kelompok kontrol, dimana masing-masing konsentrasi terdiri atas 5 (lima) sampel.
Kelompok I : Kitosan blangkas 1gr; 0,5gr dan 0,25gr ditambahkan 100
ml asam asetat 1% dan 1 ml pelarut gliserin 100%
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Kelompok II : Kitosan blangkas 1gr, 0,5gr dan 0,25gr ditambahkan 100
ml asam asetat 1% dan 1 ml pelarut VCO 100%
Kelompok III : Kontrol Gliserin 100% dan VCO 100%
Sehingga jumlah keseluruhan sampel adalah 40 sampel.
Sesuai Standard Operating Procedure (SOP) yang ada di Laboratorium
Tropical Disease Centre, Universitas Airlangga, penentuan perbedaan daya hambat
kitosan blangkas dengan pelarut gliserin dan kitosan blangkas dengan pelarut VCO
pada konsentrasi yang sama, dilakukan dengan Metode Drop Plate Miles Misra
dengan 5 (lima) kali pengulangan untuk mendapatkan hasil yang representatif dalam
menghitung jumlah koloni yang tumbuh pada media pembiakan.
4.3 Variabel Penelitian
VARIABEL BEBAS VARIABEL TERGANTUNG
Kitosan blangkas bermolekul tinggi Jumlah bakteri Fusobacterium

(Trimurni et al., 2006) nucleatum yang hidup pada
Lar. Kitosan 1%;0,5%;0,25% + gliserin setiap konsentrasi bahan coba
Lar. Kitosan 1%;0,5%;0,25% + VCO (1%; 0,5% dan 0,25%)
Gliserin 100%
VCO komersil 100% (Laurica,
Indonesia)
VARIABEL KENDALI VARIABEL TAK TERKENDALI

Media pertumbuhan (MHA)
Cara penyimpanan bahan
F. nucleatum ATCC 25586
pelarut gliserin dan VCO serta
yang diisolasi
lamanya penyimpanan sebelum
Konsentrasi lar. kitosan
bahan diperoleh
blangkas 1%; 0,5% dan 0,25%
Fania Maulani Rahmy : Perbedaan Daya Hambat Kitosan Blangkas (Lymulus Komposisi pelarut
polyphemus) gliserin
Bermolekul Tinggidan
Dengan Pelarut Perbandingan
Gliserin lar.Coconut
Dan VCO (Virgin kitosan
Oil) Terhadap Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 (Penelitian
IN-VITRO), 2009. blangkas dengan pelarut
VCO komersil yang digunakan
USU Repository 2009 Kandungan bahan lain yang
Suhu inkubasi (37 C)
terdapat pada VCO komersil
Waktu pembiakan F. nucleatum
(24 jam)
Teknik pengisolasian dan
pengkulturan
4.3.1 Variabel bebas
a. Kitosan blangkas bermolekul tinggi dengan berat 1gr; 0,5 gr dan 0,25 gr
(Trimurni et al., 2006)
b. Larutan kitosan blangkas dengan konsentrasi 1%; 0,5% dan 0,25% yang
dicampur dengan pelarut gliserin 100%
c. Larutan kitosan blangkas dengan konsentrasi 1%; 0,5% dan 0,25% yang
dicampur dengan pelarut VCO 100%
d. Pelarut yaitu gliserin 100% dan VCO komersil 100% (Laurica, Indonesia)
4.3.2 Variabel tergantung
Jumlah bakteri Fusobacterium nucleatum yang hidup pada setiap konsentrasi
bahan coba dengan pelarut yaitu pada konsentrasi 1%; 0,5% dan 0,25%.
4.3.3 Variabel kendali
a. Media pertumbuhan yang digunakan yaitu Mueller Hinton Agar (MHA).
b. F. nucleatum yang diisolasi merupakan stem cell F.nucleatum ATCC
25586
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
c. Konsentrasi larutan kitosan blangkas sebesar 1%; 0,5% dan 0,25%
d. Perbandingan Lar. Kitosan Blangkas 1%; 0,5% dan 0,25% dengan pelarut
gliserin 100% dan VCO 100%
e. Suhu inkubasi bakteri F. nucleatum yaitu 37C.
f. Waktu pembiakan F. nucleatum yaitu selama 24 jam.
g. Teknik pengisolasian dan pengkulturan F. nucleatum pada inkubator CO2
h. Sterilisasi alat, bahan coba dan media
4.3.4 Variabel tak terkendali
a. Cara penyimpanan bahan pelarut gliserin dan VCO serta lamanya
penyimpanan sebelum bahan diperoleh
b. Komposisi pelarut gliserin dan VCO komersil yang digunakan
c. Kandungan bahan lain yang terdapat pada VCO komersil
4.4. Definisi opersional
4.4.1 Bakteri Fusobacterium nucleatum yang berasal dari stem cell F. nucleatum
ATCC 25586 (MediMarkEurope, France) dikultur pada media Mueller
Hinton Agar (MHA) kemudian dicampurkan dengan bahan coba kitosan
blangkas 1%; 0,5% dan 0,25% dengan pelarut gliserin dan VCO lalu
diinkubasi dalam inkubator CO2 (Sanyo, Japan) dengan suhu 37C selama 24
jam untuk menciptakan suasana anaerob sehingga dapat ditentukan perbedaan
daya hambat antara kitosan blangkas dengan pelarut gliserin dan kitosan
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
blangkas dengan pelarut VCO pada konsentrasi yang sama terhadap
pertumbuhan bakteri Fusobacterium nucleatum.
4.4.2 Kitosan blangkas (Trimurni et al., 2006) merupakan kitosan yang diperoleh
dari kulit udang blangkas, dimana sebanyak 1 gr; 0,5 gr dan 0,25 gr bubuk
kitosan blangkas dilarutkan dalam 100 ml asam asetat 1% dan selanjutnya
ditambahkan 1 ml pelarut gliserin 100% dan VCO 100%.
4.4.3 Gliserin merupakan pelarut jenis viscous yang dicampurkan dengan larutan
kitosan blangkas 1%; 0,5% dan 0,25%, masing-masing sebanyak 1 ml.
4.4.4 VCO (virgin coconut oil) komersil dengan merk Laurica, Indonesia
merupakan pelarut jenis oily, sebanyak 1 ml dicampurkan dengan larutan
kitosan blangkas 1%; 0,5% dan 0,25%.
4.4.5 Kitosan blangkas + gliserin merupakan campuran 9 ml larutan kitosan
blangkas pada konsentrasi 1%; 0,5% dan 0,25% dengan 1 ml pelarut gliserin
100% yang akan dilihat daya hambatnya terhadap penambahan 1 ml suspensi
bakteri Fusobacterium nucleatum yang telah sesuai dengan kekeruahan 0,5
Mc Farland dalam suasana anaerob.
4.4.6 Kitosan blangkas + VCO merupakan campuran 9 ml larutan kitosan blangkas
pada konsentrasi 1%, 0,5% dan 0,25% dengan 1 ml pelarut VCO 100% yang
akan dilihat daya hambatnya terhadap penambahan 1 ml suspensi bakteri
Fusobacterium nucleatum yang telah sesuai dengan kekeruhan 0,5 Mc
Farland dalam suasana anaerob.
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
4.4.7 Penentuan perbedaan daya hambat kitosan blangkas dengan pelarut gliserin
dan VCO pada konsentrasi yang sama merupakan uji yang dilakukan untuk
membandingkan daya hambat campuran kitosan blangkas dengan pelarut
gliserin dan daya hambat kitosan blangkas dengan pelarut VCO terhadap
bakteri Fusobacterium nucleatum pada konsentrasi yang sama yaitu 1%; 0,5%
dan 0,25%. Penentuan ini dilakukan dengan menggunakan metode Drop Plate
Miles Misra yakni dengan menghitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh
pada media padat (MHA) setelah bahan coba diinkubasi dalam inkubator CO2
(Sanyo, Japan) dengan suhu 37C selama 24 jam untuk menciptakan suasana
anaerob.
4.5. Alat dan bahan penelitian
4.5.1 Alat penelitian
1. Inkubator CO2 (Sanyo, Japan)
2. Electronic balance (Ohyo JP2 6000, Japan)
3. Kaca pembesar (Ootsuka ENV-CL, Japan)
4. Vorteks (Iwaki TM-100, Japan)
5. Autoclave (Tomy, Japan)
6. Tabung gas CO2 (Japan)
7. Tabung reaksi dan rak
8. Petri dish
9. Mikropipet dan tips (Gilson, France)
10. Kabin cabinet

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
11. Lampu spiritus
12. Ose
13. Kapas
4.5.2 Bahan penelitian
1. Kitosan blangkas bermolekul tinggi dengan berat 1gr; 0,5 gr dan 0,25 gr
(Trimurni et al., 2006)
2. Gliserin 100% sebanyak 1 ml
3. VCO komersil 100% (Laurica, Indonesia) sebanyak 1 ml
4. Asam asetat 1% sebanyak 100 ml (Lab. Tropical Disease Centre, UNAIR)
5. Stem cell F. nucleatum ATCC 25586 (MediMarkEurope, France) sesuai
dengan kekeruhan 0,5 Mac Farland (1 x 108)
6. Mueller Hinton Cair (Difco, USA)
7. NaCl 0,9% (Lab. Tropical Disease Centre, UNAIR)
Gambar 6. Media Mueller Hinton Cair

(Difco, USA)
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Gambar 7. Gambar 8. Gambar 9.
Kitosan blangkas VCO komersil Gliserin
(Trimurni et al., 2006) (Laurica, Indonesia)
4.6. Tempat dan waktu penelitian
4.6.1 Tempat penelitian : Laboratorium Tropical Disease Centre,
Universitas Airlangga
4.6.2 Waktu penelitian : 5 (lima bulan)
4.7 Prosedur pengambilan dan pengumpulan data
4.7.1 Pembuatan media
Sebelum spesimen dibiakkan, dilakukan pembuatan media Mueller Hinton
Agar (MHA), sebanyak 12 gram dilarutkan ke dalam 240 ml aquadest, lalu
dipanaskan di atas tungku pemanas magnetik sampai mendidih. Media yang telah
masak, disterilkan di dalam autoklaf (Tomy, Japan) selama 15-20 menit dengan
tekanan udara 2 atm suhu 121C. Lalu dituangkan dalam petri steril, setiap satu petri
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
akan diambil sebanyak 20-25 ml. Setelah memadat, media diinkubasi untuk
memeriksa sterilitasnya. Jika dalam 24 jam tidak terdapat pertumbuhan bakteri maka
media dianggap steril dan siap untuk digunakan.
Gambar 10. Autoclave (Tomy, Gambar 11. Mikropipet dan tips

Japan) (Gilson, France)
Gambar 12.
Inkubator CO2 (Sanyo, Japan)
4.7.2 Pembiakan spesimen
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Proses pembiakan spesimen diambil dari biakan murni Fusobakterium
nucleatum yang dilakukan dalam suasana anaerob pada inkubator CO2 (Sanyo,
Japan). Fusobacterium nucleatum yang digunakan ialah spesimen stem-cell
Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. Dengan menggunakan ose, biakan murni
bakteri tersebut digoreskan zig-zag dan rapat pada media padat Mueller Hinton Agar
(MHA) yang telah disiapkan pada prosedur sebelumnya. Biakan bakteri diinkubasi
dalam suasana anaerob pada suhu 37C selama 24 jam, setelah itu diamati koloni
bakteri yang tumbuh.
Gambar 13. Kaca pembesar (Ootsuka, Gambar 14. Tabung gas CO2
ENV-CL, Japan) (Japan)
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Gambar 15 . Biakan Fusobacterium nucleatum pada petri dish yang telah tumbuh subur,
terlihat dibawah mikroskop, pembesaran 100gpi
Pada hasil pengkulturan dilihat apakah telah didapatkan biakan bakteri
Fusobacterium nucleatum subur dan murni tanpa terjadi mutasi atau kematian.
Apabila pertumbuhan bakteri tidak subur dan terjadi kontaminasi bakteri lain,
prosedur pembiakan dan pengamatan diulang kembali. Setelah hasil didapat, diambil
beberapa koloni bakteri lalu diencerkan dengan larutan isotonis (NaCl 0,9% atau
Phosphat Buffer Saline) hingga didapatkan kekeruhan yang sama dengan standard 0,5
Mac Farland atau sebanding dengan konsentrasi bakteri 1 x 108 CFU/ml.
4.7.3 Persiapan bahan coba
Pada penelitian ini, pembuatan suspensi bahan coba dilakukan pada
konsentrasi yang sama dengan penambahan asam asetat 1% lalu dicampurkan dengan
bahan pelarut (vehicle). Konsentrasi yang digunakan ialah 1%, 0,5% dan 0,25%.
Sejumlah bahan coba yaitu 1 gr bubuk kitosan untuk konsentrasi 1%, 0,5 gr bubuk
kitosan untuk konsentrasi 0,5% dan 0,25 gr bubuk kitosan untuk konsentrasi 0,25%
dicampur dengan 100ml asam asetat 1%, lalu dicampur merata (divortex). Hasil
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
pencampuran ini dari setiap konsentrasi tersebut diambil sebanyak 9 ml dan
dimasukkan ke dalam tabung sesuai label, lalu ditambahkan dengan bahan pelarut
yakni gliserin dan VCO sebanyak 1 ml sesuai dengan konsentrasinya. Untuk kontrol
yakni gliserin 100% dan VCO 100%, pada setiap tabung reaksi hanya diberi 1 ml
bahan pelarut saja tanpa penambahan larutan kitosan blangkas. Masing-masing
konsentrasi bahan coba dibuat dalam 5 tabung.
Gambar 16. Electronic Gambar 17. Vorteks

balance (Ohyo JP2 6000, (Iwaki TM-100, Japan)
)
4.7.4 Penentuan perbedaan daya hambat kitosan blangkas dengan pelarut
gliserin dan VCO pada konsentrasi yang sama
Dalam penelitian ini bahan coba dibagi atas 3 kelompok yaitu:
1. Larutan kitosan blangkas 1%, 0,5% dan 0,25% dengan 1 ml pelarut gliserin
100%
2. Larutan kitosan blangkas 1%, 0,5% dan 0,25% dengan 1 ml pelarut VCO
100%
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
3. Gliserin 100% dan VCO 100% sebagai kontrol
Bahan coba yang telah dipersiapkan sebelumnya didalam tabung reaksi diberi
label sesuai dengan konsentrasinya. Suspensi bakteri yang telah dibuat sesuai dengan
kekeruhan 0,5 Mac Farland diambil sebanyak 1 ml, lalu dimasukkan ke masing-
masing tabung sesuai konsentrasi bahan coba, begitu juga pada kontrol gliserin 100%
dan VCO 100%. Selanjutnya diinkubasi selama 24 jam dalam inkubator CO2 dengan
suhu 37C.
Prosedur penentuan perbedaan daya hambat kitosan blangkas dengan pelarut
gliserin dan kitosan blangkas dengan pelarut VCO pada konsentrasi yang sama
dilakukan dengan metode Drop Plate Miles Misra yang digunakan pada modifikasi
metode dilusi untuk verifikasi hasil dan menentukan apakah kekeruhan yang terjadi
disebabkan oleh pertumbuhan bakteri atau karena suspensi bahan coba. Pada bahan
coba ini tidak dilakukan pengenceran karena kondisi pelarut yang tidak
memungkinkan.
Prosedur Drop Plate Miles Misra dimulai dengan mengambil sebanyak 50l
bahan coba yang telah diinkubasi dengan mikropipet, lalu ditanam ke dalam media
padat yakni Mueller Hinton Agar (MHA). Setiap satu petri media tanam dibagi atas 5
bagian, dimana setiap tetes bahan coba memiliki konsentrasi yang sama tetapi berasal
dari tabung yang berbeda. Dalam prosedur ini dilakukan 5 kali replikasi pada media
yang berbeda sehingga diperoleh 5 petri untuk setiap konsentrasi. Setelah diteteskan,
media didiamkan sekitar 15-20 menit agar mengering lalu dimasukkan ke dalam
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
inkubator CO2 dengan suhu 37C selama 24 jam. Selanjutnya koloni kuman yang
tumbuh pada media agar dapat dihitung.
Prinsip perhitungan jumlah bakteri adalah setiap satu sel bakteri hidup bila
dibiakkan pada media padat akan tumbuh menjadi satu koloni kuman. Bila bentuk
koloni melebar dianggap berasal dari satu koloni, bila bentuk 2 koloni bersinggungan
dianggap sebagai 2 koloni, satuan yang dipakai adalah CFU (Colony Forming Unit) /
ml cairan (suspensi). Apabila pada petri dish mengandung banyak koloni, dimana
terlihat pertumbuhan bakteri yang sulit untuk dihitung, maka pada konsentrasi
tersebut dianggap tidak bisa untuk dihitung (TBUD).
Setelah dihitung jumlah koloni kuman pada masing-masing tetesan, lalu
dibuat jumlah rata-rata dan dikalikan dengan faktor pengenceran dan faktor pengali
untuk tiap petri. Oleh karena bahan coba pada penelitian tidak dilakukan pengenceran
maka faktor pengenceran dikali 1, selain itu karena penanaman bahan coba pada
media padat sebanyak 50l, maka koloni bakteri dikali faktor pengali 20 untuk
mendapatkan satuan CFU/ml (satuan standar).
Misalnya :
*Hasil perhitungan koloni rata-rata tiap petri :
a. Petri 1 = 2
b. Petri 2 = 2
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
c. Petri 3 = 3
d. Petri 4 = 4
e. Petri 5 = 5
Dirata-ratakan (x) = n/5
*Faktor pengenceran = 1 (karena bahan coba tidak diencerkan maka nilainya sama
dengan 1)
*Faktor pengali = 20 (karena bahan coba yg diteteskan sebanyak 50l)
Maka, jumlah bakteri yang tumbuh = jumlah rata-rata koloni x faktor pengencer x
faktor pengali
= n/5 x 1 x 20
= X (CFU/ml)
BAB 5
HASIL PENELITIAN
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Semua bahan coba dikondisikan dalam suasana anaerob pada inkubator CO2
dengan suhu 37C selama 24 jam untuk menentukan perbedaan daya hambat kitosan
blangkas dengan pelarut gliserin dan VCO pada konsentrasi yang sama yakni 1%;
0,5% dan 0,25% terhadap bakteri Fusobacterium nucleatum. Hal ini ditentukan
dengan melihat jumlah pertumbuhan bakteri yang terdapat pada media pertumbuhan
MHA. Dalam proses pencampuran bahan coba kitosan blangkas pada konsentrasi 1%;
0,5% dan 0,25% dengan pelarut gliserin dan VCO serta kontrol gliserin 100% dan
VCO 100% menunjukkan kekeruhan yang sulit ditentukan. Ini dikarenakan kondisi
bahan coba sebelum pencampuran suspensi bakteri sudah menunjukkan kekeruhan
sehingga sulit dibedakan apakah keadaan tersebut disebabkan oleh pertumbuhan
kuman atau bahan coba. Karena itu, pada ketiga konsentrasi ini dilakukan metode
Drop Plate Miles Misra untuk melihat pertumbuhan bakteri pada media agar.
Gambar 18. Lar. Kitosan Blangkas 0,5%
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
(a) (b)
Gambar 19. Hasil peletakan tetesan Kitosan Blangkas 1% (a) dan 0,5% (b) dengan pelarut
Gliserin pada media padat setelah diinkubasi 24 jam terlihat tidak ada pertumbuhan (Steril)
Gambar 20. Hasil peletakan Kitosan Blangkas 0,25% dengan pelarut Gliserin pada media
padat setelah diinkubasi 24 jam terlihat sedikit pertumbuhan bakteri
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Tabel 2. Perhitungan jumlah bakteri untuk bahan coba kitosan blangkas dengan pelarut
gliserin
Bahan Uji Replikasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Bahan Uji 3

Bahan Uji 1 Bahan Uji 2 (0,25%)
(1%) (0,5%)
Blangkas + 1 0 0 8.101CFU/ml *
gliserin 2 0 0 2,2. 102CFU/ml*
3 0 0 1,8. 102CFU/ml*
4 0 0 3,6. 102CFU/ml*
5 0 0 1,2. 102CFU/ml*
X = 0 0 1,92. 102 96 CFU/ml*
* = sudah dikali faktor pengencer 20
0 = steril, tidak didapati pertumbuhan kuman
TBUD = Tidak bisa untuk dhitung, karena pertumbuhan bakteri masih subur (jumlah koloni >300)
ditandai dengan bentuk koloni yang tumpang tindih sehingga sukar untuk dihitung.
Berdasarkan hasil pemeriksaan dengan menggunakan mikroskop (Gambar
19(a) dan (b)) tidak terlihat adanya pertumbuhan bakteri pada media perbenihan
untuk bahan coba kitosan blangkas pada konsentrasi 1% dan 0,5% dengan pelarut
gliserin 100%. Sedangkan pada Gambar 20, kitosan blangkas pada konsentrasi yang
lebih kecil yaitu 0,25% terlihat ada beberapa koloni yang tumbuh di atas media
perbenihan. Pada perhitungan yang terlampir pada tabel 2 menunjukkan bahwa
jumlah bakteri yang tumbuh pada konsentrasi 1% dan 0,5% adalah 0 (nol) atau steril
sedangkan pada konsentrasi 0,25% ditemukan sedikit pertumbuhan bakteri
F.nucleatum dengan rata-rata 1,92. 102 96 CFU/ml. Dari hasil ini dapat disimpulkan
bahwa daya hambat bahan coba kitosan blangkas 1% dan 0,5% dengan pelarut
gliserin lebih efektif dalam membunuh Fusobacterium nucleatum..
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Gambar 21. Hasil penanaman bahan coba kitosan blangkas 1% dengan pelarut VCO pada
media MHA setelah diinkubasi 24 jam
(a) (b)
Gambar 22. Hasil peletakan Kitosan Blangkas 1% (a) dan 0,5% (b) dengan pelarut VCO
terlihat pertumbuhan bakteri yang masih subur (TBUD)
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Gambar 23. Hasil peletakan Kitosan Blangkas 0,25% dengan pelarut VCO terlihat
pertumbuhan bakteri yang masih subur (TBUD)
Tabel 3. Perhitungan jumlah bakteri untuk bahan coba kitosan blangkas dengan pelarut VCO
(virgin cocnut oil)
Bahan Uji Replikasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi

Bahan Uji 1 Bahan Uji 2 Bahan Uji 3
(1%) (0,5%) (0,25%)
Blangkas + VCO 1 TBUD TBUD TBUD
2 TBUD TBUD TBUD
3 TBUD TBUD TBUD
4 TBUD TBUD TBUD
5 TBUD TBUD TBUD
X = TBUD TBUD TBUD
Tabel 4. Perhitungan jumlah bakteri untuk kontrol gliserin 100% dan VCO 100%
Bahan Uji Replikasi Gliserin 100% VCO 100%

Kontrol 1 TBUD TBUD
2 TBUD TBUD
3 TBUD TBUD
4 TBUD TBUD
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
5 TBUD TBUD
X = TBUD TBUD
Campuran kitosan blangkas dengan pelarut VCO dari pemeriksaan
mikroskopis terlihat pada Gambar 22 (a) dan (b) serta Gambar 23. Pada gambar
tersebut menunjukkan bahwa bahan coba kitosan blangkas pada konsentrasi 1%;
0,5% dan 0,25% dengan pelarut VCO terlihat adanya pertumbuhan koloni bakteri
yang masih subur sehingga tidak bisa untuk dihitung (TBUD). Gambaran tersebut
diperkuat oleh hasil perhitungan pada tabel 3. Hal ini menunjukkan bahwa ketiga
konsentrasi bahan coba tersebut tidak memiliki daya hambat terhadap bakteri
F.nucleatum. Begitu juga dengan kontrol gliserin 100% dan VCO 100% yang
terlampir pada tabel 4, menunjukkan pertumbuhan bakteri F.nucleatum yang masih
subur dan tidak bisa untuk dihitung (TBUD).
Data hasil penelitian ini tidak dilakukan uji beda bahan coba secara statistik
karena hasil perhitungan koloni bakteri terdapat nilai 0 (nol) dan TBUD (tidak bisa
untuk dihitung). Artinya, nilai 0 (nol) menunjukkan tidak terdapat pertumbuhan
bakteri pada media perbenihan atau semua bakteri yang berkontak dengan bahan coba
100% mengalami kematian sehingga dikatakan bahwa bahan coba memiliki daya
hambat terhadap bakteri. Sedangkan TBUD (tidak bisa untuk dihitung) menunjukkan
pertumbuhan koloni bakteri yang masih subur pada media perbenihan sehingga sulit
untuk dihitung. Berdasarkan hasil ini, maka nilai yang diperoleh tidak memenuhi
kriteria dalam pengujian statistik.
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
BAB 6
PEMBAHASAN
Penelitian tentang daya hambat kitosan blangkas bermolekul tinggi dengan
pelarut gliserin dan VCO terhadap Fusobacterium nucleatum adalah untuk
membuktikan bahwa kitosan blangkas bermolekul tinggi yang diaplikasikan dengan
pelarut memiliki daya hambat terhadap Fusobacterium nucleatum jika digunakan
sebagai pengembangan bahan dressing saluran akar. Selain itu, penelitian ini juga
untuk mengetahui perbedaan daya hambat kitosan blangkas pada kedua jenis pelarut
terhadap bakteri Fusobacterium nucleatum sehingga diketahui jenis pelarut yang
lebih baik diantara keduanya.
Dalam penelitian ini, konsentrasi bahan yang digunakan untuk menguji daya
hambat kitosan blangkas yang dimanipulasi dengan pelarut gliserin dan VCO adalah
sama yaitu 1%; 0,5% dan 0,25%. Penggunaan konsentrasi yang sama disesuaikan
dengan tujuan penelitian yaitu untuk mengetahui perbedaan pengaruh aplikasi kedua
pelarut ini terhadap efek antibakteri kitosan blangkas sehingga dengan memberikan
perlakuan yang sama pada bahan coba kitosan blangkas maka perbedaan mekanisme
keduanya sebagai pelarut dapat diketahui, apakah mampu meningkatkan daya hambat
kitosan terhadap bakteri atau bahkan menurunkan kemampuan antibakteri kitosan
blangkas sehingga membuat bakteri semakin tumbuh subur.

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Pemilihan konsentrasi bahan coba didasarkan oleh beberapa penelitian
terdahulu, diantaranya adalah Bae et al., 2006 yang meneliti efek kitosan terhadap
Prevotella gingivalis, Fusobacterium nucleatum dan halitosis, hasilnya menunjukkan
bahwa kemampuan antibakteri kitosan terhadap Prevotella gingivalis dan
Fusobacterium nucleatum ialah pada konsentrasi 0,31% dan 0,08%.48 Pada penelitian
lainnya seperti Sano et al., 2003 yang membuktikan bahwa pada konsentrasi 0,5%,
kitosan mampu mengurangi jumlah pembentukan plak dan kandungan bakteri
Streptococcus mutans dalam saliva.22 Begitu juga pada penelitian Ramisz et al., 2005
yang mendapatkan nilai MIC kitosan terhadap bakteri Escherichia coli ialah pada
konsentrasi 1%.23 Hal ini menunjukkan bahwa kitosan sudah memiliki efek
antibakteri pada konsentrasi yang cukup rendah. Atas dasar inilah peneliti
menggunakan bahan coba dengan konsentrasi 1%; 0,5% dan 0,25% sama pada kedua
jenis bahan pelarut.
Berdasarkan penelitian Vianna et al., 2005 yang mengaplikasikan kalsium
hidroksida dengan beberapa pelarut yang berbeda, salah satunya ialah gliserin,
menyatakan bahwa kalsium hidroksida jika dikombinasikan dengan gliserin menjadi
lebih efektif dalam melawan target patogennya.31 Sedangkan menurut Gomes et al.,
2002, gliserin lebih baik dalam menciptakan konsistensi seperti pasta sehingga lebih
mudah dimasukkan ke dalam saluran akar dan pada penelitian tersebut juga terbukti
bahwa kalsium hidroksida pasta dengan pelarut jenis oily (CMCP) lebih signifikan
dalam membentuk zona hambat terhadap bakteri. 15
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Saat ini sedang berkembang penggunan VCO (Virgin Coconut Oil) atau
minyak kelapa murni sebagai pengobatan berbagai macam penyakit, untuk penjagaan
18,19,42,44,45
kesehatan dan kosmetik.45 Banyaknya manfaat VCO disebabkan oleh
tingginya kandungan asam lemak jenuh rantai sedang (MCFA/ Medium Chain Fatty
Acid). Salah satu jenis MCFA ialah asam laurat yang memiliki sifat antimikroba dan
dapat menunjang sistem kekebalan tubuh, dimana asam laurat akan dipecah menjadi
monolaurin sehingga dapat berperan sebagai antivirus, antibakteri dan antiprotozoa.

18,19,42,44,45
Hal inilah yang mendasari pemilihan gliserin dan VCO sebagai pelarut
kitosan blangkas yang nantinya akan digunakan sebagai pengembangan bahan
dressing saluran akar.
Dalam pencampuran kitosan blangkas dengan kedua pelarut ini terlebih
dahulu ditambahkan larutan asam asetat 1%, hal ini disebabkan oleh sifat kitosan
yang hanya dapat larut dalam asam encer seperti asam asetat, asam formiat dan asam
sitrat.13,36,49 Menurut penelitian Dunn et al., 1997 adanya gugus karboksil dalam asam
asetat akan memudahkan pelarutan, karena terjadinya interaksi hidrogen antara gugus
karboksil dengan gugus amina dari kitosan. Dalam larutan asam, gugus amina bebas
sangat cocok sebagai polikationik untuk mengkelat logam atau membentuk dispersi.
Hal ini didukung oleh Sanford (1989) dalam suasana asam, gugus amina bebas dari
kitosan akan terprotonisasi membentuk gugus amino kationik (NH3+). Kation dalam
kitosan tersebut jika bereaksi dengan polimer anionik akan membentuk kompleks
elektrolit.50 Pada penelitian lain yaitu Chung et al., 2004 yang menyatakan bahwa
pada suasana yang lebih asam, kitosan lebih mudah untuk membawa gugus amino
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
(NH3+) sehingga kitosan lebih mudah diserap oleh dinding bakteri dan merubah
permeabilitas membran sel dan bakteri menjadi lebih cepat mati. 33
Hasil penelitian menunjukkan bahwa daya hambat kitosan blangkas dengan
pelarut gliserin lebih efektif terhadap bakteri Fusobacterium nucleatum daripada
pelarut VCO, dimana pada bahan coba kitosan blangkas 0,5% dan 1% dengan pelarut
gliserin tidak terlihat lagi pertumbuhan bakteri pada media agar sedangkan kitosan
blangkas dengan pelarut VCO tidak mampu menghambat pertumbuhan bakteri pada
ketiga konsentrasi yang diuji.
Hasil ini kemungkinan karena gliserin dapat larut dengan baik pada kitosan
yang sebelumnya telah dicampur dengan asam asetat 1%. Mekanismenya
kemungkinan karena adanya interaksi antara gugus amina (NH2) kitosan dengan ion
(H+) pada asam asetat sehingga gugus amino berubah menjadi gugus amino kationik
(NH3+), perubahan ini membuat kitosan menjadi lebih aktif berikatan dengan bahan
lain. Dalam proses pencampuran gliserin, interaksi kedua bahan terjadi pada gugus
hidroksil kitosan ([C6H11NO4]n) dan gugus karbonil pada gliserin (C3H5[OH]3).
Sedangkan gugus amino kationik (NH3+) kitosan akan berikatan dengan gugus
anionik dinding bakteri yang dapat menyebabkan perubahan permeabilitas membran
sel dan kematian bakteri.
Kemungkinan lain yang dapat menyebabkan kitosan blangkas dengan pelarut
gliserin memiliki daya hambat yang baik ialah karena dengan penambahan asam
asetat 1% menciptakan lingkungan asam yang dapat merubah struktur dinding sel
bakteri dan terganggunya permeabilitas membran F.nucleatum sehingga lebih banyak

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
kitosan blangkas yang diserap oleh bakteri. Perubahan inilah yang dapat
menyebabkan kematian bakteri F.nucleatum. 35
Ketidakmampuan bahan coba kitosan blangkas dengan pelarut VCO dalam
menghambat pertumbuhan bakteri Fusobacterium nucleatum kemungkinan dapat
disebabkan karena bakteri ini mampu memetabolisme lemak yang terkandung dalam
VCO dengan adanya enzim fab yang berperan dalam proses sintesis asam lemak
sehingga bakteri Fusobacterium nucleatum dapat memanfaatkan hasil metabolisme
lemak sebagai sumber makanan. Diduga bakteri ini hanya mampu mensintesis asam
lemak jenuh27 sedangkan komposisi VCO sendiri lebih dari 90% ialah asam lemak
jenuh.51 Fakta ini membuktikan bahwa pelarut VCO tidak mampu menekan
pertumbuhan bakteri Fusobacterium nucleatum bahkan makin meningkatkan
pertumbuhan sel bakteri karena dapat menyediakan makanan bagi bakteri itu
sendiri.27
Berdasarkan penelitian ini juga terbukti bahwa bahan pelarut yang digunakan
sebagai kontrol tidak memiliki efek antibakteri terhadap F.nucletum (Tabel 4). Hasil
ini sesuai dengan penelitian Gomes et al., 2002 yang menyatakan pelarut aqueous
dan viscous yang digunakannya tidak memiliki efek antibakteri, salah satunya adalah
gliserin.15 Sedangkan pelarut VCO tidak memiliki efek antibakteri terhadap
F.nucletum karena bakteri ini mampu mensintesis lemak yang terdapat di dalam VCO
menjadi makanan sehingga jumlah pertumbuhan bakteri semakin meningkat.
Dalam aktivitasnya sebagai antibakteri, kitosan memiliki beberapa mekanisme
dalam membunuh mikroorganisme diantaranya ialah dengan menggunakan kation

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
(NH3+) yang terdapat pada gugus glukosamin yang berperan dalam interaksi dengan
gugus anion permukaan sel bakteri. Kitosan mengikat dan mengganggu fungsi
normal membran yang akhirnya merusak aktivitas vital bakteri, 13,50 misalnya dengan
meningkatkan kebocoran komponen intraseluler dan menghambat transport nutrisi ke

50
dalam sel. Menurut Rabea et al., (2003) perkembangan kitosan dapat disebabkan
karena kemampuannya berikatan dengan DNA.13 Pengikatan kitosan dengan DNA
dan terhambatnya sintesis mRNA terjadi karena kemampuan kitosan menembus inti
sel mikroorganisme lalu mengganggu sintesis mRNA serta protein sel sehingga
pertumbuhan bakteri menjadi terhambat.47 Selain kondisi lingkungan yang asam,
menurut Liu et al., (2004) aktifitas antimikroba kitosan meningkat sejalan dengan
semakin tingginya derajat deasetilasi karena akan semakin banyak jumlah gugus ion
amino yang dimilikinya.36,50
Sebagai pemikiran, dengan melihat hasil penelitian ini bahan coba kitosan
blangkas pada konsentrasi 1% dan 0,5% dengan pelarut gliserin lebih efektif
menghambat pertumbuhan bakteri Fusobacterium nucleatum daripada bahan coba
kitosan blangkas pada konsentrasi 1%; 0,5% dan 0,25% dengan pelarut VCO dimana
terlihat adanya pertumbuhan bakteri yang masih subur. Peneliti berasumsi bahwa
gliserin sebagai pelarut dapat dipertimbangkan untuk digunakan bersama kitosan
blangkas sebagai bahan dressing, namun untuk penggunaan VCO perlu dilakukan
penelitian yang lebih lanjut dengan menggunakan asam laurat murni sebagai
komposisi utama pada VCO komersil. Hal ini dikarenakan asam laurat murni yang
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
mengandung monolaurin sudah terbukti memiliki kemampuan antibakteri pada
penelitian terdahulu.
BAB 7
KESIMPULAN DAN SARAN
7.1 Kesimpulan
Aplikasi kitosan blangkas bermolekul tinggi pada konsentrasi 1% dan 0,5%
dengan pelarut gliserin lebih baik dalam menghambat pertumbuhan bakteri
Fusobakterium nucleatum daripada kitosan blangkas bermolekul tinggi dengan
pelarut VCO (Virgin coconut oil) pada ketiga konsentrasinya yakni 1%; 0,5% dan
0,25%. Ini membuktikan bahwa terdapat perbedaan antara aplikasi gliserin dan VCO
sebagai pelarut kitosan blangkas jika akan dikembangkan sebagai bahan dressing dan
terlihat bahwa pelarut gliserin lebih efektif dalam menghambat pertumbuhan
Fusobakterium nucleatum daripada penggunaan VCO komersil.
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
7.2 Saran
7.2.1 Sebaiknya digunakan bahan murni dari produk VCO komersial yaitu asam
laurat untuk membuktikan efektifitasnya dalam meningkatkan daya hambat
kitosan blangkas bermolekul tinggi terhadap Fusobacterium nucleatum.
7.2.2 Sebaiknya digunakan pelarut oily yang tidak mengandung bahan yang dapat
dimetabolisme oleh bakteri Fusobacterium nucleatum namun tetap memiliki
daya antibakteri.
7.2.3 Sebaiknya dilakukan uji antibakteri kitosan blangkas dengan pelarut VCO
terhadap bakteri lain yang tidak mampu memetabolisme asam lemak yang
terkandung di dalam VCO
DAFTAR PUSTAKA
1. Baumgartner JC, Microbiologic Aspects of Endodontic Infections. CDA Journal

2004; 32(6): 459-68.
2. Rani A, Chopra A. Isolation and Identification of Root Canal Bacteria from

Symptomatic Nonvital Teeth with Periapical Pathosis. Endodontology: 12-7.
3. Ferreira CM, Rosa OP, Torres SA, Ferreira FB, Bernardinelli N. Activity of
Endodontic Antibacterial Agents Against Selected Anaerob Bacteria. Braz Dent
J 2002; 13(2): 118-22.
4. Thaweboon B, Thaweboon S, Choonharuangdej S, Suppakpatana P. Effect of

Sonicated Prevotella intermedia, Fusobacterium nucleatum and Lactobacillus
casei Extracts on Interleukin-8 Production by Human Dental Pulp Cells.
Southeast Asian Journal of Tropical Medicine and Public Health 2006; 37(3):
523-7.
5. Haraldsson G. Oral Commensal Prevotella species and Fusobacterium

nucleatum: Identification and Potential Pathogenic Role. Dissertation. Helsinki:
Faculty of Medicine of The University of Helsinki, 2005: 16-7, 23-5.
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
6. Jawatz E, Melnick JL, Adelberg EA. Mikrobiologi Kedokteran. Alih Bahasa.
Edi Nugroho, RF Maulany. Jakarta: EGC, 1996: 290.
7. Boldstad AI, Jensen HB, Bakken V. Taxonomy, Biology and Periodontal

Aspects of Fusobacterium nucleatum. Clinical Microbiology Reviews 1996;
9(1): 55-71.
8. Ercan E, Dalli M, Yavuz I, Ozekinci T. Investigation Microorganisms in

Infected Dental Root Canals. Biotechnol and Biotechnol Eq 2006; 20(2): 166-
72.
9. Rosa OP, Torres SA, Ferreira CM, Ferreira FB. In vitro Effect of Intracanal
Medicaments on Strict Anaerobes by Means of The Broth Dilution Method.
Pesqui Odontol Bras 2002; 16(1): 31-6.
10. Mickel AK, Sharma P, Chogle S. Effectiveness of Stannous Fluoride and

Calcium Hydroxide Against Enterococcus faecalis. J Endodon 2003; 29(4):
259-60.
11. Leswari MI. Peranan Kalsium Hidroksida Sebagai Bahan Pelindung Pulpa
Gigi. M.I.Kedokt. Gigi FKG Usakti 1997; 12(34): 45-50.
12. Kudiyirickal MG, Ivancakova R. Antimicrobial agents used in Emdodontic

Treatment. Acta Medica 2008; 51(1): 3-12.
13. Trimurni A, Harry A, Wandania F. Laporan Akhir Penelitian Riset Pembinaan

Iptek Kedokteran 2006/2007. Medan. Fakultas Kedokteran Gigi USU, 2006: 16-
8, 27-30, 37-9.
14. Raafat D, Bargen K, Haas A, Sahl HG. Chitosan as an antibacterial compound:

Insights into its mode of action. Appl Environ Microbiol 2008; 74(12): 3764-73.
15. Gomes BPF, Ferraz CCR, Vianna ME, Rosalen PL, Zaia AA, Teixeira FB,
Souza-Filho FJ. Invitro antimicrobial activity of calcium hydroxide pastes and
their vehicle against selected microorganisms. Braz Dent J 2002; 13(3): 155-61.
16. Anonymous. Glycerinum-Glycerin. http://chestofbooks.com/health/materia-

medica-drugs/Manual-Of-Dental-Materia-Medica-And-
Therapeutics/Glycerinum-Glycerin.html (16 September 2008).
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
17. Anonymous. What is Glycerin?.
<http://www.gaiagarden.com/details/glycerin_extracts.php> (8 September
2008).
18. Timoti H. Aplikasi Teknonologi Membran pada Pembuatan Virgin Coconut Oil.
Nawapanca Adhi Cipta 2005; 1-4.
19. Arif A. Minyak VCO (Virgin Coconut Oil) bersifat Antibakteri, Antivirus dan
Antiprotozoa. <http://www.minyak-kelapa.com/artikel/antibakteri.php> (13
September 2008).
20. Banurea FE, Trimurni A. Antibckterial Effect of High Molecul Chitosan

Blangkas (Lymulus polyphemus) against Fusobacterium nucleatum. Arch
Orofasial Sc Kelantan, Malaysia. 2008; 3(2): 73.
21. Fernandes JC, Tavaria FK, Soares JC, Ramos OS, Monteiro MJ, Pintado ME,
Malcata FX. Antimicrobial effects of chitosans and chitooligosaccharides, upon
Staphylococcus aureus and Escherichia coli, in food model system. Food
Microbiol 2008; 25(7): 922-8. (Abstract).
22. Sano H, Shibasaki KI, Matsukubo T, Takaesu Y. Effect of Chitosan rinsing on

reduction of dental plaque formation. Bull Tokyo Dent Coll 2003; 44(1): 9-16.
23. Ramisz AB, Pajk AW, Pilarczyk B, Ramisz A, Laurans L. Antibacterial and
Antifungal Activity of Chitosan. In: Animal and Environment Proceedings vol.
2. Eds. Kryski A., Wrzesie R. Warszawa. ISAH, 2005: 406-8.
24. Zilm PS, Bagley CJ, Rogers AH, Milne IR, Gully NJ. The proteomic profile of
Fusobacterium nucleatum is regulated by growth pH. Microbiol 2007; 153:
148-59.
25. Baumgartner JC, Bakland LK, Sugita EI. Microbiology Of Endodontics And
Asepsis In Endodontic Practice. In: Ingle JI, Bakland LK, eds. Endodontics
Fifth Edition. Kanada: BC Decker, 2002: 63-74.
26. Siqueira JF, Rocas IN, Alves FRF, Santos KRN. Selected Endodontic
Pathogens in the Apical Third of Infected Root Canals: A Molecular
Investigation. J Endodon 2004; 30(9): 638-43.
27. Kapatral V, Anderson I, Ivanova N, et al. Genome Sequence and Analysis of the
Oral Bacterium Fusobacterium nucleatum Strain ATCC 25586. J Bacteriol
2002; 184(7): 2005-18.
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
28. Avila-Campos MJ, Nakano V. Pathogenecity of Fusobacterium nucleatum:
General Aspects of Its Virulence. Probiotics and Prebiotics Int J 2006; 1(2):
105-12.
29. Rogers AH. Studies on Fusobacteria associated with periodontal disease.

Australian Dent J 1998; 43(2): 105-9.
30. Pianotti R, Lachette S, Dills S. Desulfuration of Cysteine and Methionine by

Fusobacterium nucleatum. J Dent Res 1986; 65(6): 913-17.
31. Vianna ME, Gomes BP, Sena NT, Zaia AA, Ferraz CC, Fihlo FJ. In vitro
evaluation of the susceptibility of endodontic pathogens to calcium hydroxide
combined with diffrent vehicle. Braz Dent J 2005; 16(3): 175-80.
32. Irawan B. Chitosan dan Aplikasi Klinisnya sebagai Biomaterial. Indonesian J

Dent 2005; 12(3): 146-51.
33. Hardjito L, Chitosan sebagai bahan pengawet pengganti formalin. Majalah

Pangan: Media Komunikasi dan Informasi 2006; 15(46): 80-84.
34. Anonymous. Chitin and Chitosan.

<http://www.de.sgs.com/de/cts_safeguards_02307_chitosan.pdf > (12
September 2008).
35. Chung YC, Su YP, Chen CC, Jia G, Wang HL, Wu JCG, Lin JG. Relationship
between antibacterial activity of chitosan and surface characteriscs of cell wall.
Acta Pharmacol Sin 2004; 25(7): 932-6.
36. Sun-Ok FK. Physicochemical and Functional Properties of Crawfish Chitosan

as Affected by Different Processing Protocols. Thesis. Seoul: Seoul National
University, 1991:1-31.
37. Anonymous. Asam asetat. <http://id.wikipedia.org/wiki/Asam_asetat.> (9

Februari 2009).
38. Anonymous. Creature of the Month. <http://www.no-

pest.com/HorseShoeCrab.htm> (8 Oktober 2008).
39. Prashanth KVH, Tharanathan RN. Chitin/Chitosan: Modification and their

unlimited application potential-an overview. J Trends in Food Science &
Technol 2007; 18 (3): 117-31.
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
40. Allen LV. Compounding with glycerin and Propylene glycol. Secundun Artem;
12(3):1-6.
41. Anonymous. Why Glycerin Usp?. The Soap and Detergent Association. 2000:
1-3.
42. Anonymous. Rain lamp fluids.

<http://www.simnia.com/rain_lamps/fluids/fluids.htm> (9 September 2008).
43. Anonymous. Cara mengolah VCO Berkualitas. <http://virgin-

oilww.blogspot.com/2007/09/cara-mengolah-vco-berkualitas.html> ( 9
September 2008).
44. Dufour M, Manson JM, Bremer PJ, Dufour JP, Cook GM, Simmonds RS.
Characterization of Monolaurin Resistance in Enterococcus faecalis. Applied
and Environmental Microbiology 2007; 73(17): 5507-15.
45. Warta Penelitian dan Pengembangan Penelitian Pasca Panen Pertanian. Minyak
Kelapa Murni: Harapan Nilai Tambah yang Menjanjikan. Warta Penelitian dan
Pengembangan Pertanian Indonesia 2005; 27(2): 1-4.
46. Anonymous. What is good and advantage of Virgin Coconut Oil to Your
Health? <http://www.bio-asli.com/pro/e_pro/e_kebaikan.asp> (29 Desember
2008).
47. Anonymous. Technical information on Monolaurin.

<http://www.monoclean.com/MonoLaurin_Technical_Info.pdf > (14 Oktober
2008).
48. Bae KH, Jun EJ, Lee SM, Kim JB, Paik DI. Effect of chitosan on Prevotella
gingivalis, Fusobacterium nucleatum and halitosis. Oral Health, Therapeutics.
2006.<http://adr.confex.com/iadr/2006Orld/techprogram/abstract_72623.htm>.
(2 Februari 2009).
49. Rochima E. Karakterisasi Kitin dan Kitosan Asal Limbah Rajungan Cirebon
Jawa Barat. <http://resources.unpad.ac.id/unpad-
content/uploads/publikasi_dosen/Makalah-5.Karakterisasi%20kitin.pdf.> (4
Februari 2009).
50. Eldin MS, Soliman EA, Hashem AI, Tamer TM. Antibacterial Activity of
Chitosan Modified with New Technique. Trends Biomater Artif Organs 2008;
22(3): 121-33.
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Lampiran 1. Skema Alur Pikir
Antibakteri Mikrobiologi Endodonti

Kitosan ditemukan Routget (1859) Perkembangan teknologi
biopolymer alami polisakarida turunan pemeriksaan mikroflora saluran akar
utama kitin deasetilasi kitin + lar.NaOH teknik aerob metode anaerob
pekat asal : kulit hewan laut, insektisida dan Miller, 1894 Penyebab utama
jamur inflamasi pulpa bakteri bakteri
Struktur poly--1,4-glucosamine kamar pulpa berbeda dengan saluran
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Kitosan molekul rendah akar
molekul tinggi Moller, 1981 cit Grossman, 1998
mengisolasi 74% bakteri anaerob
gugus amino bebas sebagai gugus fungsional Oguntebi et al, 1982 mengisolasi
Sifat khas : bioaktifitas, biodegradasi, tidak beracun 48% bakteri F. nucleatum, S.mitis dan
Aplikasi & kegunaan medis, industri pangan, kokus fakultatif gram (+)
pengawet makanan dan kedokteran gigi kitosan Sobiston et al, 1976 mengisolasi
blangkas (Trimurni et al., 2006) bahan pulp 66% Bacteroides dan Fusobacteria di
capping jaringan periapikal
Daya antibaktrial : Sundqvist, 1994 mengisolasi 48%
Chung et al., 2000 suasana derajat deasetilasi bakteri anaerob F.nucleatum
Jacinto et al, 2003 mengisolasi
& asam NH 3+ bebas >> memudahkan
74,77% bakteri obligat anaerob
penyerapan bakteri terhadap kitosan >> kitosan
Bakteri yang mendominasi hasil
diserap bakteri >> perubahan permeabilitas
penelitian :
bakteri
F. necrophorum (15 kasus)
Hardjito, 2006 afinitas kuat dengan DNA
A.prevotii (14 kasus)
bakteri, interaksi dengan membran sel bakteri
Peptostreptococcus (13 kasus)
gangguan permeabilitas membran kebocoran
F.nucleatum (11 kasus)
materi protein, pengkelat
S.sanguis (11 kasus)
Dalam penggunaan bahan-bahan dressing saluran akar Fusobacterium nucleatum
seperti Ca(OH)2 diperlukan vehicle, hal ini bertujuan Menggunakan a. amino (energi) dan
untuk memudahkan bahan tersebut untuk glukosa (reaksi biosintesis molekul
dimanipulasikan ke dalam saluran akar : interseluler)
Dahlen & Hosfad, 1997
Vehicle :
Membran luar sel LPS zat
a) Larutan aqueous : sterile distilled water, sterile
endotoksin biological effect
saline, lar. Anestesi, methylcellulose,
potent antigen antibodi host
carboxymethylcellulose, lar.anionic detergent,
chlorhexidin Moore et al, 1991 cit Boldstad et
al., 1996 Penyebab penyakit
b) Larutan viscous : gliserin, polyethyleneglycol,
periapikal produk metabolisme
propyleneglycol
butirat, propionate ion
Gliserin
ammonium menghambat
- ditemukan oleh Scheele (1779)
proliferasi fibroblast gingival
- saponifikasi dari minyak zaitun (olive oil)
mengiritasi jaringan penetrasi
- Formula C3H5[OH]3 , tipe dari alkohol
- Aplikasi bid. Kedokteran sebagai bahan pelarut bakteri epitel gingival plak
c) Larutan oily : camphorated periodontitis apikalis
paramonochlorophenol (CMCP), olive oil Sifat F.nucleatum berkaitan dengan
bakteri lain :
VCO (Virgin Coconut Oil) Memecah glukosa interseluler
- minyak kelapa murni teknik konvensional energi bagi bakteri lain
(fermentasi dan sentrifugasi) dan aplikasi Hubungan sinergis F.nucleatum
teknologi membrane
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
- Kandungan 93% asam lemak jenuh 47- dengan faktor virulensi
53% a.lemak rantai sedang zat dominan
efek patogenik bakteri pigmen
asam laurat 50.33%
hitam
- Sifat mudah dicerna, tidak dirubah menjadi
kolesterol, tidak tertimbun di dalam tubuh Kemampuan beragregasi
- Aplikasi bid. kesehatan antibodi, melalui ikatan protein dinding
penyembuhan, mengganti sel sel rusak, sel, residu karbohidrat
antibakteri, antivirus dan jamur (C.albicans), interaksi protein
- Daya antibacterial (Eubacterium sp), ikatan asam
VCO as. Laurat monolaurin lipoteichoic (S.sanguis), ikatan
menembus dinding sel bakteri yang karbohidrat (galaktosa:
mengandung lipid cairan sel tersedot keluar p.ginggivalis dan lektin:
sel mengerut bakteri lisis F.nucleatum)
- Patogen yang mampu diatasi VCO Strep.
agalactiae, Strep. aureus dan bermacam virus
(herpes, sarcoma, HIV, leukemia dan
cytomegalovirus)
Pada penelitian Banurea dan Trimurni (2008) menunjukkan bubuk kitosan blangkas
bermolekul tinggi bereaksi positif sebagai antibakteri terhadap Fusobacterium nucleatum,
namun sulit untuk dimanipulasikan ke dalam saluran akar
Karena itu timbul pemikiran untuk mengaplikasikan bahan vehicle (pelarut) berupa
gliserin dan VCO (Virgin Coconut Oil) bersama kitosan blangkas untuk mempermudah
proses manipulasi
Dalam aplikasi klinis di bidang kedokteran gigi, bubuk kitosan blangkas

bermolekut tinggi memiliki efek antibakteri terhadap Fusobacterium
nucleatum, namun belum diketahui efek antibakterial kitosan blangkas
bermolekul tinggi jika diaplikasikan dengan pelarut gliserin dan VCO
(virgin coconut oil) dan apakah kedua bahan ini memiliki perbedaan daya
hambat terhadap Fusobacterium nucleatum
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Dari uraian diatas timbul pemikiran untuk mengetahui efek antibakterial
bahan kitosan blangkas bermolekul tinggi jika diaplikasikan dengan bahan
pelarut gliserin dan VCO (virgin coconut oil) dan mengetahui perbedaan
daya hambat keduanya terhadap Fusobacterium nucleatum.
Judul penelitian
Tujuan penelitian
PERBEDAAN DAYA HAMBAT
Mengetahui perbedaan daya hambat kitosanKITOSAN
blangkasBLANGKAS
bermolekul tinggi
BERMOLEKUL
dengan TINGGI
aplikasi pelarut DENGAN
gliserin dan PELARUT
VCO terhadapGLISERIN DAN
pertumbuhan
VCO TERHADAP
Fusobacterium nucleatum FUSOBACTERIUM NUCLEATUM
Lampiran 2. Skema alur penelitian
1.1 Pembuatan media pertumbuhan
MHA 12 gram + aquadest 240 ml

Dipanaskan hingga mendidih

IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Disterilkan dengan autoklaf selama 15-20 menit dengan tekanan udara 2 atm suhu
121C

Dituangkan ke dalam Petri (20-25 ml/petri)

Diinkubasi sehingga dipeoleh media yang steril dan siap untuk digunakan
1.2 Pembiakan spesimen
Stem cell Fusobacterium nucleatum ATCC 25586

dibiakkan pada media pertumbuhan (MHA)

1-2 ose koloni disuspensikan dengan larutan NaCl 0,9%

Kekeruhan 0,5 Mac Farland / 1.108 CFU/ml
1.3 Persiapan bahan coba
Lar. Kitosan Lar. Kitosan Lar. Kitosan

blangkas 1% blangkas 0,5% blangkas 0,25%
(1gr + 100ml (0,5gr + 100ml (0,25gr + 100ml
a.asetat 1%) a.asetat 1%) a.asetat 1%)
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Dicampur merata (divortex)
Diambil sebanyak 9 ml + 1ml pelarut gliserin/VCO
K
9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml 9 ml
KB 1% KB KB KB 1% KB KB
+ 1ml 0,5% + 0,25% + 1ml 0,5% + 0,25%
Gli 1ml + 1ml VCO 1ml + 1ml
Gli Gli VCO VCO
(5x) (5x) (5x) (5x) (5x) (5x)
Kontrol Kontrol
1ml 1ml
Gliserin VCO
100% 100%
(5x) (5x)
1.4 Penentuan perbedaan daya hambat kitosan blangkas dengan pelarut

gliserin dan VCO pada konsentrasi yang sama
Lar.Kitosan Blangkas 1% Lar Kitosan Blangkas 0,5% Lar.Kitosan Blangkas 0,25%

(1gr + 100ml a.asetat 1%) (0,5gr + 100ml a.asetat 1%) (0,25gr + 100ml a.asetat 1%)
(9 ml) (9 ml) (9 ml)
+ + +
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Pelarut (Gliserin/VCO) Pelarut (Gliserin/VCO) Pelarut (Gliserin/VCO)
(1ml) (1ml) (1ml)
+ + +
Suspensi bakteri (1ml) Suspensi bakteri (1ml) Suspensi bakteri(1ml)
(MacF 0,5) (MacF 0,5) (MacF 0,5)
Inkubasi 37C, 24 jam pada inkubator CO2
Bahan coba ketiga konsentrasi dengan pelarut glisein & VCO + Suspensi bakteri
Diteteskan ke media pertumbuhan MHA sebanyak 50l

(Metode Drop Plate Miles Misra)
Setiap satu petri diisi 5 tetes bahan coba dengan konsentrasi yang sama dari tabung
yang berbeda
50 l 50 l
50 l 50 l
50 l
Dilakukan 5 kali pengulangan dengan petri yg berbeda

( ada 5 petri untuk setiap konsentrasi )
Inkubasi 37C, 24 jam pada inkubator CO2
Dihitung jumlah koloni bakteri yang tumbuh diatas media
Lampiran 3. Data hasil perhitungan jumlah bakteri pada penentuan perbedaan

daya hambat kitosan blangkas 1%; 0,5% dan 0,25% dengan pelarut gliserin
dan VCO serta kontrol pelarut gliserin 100% dan VCO 100%
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009
Bahan Uji Replikasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi Bahan Uji 3
Bahan Uji 1 Bahan Uji 2 (0,25%)
(1%) (0,5%)
Blangkas + 1 0 0 8.101CFU/ml *
gliserin 2 0 0 2,2. 102CFU/ml*
3 0 0 1,8. 102CFU/ml*
4 0 0 3,6. 102CFU/ml*
5 0 0 1,2. 102CFU/ml*
X = 0= Steril, tidak didapati pertumbuhan kuman
20 = faktor pengali (yang ditanam 50ul)
Bahan Uji Replikasi Konsentrasi Konsentrasi Konsentrasi

Bahan Uji 1 Bahan Uji 2 Bahan Uji 3
(1%) (0,5%) (0,25%)
Blangkas + VCO 1 TBUD TBUD TBUD
2 TBUD TBUD TBUD
3 TBUD TBUD TBUD
4 TBUD TBUD TBUD
5 TBUD TBUD TBUD
X = TBUD= Tidak bisa untuk dhitung, karena pertumbuhan bakteri
masih subur (jumlah koloni >300) ditandai dengan
bentuk koloni yang tumpang tindih sehingga sukar untuk
dihitung.
Bahan Uji Replikasi Gliserin 100% VCO 100%

Kontrol 1 TBUD TBUD
2 TBUD TBUD
3 TBUD TBUD
4 TBUD TBUD
5 TBUD TBUD
X = TBUD TBUD
IN-VITRO), 2009.
USU Repository 2009

09e01050 PDF

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

09e01050 PDF

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

PERBEDAAN DAYA HAMBAT KITOSAN BLANGKAS

(Lymulus polyphemus) BERMOLEKUL TINGGI DENGAN

Diajukan untuk memenuhi tugas dan melengkapi

syarat guna memperoleh gelar Sarjana Kedokteran Gigi

FANIA MAULANI RAHMY

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI

SKRIPSI INI TELAH DISETUJUI UNTUK DISEMINARKAN PADA

Prof. Trimurni Abidin,drg.,M.Kes.,Sp.KG(K)

PERBEDAAN DAYA HAMBAT KITOSAN BLANGKAS (Lymulus

Yang dipersiapkan dan disusun oleh :

FANIA MAULANI RAHMY

Telah dipertahankan didepan tim penguji

Susunan Tim Penguji Skripsi

Prof. Trimurni Abidin,drg.,M.Kes.,Sp.KG(K)

Anggota tim penguji lain

Cut Nurliza,drg.,M.Kes Wandania Farahanny,drg

Medan, 19 Maret 2009

Departemen Ilmu Konservasi Gigi

Fania Maulani Rahmy

Perbedaan Daya Hambat Kitosan Blangkas (Lymulus polyphemus)

Terhadap Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 (Penelitian In-Vitro)

Menurut Sundqvist (1992) Fusobacterium nucleatum merupakan salah satu

bertujuan untuk mengeliminasi mikroorganisme yang menginfeksi saluran akar.

Penggunaan bahan dressing yang semakin berkembang memberikan kesempatan

antibakteri yakni kitosan blangkas.

Gomes et al., 2002 menyatakan bahwa peran pelarut viscous ketika

dalam menciptakan konsistensi pasta sehingga lebih mudah dimasukkan ke dalam

keduanya sebagai antibakteri terhadap Fusobacterium nucleatum.

Penelitian ini dilakukan untuk membedakan daya hambat kitosan blangkas

biakkan murni Fusobacterium nucleatum. Bahan coba hasil pencampuran ditanam

37oC selama 24 jam.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa hanya kitosan blangkas pada konsentrasi

F.nucleatum. Bahan ini terbukti lebih efektif dalam menghambat Fusobacterium

mampu menghambat pertumbuhan bakteri pada ketiga konsentrasi yang diuji.

Daftar Rujukan : 50 ( 1986-2009 )

Sarjana Kedokteran Gigi.

menyayangi, membimbing, memberi semangat serta motivasi dan mendukung secara

menyelesaikan skripsi ini dengan baik.

Penulis mengucapkan terima kasih kepada keluarga yang telah banyak

dan Randi Wiranata.

1. Prof. H. Ismet D. Nasution, drg., Sp.Pros(K)., Ph.D selaku Dekan Fakultas

Kedokteran Gigi Universitas Sumatera Utara.

2. Prof. Trimurni Abidin,drg.,M.Kes.,Sp.KG(K) selaku Ketua Departemen Ilmu

ini sehingga dapat diselesaikan dengan baik.

3. Seluruh staf pengajar dan pegawai khususnya di Depertemen Ilmu Konservasi

Gigi Universitas Sumatera Utara yang telah memberikan bantuan selama

penyelesaian skripsi ini.

4. Ariyani, drg selaku dosen pembimbing akademik yang telah membimbing

penulis selama menjalani pendidikan di Fakultas Kedokteran Gigi Universitas

5. Dr. Wahyu Hidayatiningsih S.Si., M.Kes selaku peneliti pada Laboratorium

Tropical Disease Centre, Universitas Airlangga yang telah banyak membantu

peneliti terutama dalam kegiatan penelitian di laboratorium.

Pusat Penelitian FMIPA USU atas bimbingannya dalam penelitian ini.

dapat terselesaikan dengan baik

teman-teman stambuk 05 yang tidak dapat disebutkan satu persatu, terima

terjalin selama ini

9. Terkhusus untuk temen-teman U-36; Fresty, Darnita, Ninna, Onna, Tiwi,

Darmayanti dan senior-senior lainnya yang telah banyak membantu. Untuk

secara langsung maupun tidak, mudah-mudahan segala bantuannya menjadi amal

skripsi ini terdapat kesalahan baik yang disengaja maupun tidak.

Medan, 19 Maret 2009

HALAMAN JUDUL ................................................................................. i

HALAMAN PERSETUJUAN ................................................................... ii