PENGEMBANGAN UJI PELEPASAN IN VITRO UNTUK CAPSAICIN TOPIKAL FORMULASI GEL DENGAN

MENGGUNAKAN FRANZ DIFFUSION CELL

Uji pelepasan in vitro (IVRT) dikembangkan untuk mengevaluasi profil pelepasan Capsaicin dari formulasi
gel topikal Capsaicin. Metode ini dikembangkan dengan menggunakan sel difusi Vertikal Franz, selaput
sintetis yang tersedia secara komersial, media reseptor hidrolik dan kuantifikasi oleh HPLC dengan
deteksi UV. Profil pelepasan Capsaicin yang baik diamati dengan membran Teflon 0.2m, Etanol: Air
(70:30,% v/v) sebagai media reseptor, 32C sebagai suhu kompartemen dan 8 jam waktu belajar. Aliquot
sampel pada interval waktu yang berbeda dianalisis dengan HPLC dengan deteksi UV pada 280 nm. Nilai
pelepasan kumulatif dan fluks Capsaicin pada akhir penelitian ditemukan sekitar> 15 g / cm2 dan 2,0 g
/cm2/hr berurutan. Linearitas dibuat untuk Capsaicin dalam kisaran konsentrasi 0,25-6,25 g / ml
dengan koefisien korelasi 0,9998. Metode menunjukkan kekuatan dan sensitivitas diskriminatif dalam hal
kuantifikasi pada konsentrasi rendah. Metode dapat digunakan dalam industri farmasi dan Kosmetik
untuk memantau keseragaman batch ke batch sehubungan dengan perubahan komposisi proses dan
formulasi dan untuk perbandingan

Pengenalan

Capsaicin adalah komponen aktif cabe rawit, mereka umumnya dikenal sebagai buah masak dari
berbagai jenis genus capsicum. Umumnya rasa mereka mewakili rasa panas yang terdiri dari
capsaicinoids sebagai kelompok utama senyawa organik yang berkaitan erat dengan keluarga alkaloid,
dan diketahui secara biosintesis dan terakumulasi dalam plasenta buah Capsicum. Pembakaran dan
sensasi menyakitkan yang terkait dengan capsaicin dihasilkan dari interaksi kimianya dengan neuron
sensorik

Capsaicin, sebagai anggota keluarga vanilloid, terikat pada reseptor yang disebut subtipe reseptor
Vanilloid 1. Capsaicin digunakan dalam salep topikal dan juga pada tambalan transdermal untuk
menghidupkan kembali rasa sakit pada neuropati perifer. Ini bisa digunakan sebagai krim untuk
menghilangkan nyeri ringan dan nyeri pada otot dan sendi yang berhubungan dengan arthritis. Ini dapat
digunakan dalam kisaran konsentrasi antara 0,025% dan 0,075%

Struktur dan rincian molekuler Capsaicin diberikan pada gambar

Penggunaan sel difusi Franz untuk menilai permeabilitas kulit telah berkembang menjadi metodologi
penelitian utama, memberikan wawasan kunci tentang hubungan antara kulit, obat dan formulasi.
Parameter kunci untuk setiap produk obat adalah keampuhannya seperti yang ditunjukkan dalam uji
klinis terkontrol. Waktu dan biaya yang terkait dengan percobaan semacam itu membuat mereka tidak
sesuai dengan metode pengendalian kualitas rutin. Oleh karena itu uji pelepasan in vitro (IVRT) oleh sel
difusi Franz sering digunakan untuk memastikan bahwa kualitas dan kinerja produk dipertahankan dari
waktu ke waktu dan dengan adanya perubahan. Tingkat pelepasan in vitro dapat mencerminkan efek
kombinasi beberapa parameter fisik dan kimia, termasuk kelarutan dan ukuran partikel bahan aktif dan
sifat reologi dari bentuk sediaan. Sel difusi Franz biasanya digunakan dengan kulit manusia atau hewan
yang dipalsukan. Namun, bila kulit biologis tidak tersedia, membran sintetis yang digunakan dalam
penelitian difusi obat oleh sel Franz memiliki dua fungsi: simulasi kulit dan kontrol kualitas. Selaput
sintetis untuk pengendalian mutu harus memiliki ketahanan difusi minimum terhadap obat dan hanya
bertindak sebagai pendukung untuk memisahkan formulasi dari media reseptor. Administrasi Makanan
dan Obat-obatan (FDA) telah menyarankan bahwa membran sintetis sederhana berpori cocok untuk
menilai kinerja formulasi topikal karena mereka bertindak sebagai pendukung namun bukan merupakan
batasan yang membatasi batas. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengembangkan uji pelepasan in
vitro (in vitro release test / IVRT) untuk formulasi gel topikal Capsaicin dengan menggunakan sel difusi
Franz dan penerapan metode yang dikembangkan di industri farmasi dan kosmetik. Penelitian ini
dilakukan dengan membran sintetis yang berbeda dan media beralkohol sebagai medium reseptor untuk
menetapkan kondisi terbaik yang sesuai untuk difusi Capsaicin dari formulasi ke medium reseptor
melalui membran sintetis.

BAHAN DAN METODE

Instrument dan reagen

Sel difusi Franz Vertikal dengan auto sampler (Buat: Logan), sistem Aliansi HPLC dengan deteksi UV dan
perangkat lunak Pemberdayaan (Make: Waters), keseimbangan ganda XS205 (Make: Mettler Toledo),
Sonicator sonel bandelin sonar, labu volumetrik, pipet dan gelas teh adalah Digunakan untuk penelitian
ini. Standar kadar glukosa dalam darah (Nilai: 10%), kadar etanol HPLC etanol (dibuat: Merck), kadar
metanol HPLC (Pembuatan: RFCL), kadar HPLC asetonitril (dibuat: RFCL), kadar HPLC grade glukosa
glukolase glukolase HPLC digunakan untuk penelitian ini. .

Parameter uji pelepasan in vitro

Penelitian dilakukan dengan sel Franz terdiri dari enam sel vertikal dan pemandian air yang digunakan
untuk menjaga suhu pada suhu 32 1 C. Sekitar 200 sampai 300 mg sampel gel topikal Capsaicin
diaplikasikan pada membran Teflon 0.2m (membran sintetis) dari ruang donor dan benar-benar
tersumbat dengan menutupi bentuk sediaan dengan parafilm. Bilik diisi dengan Etanol: Air (70:30,% v /
v) sebagai media reseptor dan diaduk pada 600 rpm dengan pengaduk magnet. Media reseptor dipilih
karena kelarutan berair rendah dari Capsaicin. Semua membran telah dibasahi sebelumnya dalam media
reseptor selama 15 menit sebelum digunakan. Setiap penelitian dilakukan selama 8 jam dan sampel
ditarik pada interval 0,5, 1, 2, 4, 6 & 8 jam dari masing-masing sel dan diisi ulang dengan media reseptor
segar. Kuantifikasi Capsaicin dalam sampel dilakukan dengan metode HPLC yang dijelaskan di bawah ini.
Jumlah kumulatif pelepasan obat dan Fluks dihitung dan grafik diplot pelepasan obat kumulatif Vs akar
kuadrat waktu untuk setiap formulasi. Sampel gel dengan komposisi dan sifat reologi yang berbeda
dipelajari dengan metode ini dan dievaluasi perbedaan pelepasan obat dengan memperhatikan
perubahan komposisi formulasi dan perubahan atribut fisik formulasi.

Metode Kuantifikasi (HPLC)

Kuantifikasi Capsaicin pada sampel IVRT dilakukan dengan RP-HPLC dengan deteksi UV pada 280 nm.
Pemisahan dicapai pada kolom Grace Alltima C18 (25cm 4,6 mm, 5 m) yang dipertahankan pada suhu
40 C. Fasa gerak sebagai campuran 0,1% v / v Asam asetat glasial, Metanol dan asetonitril (40:35:25,% v
/ v) digunakan pada laju alir 1,0 ml / menit dengan mode isokratis untuk elusi puncak Capsaicin. Sampel
disuntik dengan 50 l beban injeksi dan waktu lari 22 menit. Kurva linier untuk Capsaicin dalam media
reseptor dibuat pada kisaran konsentrasi 0,25- 6,25 g / ml dan disuntikkan ke dalam HPLC, kurva linier
diplot dari Area Konsentrasi vs Capsaicin. Semua sampel penelitian IVRT dianalisis dengan HPLC dalam
rentang linieritas yang ditetapkan.

HASIL DAN DISKUSI

Media reseptor, membran, parameter aparatus sel difusi Franz lainnya dan metode HPLC untuk
kuantifikasi adalah parameter utama untuk pengembangan metode IVRT dan dioptimalkan seperti yang
disebutkan dalam a), b), c) dan d).

A) Seleksi media reseptor

Faktor yang paling penting untuk pemilihan media reseptor adalah kelarutan obat dalam media. Media
reseptor harus menyediakan wastafel diffusional untuk bahan aktif yang dilepaskan dari formulasi
semipadat. Umumnya hal ini mirip dengan kondisi fisiologis kulit, juga penting untuk memastikan
pelepasan obat dapat diukur tanpa bias. Media reseptor yang tepat seperti penyangga air untuk obat-
obatan terlarut dalam air atau media hidro-alkohol untuk obat-obatan yang larut dalam air atau media
lain dengan pembenaran yang tepat dapat digunakan. Capsaicin tidak larut dalam air dan larut dalam
alkohol. Oleh karena itu kelarutan capsaicin dalam komposisi air dan alkohol yang berbeda (media hidro-
alkohol) dicoba dan menemukan bahwa media yang mengandung 50% alkohol dalam air cukup baik
untuk mencapai kondisi wastafel. Oleh karena itu, percobaan IVRT dilakukan dengan komposisi etanol
dan air yang berbeda seperti 50:50, 60:40, 70:30 & 80:20% v / v sebagai media reseptor, membran
Teflon 0.2m sebagai penghalang, sekitar 200 mg sampel aplikasi Dan jangka waktu 8 jam. Kemudian
diamati profil pelepasan Capsaicin dari formulasi gel dengan menggunakan media reseptor yang
berbeda. Hubungan Q (Cumulative amount release) vs T (akar kuadrat waktu) berasal dari model
Higuchi. Pelepasan kumulatif Capsaicin vs T berkenaan dengan medium reseptor yang berbeda
ditunjukkan pada gambar 2.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa pelepasan capsaicin meningkat dengan meningkatnya konsentrasi
etanol dalam medium reseptor. Pelepasan Capsaicin yang baik seperti 18,63 g dan 20,98 g ditemukan
dengan komposisi Etanol dan Air masing-masing 70:30 dan 80:20,% v / v. Tetapi formasi gelembung
udara ditemukan di ruang reseptor tepat di bawah membran dengan Etanol: Air (80:20,% v / v) sebagai
media reseptor dan variabilitas pelepasan di dalam sel diamati sedangkan dengan Etanol: Air (70:30, %
V / v), tidak ada pengamatan seperti itu yang ditemukan. Oleh karena itu, Etanol: Air (70:30,% v / v)
dipilih sebagai media reseptor untuk penelitian IVRT.

B) pemilihan membran

Membran pilihan memungkinkan obat berdifusi ke media reseptor karena dilepaskan dari sampel dan
tidak boleh mengandung leachables yang dapat menyebabkan gangguan pada kuantifikasi obat. Tiga
membran sintetis yang berbeda 0.2m Nylon, 0.2m Teflon dan polysulphone 0.2m dicoba dengan
Etanol: Air (70:30,% v / v) sebagai media reseptor untuk studi pelepasan Capsaicin dari formulasi gel
topikal. Sebelum memulai studi pelepasan in vitro, studi pengikatan membran dan pretreatment
membran dengan media dilakukan. Studi pengikatan membran dilakukan untuk menentukan apakah
Capsaicin terikat pada membran tertentu atau tidak. Larutan standar capsaicin konsentrasi 4,5g / ml
disiapkan dan disaring melalui masing-masing membran di atas pada rangkap tiga dan dianalisis semua
larutan tersaring terhadap larutan tanpa filter oleh HPLC. Hasil studi pengikatan membran dirangkum
dalam tabel 1 dan memungkinkan perolehan capsaicin ditemukan> 94% dengan ketiga membran,
sementara di dalam tiga membran, Recovery Capsaicin ditemukan> 98% dengan menggunakan membran
Teflon dibandingkan dengan Nylon dan Polysulphone. Membran. Pretreatment membran dilakukan
dengan merendam media reseptor selama 15 menit untuk menghindari variabilitas dalam profil
pelepasan. Kemudian IVRT formulasi gel topikal capsaicin dilakukan dengan masing-masing membran
pada sel tripolis dengan menggunakan etanol: air (70:30,% v / v) sebagai media reseptor. Setiap
penelitian dilakukan selama 8 jam dan pelepasan obat kumulatif yang ditentukan untuk setiap membran.
Hasil penelitian memungkinkan bahwa Teflon 0.2m menunjukkan pelepasan yang baik sekitar 20,98
g / cm2 dibandingkan dengan 0.2m Nylon dan 0.2m Polysulphone membran yang menunjukkan hasil
masing-masing 17,62 g / cm2 dan 15,89 g / cm2 (gambar 3). Oleh karena itu membran Teflon 0.2m
telah selesai untuk penelitian ini.

Tabel 1

Studi pengikatan membran Capsaicin dengan membran sintetis yang berbeda (n = 3)

Gambar 3

Pengaruh membran sintetis yang berbeda pada pelepasan Capsaicin (n = 3)

C) parameter peralatan lainnya & perhitungan pelepasan obat

Suhu belajar yang akan dipilih berdasarkan penerapan formulasi pada organ target. Aplikasi dasar
formulasi gel Capsaicin pada kulit, kemudian suhu 32 C digunakan selama percobaan. Jumlah sampel
gel yang digunakan (200 mg) pada membran dipilih berdasarkan jumlah yang dibutuhkan untuk
penyebaran seragam dan penutupan daerah membran. Umumnya enam sel difusi Franz digunakan untuk
pengujian seperti dalam pengujian disolusi untuk meniadakan variabilitas bentuk sediaan individu.
Sampel interval penelitian ini diselesaikan sebagai 0,5, 1, 2, 4, 6 & 8 jam berdasarkan pelepasan
Capsaicin yang cukup. Sampling dilakukan dengan auto sampler dan ada penggantian sampel yang
lengkap dengan media reseptor segar. Oleh karena itu, tidak ada batasan untuk pengumpulan sampel
volume kecil pada setiap interval dan penggantian sampel secara lengkap dengan media reseptor segar
menghasilkan kondisi wastafel yang mudah untuk obat yang memiliki kelarutan yang buruk. Jumlah
kumulatif (Q) Capsaicin dilepaskan pada luas permukaan Membran ditentukan dengan persamaan
berikut.

Dimana
Q = jumlah kumulatif Capsaicin yang dilepaskan setiap permukaan area (g/cm2)
Cn= Konsenstrasi Capsaicin (g/ml) di determinasi pada nth sampel
V = Volume individual Franz sel difusi, 11 ml
n-1
Ci = jumlah konsentrasi Capsaicin (g/ml) di determinasi pada sampel 1 melalui n-1
i =1
S = volume sampel, 11 ml
A = Permukaan area sampel, 1.766 cm2

d) metode HPLC untuk kuantifikasi

metode analisis yang sensitif telah dikembangkan untk menghitung level rendah dari Capsaicin dalam
medium reseptor. Pemisahan yang baik dari Capsaicin dalam matriks gel diketahui dengan menggunakan
Grace Alltima C18 (25cm 4.6 mm, 5m) sebagai fase gerak dan campuran 0.1% v/v asam asetat
glasial, metanol, acetonitrile (40:35:25, % v/v) sebagai fase diam. Fase diam dijalankan pada laju alir 1.0
ml/menit dalam mode isocratic selama 22 menit untuk dilakukan pemisahan (grafik 4)

Capsaicin dideteksi pada panjang gelombang 220 nm untuk meningkatkan sensitivitas. parameter lain
seperti 50 l volume injeksi dan temperatur kolom 35C dimana diselesaikan selama pengembangan.
Linearitas metode disesuaikan dalam rentang konsentrasi 0.25 6.25 g/ml. korelasi koefisien linearitas
plot dan penjumlahan linearitas didapatkan 0.9998 dan y = 28479x 438.9 (grafik 5).

e) Penggunaan IVRT untuk monitoring pelepasan formulasi gel Capsaicin yang berbeda

Formulasi yang berbeda gel Capsaicin F1(Capsaicin dengan 7% Propylene glycol dalam komposisi gel), F2
(Capsaicin dengan 28% Propylene glycol dalam komposisi gel) and F3 (Capsaicin dengan 30% Propylene
glycol dalam komposisi gel) diuji dengan mengembangkan metode dan sifat pelepasan Capsaicin (grafik
6). Hasil Flux, pelepasan kumulatif obat, viskositas formulasi ditunjukan pada tabel 2. hasil yang
didapatkan bahwa formula F1 menunjukan pelepasan yang baik dari Capsaicin dibandingkan dengan F2
dan F3. Hasil yang didapatkan pada rentang pelepasan Capsaicin akan mempengaruhi sifatnya jika terjadi
perubahan konsentrasi propilen glikol (viskositas) dari formulasi.
Kesimpulan

Pengembangan metode IVRT bertujuan untuk menggunakan membran sintetik sebagai uji pelepasan in
vitro. metode ini merupakan metode yang sensitif, Capsaicin digunakan pada rentang konsentrasi 0.25-
6.25 g/ml mempunyai korelasi linearitas 0.9998. Metode ini digunakan untuk melihat profil atau sifat
dari pelepasan yang berbeda dari sedian topikal gel.

Metode ini menunjukan kekuatan diskriminatif dengan memperhatikan perubahan komposisi dari
formulasi. Metode ini menyediakan alat yang berguna untuk melihat kualitas produk yang dibutuhkan
oleh SUPAC-SS. metode ini bisa digunakan dalam industri farmasi dan kosmetik untuk memantau batch
ke batch agar produk tersebut seragam dengan memperhatikan perubahan dalam proses dan komposisi
formulasi dan pengujian komparatif IVRT.