Kapasitas polifenol dan antioksidan dalam JB

JB 10ml

Sentrifugasi 10 menit

Penyaringan Padatan

Heksana 5ml Ekstraksi Pengambilan 2,5ml

Filtrat 2,5ml

Heksana 5ml Ekstraksi

Filtrat

Analisis fitokimia

1. Analisis ACN
1ml filtrat

Penyaringan (0,22μm

Pengujian

2. Analisis proantosianin

5ml filtrat

Fraksinasi oleh Sephadex LH-20

Pengujian
Pengujian jumlah fenolik

filtrat

Penambahan reagen folin ciocalteu

Pengujian

Persiapan pengujian in vitro dan in vivo

Pengujian CAP-e digunakan untuk mengevaluasi kapasitas antioksidan dari JB in vitro dan in
vivo. Untuk uji in vitro, pengenceran serial JB ditambahkan ke pengujian tersebut. Untuk
pengujian antioksidan serapan in vivo, sampel serum yang diperoleh sebelum dan setelah
konsumsi baik JB atau plasebo yang ditambahkan ke dalam sel.

Pengujian in vitro : sel darah manusia sehat umur 19-52 tahun

JB 100ml

Sentrifugasi

Penyaringan Padatan

Supernatant

Purifikasi sel :

Darah

Sentrifugasi

Fraksi sel polimorfonuklear (PMN) Fraksi eritrosit

Pencucian Pencucian

Pengujian ROS Pengujian CAP-e

Pengujian CAP-e (Cell-Based Antioxidant Protection of Erytrocytes)
Sel darah merat dari jenis O+ dicuci menggunakan garam fisiologis dan disimpan pada suhu
4°C. pencucian ulang dilakukan untuk memastikan senyawa oksidan tidak terserap oleh sel
sebelum dianalisis. Kemudian sel diberi warna menggunakan DCFDA, yaitu probe yang akan
menjadi neon akibat kerusakan radikal bebas. Kemudian diberi hidrogen peroksida dan
dilakukan analisis menggunakan perangkat lunak FlowJo.

Evaluasi pembentukan ROS (Reactive Oxygen Species) oleh sel PMN

Sel PMN

+ JB

+CO2 5% Inkubasi, 37°C 90 menit

Pencucian dalam PBS

Resuspensi

Inkubasi, 37°C 1 jam

+ hidrogen peroksida, 45 menit

Pencucian dalam PBS

Pemindahan ke RPMI

Penyimpanan diatas es

Analisa dengan Flow Cytometry

Pengujian in vivo : 5 botol JB 750ml untuk menguji efek konsumsi jus dengan dosis 120ml.
 Partisipan

Wawancara

Pemeriksaan medis

14 partisipan

7 partisipan 12 partisipan

Pengambilan darah Pengisian kuesioner

Analisa ORAC Pengambilan sampel darah awal

Konsumsi 120ml JB

Pengambilan darah setelah 1

dan 2 jam konsumsi

Pencuplikan 6ml sampel

Pendiaman 30 menit

Sentrifugasi, 10 menit

Pemasukan filtrat kedalam aliquot

Pembekuan

Pengujian status antioksidan