Proyek Fisiologi Mikroba 2018

------------------------------------------------------------------------------
MODUL II
ISOLASI BAKTERI PENGGUNA
TRIPOFAN
PJ : Danang M. Gumilang - 10415033 (no hp : 081321332018) | Co-PJ : Reiza Mauladi - 10415040
Tanggal Praktikum : Kamis, 1 Februari 2018
------------------------------------------------------------------------------

I. PENDAHULUAN
Mikroba merupakan makhluk hidup yang keberadaannya dapat ditemui di hampir seluruh
permukaan bumi. Sampel alam, seperti tanah dan air, umumnya memilki kelimpahan mikroba yang
tinggi. Oleh karena itu, untuk mendapatkan mikroba dengan spesifikasi metabolisme tertentu dari
alam, dibutuhkan suatu teknik khusus yang disebut sebagai teknik kultur pengaya. Teknik ini
dilakukan dengan memanipulasi kondisi fisik dan kimia dari medium tumbuh mikroba sehingga
secara spesifik mampu mendukung pertumbuhan mikroba tertentu dengan lebih baik daripada
mikroba lainnya. Tujuan akhir dari teknik ini adalah untuk membuat mikroba target dapat tumbuh
dengan lebih dominan daripada mikroba lain sehingga lebih mudah untuk diisolasi. Manipulasi fisika
yang dapat dilakukan adalah dengan manipulasi suhu inkubasi, gelap terang, dan pH, sedangkan
manipulasi kimia dapat dilakkan dengan menambahkan senyawa-senyawa spesifik seperti sulfur,
besi , gula, asam amino, ammonia dan lain-lain.
Pada praktikum ini akan dilakukan isolasi bakteri yang mampu mennggunakan triptofan
sebagai sumber karbon. Isolasi dilakukan dari sampel tanah yang berada di dekat akar tumbuhan.
Medium yang digunakan dalam teknik kultur pengaya di praktikum ini adalah medium ATCC-Y, yaitu
medium yang mengandung berbagai mineral tanpa sumber karbon kecuali triptofan. Bakteri
pengguna triptofan merupakan bakteri yang umum ditemui di tanah yang banyak ditumbuhi dengan
tumbuhan. Bakteri pengguna triptofan umumnya memiliki hubungan simbiosis mutualisme dengan
tumbuhan karena mampu menghasilkan senyawa Indole Acetic Acid (IAA) dari hasil metabolisme
triptofan yang dilakukannya. IAA atau auksin merupakan hormon tumbuhan yang mampu
menginduksi pertumbuhan apikal tumbuhan. Isolat bakteri pengguna triptofan yang diperoleh dapat
digunakan untuk berbagai keperluan dalam berbagai bidang. Salah satunya adalah bidang pertanian,
yaitu sebagai pupuk biologis untuk mendukung pertumbuhan tumbuhan.
Proyek Fisiologi Mikroba 2018

II. CARA KERJA

Hari, Tanggal Cara Kerja

Cara Kerja
Kamis, 1 1 gram sample tanah (sesuai kelompok)
Februari 2018 - Dimasukkan ke dalam falcon berisi 9 mL medium brothyang jenisnya sesuai dengan
tabel
- Dikocok perlahan
- Dinkubasi pada suhu ruang dan suasana gelap (ditutup dengan alumunium foil) dan
terang selama 4 hari
Kultur hasil inkubasi 4 hari
Rabu, 5 - Dimasukkan sebanyak 1 mL ke falcon yang berisi medium broth ATCC baru
Februari 2018 - Diinkubasi pada suhu kamar dan suasana sesuai tabel selama 3 hari dalam shaker
Kultur hasil inkubasi 3 hari
- Diencerkan hingga 10-7 dan tiga pengenceran terakhir di- spread pada medium agar
(sesuai dengan tabel)

Kelompok Jenis tanah Perlakuan Jenis medium

1 ATCC-Y dan ATCC-TY
GELAP
Sabtu, 8 2 0-7 cm dari ATCC-T dan ATCC
Februari 2018 3 pangkal akar ATCC-Y dan ATCC-TY
TERANG
4 ATCC-T dan ATCC
5 ATCC-Y dan ATCC-TY
GELAP
6 25-30 cm dari ATCC-T dan ATCC
7 pangkal akar ATCC-Y dan ATCC-TY
TERANG
8 ATCC-T dan ATCC

- Diinkubasi selama 1 hari pada suhu ruang dan suasana sesuai tabel

Isolat mikroba dalam medium ATCC

Minggu, 9 - Dilakukan TPC
Februari 2018 - Diambil 2 koloni dominan , kemudian dilakukan metode 4-way-streak ke medium
ATCC baru (sesuai kelompok)
- Diinkubasi selama 1 hari pada suhu ruang dan suasana sesuai tabel

Senin, 10 Koloni dominan dalam medium ATCC

Februari 2018 - Diamati karakteristik makroskopisnya
- Diinokulasi dengan oose ke dalam 5 mL medium ATCC di dalam tabung reaksi
- Diinkubasi selama 1 hari pada suhu kamar dengan perlakuan sesuai tabel

Isolat dalam medium ATCC-Y cair

Selasa, 11 - Dilakukan uji indol dengan meneteskan 4 tetes reagen Kovac ke dalam tabung reaksi
Februari 2018 - Dilakukan pewarnaan Gram (diambil dari hasil isolasi)
- Diamati di bawah mikroskop dan didokumentasikan
Hasil pengamatan
 Proyek Fisiologi Mikroba 2018

III. MSDS
 NH4Cl  MgSO4
 K2HPO4  Ekstrak yeast
 KH2PO4  Reagen kovac
 L-Triptofan

IV. POIN-POIN LITERATUR

1. Pengertian teknik pengayaan kultur
2. Informasi mengenai medium ATCC 775 (komposisi, kegunaan, cara membuat)
3. Triptofan
4. IAA
5. Contoh bakteri tanah yang memanfaatkan triptofan
6. Uji indol dan Reagen Kovac

V. PERKIRAAN HASIL EKSPERIMEN

Sesuai dengan tujuan, jenis tanah, dan perlakuan masing-masing

VI. FORMAT HASIL PENGAMATAN

Berisi data dari 8 kelompok

1. Tabel hasil Perhitungan TPC (foto yang dimasukkan hanya pengenceran 10-6, tetapi hasil
perhitungan merupakan hasil setelah dirata-rata)
TPC
Kelompok Sampel Tanah Perlakuan Media
Foto Keterangan
Hasil
ATCC
Perhitungan
1
ATCC-Y
Gelap
0-7 cm dari pangkal
ATCC-T
akar
2
ATCC-TY

3
4 Terang
5
6 25-30 cm dari Gelap
7 pangkal akar
8 Terang
 Proyek Fisiologi Mikroba 2018

2. Tabel Hasil Pengamatan Morfologi Mikroskopis dan Makroskopis Bakteri Dominan

Pengamatan Mikroskopis Pengamatan Mikroskopis Hasil uji Indol

Kelompok Sampel Tanah Perlakuan Media
Foto Koloni Keterangan Foto Keterangan Foto hasil
Karakteristik
(-)
ATCC koloni
1 (+)
(-)
ATCC-Y
Gelap
0-7 cm dari pangkal
akar ATCC-T
2
ATCC-TY

3
4 Terang
5
6 25-30 cm dari Gelap
7 pangkal akar
8 Terang

Note : Keterangan pada kolom pengamatan mikroskopis diisi oleh: karakterisitik mikroba (Gram,
bentuk, dsb)

VII. DAFTAR PUSTAKA

minimal 2 jurnal tahun 2000 or lebih baru + 1 buku :)

VIII. CATATAN UNTUK PRAKTIKAN

- Tanah diambil dari jenis tanaman yang nanti akan diberitahukan lebih lanjut
- Hari selasa praktikan wajib membawa ziplock dan aluminium foil karena pengambilan sampel
tanah dilakukan bersamaan dengan pengambilan sampel tanah ekovomik
- Sampel tanah yang diambil ada dua jenis, yaitu yang berjarak sekitar 0-7 cm (panah oranye)
dan 25-30 cm (panah hijau) dari pangkal akar (lihat gambar). Kedalaman tanah yang diambil
berkisar 5-10 cm dari permukaan. Dua sampel tersebut digunakan untuk satu angkatan.

- "The roots of all goodness lie in the soil of appreciation for

goodness"-
Dalai Lama