DNA Rekombinan

Kelompok 1
Galis Nurlia NIM 2119160056
Okib Gustamil NIM 2119160062
Teni Setia Mulyani NIM 2119160064
Adisty Aulia Safira NIM 2119160082
Pengertian

DNA rekombinan atau recombinant DNA/rDNA :

Suatu bentuk DNA buatan dengan menggabungkan atau merekombinasi dua
atau lebih untaian benang DNA yang dalam keadaan normalnya tidak
berpasangan atau terjadi bersama
 Sejarah DNA Rekombinan

Ide DNA rekombinan pertama kali diusulkan oleh Peter Lobban

Publikasi pertama yang menggambarkan produksi yang sukses dan replikasi DNA rekombinan
intraseluler muncul pada tahun 1972 dan 1973
Pada tahun 1972 dengan menggunakan ecoRI, DNA rekombinan pertama kali dihasilkan oleh Paul
Berg
Sedangkan pada tahun 1973 telah dilakukan rekayasa pada bakteri E. coli dengan plasmid
rekombinan oleh Boyer, Cohen dan Chang.
Dengan ditemukannya teknologi DNA rekombinan maka membuat kegiatan analisis dan rekayasa
genetik menjadi semakin berkembang
Macam DNA Rekombinan

Rekombinasi DNA terbagi menjadi 2

• Rekombinasi alami (pindah silang, transduksi,
transformasi)

• Rekombinasi buatan (penyambungan DNA secara in

vitro)

Rekombinasi DNA dapat dilakukan, karena :

• Struktur DNA semua spesies sejenis atau sama

• DNAnya dapat disambung – sambungkan

• Ditemukannya enzim pemotong dan penyambung

• Gen akan dapat terekspresi di sel apa pun

 Faktor Yang Berperan Pada DNA Rekombinan

Enzim (pemotong dan Vektor Agen (sel target)

penyambung)
Enzim pemotong dikenal juga
dengan nama enzim restriksi
endonuclease.
Nama lain dari enzim penyambung
adalah enzim ligase.
Mengingat ukuran gen yang sangat
kecil, maka memasukkan gen ke
dalam sel target harus
menggunakan pembawa gen atau
vektor
Sel target yang biasa digunakan dalam
rekombinasi DNA adalah sel bakteri
Escherichia coli.
 Proses DNA Rekombinan

Isolasi DNA
Salah satu prinsip isolasi DNA yaitu dengan
sentrifugasi. Sentrifugasi merupakan teknik
untuk memisahkan campuran berdasarkan
berat molekul komponennya. Hasil sentrifugasi
akan menunjukkan dua macam fraksi yang
terpisah, yaitu supernatan pada bagian atas dan
pelet pada bagian bawah.

DNA yang telah diisolasi, diuji kualitas dan kuantitasnya melalui elektroforesis dan
spektrofotometer.
The Power of PowerPoint | thepopp.com 7
 Proses DNA Rekombinan

Pemotongan DNA
Enzim restriksi (Endonuklease) adalah enzim yang berasal dari bakteri, yang
dapat memotong rantai DNA (double stranded) atau RNA. Bagian pada
DNA yang dikenai aksi pemotongan oleh enzim restriksi ini dinamakan
sekuens pengenal.

Contoh : Enzim EcoRI Memotong DNA pada bagian yang urutan basanya adalah GAATTC (sekuens pengenal bagi EcoRI
adalah GAATTC). Didalam sekuens pengenal tersebut, Enzim EcoRI memotongnya tidak pada sembarang situs tetapi
hanya memotong pada bagian atau situs antara G dan A.
 Bentuk Pemotongan DNA

Pemotongan Sticky End Pemotongan Blunt End

 Proses DNA Rekombinan

Penggabungan DNA
Fragmen-fragmen DNA genomik nantinya harus dapat disambungkan
(diligasi) dengan DNA vektor yang sudah berbentuk linier.

Ada beberapa cara yang dapat digunakan untuk meligasi fragmen-fragmen DNA secara in vitro yaitu:
1) Ligasi menggunakan enzim DNA ligase dari bakteri. Cara ini hanya dapat digunakan untuk meligasi sticky end.
2) Ligasi menggunakan DNA ligase dari sel-sel E. coli yang telah diinfeksi dengan bakteriofag T4 atau lazim disebut
sebagai enzim T4 ligase. Cara yang kedua ini dapat digunakan baik pada ujung lengket maupun pada blunt end.
10
 Proses DNA Rekombinan

Pemasukkan DNA ke dalam sel hidup

Memasukkan DNA rekombinan ke dalam sel organisme
prokariot maupun eukariot sehingga DNA rekombinan dapat
berepilkasi dan bahkan dapat diekspresikan.

Pada dasarnya ada tiga kemungkinan yang dapat terjadi setelah transformasi dilakukan yaitu:
• Sel inang tidak dimasuki DNA apa pun atau berarti transformasi gagal.
• Sel inang dimasuki vektor religasi atau berarti ligasi gagal.
• Sel inang dimasuki vektor rekombinan dengan/tanpa fragmen sisipan atau gen yang diinginkan.
11
Penerapan DNA Rekombinan
• Chymosin rekombinan
• Insulin rekombinan manusia
• Hormon pertumbuhan manusia rekombinan
(HGH, somatotropin)
• Faktor pembekuan darah rekombinan VIII
• Vaksin hepatitis B rekombinan
• Diagnosis infeksi HIV
• Beras emas
• Tanaman tahan herbisida
• Tanaman tahan serangga
 Thank you!
Any questions?

The Power of PowerPoint – thepopp.com

Font: Ubuntu font family
Icons: Elegant Icon Font