SUBKLONING DAN ISOLASI GEN PENYANDI MIKRONEMA 3 (MIC-3)

Toxoplasma gondii ISOLAT LOKAL

Indrasanti, Molekul, Vol. 6. No. 1. Mei, 2011: 10 - 18

Toxoplasma T. gondii merupakan patogen obligat intraseluler yang termasuk

dalam filum Apicomplexa. Parasit protozoa ini dapat menginfeksi hospes dalam kisaran
yang luas, diantaranya pada burung, mamalia dan hewan liar. Infeksi T. gondii pada
individu imunokompeten bersifat ringan dan tidak menimbulkan gejala klinis, dan
infeksi T. gondii pada individu immunocompromise kemungkinan berakibat fatal.

Mikronema protein (MIC) adalah salah satu protein yang dimiliki oleh antigen
ekskresi-sekretori (ESA) dari Toxoplasma gondii. Mikronema 3 protein (MIC-3) adalah
protein yang memainkan peran penting dalam proses invasi selama infeksi sel sebagai
parasit lampiran mediator ke sel inang. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mengkloning mic-3 (pengkodean gen untuk MIC-3) T. gondii dari isolat lokal
menggunakan teknologi DNA rekombinan dengan mengkloning mic-3 dalam vektor
ekspresi. Protein rekombinan diharapkan dapat terekspresikan yang selanjutnya dapat
digunakan sebagai kandidat vaksin maupun perangkat diagnosis toksoplasmosis.

Asam Deoksiribonukleat (DNA) dari T. gondii tachyiloit diamplifikasi oleh

PuRe Taq RTG-PCR Beads menggunakan primer spesifik. Primer spesifik untuk gen
penyandi protein MIC-3 yaitu primer forward. DNA yang diamplifikasi dicerna dua kali
menggunakan EcoRV dan restonasi endonuklease HindIII dan kemudian dimurnikan
menggunakan EZ-10 spin coloumn purification kit. DNA mic-3 diikat ke dalam vektor
ekspresi pET-32a (+) yang memungkinkan penggabungan keduanya menggunakan T4
DNA ligase, Transformasi DNA rekombinan ke dalam Escherichia coli BL21
dilakukan dengan teknik heat shock, untuk memindahkan DNA rekombinan hasil ligasi
ke dalam hospes yang kompeten (E. coli BL21) dengan perlakuan CaCl2 dingin.
Transformasi ini dapat merusak dinding sel bakteri pada lokasi tertentu yang
memudahkan plasmid masuk ke dalam bakteri. Hasil penelitian menunjukkan bahwa
gen rekombinan mic-3 telah berhasil dilakukan dengan mengkloning pengkodean gen
mic-3 hasil amplifikasi gen mic-3 T. gondii isolat lokal sebesar 1,2 kbp ke vektor pET-
32a(+) pada E. coli BL-21, dimana Kloning gen melalui pendekatan metode PCR
memungkinkan untuk mendapatkan klon yang membawa gen spesifik yang diinginkan.

Sri Anika Cahayu (TB151051)