latar belakang

Standar emas untuk diagnosis dan pementasan banyak penyakit adalah histopatologi. Sistem penilaian
telah dikembangkan untuk memprediksi agresivitas tumor, dan ahli patologi

laporan sering memandu keputusan perawatan klinis. Namun,

semua sistem penilaian bersifat subjektif. Intra dan antar pengamat

variabilitas sering terjadi seperti yang dicontohkan dalam sel ginjal

karsinoma, kanker prostat, dan kanker kandung kemih [1-6].

Ketidakcocokan antara biopsi dan spesimen reseksi juga

terjadi [5,7]. Perkembangan teknik analitik molekuler seperti imunohistokimia dan fluoresensi

Hibridisasi in situ (FISH) telah meningkatkan mikroskopis

pemeriksaan dan telah memungkinkan untuk penemuan biomarker.

Kedua teknik telah banyak diadopsi ke dalam praktik patologi [8,9]. Baru-baru ini, throughput tinggi

teknik analitik molekuler untuk RNA, DNA yang tidak ditargetkan

dan penentuan protein telah diperkenalkan. Lengkap dengan pendekatan-pendekatan tersebut adalah
metabolomik, prosesnya

katalogisasi dan mengukur berat molekul rendah

(<1.500 Da) komponen bahan biologis. Baru

laporan telah menunjukkan bahwa metabolomik juga bisa

mengungkap tanda tangan spesifik penyakit yang berpotensi

bantuan dalam diagnosis dan manajemen penyakit [10-14]. Sementara

ada banyak upaya yang sedang dilakukan untuk menemukan dan menerapkan biomarker metabolomik
dalam darah dan urin, jaringan

tetap menjadi fokus utama untuk penemuan biomarker dan

pelaksanaan

Secara historis, metabolisme jaringan telah dilakukan

menggunakan potongan besar jaringan (> 30 mg). Untuk mencapai

cepat, ekstraksi metabolit lengkap, jaringan itu

tanah, menghancurkan arsitektur seluler dan jaringan itu

sangat penting untuk penilaian patologis, termasuk immu �nohistochemistry dan FISH. Keterbatasan ini
sebagian besar mencegah penggunaan metabolomik untuk mengevaluasi klinis

biopsi. Menggunakan metode inkubasi biopsi dalam air

alkohol [15], kami menggambarkan dan mengkarakterisasi alur kerja baru yang mengatasi keterbatasan
ini dan dapat diimplementasikan dalam praktik patologi klinis standar. Alkohol

telah, selama bertahun-tahun, menjadi fiksatif standar untuk digunakan dalam

sitologi. Sebagai alternatif yang kurang toksik untuk formaldehyde, fiksasi berbasis alco �hol semakin
sering digunakan untuk rutin

patologi. Menganalisis biopsi yang sama menggunakan histo �pathologi dan profil metabolik /
biokimiawi biomarker

dapat meningkatkan akurasi diagnosis berbasis patologi.

Hasil kami menunjukkan bahwa profil metabolisme dapat menambah laporan patologi dengan
menambahkan metrik berbasis biokimia kuantitatif pada informasi yang diperoleh dari pasien.

biopsi

METODE

# sample colection

# Sample preparation and metabolite extraction

# histology

# Metabolomic profiling

Biopsi dari sepuluh jaringan manusia (otot, kelenjar adrenal, usus besar, paru-paru, pankreas, usus kecil,
limpa,

lambung, prostat, ginjal) ditempatkan langsung dalam larutan metanol untuk memulihkan metabolit,
mengendapkan protein,

dan memperbaiki jaringan. Setelah inkubasi, biopsi dikeluarkan dari larutan dan diproses untuk histologi.
Ginjal

dan kanker prostat tumor dan biopsi jinak diwarnai dengan hemotoxylin dan eosin dan biopsi prostat

menjadi sasaran imunohistokimia PIN-4. Ekstrak metanol dianalisis untuk metabolit pada GC / MS
dan platform LC / MS. File data spektrometri massa mentah secara otomatis diekstraksi menggunakan
sistem informatika

itu termasuk perangkat lunak identifikasi puncak dan metabolit

HASIL

Metabolit di semua kelas biokimia utama (asam amino, peptida, karbohidrat, lipid, nukleotida,

kofaktor, xenobiotik) diukur. Jumlahnya (mulai dari 260 prostat hingga 340 di usus besar) dan identitas

metabolit sebanding dengan hasil yang diperoleh dengan metode saat ini yang membutuhkan 30 mg
jaringan tanah.

Membandingkan tingkat relatif metabolit, tumor kanker dari ginjal jinak dan biopsi prostat bisa

dibedakan. Analisis histopatologis biopsi yang berhasil dilakukan dengan pewarnaan kimia (hematoxylin,
eosin) dan

pengikatan antibodi (PIN-4, dalam prostat) menunjukkan arsitektur seluler dan imunoreaktivitas tetap
dipertahankan.

KESIMPULAN

Ekstraksi metabolit bersamaan dan analisis histologis biopsi yang utuh dapat dilakukan

alur kerja klinis. Fiksasi metanol secara efektif melindungi berbagai jaringan dan kompatibel dengan
bahan kimia

pewarnaan dan imunohistokimia. Metode ini menawarkan kesempatan untuk menambah diagnosis
histopatologis

dan klasifikasi tumor dengan ukuran kuantitatif biokimia dalam sampel jaringan yang sama. Sejak
tertentu

biokimia telah terbukti berkorelasi dengan agresivitas penyakit, metode ini harus terbukti berharga
sebagai

tambahan untuk membedakan agresivitas kanker.

Kami melaporkan alur kerja yang menggunakan analisis histologis dan metabolo �mik pada biopsi jarum
inti tunggal untuk membantu dalam diagnosis penyakit dalam pengaturan klinis. Metode ini akan

memfasilitasi terjemahan studi penemuan ke dalam klinis

tes diagnostik yang diterima, dan tes-tes ini memiliki potensi untuk membawa daya penyelesaian
tambahan untuk diagnosis berbasis histo�pathologi saat ini. Pada kanker prostat, untuk
contoh, pertanyaan umum adalah apakah pasien dengan a

skor Gleason klinis 6 atau 7 harus menjalani radikal

prostatektomi. Dengan 60 hingga 70% dari sekitar

220.000 kasus kanker prostat hadir dalam Gleason ini

Rentang skor [20], bukti lebih lanjut mengenai apakah a

Tumor yang agresif akan membantu menginformasikan diskusi dokter mengenai pilihan antara calon

manajemen dan terapi definitif, termasuk radikal

radioterapi atau operasi radikal. Di luar kanker prostat,

ada banyak kanker lain (dan kemungkinan penyakit lainnya) di mana data biokimia dapat melengkapi
histo�atologi, meningkatkan utilitas diagnostik dan prognostik.

Mengingat prevalensi kanker pada populasi manusia,

aplikasi alur kerja ini berpotensi menjadi lebih baik

menginformasikan opsi manajemen kanker untuk jutaan orang

pasien di seluruh dunia.