Diallyl trisulfide, polisulfida bawang putih melindungi terhadap Nefrotoksisitas oksidatif akibat oksitosin, apoptosis

dan pembengkakan pada tikus dengan mengaktikan Nrf2/ARE

Latar Belakang: Kontaminasi arsenik (As) adalah masalah lingkungan global yang sangat berbahaya karena dapat
masuk ke dalam rantai makanan dan menjadi bio-akumulasi, membahayakan kesehatan manusia. keracunan
kronis As menyebabkan Efek toksik yang tidak diinginkan di berbagai sistem organ tubuh, terutama ginjal. Diallyl
trisulfide (DATS) adalah senyawa organosulfur yang telah dikenal luas penggunaannya sebagai antibakteri,
antitumorogenik,agen antioksidan dan juga dilaporkan memiliki sifat anti-apoptosis dan anti-inflamasi.
Tujuan: Dalam penelitian ini, kami bermaksud untuk menyelidiki peran protektif DATS, senyawa organosulfur
bawang putih untuk mencegah cedera oksidatif yang diinduksi oleh oksidatif yang diinduksi pada tikus.
Desain studi
Aktivitas DATS untuk melawan toksisitas oksidatif akibat oksidasi oleh As dianalisis dengan menggunakan tikus
sebagai model in vivo.
Metode: Kami menyelidiki efek nefroprotektif DATS pada tikus yang diobati dengan melakukan berbagai penelitian
serologis, biokimia, molekuler dan histologis. Aktivasi Nrf2 diteliti menggunakan western blot.
Hasil: Data menunjukkan bahwa paparan As secara signifikan meningkatkan serum dan urine nephritic, oxidative
stress, apoptosis dan inflammatory marker pada jaringan ginjal tikus. Karena keracunan juga menurunkan status
antioksidan jaringan ginjal seiring dengan gangguan pada membran yang terikat ATPase. Saat nefrotoksisitas
dikonfirmasi lebih lanjut dengan perubahan morfologi dan ultrastruktur yang berubah pada jaringan ginjal.
Sebaliknya, pra-administrasi DATS secara efektif memulihkan variabel ginjal yang diubah oleh As, yang telah
didukung oleh pengamatan histologis dan ultrastructural. Penolakan ini dicapai sebagian melalui aktivasi jalur Nrf2-
ARE melalui aktivasi Akt.
Kesimpulan: Temuan ini menjelaskan penggunaan DATS secara prospektif sebagai senyawa organosulfur yang
menjanjikan terhadap disfungsi ginjal oksidatif akibat As pada tikus.

Arsenik (As) adalah polutan beracun lingkungan dan industri yang mempengaruhi tumbuhan dan hewan, termasuk
manusia. Mengenai sumber As, baik aktivitas alami maupun antropogenik melepaskannya ke lingkungan.
Penyebab utama Asosis kronis yang meluas adalah konsumsi air minum bawah tanah yang secara alami
terkontaminasi dengan As. Paparan kronis pada air minum yang mengandung anorganik tingkat tinggi Seperti
dikaitkan dengan berbagai penyakit kulit, diabetes, penyakit kardiovaskular, dan kanker beberapa organ [1]. Begitu
masuk ke sistem kehidupan, itu menyebabkan luka pada toksisitas multi-organ. Telah diketahui dengan pasti
bahwa stres oksidatif merupakan mekanisme penting untuk patogenesis. Namun, target molekuler dan jalur
pensinyalan yang tepat untuk sebagian besar efek biologis dari As tetap belum ditentukan [2]

Ginjal adalah situs yang paling penting untuk ekskresi As dan metabolit reaktifnya. Laporan terbaru menunjukkan
bahwa kemunduran oksidatif yang dimediasi ROS dari makromolekul esensial adalah jalur utama dimana As
menginduksi disfungsi ginjalnya. Seperti mengganggu reaksi transduksi energi, produksi ATP, dan integritas kapiler
serta menyebabkan kerusakan endotel dan hilangnya volume seluler. Seperti mengganggu metabolisme GSH, yang
berfungsi sebagai antioksidan penting yang bertanggung jawab atas detoksifikasi dan ekskresi arsenik melalui
kelompok sulfhidrilnya [3]. Seperti memiliki afinitas terhadap kelompok protein SH yang menyebabkan
penghambatan respirasi seluler, gangguan glikolisis dan proses oksidatif dan akhirnya kematian sel. Seperti
konsentrat di ginjal selama eliminasi urinnya yang mempengaruhi fungsi tubulus proksimal yang berbelit. Seperti
yang diinduksi stres oksidatif meningkatkan ekspresi HO-1 dan MAPK, yang dengan mengatur berbagai faktor
transkripsi seperti activator protein-1 (AP-1), mengaktifkan faktor transkripsi-2 (ATF-2), dan Elk-1 menyebabkan
toksisitas ginjal [4]. Pemaparan terus menerus terhadap As merusak ginjal melalui generasi radikal bebas yang
berlebihan di dalam nefron. Investigasi pada tingkat seluler dan molekuler menunjukkan bahwa Sebagai
peningkatan produksi spesies oksigen reaktif (seperti, superoksida dan hidrogen peroksida), menyebabkan
peroksidasi lipid, meningkatkan oksidasi protein, enzim dan juga DNA, mengganggu mitosis dan meningkatkan
apoptosis [5].

Mengingat sifat pro-oksidatif As, penggunaan antioksidan bersama-ajuvan bersamaan dengan terapi khelasi
mungkin merupakan strategi terapeutik yang efisien untuk melawan Nefrotoksisitas [2]. Bawang putih polisulfida,
yang sifat antioksidannya telah mapan [6], bisa mewakili pilihan terapeutik yang penting. Sesuai dengan saran ini,
sebuah penelitian sebelumnya dari kelompok kami menunjukkan efek menguntungkan in vivo dari DATS terhadap
mitotoksisitas As-induced pada tikus [6]. Selain itu, dalam studi perlindungan kardio kami juga mengungkapkan
bahwa DATS, dengan sifat antioksidannya, mencegah efek toksik dari As dengan menghambat formasi ROS As
-induced [7] yang menunjukkan bahwa DATS dapat mewakili agen terapeutik yang menjanjikan untuk melawan
indek nephrotoxicity yang disebabkan oleh As.
Sepengetahuan kami, tidak ada laporan mengenai efek perlindungan DATS terhadap indek nephrotoxicity akibat
Asupan dalam model hewan pengerat. Oleh karena itu, kami berhipotesis bahwa DATS dapat menawarkan
perlindungan terhadap nefrotoksisitas akibat As-induced, dan mengusulkan penelitian ini untuk mengevaluasi
mekanisme yang terlibat dalam toksisitas nefro As-induced sehubungan dengan DATS, termasuk peran stres
oksidatif dan nitrosatif, mediator inflamasi, dan penanda apoptosis.

2. Bahan-bahan dan metode-metode

2.1. Bahan kimia
Seperti (Sodium arsenate-Na3AsO4) diperoleh dari Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Diallyl trisulfide dibeli
dari Lukang Cisen Pharmaceutical Co., Ltd. (Shangdong, China). Antibodi terhadap Nrf2, Keap-1, HO-1, γ-GCS,
SOD1, SOD2, GSK3 β, pro-caspase3, caspase3 dan PI3K diperoleh dari Bioteknologi Santa Cruz (Santa Cruz, CA, AS).
Anti-phospho-Akt dan anti-Akt antibodi dibeli dari Cell signaling Technology (Beverly, MA, USA). Antibodi anti-Bax,
antibodi anti-Bcl-2, antibodi anti-sitokrom C dan Primer terhadap antibodi monoklonal Nox2, Nox4, p47phox dan
IL-1β diperoleh dari Bioteknologi Santa Cruz (Santa Cruz, CA, AS). Antibodi poliklonal Bax dan antibodi monoklonal
bcl-2 untuk uji imunohistokimia diperoleh dari Beijing Zhongshan Biotechnology Co. Ltd. (Beijing, China). Antibodi
anti-iNOS poliklonal diperoleh dari Biosciences BD (San Jose, CA, AS). Kambing polyclonal TNF-α dan anti-NF-κB
yang digunakan diperoleh dari Bioteknologi (Santa Cruz, CA, AS).

2.2. Binatang
Tikus albino jantan dengan berat 170-180 g digunakan dalam penelitian ini. Mereka dirawat di rumah hewan yang
dikendalikan lingkungan (suhu 24 ± 2 ° C) dengan jadwal ringan dan gelap 12 jam dan akses gratis ke air minum
deionisasi. Perlakuan dan protokol hewan yang digunakan disetujui oleh Komite Etika Hewan Kelembagaan,
Universitas Annamalai (Nomor Registrasi: 885/2012 / CPCSEA).

2.3. Desain eksperimental

Dalam penelitian ini, As diberikan sodium arsenate (Na3AsO4) secara intragastrik dengan dosis 5 mg / kg berat
badan (BW) / hari selama 4 minggu, yaitu 1/8 dari nilai LD50 oral pada tikus. Sebuah studi percontohan dilakukan
dengan tiga dosis DATS yang berbeda (20, 40 dan 80 mg / kg) untuk menilai efek proteksi nefrofis dosis-dosis DATS
pada tikus As-treated. Setelah 4 minggu percobaan, diamati bahwa perlakuan awal DATS pada dosis 20, 40 dan 80
mg / kg · BB secara signifikan (P <0,05) menurunkan kadar marker nefritis serum, zat reaktif asam thiobarbiturat
dan meningkatkan tingkat GSH yang berkurang di jaringan ginjal As tikus yang mabuk (data tidak ditunjukkan). Pra-
perawatan dengan 80 mg / kg · BW DATS menunjukkan efek proteksi nefrofektif yang signifikan bila dibandingkan
dengan dua dosis lainnya. Oleh karena itu, 80 mg / kg DATS telah dipilih sebagai rejimen dosis efektif terhadap
Nefrotoksisitas As dalam penelitian ini.

Untuk penelitian kami, 24 tikus dipilih secara acak dan dibagi menjadi empat kelompok yang terdiri dari enam
tikus di masing-masing kelompok: kelompok I-tikus kontrol secara oral diberikan dengan minyak salin dan jagung
normal selama 28 hari, tikus kelompok II diberikan secara oral dengan As ( 5 mg / kg BB pada garam normal selama
28 hari, tikus kelompok III diberikan secara oral dengan DATS (80 mg / kg BB) 90 menit sebelum keracunan As (5
mg / kg BB) selama 28 hari. dan kelompok IV-diberikan secara oral dengan DATS saja (80 mg / kg BB) selama 28
hari. Hewan-hewan itu diberi umpan pelet dari makanan hewan laboratorium Amrut, Pune, India dan air ad
libitum.

Pada akhir periode percobaan, tikus dari masing-masing kelompok berpuasa semalam dan diberi anestesi dengan
natrium pentobarbital (35 mg / kg, i.p.) dan dikorbankan dengan pemenggalan leher rahim. Untuk pemisahan
serum, darah dari hewan dikumpulkan dan disentrifugasi pada 1000 x g selama 15 menit. Sampel urin dari masing-
masing hewan yang ditempatkan di kandang metabolik yang dirancang khusus dikumpulkan dalam tabung
sentrifus dalam siklus 24 jam dengan perawatan khusus untuk menghindari kontaminasi tinja. Volume masing-
masing sampel direkam dan disentrifugasi pada 3000 x g selama 5 menit. Sampel urin dikumpulkan selama 24 jam
(9 pagi sampai 9 pagi) sesuai dengan protokol laboratorium standar [9]. Serum dan urine segera digunakan untuk
penentuan parameter biokimia terpilih setelah pengumpulan. Jaringan ginjal dari tikus kontrol dan tikus percobaan
dipotong, dibilas dengan garam es dan diproses untuk penelitian biokimia dan histologis. Jaringan ginjal dari
kontrol dan tikus percobaan dihomogenisasi dengan menggunakan homogenisasi Teflon pada 100 mM buffer Tris-
HCl (pH 7,4) dan disentrifugasi pada 12.000 x g selama 30 menit pada suhu 4 ° C. Supernatan gabungan digunakan
untuk berbagai uji biokimia. Kandungan protein dalam homogenasi jaringan diperkirakan dengan metode Lowry et
al [8].

2.4. Analisis logam

1 g jaringan ginjal dicerna dengan asam nitrat dalam oven microwave. Sampel ginjal dan urin dicerna basah dan
konsentrasi As pada sampel yang dicerna diukur dengan menggunakan spektrofotometer serapan atom hidrida
(AAS, ECIL-4141, India) pada panjang gelombang 193,7 nm dan arus 10 mA. Nilai tersebut dinyatakan dalam
mikrogram per mililiter urine atau mikrogram per gram jaringan. 0,02 μg / L adalah batas deteksi untuk As. Analisis
berulang sampel uji dilakukan untuk memastikan akurasi analitis; lima standar yang baru disiapkan dan residu
reagen, dijalankan dengan setiap seri analisis.

2.5. Analisis penanda nefritis dalam serum dan urine

Dengan menggunakan alat diagnostik komersial (Sigma Diagnostics (I) Pvt. Ltd., Baroda, India), kadar urea, asam
urat dan kreatinin dalam serum dan urin diperkirakan secara spektrofotometri. Urin segera digunakan untuk
analisis urin (strip tes urin) dan pH air seni sedikit asam. Dari kreatinin serum dan 24 jam sampel kreatinin urin,
klirens kreatinin sebagai indeks laju filtrasi glomerulus dihitung. Urobilinogen, sel darah merah dan sel darah putih
dalam sampel urin dianalisis dengan menggunakan kit diagnostik standar (MediScreen Urine Strips, Organics,
France) dan kit diagnostik AMP standar (Stattogger Strasse, Graz, Austria).

2.6. Uji peroksidasi lipid ginjal, kandungan protein karbonil, ROS dan NO
Peroksidasi lipid ginjal diukur secara kolorimetri dengan mengukur TBARS dan LOOH masing-masing [9,10].
Kandungan protein karbonil total dalam ginjal ditentukan dengan metode spektrofotometri [11] dan dinyatakan
sebagai protein nmol / mg. Produksi ROS di jaringan ginjal ditentukan dengan menggunakan metode 2 ', 7'-
diklorofluorescein diacetate (DCFDA; Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA), dimana DCF-DA diubah
menjadi DCF berpendingin tinggi dengan peroksida sel (termasuk H2O2) , seperti yang telah dijelaskan sebelumnya
[12]. Tingkat NO ginjal secara tidak langsung diukur dengan menentukan tingkat nitrit menggunakan kit uji
kolimimetri seperti yang ditunjukkan oleh produsen (Cayman Chemical Company, USA) berdasarkan reaksi Griess
[13].

2.7. Uji antioksidan non-enzimatik

2.7.1. Penentuan antioksidan non-enzimatik
Penurunan glutathione (GSH) ditentukan dengan metode Moron et al. [14]. Supernatan (0,5 ml) dicampur dengan
TCA 10% dalam perbandingan 1: 1 dan kemudian disentrifugasi selama 10 menit pada 5000 × g. Supernatan yang
jelas kemudian dicampur dengan 2 ml buffer fosfat dan 0,5 ml asam benzoat 5,5-dithionitrobis (DTNB). Setelah
inkubasi selama 10 menit, absorbansi diukur pada 412 nm. Total kelompok sulfidril (TSH) dalam homogenat ginjal
diukur setelah reaksi dengan asam benzoat dithionitrobis, dengan menggunakan metode Ellman [15]. Supernatan
(1 ml) diobati dengan 0,5 ml reagen Ellman (19,8 mg 5,5-dithionitrobis benzoic acid dalam 100 ml 0,1% natrium
sitrat) dan 3,0 ml buffer fosfat (0,2 mol / L, pH 8.0). Absorbansi dibaca pada 412 nm menggunakan
spektrofotometer. Konsentrasi vitamin C diukur dengan metode Omaye dkk. [16]. Untuk 0,5 ml homogenat, 1,5 ml
TCA 6% ditambahkan dan disentrifugasi (3500 × g, 20 menit). Untuk 0,5 ml supernatan, 0,5 ml reagen DNPH (2%
DNPH dan 4% 9 N H2SO4) ditambahkan dan diinkubasi selama 3 jam pada suhu kamar. Setelah inkubasi, 2,5 ml
85% H2SO4 ditambahkan, dan warna yang dikembangkan dibaca pada 530 nm setelah 30 menit menggunakan
spektrofotometer. Vitamin E diperkirakan dengan metode Desai [17]. Vitamin E diekstraksi dari jaringan jantung
dengan penambahan 1,6 ml etanol dan 2,0 ml petroleum ether dan disentrifugasi. Supernatan dipisahkan dan
diuapkan ke udara. Untuk residu, 0,2 ml 0,2% 2-dipyridil dan 0,2 ml 0,5% klorida besi ditambahkan dan disimpan
dalam gelap selama 5 menit. Lapisan berwarna merah intens yang diperoleh dengan penambahan 4 ml butanol
dibaca pada 520 nm dengan menggunakan spektrofotometer.
2.8. Uji antioksidan enzimatik dan enzim metabolisme glutathione
Aktivitas Superoksida dismutase (SOD) ditentukan dengan metode Kakkar dkk. [18] di mana penghambatan
pembentukan NADHphenazine methosulfate nitroblue tetrazolium formazon diukur secara spektrofotometri pada
560 nm. Aktivitas Katalase (CAT) diuji secara kolorimetri seperti yang dijelaskan oleh Sinha [19] dengan
menggunakan pereaksi asam dikromat asetat. Aktivitas glutathione peroxidase (GPx) diuji dengan metode yang
didasarkan pada reaksi antara glutathione yang tersisa setelah tindakan GPx dan asam 5,5-adithio-2-nitrobenzoat
untuk membentuk kompleks yang menyerap secara maksimal pada 412 nm [20]. Aktivitas Glutathione S-
transferase (GST) ditentukan secara spektrofotometri dengan menggunakan dichloro- 2,4dinitrobenzene sebagai
substrat [21]. Glutathione reduktase (GR) yang menggunakan NADPH untuk mengubah glutathione dimetabolisme
menjadi bentuk yang dikurangi diuji dengan metode Horn and Burns [22]. Pengukuran glukosa-6-fosfat
dehidrogenase (G6PD) dilakukan dengan metode Beutler [23] dimana peningkatan absorbansi diukur saat reaksi
dimulai dengan penambahan glukosa-6-fosfat. Tingkat protein ditentukan dengan menggunakan bovine serum
albumin (BSA) sebagai standar pada 560 nm [8].

2.9. Estimasi triphosphatees adenosin terikat membran

Aktivitas ATPase total dalam homogenat ginjal diukur dengan metode Evans [24]. Aktivitas ATPase dalam 0,1 ml
aliquot homogenat diukur dalam volume akhir 2 ml yang mengandung 0,1 ml 0,1 M Tris-HCl (pH 7,4), 0,1 ml 0,1 M
NaCl, 0,1 ml 0,1 M MgCl2, 1,5 ml 0,1 M KCl, 0,1 ml 1 mM EDTA dan 0,1 ml ATP 0,01 M. Reaksi dihentikan setelah 20
menit dengan penambahan 1 ml asam trikloroasetat 10% dan kemudian disentrifugasi (1500 x g selama 10 menit)
dan fosfat anorganik (Pi) dibebaskan diperkirakan pada supernatan protein. Jumlah Pi yang dibebaskan
diperkirakan sesuai dengan metode Fiske dan Subbarow [25]. Aktivitas ATPase Na + / K +-tependen ditentukan
dengan metode Bonting [26] dengan sedikit modifikasi. Dalam uji ini, 0,2 ml homogenat jaringan ginjal
ditambahkan ke dalam campuran yang mengandung 1 ml buffer Tris-HCl 184 mM (pH 7,5), 0,2 ml 50 mM MgSO4,
0,2 ml 50 mM KCl, 0,2 ml 600 mM NaCl, 0,2 ml 1 mM EDTA dan 0,2 ml ATP 10 mM dan diinkubasi selama 15 menit
pada 37 ° C. Reaksi dihentikan dengan penambahan 1 ml asam trikloroasetat 10% dingin. Jumlah Pi dibebaskan
kemudian diperkirakan dalam supernatan protein bebas. Aktivitas Na + / K + -ATPase diambil sebagai komponen
sensitif ouabain dari aktivitas ATPase total. Aktivitas Ca2 + -ATPase diuji menurut metode Hjerten dan Pan [27].
Secara singkat, 0,1 ml homogenat jaringan ditambahkan ke dalam campuran yang mengandung 0,1 ml buffer Tris-
HCl 125 mM (pH 8), 0,1 ml 50 mM CaCl2 dan 0,1 ml ATP 10 mM. Isinya diinkubasi pada suhu 37 ° C selama 15
menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan 0,5 ml asam trikloroasetat 10% dingin dan disentrifugasi. Jumlah Pi
dibebaskan diperkirakan dalam supernatan. Aktivitas Mg2 + -ATPase diuji dengan metode Ohnishi et al. [28]. Isinya
diinkubasi selama 15 menit pada 37 ° C dan reaksinya dihentikan dengan menambahkan 0,5 ml asam trikloroasetat
10%. Pi dibebaskan kemudian diperkirakan dalam supernatan protein bebas. Aktivitas enzim ATPase ini dalam
homogenat jaringan dinyatakan sebagai μg Pi yang membebaskan min-1 mg protein-1.

2.10. Pemeriksaan ginjal TNF-α dan serum proinflammatory cytokines

Tingkat TNF-α pada homogenat ginjal ditentukan dengan enzymeelinked immunosorbent assay (ELISA) dengan
menggunakan kit immunoassay TNF-α tikus sesuai dengan rekomendasi dari produsen (R & D Systems, USA).
Tingkat serum TNF-α, IL-6 dan IL-1β dihitung dengan menggunakan kit Quantikine ELISA untuk TNF-α, tikus IL-6 dan
tikus IL-1β (R & D Systems, Minneapolis, MN, USA), masing-masing, sesuai dengan petunjuk pabriknya.

2.11. Analisis blot barat

Aliquot dari jaringan ginjal dihomogenisasi dalam buffer lisis dingin-dingin [1% NP-40; Gliserol 10%; 20 mM Tris-
Hcl, pH 7.5; 150 mM NaCl; 1 mM EDTA; 1 mM etilena glikol-O, O'-bis (2-aminoetil) - N, N, N ', asam n-tetraasetat
(EGTA), 1 mM NaVo4, 10 mM NaPo4, 10 μg / ml leupeptin dan 1 mM fenilmetilulfonil fluorida (PMSF)]. Total
protein (30-50 μg) dikenai 12% SDS-PAGE, dipindahkan ke membran nitroselulosa dan diinkubasi dengan antibodi
primer melawan Nrf2, Keap-1, HO-1, γ-GCS, SOD1, SOD2, GSK3 β, p47phox, Nox2, Nox4, β-actin semalam pada
suhu 4 ° C. Selaput kemudian diperiksa dengan antibodi sekunder berlipat lobak peroksidase (Santa Cruz
Biotechnology, Inc.) pada suhu kamar selama 1 jam, sebelum dicuci kembali dan divisualisasikan dengan
menggunakan reaksi chemiluminescence yang disempurnakan (Amersham ECL ™ Western Blotting System;
Amersham, Piscataway , NJ, USA). Ekspresi protein diukur secara densitometri dengan menggunakan perangkat
lunak LabWorks 4.5 di American UVP Bioimaging System (Upland, CA, USA), dan perubahan ekspresi dinormalisasi
dengan standar internal, β-actin.

2.12. Imunohistokimia
Jaringan ginjal diperbaiki dengan formaldehida 4% selama 24 jam dan disematkan pada parafin secara rutin, diikuti
dengan 4 μm yang diiris. Metode streptavidin peroxidase (SP) diadopsi [29]. Antibodi monoklonal bcl-2 (1:50) atau
antibodi poliklonal Bax (1:50) sebagai antibodi primer diterapkan dan diinkubasi semalaman pada suhu 4 ° C. Irisan
itu diamati dan difoto melalui mikroskop ringan. Sitoplasma sel apoptosis diwarnai dengan warna kuning
kecoklatan.

Ekspresi caspase-3 di jaringan ginjal dinilai dengan pewarnaan imunohistokimia. Bagian ginjal pada selubung
dilapisi polylysine yang diperoleh diperbaiki pada formalin buffer netral dan disematkan pada parafin dan
kemudian diobati dengan antibodi caspase-3 untuk analisis imunohistokimia. Prosedur diproses sesuai dengan
protokol pabrikan yang direkomendasikan untuk imunohistokimia caspase-3 dengan sedikit modifikasi. Setelah
deparaffinisasi dan rehidrasi, bagian diiradiasi dalam buffer 0,1 mol / L natrium sitrat (pH 6.0) dalam oven
microwave (suhu rendah sedang) selama 20 menit. Kemudian bagian tersebut terpapar 3% H2O2 selama 10 menit
sampai peroksidase endogen pereda, diikuti dengan pembilasan 3 kali pada buffer Tris (pH 7,4) selama 10 menit.
Bagian diinkubasi secara selektif di bawah kondisi lembab dengan menggunakan anticaspase-3 dan antibodi
poliklonal (Thermo Fisher Scientific, USA; 1: 400) untuk semalam di suhu 4 ° C. Keesokan harinya, slide dicuci 3 kali
di buffer Tris masing masing 10 menit. Spesifisitas antibodi diuji dengan penghilangan antibodi primer dan kontrol
positif jaringan amandel tikus. Setelah dicuci dengan buffer Tris (pH 7,4), jaringan divisualisasikan dengan 3,30-
diaminobenzidine (DAB) dan dihitung dengan hematoxylin. Akhirnya, bagian-bagian tersebut mengalami dehidrasi
pada xilena, dipasang pada DPX dan penutupnya tergelincir. Slides yang disiapkan untuk setiap kasus diperiksa
dengan mikroskop cahaya. Kontrol positif dan negatif dilakukan bersamaan dengan bagian bernoda caspase-3.
Pewarnaan bagian dengan antibodi yang tersedia secara komersial berfungsi sebagai kontrol positif dan kontrol
negatif termasuk pewarnaan bagian jaringan dengan penghilangan antibodi primer.
Ekspresi imunohistokimia sitokin pro-inflamasi dilakukan dengan menggunakan jaringan ginjal terserap parafin.
Bagian jaringan yang melekat parafin dengan ketebalan tiga mikrometer di deparaffinisikan, pertama-tama
dihidrasi kembali dalam xilena dan kemudian dalam larutan etanol bergradasi. Luncuran kemudian diblokir dengan
BSA 5% di TBS (Tris-buffered saline) selama 2 jam. Bagian kemudian diberi kekebalan dengan antibodi primer (iFOS
poliklonal kelinci, NF-κB dan TNF-α poliklonal) diencerkan 1: 200 dengan BSA 5% di TBS dan diinkubasi semalaman
pada suhu 4 ° C. Setelah mencuci sela tiga kali dengan TBS, bagian diinkubasi dengan antibodi sekunder yang sesuai
(antibodi sekunder dari Bangalore Genei India), diencerkan 1: 200 dengan BSA 5% di TBS dan kemudian diinkubasi
selama 2 jam pada suhu kamar. Bagian kemudian dicuci dengan TBS dan diinkubasi selama 5-10 menit dalam
larutan diaminobenzidin 0,02% yang mengandung 0,01% hidrogen peroksida. Pewarnaan counter dilakukan
dengan menggunakan hematoxylin, dan slide divisualisasikan di bawah mikroskop cahaya dan tingkat
imunopositifitas sel dinilai. Jumlah sel imunopositif dihitung dalam 5 bidang mikroskopis terpisah pada masing-
masing slide dan jumlah rata-rata untuk masing-masing slide diperoleh, kemudian mean ± SD dihitung untuk
masing-masing kelompok (10 slide).

2.13. Mikroskop cahaya

Jaringan ginjal dikeluarkan dan disematkan di blok parafin setelah disimpan dalam larutan Bouin dan diproses
dalam serangkaian etanol bergradasi. Bagian dengan ketebalan 4-5 μm dibuat dari balok. Bagian tersebut diwarnai
dengan hematoxylin dan eosin (H & E) untuk mengamati struktur umum dan dilihat dengan mikroskop cahaya
Olympus.

2.14. Mikroskop elektron

Spesimen ginjal mikroskopis elektron diawali dengan larutan glutaraldehida 3% dalam buffer fosfat 0,1 M selama
1,5 jam, pada suhu 4 ° C. Setelah ini, mereka dicuci dengan buffer fosfat 0,15 M (pH 7,2) dan pasca-tetap dalam
larutan osmium tetroxide 2% dalam buffer buffer fosfat 10 mM dan dibiarkan semalam. Dehidrasi dilakukan pada
aseton, dan inklusi dilakukan pada resin epilepsi embedding Epon 812. Blok-blok tersebut dipotong dengan LKB
tipe ultramicrotome, dengan ketebalan 70 mm. Bagian-bagian tersebut dikelompokkan dua kali berlawanan
dengan larutan uranyl asetat dan timbal sitrat dan dianalisis dengan mikroskop elektron TEM Tecnai 12 Biotwin.

2.15. Analisis statistik

Analisis statistik dilakukan dengan paket statistik SPSS 16.0 untuk Windows (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA). Data
dinyatakan sebagai mean ± standard deviations (SD). ANOVA dua arah yang dilanjutkan dengan uji Tukey post hoc
dilakukan untuk memeriksa signifikansi statistik antar kelompok yang berbeda. Tingkat 0,05 dipilih sebagai titik
signifikansi statistik minimal.

3. Hasil
3.1. Efek konsentrasi DATS terhadap As pada ginjal dan urin

Gambar 1 (A dan B) menunjukkan konsentrasi As dalam ginjal dan urin kontrol dan tikus percobaan. Konsentrasi As
dalam jaringan ginjal (P <0,05) meningkat secara signifikan dengan penurunan signifikan (P <0,05) pada urine tikus
yang terpapar bila dibandingkan dengan tikus kontrol. Pra-perawatan DATS pada Tikus yang mabuk, secara
signifikan mengurangi tingkat As di ginjal dan meningkatkan konsentrasi As asin (P <0,05) bila dibandingkan dengan
tikus Astreated. DATS saja tikus yang diobati tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan bila dibandingkan
dengan tikus kontrol.

Gambar 1. Konsentrasi As pada jaringan ginjal kontrol dan tikus percobaan (panel A) dan konsentrasi As dalam urin
(panel B) kontrol dan tikus percobaan. Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari tiga pengamatan independen pada
masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf superskrip berbeda (a-c) pada kolom yang sama berbeda secara
signifikan pada P <0,05 (DMRT).

Tabel 1
Pengaruh DATS terhadap perubahan arsenik pada marker serum serum.
Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari enam ekor tikus pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf
superskrip berbeda (a-c) pada baris yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT).
3.2. Efek DATS dan As pada serum renal spidol
Tabel 1 menunjukkan tingkat serum dan penanda ginjal pada tikus kontrol dan tikus percobaan. Kenaikan kadar
urea serum, asam urat dan kreatinin yang signifikan (P <0,05) dengan penurunan kadar klirin kreatinin dalam
serum As tikus yang mabuk diamati bila dibandingkan dengan tikus kontrol. Pra-pemberian DATS bersamaan
dengan As signifikan (P <0,05) mengembalikan tingkat serum renal marker dan klirens kreatinin jika dibandingkan
dengan tikus yang diobati. DATS saja tikus yang diobati tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan pada kadar
serum marker ginjal dan klirens kreatinin bila dibandingkan dengan tikus kontrol.

Tingkat penanda ginjal urin seperti urea, asam urat dan kreatinin menurun secara signifikan dengan peningkatan
kadar urobilinogen dan berat jenis air seni, sel darah merah dan air seni yang signifikan pada tikus As-treated. Pra-
perawatan DATS pada tikus yang diinspirasikan secara signifikan (P <0,05) memperbaiki tingkat urea, asam urat,
kreatinin, urobilinogen dan berat jenis urin, sel darah merah dan sel darah putih yang diperlukan dalam urine bila
dibandingkan dengan tikus yang diobati. DATS saja tikus yang diobati tidak menunjukkan perbedaan yang signifikan
dalam tanda-tanda ginjal urin dan profil urin, kecuali berat jenis dalam air kencing jika dibandingkan dengan tikus
kontrol.

3.3. Efek DATS dan As pada penanda stres oksidatif ginjal

Tingkat TBARS, LOOH, PC, ROS dan NO dalam kontrol dan tikus percobaan ditunjukkan pada Tabel 2. Tingkat ROS,
NO, produk peroksidasi lipid seperti TBARS, LOOH dan PCC secara signifikan (P <0,05) meningkat pada As- tikus
yang diobati jika dibandingkan dengan tikus kontrol. Pra-pemberian DATS pada tikus yang diobati dengan Asisten
(P <0,05) menurunkan tingkat ROS ginjal dan penanda stres oksidatif bila dibandingkan dengan tikus yang diberi
perlakuan As. Administrasi DATS secara signifikan mengurangi tingkat TBARS, LOOH, PCC, ROS dan NO bila
dibandingkan dengan tikus koprotein
3.4. Efek DATS dan As pada enzimatik antioksidan enzimatik non enzimatik
Aktivitas antioksidan enzimatik ginjal pada tikus kontrol dan tikus percobaan ditunjukkan pada Tabel 3. Penurunan
signifikan aktivitas enzimatik enzimatik yaitu superoxide dismutase (SOD), katalase (CAT), glutathione peroxidase
(GPx), signifikan (P <0,05) glutathione-s-transferase (GST) dan enzim metabolisme glutathione seperti glutathione
reductase (GR), dan glukosa-6- fosfat dehidrogenase (G6PD) diamati pada tikus yang diobati bila dibandingkan
dengan tikus kontrol. Pra-administrasi DATS bersama dengan tikus yang diberi As menunjukkan peningkatan
signifikan (P <0,05) pada aktivitas enzim antioksidan ini jika dibandingkan dengan tikus yang diobati dengan As.
Pemberian DATS saja menunjukkan peningkatan signifikan (P <0,05) pada aktivitas antioksidan enzimatik ini jika
dibandingkan dengan tikus kontrol.

Penurunan signifikan (P <0,05) pada tingkat antioksidan nonenzymatic GSH, TSH, Vitamin C dan E pada jaringan
ginjal As diperlakukan tikus diamati bila dibandingkan dengan tikus kontrol (Tabel 3). Pra-administrasi DATS in
Sebagai tikus yang mabuk secara signifikan (P <0,05) meningkatkan tingkat antioksidan nonenzymatic jika
dibandingkan dengan tikus As treated. DATS saja yang diberikan tikus menunjukkan peningkatan signifikan (P
<0,05) pada tingkat antioksidan nonenzimatik ini jika dibandingkan dengan tikus kontrol.

3.5. Efek DATS dan As pada ATPase membran DNA terikat

Tabel 4 menunjukkan tingkat total membran renal yang terikat ATPase, Na + / K +, Ca2 + dan Mg2 + ATPase pada
ginjal kontrol dan tikus percobaan. Penurunan signifikan (P <0,05) pada tingkat terikat pada membran ginjal
ATPase pada jaringan ginjal tikus As-treated bila dibandingkan dengan tikus kontrol. Namun, pada tikus yang
diadministrasikan dengan DATS bersama dengan As, ada penurunan signifikan (P <0,05) pada tingkat membran
terikat pada ATPase bila dibandingkan dengan tikus yang diobati. Tikus yang diobati dengan DATS saja tidak
menunjukkan perbedaan yang signifikan pada ATPase yang terikat membran bila dibandingkan dengan tikus
kontrol.

Meja 2
Efek DATS pada penanda stres oksidatif ginjal pada As treated rats.
Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari enam ekor tikus pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf
superskrip berbeda (a-c) pada baris yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT).

Tabel 3
Efek DATS terhadap antioksidan enzimatik dan non-enzimatik pada tikus As treated.

Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari enam ekor tikus pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf
superskrip berbeda (a-d) pada baris yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT). U-mewakili unit
enzim tertentu.
SOD-satu unit aktivitas enzim diambil sebagai reaksi enzim, yang memberi penghambatan 50% pengurangan NBT
pada protein 1 menit / mg; CAT-μmol H2O2 menggunakan / min / mg protein; GPx-μg GSH dikonsumsi / min / mg
protein; GST-μmol konjugasi CDNB-GSH terbentuk / min / mg protein; GR-nmol NADPH teroksidasi / min / mg
protein; G6PD-nmol NADPH terbentuk / min / mg protein
3.4. Efek DATS dan As pada enzimatik antioksidan enzimatik non enzimatik
Aktivitas antioksidan enzimatik ginjal pada tikus kontrol dan tikus percobaan ditunjukkan pada Tabel 3. Penurunan
signifikan aktivitas enzimatik enzimatik yaitu superoxide dismutase (SOD), katalase (CAT), glutathione peroxidase
(GPx), signifikan (P <0,05) glutathione-s-transferase (GST) dan enzim metabolisme glutathione seperti glutathione
reductase (GR), dan glukosa-6- fosfat dehidrogenase (G6PD) diamati pada tikus yang diobati bila dibandingkan
dengan tikus kontrol. Pra-administrasi DATS bersama dengan tikus yang diberi As menunjukkan peningkatan
signifikan (P <0,05) pada aktivitas enzim antioksidan ini jika dibandingkan dengan tikus yang diobati dengan As.
Pemberian DATS saja menunjukkan peningkatan signifikan (P <0,05) pada aktivitas antioksidan enzimatik ini jika
dibandingkan dengan tikus kontrol.

Penurunan signifikan (P <0,05) pada tingkat antioksidan nonenzymatic GSH, TSH, Vitamin C dan E pada jaringan
ginjal tikus As yang diobati bila dibandingkan dengan tikus kontrol (Tabel 3). Pra-administrasi DATS in Sebagai tikus
yang mabuk secara signifikan (P <0,05) meningkatkan tingkat antioksidan nonenzymatic jika dibandingkan dengan
tikus As yang diobati. DATS saja yang diberikan tikus menunjukkan peningkatan signifikan (P <0,05) pada tingkat
antioksidan nonenzimatik ini jika dibandingkan dengan tikus kontrol.

3.5. Efek DATS dan As pada ATPase membran DNA terikat

Tabel 4 menunjukkan tingkat total membran renal yang terikat ATPase, Na + / K +, Ca2 + dan Mg2 + ATPase pada
ginjal kontrol dan tikus percobaan. Penurunan signifikan (P <0,05) pada tingkat terikat pada membran ginjal
ATPase pada jaringan ginjal tikus A yang diobati bila dibandingkan dengan tikus kontrol. Namun, pada tikus yang
diadministrasikan dengan DATS bersama dengan As, ada penurunan signifikan (P <0,05) pada tingkat membran
terikat pada ATPase bila dibandingkan dengan tikus yang diobati. Tikus yang diobati dengan DATS saja tidak
menunjukkan perbedaan yang signifikan pada ATPase yang terikat membran bila dibandingkan dengan tikus
kontrol.

Meja 2
Efek DATS pada penanda stres oksidatif ginjal pada tikus As yang diobati.
Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari enam ekor tikus pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf
superskrip berbeda (a-c) pada baris yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT).

Tabel 3
Efek DATS terhadap antioksidan enzimatik dan non-enzimatik pada tikus As yang diobati.

Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari enam ekor tikus pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf
superskrip berbeda (a-d) pada baris yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT). U-mewakili unit
enzim tertentu.
SOD-satu unit aktivitas enzim diambil sebagai reaksi enzim, yang memberi penghambatan 50% pengurangan NBT
pada protein 1 menit / mg; CAT-μmol H2O2 menggunakan / min / mg protein; GPx-μg GSH dikonsumsi / min / mg
protein; GST-μmol konjugasi CDNB-GSH terbentuk / min / mg protein; GR-nmol NADPH teroksidasi / min / mg
protein; G6PD-nmol NADPH terbentuk / min / mg protein

3.8. Efek DATS dan As pada ekspresi ginjal tersumbat-Caspase 3

Analisis blot barat pada ekspresi bungkuk-Caspase 3 pada kontrol dan tikus percobaan diilustrasikan pada Gambar
4. Ekspresi celah-Caspase 3 pada jaringan ginjal secara signifikan (P <0,05) meningkat pada tikus yang diobati bila
dibandingkan dengan kontrol. tikus Pra-administrasi DATS pada Tikus yang diobati menunjukkan penurunan P
<0,05 yang signifikan pada tingkat ekspresi pro-Caspase 3 dan cleavo-Caspase pada jaringan ginjal. DATS sendiri
mengolah kelompok tikus tidak menunjukkan perubahan signifikan pada tingkat apoptosis ini bila dibandingkan
dengan tikus kontrol.

Tabel 4
Efek DATS pada membran ginjal terikat ATPase pada As treated rats.
Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari enam ekor tikus pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf
superskrip berbeda (a-c) pada baris yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT). ATPase-μg Pi
dibebaskan / min / mg protein.

Gambar 3. Pengaruh DATS pada ekspresi protein antioksidan ginjal kontrol dan tikus Astreated. Nilai diberikan
sebagai mean ± SD dari tiga pengamatan independen pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf
superskrip berbeda (a-d) pada kolom yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT).

3.9. Efek DATS dan As terhadap ekspresi p-Akt, Akt, p-PI3K dan PI3K
Analisis blot bagian atas ekspresi p-Akt, Akt, p-PI3K dan PI3K pada kontrol dan tikus percobaan diilustrasikan pada
Gambar 5. Tingkat ekspresi p-Akt, Akt, p-PI3K dan PI3K menurun secara signifikan P <0,05) pada tikus yang diobati
bila dibandingkan dengan tikus kontrol. Pra-administrasi DATS pada tikus yang diobati dengan perlakuan
menunjukkan peningkatan signifikan (P <0,05) pada tingkat ekspresi p-Akt, Akt, p-PI3K dan PI3K pada jaringan
ginjal tikus bila dibandingkan dengan tikus yang diobati. Kelompok perlakuan DATS sendiri menunjukkan
peningkatan signifikan (P <0,05) pada tingkat penanda ini bila dibandingkan dengan tikus kontrol.
3.10. Efek DATS dan As pada protein ginjal Bax, Bcl-2 dan sitokol C sitosol C ekspresi
Gambar 6 menunjukkan pola ekspresi protein Bax, Bcl-2, Sitokol sitokrom C dalam jaringan kontrol dan tikus
percobaan ginjal. Pada tikus Astreated tingkat Bax dan apoptosis marker Cytosolic Cyt C expression secara
signifikan (P <0,05) meningkat dan tingkat ekspresi protein Bcl-2 menurun secara signifikan (P <0,05) bila
dibandingkan dengan tikus kontrol. Pre-suplementasi DATS pada tikus yang diobati dengan Asisten (P <0,05)
menurunkan tingkat Bax dan tanda apoptosis Cytosolic Cyt C dengan tingkat peningkatan ekspresi protein Bcl-2
diamati bila dibandingkan dengan tikus yang diobati. DATS saja tikus yang diobati menunjukkan perubahan
antiapoptosis yang signifikan dalam ekspresi protein ini bila dibandingkan dengan tikus kontrol.
Gambar 4. Pengaruh DATS terhadap ekspresi protein retakan ginjal - Caspase 3. Nilai diberikan sebagai mean ± SD
dari tiga pengamatan independen pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf superskrip berbeda (a-c)
pada kolom yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT).

3.11. Efek DATS dan As pada pemeriksaan imunohistokimia Bax

Gambar 7 menunjukkan ekspresi Bax ginjal sebagaimana dinilai oleh pemeriksaan imunohistokimia pada kontrol
dan tikus percobaan. Sel apoptosis diwarnai dengan warna kuning-coklat. Tidak ada ekspresi Bax pada tikus
kontrol. Peningkatan ekspresi Bax yang signifikan (P <0,05) diamati pada tikus yang diobati bila dibandingkan
dengan tikus kontrol. Pra-administrasi DATS secara signifikan (P <0,05) mengurangi ekspresi Bax in As sebagai tikus
yang mabuk bila dibandingkan dengan tikus yang diberi perlakuan As. DATS saja yang diberikan tikus tidak
menunjukkan ekspresi protein Bax pada jaringan ginjal tikus.

3.12. Efek DATS dan As terhadap ekspresi Bcl-2 ginjal

Gambar 8 menunjukkan ekspresi Bcl-2 yang dinilai oleh imunohistokimia pada jaringan ginjal tikus kontrol dan
tikus percobaan. Ginjal tikus kontrol dan DATS menunjukkan ekspresi kuat Bcl-2. Seperti diobati, jaringan ginjal
menunjukkan penurunan ekspresi Bcl-2 yang ditandai bila dibandingkan dengan tikus kontrol. Pra-perawatan DATS
pada Tikus yang mabuk menunjukkan peningkatan yang signifikan dalam ekspresi Bcl-2 bila dibandingkan dengan
tikus yang diobati.

3.13. Efek DATS dan As pada subunit NADPH oxidase ginjal - Nox2, p47phox dan ekspresi Nox4
Tingkat ekspresi protein dari subunit NADPH oxidase - Nox2, p47phox dan Nox4 dinilai pada jaringan ginjal tikus
kontrol dan tikus percobaan (Gambar 8). Tingkat ekspresi Nox2, p47phox dan Nox4 meningkat secara signifikan
pada tikus yang terpapar As dibandingkan dengan tikus kontrol. DATS pre-treatment secara signifikan
meminimalkan ekspresi protein Nox2, p47phox dan Nox4 bila dibandingkan dengan tikus As treated (Gambar 9).
DATS saja tikus yang diobati tidak menunjukkan perubahan signifikan pada ekspresi protein Nox2, p47phox dan
Nox4 dan sebanding dengan tikus kontrol.

Gambar 5. Pengaruh DATS terhadap ekspresi protein p-Akt, Akt, p-PI3K dan PI3K pada jaringan ginjal. Nilai
diberikan sebagai mean ± SD dari tiga pengamatan independen pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf
superskrip berbeda (a-d) pada kolom yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT).

Gambar 6. Pengaruh DATS terhadap ekspresi protein ginjal Bax, Bcl-2, Sitokola sitokrom C dalam kontrol dan
Sebagai tikus yang diobati. Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari tiga pengamatan independen pada masing-
masing kelompok. Nilai dengan huruf superskrip berbeda (a-d) pada kolom yang sama berbeda secara signifikan
pada P <0,05 (DMRT).

3.14. Efek DATS dan As pada ekspresi iNOS, NFκB, TNFα dan caspase-3 ginjal
Gambar 10 mewakili pola ekspresi iNOS ginjal, NFκB dan TNFα di daerah glomerulus dan tubular kontrol dan tikus
percobaan. Seperti tikus yang diobati menunjukkan peningkatan yang signifikan (P <0,05) pada ekspresi iNOS,
NFκB, TNFα dan caspase-3 di daerah glomerulus dan tubular ginjal bila dibandingkan dengan tikus kontrol.
Perlakuan awal DATS pada tikus yang diberi perlakuan menunjukkan penurunan yang signifikan pada
imunoreaktivitas iNOS, NFκB, TNFα dan caspase-3 di daerah glomerulus dan tubular tikus ginjal jika dibandingkan
dengan tikus yang diobati dengan As (Gambar 10B).
Gambar 7. Pengaruh DATS terhadap pewarnaan imunohistokimia ginjal Bax dalam kontrol dan Sebagai tikus yang
mabuk (sel apoptosis diwarnai dengan warna kuning kecoklatan) (200 ×). (A) Tikus kontrol menunjukkan ekspresi
nih protein Bax (B) Sebagai tikus yang diobati menunjukkan ekspresi protein Bax maksimum yang signifikan, (C)
DATS pra-pemberian Sebagai tikus yang mabuk menunjukkan tingkat ekspresi Bax yang berkurang, (D) DATS sendiri
diberikan Tikus tidak menunjukkan ekspresi protein Bax. Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari tiga pengamatan
independen pada masing-masing kelompok. Nilai dengan huruf superskrip berbeda (a-b) pada kolom yang sama
berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT). ND menunjukkan tidak terdeteksi. (Untuk interpretasi referensi
terhadap warna dalam legenda gambar ini, pembaca dirujuk ke versi web artikel ini.)

Gambar 8. Pengaruh DATS terhadap pewarnaan imunohistokimia protein Bcl-2 pada jaringan ginjal tikus Asu (200
×). (A) Tikus kontrol menunjukkan ekspresi maksimum bcl-2, (B) Karena tikus yang diobati menunjukkan ekspresi
minimal bcl-2, (C) DATS pra-pemberian Sebagai tikus yang mabuk menunjukkan ekspresi sedikit bcl-2 jika
dibandingkan dengan Sebagai kelompok perlakuan, (D) DATS sendiri diberikan tikus menunjukkan ekspresi bcl-2
lebih banyak. Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari tiga pengamatan independen pada masing-masing kelompok.
Nilai dengan huruf superskrip berbeda (a-c) pada kolom yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05 (DMRT).

3.15. Efek DATS pada histologi ginjal tikus As diperlakukan

Histologi glomerulus dan tubular normal terlihat baik di daerah korteks dan medula ginjal pada tikus kontrol11 (A)
A. Seperti ditemukan menyebabkan kemacetan glomerulus dan peritubular yang sangat parah, peningkatan
signifikan pada ruang glomerulus, pelebaran tubular ¸ vakuolisasi, nekrosis tubular dan pembengkakan. seperti
ditunjukkan pada Gambar 11 (A) B. Nekrosis struktur tubular terlihat pada bagian proksimal dan distal. Bagian
meduler kortikal bagian dalam dan luar menunjukkan kerusakan arsitektural yang lebih ekstrem daripada daerah
medula perut bagian dalam ginjal. Nefrosis ditandai dengan meluasnya degenerasi arsitektur tubular, kemacetan
tubular, pembengkakan dan nekrosis. Pra-perawatan DATS to As tikus yang mabuk menunjukkan cedera ginjal
yang kurang parah bila dibandingkan dengan kelompok As treated (Gambar 11 (A) C). DATS sendiri pada tikus yang
diobati tidak menunjukkan adanya kerusakan ginjal dan histoarchitecture mereka hampir serupa dengan ginjal
tikus kontrol (Gambar 11 (A) D).

3.16. Efek DATS pada struktur ultra-kronis tikus As treated

Struktur ultra ginjal pada tikus menunjukkan korteks dan daerah medula dari kontrol dan tikus yang diobati pada
Gambar 11B (A-D). Jaringan ginjal dari sekuens pengendali tikus secara utuh terdiri dari sel epitel tubulus ginjal
proksimal dan mikrovili, dimana DATS sendiri mengobati jaringan ginjal tikus menunjukkan struktur mikroskopis
yang serupa dengan kontrol dengan nukleus dan mitokondria yang terlihat jelas (Gambar 11 (B) A dan D ). Sebagai
tikus yang terpapar, membran nukleus tidak beraturan dengan badan apoptosis englobed pada sel epitel tubular
diamati (Gambar 11 (B) B). Perlakuan awal DATS terhadap Karena tikus yang terpapar secara signifikan mengurangi
apoptosis sel epitel tubulus ginjal yang dirangsang oleh As dan tumpukan tubulus ginjal proksimal yang jelas dan
asupan dan membran dasar tubular diamati (Gambar 11 (B) C).
Gambar 9. Pengaruh DATS terhadap ekspresi protein renal pada oksidase NADPH - Nox2, p47phox dan Nox4 pada
tikus yang keracunan As. Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari tiga pengamatan independen pada masing-masing
kelompok. Nilai dengan huruf superskrip berbeda (a-c) pada kolom yang sama berbeda secara signifikan pada P
<0,05 (DMRT).

4. Diskusi
Penelitian ini telah menunjukkan bahwa DATS, polisulfida bawang putih, memperbaiki kerusakan ginjal akibat As
pada tikus. Polysulfide bawang putih memoderasi peningkatan BUN dan kreatinin serum yang biasa terjadi dan
selanjutnya mengurangi stres oksidatif, sitokin inflamasi, TNF-α dan pro-apoptosis, Bax pada tubulus ginjal.

Arsenik adalah polutan lingkungan dan industri universal dan karsinogen manusia. Sejumlah laporan telah
menggambarkan efek toksik dan karsinogenik logam berat Seperti pada kesehatan manusia karena
ketersediaannya yang luas di udara, makanan laut dan tanaman air. Ini kurang diekskresikan dan terakumulasi di
berbagai organ, seperti ginjal, testis, hati, otak dan jantung, dan bertanggung jawab atas kerusakan organ parah
[30]. Produksi ROS dianggap sebagai mekanisme kunci dari karsinogenesis yang disebabkan logam, karena logam
berat seperti As mampu mengubah ekuilibrium redoks dalam sel. Administrasi kronis As merusak tubulus
proksimal di ginjal melalui apoptosis dan nekrosis, yang menyebabkan nefropati karakteristik [31].

Peningkatan kadar serum urea, asam urat, kreatinin seiring dengan penurunan klirens kreatinin yang menunjukkan
adanya kemungkinan kerusakan ginjal oleh As. DATS secara signifikan mencegah penanda ginjal yang berubah dan
disfungsi ginjal Akibat Asimetrik yang dilemahkan yang kemudian dikonfirmasi dengan uji biokimia dan
pemeriksaan morfologi jaringan. Telah didokumentasikan dengan baik bahwa stres oksidatif bertindak sebagai
faktor patogen penting yang menyebabkan kerusakan ginjal akibat induksi As [30,31]. Umumnya, di dalam sel,
mitokondria menghasilkan ROS seperti superoksida, hidroksi hidrogen peroksida secara teratur melalui rantai
transpor elektron tetapi juga secara bersamaan diparut oleh enzim anti-oksidan. Produksi ROS mitokondria
meningkat lebih jauh saat terpapar xenobiotik terutama As. Seperti yang menghasilkan ROS besar secara
langsung / tidak langsung terakumulasi di mitokondria sel epitel ginjal [31]. Radikal bebas yang berlebihan sehingga
menghasilkan menguras toko antioksidan intraselular, terutama GSH. Siklus Glutathione adalah sistem pertahanan
anti-oksidan endogen yang paling penting yang menjaga struktur dan integritas sel. Namun, penipisan GSH pada
asimetris menyebabkan hilangnya integritas membran dan kematian sel. Selanjutnya, radikal bebas ini langsung
bereaksi dengan komponen lipid membran sel dan menyebabkan peroksidasinya seperti yang ditunjukkan oleh
peningkatan MDA, penanda peroksidasi lipid dan karbonilasi protein pada tikus yang diobati. Sebaliknya, suplemen
DATS menurunkan generasi radikal bebas, peroksidasi lipid dan aktivitas enzim anti-oksidan yang meningkat di
jaringan ginjal. Pengamatan kami juga mendapat dukungan dari sebuah penelitian yang dilakukan oleh
Miltonprabu dan Muthumani [31] di mana mereka telah menunjukkan bahwa sitotoksisitas yang dilemahkan
silibinin yang diinduksi Sebagai tekanan oksidatif yang diinduksi pada jaringan ginjal tikus dengan mengais ROS,
mengurangi MDA dan memulihkan aktivitas anti-oksidan. Dengan demikian, dapat dihipotesiskan bahwa
perlindungan yang diberikan oleh DATS dalam penelitian ini dapat dikaitkan dengan efek anti-oksidannya [32].
Laporan yang melimpah sebelumnya menyarankan bahwa polisulfida bawang putih dapat bertindak sebagai
antioksidan, pemulung freeradis, dan pelindung radio [31,33] yang selanjutnya dikonfirmasi oleh pemeriksaan
biokimia dan pemeriksaan morfologi jaringan.

Gambar 10. Efek DATS terhadap pewarnaan imunohistokimia iNOS, NFκB, TNF-α (daerah glomerular dan tubular
ginjal) dan caspase-3 (daerah kortikal dan medullar ginjal) pada jaringan ginjal tikus asin (200 ×). (A) Tikus kontrol
menunjukkan pewarnaan negatif sitokin proinflamasi ginjal dan Caspase-3 (B) Karena tikus yang diobati
menunjukkan ekspresi maksimum sitokin proinflamasi ginjal dan Caspase-3 (C) DATS yang telah diberikan Sebagai
tikus yang mabuk menunjukkan minimal ekspresi / pewarnaan sitokin pro inflamasi ginjal dan Caspase-3 (D) DATS
yang diberikan pada tikus keracunan As menunjukkan ekspresi / pewarnaan minimal sitokin pro inflamasi ginjal
dan Caspase-3. Nilai diberikan sebagai mean ± SD dari tiga pengamatan independen di masing-masing kelompok.
Nilai dengan huruf superskrip berbeda (a-b) pada kolom yang sama berbeda secara signifikan pada P <0,05
(DMRT). ND menunjukkan tidak terdeteksi.

Gambar 11. (A) Efek DATS pada struktur ginjal tikus As-mabuk. Fotomikrograf representatif menunjukkan struktur
ginjal pembesaran tikus (H & E, 40 ×) pada kelompok eksperimen. (A) Jaringan ginjal tikus kontrol normal.
Perhatikan penampilan normal glomerulus (G) (panah hitam), dengan kedua tubulus berbelitik proksimal (PC) dan
tubulus distal berdenyut (DC) yang menunjukkan epitel normal. (B) (B) Jaringan ginjal tikus As-mabuk; kapiler
glomerulus melebar, tidak teratur, dan menempel pada kapsul Bowman yang mengecil (panah). Beberapa kapiler
glomerulus menunjukkan pembengkakan dan epitel tubular yang terkena (bintang) (C) Jaringan ginjal setelah
diobati dengan DATS; fitur histologis relatif membaik dibandingkan tikus As-inxicated yang tidak diobati. Kapiler
glomerulus mempertahankan ukuran dan penampilan normal mereka, dan epitel tubular tampak normal. (D)
Jaringan ginjal dari DATS saja yang diobati tikus menunjukkan struktur normal kapiler glomerulus dan epitel
tubular.

(B) Mikrograf elektron tikus kontrol ginjal (A) dan tikus jantan DATS (D) yang menggambarkan penampilan normal
glomerulus, sel epitel utuh proksimal dan distal, sel endotel, sel mesangial dan mikrovili. Inti itu normal bersamaan
dengan organel intra seluler lainnya. Mikrograf elektron Sebagai tikus yang diobati (B) menunjukkan glomerulus
dengan peningkatan jumlah sel endotel, tubulus proksimal dengan mikrovili yang rusak sejumlah besar sitosom
dan vakuola dan tubulus distal dengan amplop nuklir tak terisolasi inti terfragmentasi dan lisosom sekunder besar
yang memberikan tampilan sel apoptosis dan hewan yang diobati dengan DATS As (C) yang menggambarkan
glomerulus dengan proses kaki yang membaik, tubulus proksimal dengan sikat normal dan mitokondria dan
tubulus distal dengan mikrovili pleomorfik karakteristik (x 6000). Panah hitam-mitokondria, badan panah-apoptotik
merah di sel epitel tubular, N-Nucleus. (Untuk interpretasi referensi terhadap warna dalam legenda gambar ini,
pembaca dirujuk ke versi web artikel ini.)

Senyawa belerang diallyl dalam bawang putih juga telah dilaporkan karena kemampuannya untuk mengurangi
stres oksidatif dan untuk melestarikan jaringan ginjal dari nefrotoksik [33]. Dalam penelitian ini, akumulasi As
dalam jaringan ginjal secara efektif dikurangi dengan peningkatan kadar As dalam urine oleh DATS dengan jelas
menunjukkan khasiat khelasinya. Kelompok sulfat DATS atau metabolit aktifnya dapat mengikat As dan
meningkatkan ekskresi As, yang akibatnya terjadi penurunan akumulasi As. Sifat chelating dari DATS meningkatkan
eliminasi As dari jaringan ginjal, yang dapat mengurangi beban As dengan perpindahan kofaktor logam dan / atau
As mengikat dengan enzim kaya sulfydryl [34].

Pengobatan DATS menghambat penipisan enzim antioksidan enzimatik dan antioksidan non-enzimatik. Penurunan
yang signifikan pada tingkat antioksidan enzimatik dan non-enzimatik seperti yang terlihat pada Asintoksikasi dapat
menyebabkan peningkatan kerentanan jaringan ginjal terhadap kerusakan radikal bebas yang diinduksi [31].
Kemampuan metal chelating dan antioksidan DATS untuk menghambat pembangkitan ROS semakin mengurangi
stres oksidatif yang disebabkan oleh keracunan, yang dapat menahan deplesi lebih lanjut enzim antioksidan di
ginjal. Hasil kami juga mendukung pengurangan tingkat antioksidan antioksidan enzimatik non enzimatik pada
ginjal tikus As-mabuk [31]. Sebagian besar enzim antioksidan menjadi tidak aktif setelah paparan As karena ikatan
langsung kelompok As dengan tiol (SH). Telah dilaporkan bahwa metabolit DATS juga dapat menghambat oksidasi
yang dimediasi oleh peroksinitrate, yang selanjutnya mendukung hipotesis potensi antioksidan DATS [6]. As-
induced toxicity dimediasi melalui pembangkitan ROS dan NOS pada fase awal As-induced nephrotoxicity. Seperti
mempromosikan pembangkitan NO, dan dengan adanya oksigen NO membentuk zat antara yang menggantikan As
dari sulphhydryls. Bebas Seperti telah diamati untuk menginduksi kerusakan DNA dan apoptosis [31]. Dalam
penelitian ini, tikus As-inxicated menunjukkan peningkatan tingkat NO, sedangkan pra-perawatan DATS mencegah
peningkatan NO ginjal pada tikus. Oleh karena itu, kami menyimpulkan bahwa DATS memiliki kemampuan ampuh
untuk menahan stres nitrosatif yang disebabkan oleh As. TIDAK adalah biomarker untuk peradangan sehingga
DATS memiliki kemampuan untuk mengurangi respons inflamasi As-induced.

Sifat chelating DATS meningkatkan eliminasi As dari jaringan ginjal, yang dapat mengurangi beban Sebagai dengan
perpindahan kofaktor logam dan / atau As
mengikat dengan enzim. Selain itu, kemampuan DATS untuk bereaksi dengan radikal bebas atau dengan produk
samping yang sangat reaktif dari peroksidasi lipid serta peningkatan kolam tiol jaringan mungkin bertanggung
jawab atas pengurangan modifikasi oksidatif enzim dan pembalikan aktivitas antioksidan dan metabolisme
glutathione. enzim. Di antara sulfida polialil, DATS telah terbukti menjadi inducer paling ampuh dari enzim fase II
[35]. DATS sangat manjur dalam mengacaukan kompleks sitoplasma antara protein Keap1 terikat dengan protein
dan faktor transkripsi Nrf2, sehingga melepaskan Nrf2 untuk bermigrasi ke nukleus dimana ia mengaktifkan
elemen respon antioksidan (ARE) dari gen enzim fase II dan mempercepat transkripsi mereka [36 ].

Pengujian ATPase terikat membran mengungkapkan perubahan struktural dan fungsi pada membran di bawah
kondisi patologis. Berkurangnya aktivitas Na + / K + ATPase dapat disebabkan oleh peroksidasi lipid yang
disempurnakan oleh radikal bebas pada induksi As, karena Na + / K + ATPase adalah gugus 'SH' yang mengandung
enzim dan bergantung pada lipida [31]. Overload Ca2 + yang diobati oleh As juga menurunkan aktivitas Ca2 +
ATPase pada membran sel. Gangguan permeabilitas membran atau fragmentasi membran menyebabkan
kebocoran ion Ca2 + ke dalam sel sehingga menyebabkan kerusakan sel ireversibel. Mg2 + ATPase Mg2 + ATPase
mengkatalisis gerakan transmembran zat yang menggunakan ATP dalam sel dan aktivitasnya yang berkurang
memerlukan peningkatan peroksidasi lemak pada paparan As. Pemberian DATS secara substansial mengurangi
tingkat peroksidasi lipid di jaringan ginjal dan dengan demikian mempertahankan aktivitas enzim terikat membran.
Hal ini dapat disebabkan oleh kemampuan DATS untuk melindungi kelompok sulfidril dari kerusakan oksidatif
melalui penghambatan lipid peroksidasi lipida membran dan dengan demikian menstabilkan membran [35].
Ada juga bukti yang berkembang mensyaratkan bahwa stres oksidatif merangsang sekresi sitokin pro-inflamasi
pada cedera ginjal As-induced. Studi telah menunjukkan bahwa TNF-α, sitokin inflamasi apoptosis apoptosis sel
epitel, melapisi struktur tubular melalui jalur reseptor kematian, membujuk kerusakan pada arsitektur ginjal, yang
merupakan ciri khas dari As akibat luka ginjal [37]. Miltonprabu dan Muthumani [31] telah menunjukkan
peningkatan ekspresi ginjal TNF-α pada tikus yang diobati. Demikian juga, dalam penelitian kami, kami menemukan
peningkatan TNF-α, NF-kB dan sitokin pro-inflamasi serum TNF-α, IL-6 dan IL-1β dan disfungsi tubular pada tikus
yang diobati dan pretreatment DATS menghambat produksi sitokin dan kemokin. dan mempertahankan integritas
struktural tubulus. Dalam silibinin studi mereka, penyusun utama silimarin melindungi terhadap kerusakan ginjal
akibat induksi As dengan mengurangi kadar TNF dalam serum [31]. Dengan demikian, dapat dinyatakan bahwa
nephroprotection yang ditunjukkan oleh DATS tidak hanya karena pemeliharaan status redoks tetapi juga karena
efek anti-apoptosis dan anti-inflamasi.

Badan fakta yang tersedia menyiratkan bahwa As mengaktifkan jalur intrinsik apoptosis pada tubulus ginjal yang
bertindak sebagai pengatur utama kerusakan otak akibat Asimilasi [31]. Seperti yang disebabkan ROS
menyebabkan perubahan pada membran mitokondria bagian dalam yang membuka pori transisi permeabilitas
mitokondria dan menyebabkan potensi membran mitokondria kehilangan. Hal ini menyebabkan pelepasan
sitokrom-c dari mitokondria ke sitosol dan translokasi Bax ke mitokondria. Sitokrom-c selanjutnya mengaktifkan
protease sistein yang disebut caspases termasuk caspase-3, 8 dan 9 [38]. Penelitian sebelumnya telah
menunjukkan bahwa caspase-3 mengatur fase pelaksanaan apoptosis dan berperan sebagai kontributor utama
pada Nefrotoksisitas akibat Asimilasi [39]. Sejalan dengan penelitian ini, kami menemukan peningkatan signifikan
protein prokapoptotik Bax, caspase-3 dan penurunan ekspresi protein anti-apoptosis Bcl-2 pada jaringan ginjal.
Selanjutnya, aktivasi Caspase-3 yang diinduksi juga menyebabkan kerusakan DNA pada jaringan ginjal [39].
Pengobatan DATS mengurangi ekspresi Bax dan caspase-3 dan meningkatkan ekspresi Bcl-2. Oleh karena itu, DATS
mengurangi nefrotoksisitas As dengan menipiskan apoptosis pada tikus yang diobati. Efek anti-apoptosis DATS
telah dilaporkan pada kardiomiopati diabetes tikus oleh Tsai et al. [40]. Dengan demikian, mekanisme yang masuk
akal yang mendasari efek nefroprotektif DATS dapat dikaitkan dengan efek anti-oksidatif dan anti-apoptosisnya.

Nrf2 adalah faktor kunci dalam stres oksidatif. Nrf2 mengatur ekspresi protein antioksidan melalui interaksi dengan
unsur respon antioksidan (ARE). Dalam kondisi normal, Nrf2 sitoplasma sebagian besar berkombinasi dengan
Keap1 dan terdegradasi dengan cepat oleh proteasom ubiquitin [41]. Konsentrasi rendah Nrf2 tidak aktif. Stres
oksidatif atau stimulasi zat nukleofilik dapat memicu disosiasi Nrf2 dari Keap1 dan melepaskan Nrf2 bebas. Ini juga
dapat melemahkan efek protease yang dimediasi Keap1 pada Nrf2 [42]. Nuklir translokasi Nrf2 bebas dan mengikat
dengan ARE memicu transkripsi gen target di hilir, termasuk GSH-Px, HO-1, -GCS, dan NQO1. Ekspresi gen target
hilir berperan penting dalam menjaga homeostasis redoks [43]. Hasil kami menunjukkan bahw As menurunkan
tingkat mRNA nrf2 serta transkripsi gen target hilir Nrf2 (gen fase 2) (Gambar 3), menunjukkan bahwa stres
oksidatif yang diinduksi oleh As mempercepat transkripsi gen secara signifikan. Penelitian sebelumnya telah
menunjukkan bahwa paparan As menyebabkan peningkatan nyata dalam pembentukan spesies oksigen reaktif
(ROS) yang melebihi kapasitas fisiologis enzim antioksidan, akhirnya melelahkan enzim ini, mengurangi
aktivitasnya, dan dengan demikian menurunkan aktivitas Nrf2 [31] . Dalam kondisi percobaan kami, sistem
antioksidan endogen dari jaringan ginjal dihambat pada dosis sub-mematikan As selama empat minggu, yang
mengakibatkan kerusakan sel jaringan ginjal. Pengobatan dengan DATS menginduksi Nrf2 dengan ekspresi tinggi,
mengaktifkan jalur pensinyalan Nrf2 / ARE, dan kemudian menginduksi ekspresi mRNA antioksidan hilir dan
ekspresi protein. Nrf2, sebagai pertahanan antioksidan endogen master, memainkan peran penting dalam
mencegah gangguan oksidatif sel ginjal [31]. Kami menemukan bahwa DATS memperbaiki mRNA dan ekspresi
protein Nrf2, mengikuti paparan As.

Nrf2 mengkoordinasikan ekspresi sekelompok enzim antioksidan, termasuk HO-1, NQO-1, thioredoxin-1 (Txn-1),
dan superoxide dismutase 2 (SOD2), yang bersama-sama menekan stres oksidatif di ginjal dan berfungsi sebagai
regulator negatif disfungsi ginjal maladaptif, menunjukkan bahwa Nrf2 memainkan peran penting dalam menjaga
integritas fungsional jaringan ginjal di bawah tekanan oksidatif [44]. Aktivitas nefroprotektif DATS terhadap
toksisitas yang disebabkan Asin terjadi dengan peningkatan ekspresi Nrf2, HO-1, γ-GCS, SOD1 dan SOD2 dan
mengurangi tingkat ekspresi protein Keap1 dan GSK3-β dengan jelas melambangkan potensi DATS dalam aktivasi.
dari Nrf2 [8,40]. Mekanisme yang jelas untuk DATS pada aktivasi Nrf2 adalah karena interaksinya dengan residu
sistein Keap1. Residu sistein Cys273 dan Cys288 dari Keap1 dianggap dirasakan berbeda oleh elektrofil yang
berbeda dan turunan mono-alil sulfat DATS berinteraksi atau bereaksi dengan residu sistein Keap1 tertentu ini
untuk membentuk Sallyl mercaptocysteine, sehingga menginduksi aktivasi Nrf2. Mengenai mekanisme molekuler
aksi DATS, kami menemukan bahwa aktivasi AKT yang dimediasi Nrf2 dan jalur penghambatan NF-KB paling sedikit
terlibat dalam nefroproteksi DATS terhadap akibat renotoxicity yang diinduksi induksi [8,40]. Selain itu, penelitian
ini menunjukkan bahwa As mengubah ekspresi gen yang mengkodekan enzim antioksidan. DATS memperbaiki
nefrotoksisitas yang terkait dengan paparan As, dengan mengaktifkan ekspresi mrNA Nrf2, dan mengatur enzim
antioksidan dan detoksifikasi fase 2.

Beberapa penelitian telah menunjukkan bahwa berbagai macam fitokimia dari produk alami, seperti
epigallocatechin gallate (EGCG) dan 3 ', 4'-dimethylnobiletin melindungi terhadap kerusakan sel akibat oksidatif
melalui jalur PI3K / Akt / Nrf2-dependent [45, 46]. Oleh karena itu, kami menyelidiki apakah jalur tersebut
berkontribusi terhadap efek perlindungan DATS terhadap stres oksidatif akibat As. Menariknya, pensinyalan
PI3Kakt dihambat oleh tekanan oksidatif yang diinduksi oleh As di jaringan ginjal dengan represi bersamaan
dengan Nrf2 dan HO-1 dan pengungkapan Keap1 yang berkurang, sebuah represor Nrf2. Sebaliknya, DATS secara
signifikan mengembalikan sinyal penyimpangan ini oleh As yang mengindikasikan bahwa sinyal PI3K / Akt / Nrf2
terlibat dalam efek sitoprotektif DATS. Sepengetahuan kami, ini adalah studi pertama yang menunjukkan bahwa
DATS dapat melindungi terhadap kematian sel yang disebabkan oleh As-induced dengan mengaktifkan jalur PI3K /
Akt / Nrf2.

Sebagai mediasi regulasi ekspresi gen iNOS dan produksi NO dilaporkan terjadi pada ginjal [47] dan hati [48]
jaringan tikus. Kerusakan oksidatif hati dan ginjal pada tikus dikaitkan dengan NO produksi berlebih dan
penghentian GSH dan mengurangi aktivitas GPx [48]. Oleh karena itu, kami menilai apakah NO juga berkontribusi
terhadap mekanisme pensinyalan redoks kerusakan ginjal pada keracunan. Sebagai keracunan meningkatkan
ekspresi iNOS dan kemudian NO pelepasan di jaringan ginjal yang memberikan stres nitrat ginjal. Pemberian DATS
secara signifikan mengurangi pelepasan NO iNOS dalam ginjal tikus dan dengan demikian mengurangi penghinaan
nitrat yang disyaratkan oleh As.

5. Kesimpulan
Untuk rekapitulasi, hasil penelitian ini memperkuat peran penting ROS, protein jalur apoptosis seperti caspase3,
NFkB dan TNF-α dalam patogenesis Nefrotoksisitas As-induced. DATS memiliki potensi untuk mempertahankan
homeostasis seluler normal dengan melawan efek merugikan As dan mempromosikan status antioksidan seluler
melalui ekspresi PI3K / Akt / Nrf2 / ARE dan molekul hilirnya. Ini lebih lanjut menetapkan bahwa abrogasi respon
inflamasi dan induksi sinyal apoptosis oleh antioksidan yang tersedia secara alami bisa menjadi strategi yang
mengesankan untuk pencegahan kerusakan ginjal akibat As. DATS memiliki efek perisai yang poten terhadap
nefrotoksisitas agen ini, dan mungkin berguna secara klinis. Namun, ada kebutuhan untuk penelitian lebih lanjut
mengenai masalah ini sebelum aplikasi klinis dapat direkomendasikan.

Ucapan Terima Kasih

Penulis mengucapkan terima kasih atas dukungan finansial dari University Grants Commission (UGC), New Delhi,
India dalam bentuk hibah penelitian proyek utama yang didanai oleh Pemerintah India (F. No: 41-171 / 2012 (SR)
tertanggal 09 / 07/2012). Penulis menyatakan bahwa tidak ada konflik kepentingan.