F -X C h a n ge F -X C h a n ge

PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k

LABORATORIUM
TERPADU 1

BUKU PANDUAN PRAKTIKUM

“PEMERIKSAAN MIKROBIOLOGI KULIT”

TIM
LABORATORIUM
MIKROBIOLOGI FK
UNIZAR TA
2020/2021

FAKULTAS
KEDOKTERAN
UNIZAR
LABORATORIUM TERPADU 1
Gd. LABORATORIUM TERPADU 1 lt. 1
Jl. Unizar No.20 Turida, Sandubaya Mataram
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k

PEMERIKSAAN MIKROBIOLOGI KULIT

Pendahuluan
Pemeriksaan laboratorium mikrobiologi sangat diperlukan untuk menunjang diagnosis infeksi kulit
yang disebabkan oleh bakteri, virus, dan jamur. Mikroorganisme tersering penyebab infeksi kulit antara
lain: Streptococcus pyogenes dan Staphylococcus aureus, Mycobacterium leprae, virus varisela, virus
herpes, human papilloma virus (HPV), Candida sp., Dermatofita, Malassezia furfur, dll.
Spesimen yang digunakan untuk pemeriksaan mikrobiologi kulit dapat berupa pus, kerokan kulit, usap
luka, biopsi atau darah, berdasarkan patogenesis masing-masing penyakit. Pemeriksaan mikrobiologi yang
dapat digunakan adalah pemeriksaan mikroskopik yaitu pewarnaan Gram, preparat KOH, dan pewarnaan
BTA. Pemeriksaan mikroskopik diperlukan untuk membantu dokter memberikan informasi dini mengenai
kemungkinan mikroba penyebab infeksi. Dengan demikian, dokter dapat memperkirakan penatalaksanaan
selanjutnya, sambil menunggu hasil kultur/biakan.
Pada biakan, dapat diamati morfologi koloni bakteri dan jamur dan selanjutnya dapat diidentifikasi
untuk mengetahui bakteri dan jamur penyebab infeksi pada kulit. Pemilihan antibiotik dan antijamur dapat
ditentukan berdasarkan uji resistensi terhadap biakan murni bakteri dan jamur penyebab. Pemeriksaan
serologi dan mikrobiologi molekular seringkali juga diperlukan untuk membantu diagnosis infeksi kulit
yang disebabkan oleh bakteri, virus, dan jamur.

Tujuan Praktikum
Setelah mengikuti praktikum ini, mahasiswa diharapkan mampu :
a. Memahami cara pengambilan bahan pemeriksaan infeksi kulit yang disebabkan oleh bakteri, virus dan
jamur
b. Mampu melakukan pewarnaan Gram untuk menunjang diagnosis infeksi bakteri dan jamur pada kulit
c. Mampu membuat preparat KOH untuk menunjang diagnosis infeksi jamur pada kulit
d. Mengetahui cara pewarnaan BTA (Basil Tahan Asam) dengan metode Ziehl Neelsen (khusus untuk
bakteri Mycobacterium karena sukar diwarnai dengan pewarnaan gram)
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k

Pengelolaan Spesimen
1. Jenis spesimen
Jenis spesimen tergantung pada jenis lesi dan patogenesis penyakit (lihat tabel 1)

Tabel 1. Jenis spesimen berdasarkan lesi di kulit

Manifestasi klinis di kulit Mikroorganisme penyebab Spesimen

tersering
Abses terbuka/ulkus S. aureus usap dasar lesi
Abses tertutup S. aureus, Clostridium sp. Aspirat
Selulitis S. pyogenes, S. aureus biopsi, darah
Luka bakar terinfeksi P. aeruginosa, S. aureus biopsi, aspirat, usap eksudat
Sifilis T. palidum Darah
Lepra M. leprae kerokan mukosa hidung,
biopsi, kerokan jaringan

kulit, slit skin smear

Infeksi mikobakterium M. tuberculosis, M. ulcerans, M. Biopsy
marinum
Gangren C perfringens, S. pyogenes, usap dasar lesi, biopsi
Staphylococcus aureus,
Bacteroides sp.
Lesi herpetik/ vesikel Virus herpes aspirat lesi, usap dasar lesi
Kutil HPV Biopsy
Impetigo S. pyogenes, S. aureus usap dasar lesi
Mikosis superfisial Dermatofita, Candida sp., kerokan kulit, usap eksudat
Malassezia furfur (untuk lesi basah)
Mikosis Subkutis Sporothrix schenkii, biopsi
Phialophora
verrucosa, Pseudoallescheria
boydii, Madurella mycetomatis,
Actinomyces sp.
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k

2. Cara pengambilan dan transportasi spesimen

Usap
- Bersihkan lesi dengan usap kapas steril sampai dasar lesi terlihat
- Ambil spesimen dengan usap dari dasar lesi menggunakan usap kapas steril. Ambil dua usap (satu usap
untuk pewarnaan Gram dan satu untuk biakan).
- Tempatkan spesimen usap untuk biakan ke dalam medium transport stuart atau thioglikolat. Untuk
pewarnaan Gram, langsung buat preparat pada kaca obyek.
- Khusus gangren, dilakukan transportasi dan pemeriksaan spesimen secara aerob dan anaerob
- Kirim ke laboratorium < 2 jam dalam suhu ruang

Aspirat
- Bersihkan daerah pengambilan dengan antiseptik
- Aspirasi spesimen secara aseptik menggunakan Spuit steril
- Spesimen untuk pemeriksaan biakan bakteri dimasukkan ke dalam 2 tabung medium thioglikolat.
Spesimen dikirim pada suhu ruang, masing-masing spesimen dalam kondisi aerob dan anaerob. Untuk
pewarnaan Gram, langsung buat preparat pada kaca obyek
- Pada lesi vesikel yang diduga penyebabnya virus, spesimen dikirim menggunakan medium transpor
khusus virus.
- Kirim ke laboratorium < 2 jam dalam suhu ruang

Biopsi
- Bersihkan daerah pengambilan dengan antiseptik
- Lakukan biopsi secara aseptik
- Tempatkan spesimen yang sudah dibiopsi ke dalam tabung steril yang berisi NaCl 0.9%
- Untuk mikosis subkutis, spesimen diambil pada daerah yang aktif dan tempatkan pada tabung steril bila
lesi berupa pus atau pada NaCl 0.9% bila lesi kering

Darah
- Untuk pengambilan spesimen darah pada kasus selulitis, cara pengambilan dapat dilihat pada Bab XVIII
tentang infeksi sistemik
- Pengambilan spesimen darah pada kasus sifilis, cara pengambilan dapat dilihat pada Bab XVII tentang
reproduksi

Kerokan kulit
- Bersihkan daerah pengambilan dengan antiseptik
- Kerok tepi lesi yang aktif menggunakan tepi tumpul skalpel atau tepi gelas obyek yang steril
- Tempatkan spesimen ke dalam cawan petri steril
- Kirim ke laboratorium mikrobiologi dalam suhu ruang
Slit Skin Smear
- Bersihkan daerah pengambilan dengan antiseptik
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k

- Paparkan area lesi dan toreh sepanjang 2 cm menggunakan skalpel steril

- Bersihkan cairan yang pertama kali keluar dengan kasa steril
- Ambil cairan yang keluar setelahnya
- Tempatkan cairan tersebut langsung ke kaca obyek
- Luka bekas torehan diberikan antiseptik atau antibiotik topikal
- Kirim ke laboratorium mikrobiologi dalam suhu ruang

A. PEMERIKSAAN KEROKAN KULIT UNTUK DIAGNOSIS INFEKSI JAMUR

Alat dan Bahan
Alat
1. Obyek glass
2. Cover/deck glass
3. Bunsen
4. Pipet tetes
5. Skalpel atau obyek glass untuk mengambil kerokan
6. Mikroskop

Bahan
1. Kalium hidroksida (KOH)10% untuk pemeriksaan langsung.
2. Kapas Alkohol 70%

LANGKAH KERJA:
1. Bersihkan objek glass & scalpel dengan alkohol 70%
2. Kulit yg diduga terinfeksi jamur dibersihkan terlebih dahulu dengan kapas alcohol 70%
3. Bagian tepi yg aktif dari lesi dikerok dengan ujung obyek glass or scalpel. Jika tidak ada kelainan,
ambil kerokan kulit dari sela jari kaki.
4. Letakkan kerokan kulit pada permukaan obyek glass yg sudah dilabel, kemudian teteskan 1 tetes
KOH 10%, kemudian tutup dengan cover glass
5. Biarkan pada suhu ruang beberapa saat atau lewatkan sediaan sediaan diatas nyala api dua atau tiga
kali
6. Amati di bawah mikroskop adanya sel epitel dan kemungkinan adanya hifa, spora ataupun sel jamur
pada perbesaran lensa obyektif 4x, 10x, dan 40x

Hasil Pengamatan
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k

B. PEWARNAAN GRAM
Alat:

1. Ose
2. Bunsen
3. Objek Glass
4. Korek Api
5. Mikroskop
6. Bak Pewarnaan
7. Oil emersi
8. Pensil warna

Bahan:
1. Biakan murni bakteri
2.kristal violet (Gram I)
3.Iodin atau Lugol (Gram II)
4.Alkohol 95%(Gram III)
5.Safranin (Gram IV)
6.Aquadest
7.Tissue

CARA KERJA

1. Bersihkan objek glass dengan melewatkan di atas bunsen atau lampu spiritus beberapa kali.
2. Secara aseptis mengambil 1 ose biakan, letakkan di atas objek glass, ratakan seluas ± 2 cm,
kering anginkan.
3. Fiksasi di atas nyala lampu spiritus beberapa kali.
4. Teteskan 2-3 tetes larutan Gram I pada preparat dan diamkan selama 1 menit.
5. Cuci dengan air mengalir sampai cat tercuci semua, kering anginkan.
6. Teteskan 2-3 tetes larutan Gram II dan mendiamkan selama 1 menit. Cuci dengan air mengalir
sampai cat tercuci semua, kering anginkan.
7. Lunturkan dengan larutan Gram III sampai lapisan tampak pucat (± 30 detik), dan langsung cuci
dengan air mengalir lalu kering anginkan.
8. Teteskan cat Gram IV dan biarkan selama 1 menit. Cuci dengan air mengalir dan kering
anginkan.
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k

9. Mengeringkan bagian bawah kaca objek dengan tissue, amati di bawah mikroskop mulai dari
perbesaran lemah, sedang dan kuat.
10. Gambar dan beri keterangan bakteri yang tampak serta memperhatikan bentuk, warna dan reaksi
pengecatan.

Hasil Pengamatan

C. PEWARNAAN BTA (KHUSUS UNTUK BAKTERI GENUS MYCOBATERIUM)

Alat dan Bahan:

1. Ose atau kapas steril
2. Gelas obyek & cover glass
3. Lampu bunsen/spiritus
4. Bahan yang akan diperiksa
5. Rak pengecatan
6. Kran/sumber air
7. Carbol Fuchsin 0,3%
8. HCl Alkohol 3 %
9. Metylene Blue 0,3 %

CARA KERJA
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k
 F -X C h a n ge F -X C h a n ge
PD PD

!
W

W
O

O
N

N
y

y
bu

bu
to

to
k

k
lic

lic
C

C
w

w
m

m
w w
w

w
o

o
.d o .c .d o .c
c u -tr a c k c u -tr a c k

Daftar Pustaka
Budimulja U. Mikosis. Dalam: Djuanda A, Hamzah M. Aisah S. Ilmu penyakit kulit dan kelamin. Edisi 4.
Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta 2005. p. 89-105.
Cappucino J.G. Sherman N. Microbiology, a laboratory manual. 7th Ed. Pearson Benjamin Cummings,
USA, 2005. p. 77-8.
Handoko RP. Penyakit Virus. Dalam: Djuanda A. Hamzah M. Aisah S. Ilmu penyakit kulit dan kelamin.
Edisi 4. Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta, 2005.110-8.
Karuniawati A. Kiranasari A, Bela B, Tjampakasari CR, Ningsih I, Mardiastuti, Kadarsih R. Rosana Y.
Penuntun praktikum mikrobiologi kedokteran. PT Medical Multimedia Indonesia. Jakarta, 2006.
Kuswadji. Kandidosis. Dalam: Djuanda A. Hamzah M, Aisah S. Ilmu penyakit kulit dan kelamin. Edisi 4.
Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. Jakarta 2005. p. 106-09.
Murray PR, et al. Manual of clinical microbiology. Edisi 9. ASM Press. Washington DC., 2007. Struthers
JK., Westran RP. Clinial bacteriology. ASM Press. Washington DC., 2003.