Jelaskan perangkat dan mekanisme uji permeabilitas obat:

1. Metode PAMPA (absen 1-12)

2. Metode everted gut sac (absen 13- 24)
3. Metoce CaCO-2 cell monolayer (absen 25-37)

Jawab

Nama : Venny

NIM : 20190311081

ABSEN : 35

Monolayer sel Caco-2 merupakan garis sel karsinoma usus besar dari manusia, telah
digunakan sebagai model sel epitel usus untuk evaluasi permeabilitas obat dan dalam
penyaringan dalam penambah penyerapan. Ketika dikultur sebagai monolayer, sel-sel Caco-
2 berdiferensiasi untuk membentuk persimpangan ketat antara sel-sel yang berfungsi
sebagai model pergerakan senyawa paracellular melintasi monolayer. Selain itu, sel Caco-2
mengekspresikan protein transporter, protein eflux, dan enzim konjugasi Fase II untuk
memodelkan berbagai jalur transelular serta transformasi metabolik dari bahan uji. Dalam
banyak hal, monolayer sel Caco-2 meniru epitel usus manusia. Salah satu perbedaan
fungsional antara sel normal dan sel Caco-2 adalah kurangnya ekspresi isozim sitokrom P450
dan khususnya CYP3A4, yang pada tingkat tinggi di usus. Namun, sel Caco-2 dapat diinduksi
untuk mengekspresikan tingkat CYP3A4 yang lebih tinggi dengan pengobatan vitamin D3.
Suatu senyawa dianggap memiliki Caco 2 permeability tinggi jika Papp lebih besar dari 8
x10-6 cm/s dan untuk prediksi model senyawa dikatakan tinggi jika lebih dari 0,90 pada Caco
2 permeability. Penggunaan Caco-2 sel monolayer di bawah kondisi terkontrol,
permeabilitas obat dapat ditentukan. Sel Caco-2 juga dapat digunakan untuk mempelajari
interaksi obat dengan transporter P-gp. Permeabilitas obat menggunakan sel Caco-2 in viro
untuk pengangkutan obat secara pasif. Dalam beberapa kasus, permeabilitas obat mungkin
tampak rendah karena penghabisan obat melalui transporter membran seperti P-gp. P-gp ini
akan menangkap obat lipofilik saat obat tersebut akan melakukan perjalanan melalui lipid
bilayer dan membalik molekul dari dalam ke luar dan akhirnya sampai ke matriks
ekstraseluler. Sel Caco-2, ada beberapa yang tersedia secara komersial sistem ekspresi
untuk mempelajari berbagai transporter, termasuk yang disyaratkan untuk obat-obatan
berkembang oleh FDA. Sistem ini termasuk transporter rekombinan diekspresikan dalam
serangga, katak, atau mamalia sel, Juga membran plasma dari beberapa sistem ekspresi
dapat diisolasi, dengan menyediakan preparat vesikel membran yang tanpa aktivitas
metabolisme obat.

Contohnya pada pengujian permeabilitas sulfasalazine dimana Koefisien permeabilitas

sulfasalazine dan analognya di seluruh lapisan tunggal sel Caco-2 diukur sebagai fungsi dari
arah transportasi, ketergantungan energi dan konsentrasi, dan dengan adanya inhibitor dari
berbagai pompa penghabisan seluler dan pengangkut. Kemudian didapatkan hasil dari
koefisien permeabilitas sulfasalazine melintasi monolayer sel Caco-2 kira-kira 342-, 261-,
dan 176 kali lipat lebih tinggi dari arah basolateral ke apikal (BL-->AP) dari arah apikal ke
basolateral (AP-->BL) di 100, 200, dan 500 mikroM, masing-masing. Koefisien permeabilitas
pembawa, koefisien permeabilitas membran tak jenuh, dan konstanta Michaelis
diperkirakan masing-masing 1,4x10(-5) cm/s, 1,9x10(-8) cm/s, dan 369 mikro. Penghabisan
sulfasalazine sepenuhnya diblokir pada 40 dan dengan adanya uncoupler fosforilasi
oksidatif. Menggunakan penghambat penghabisan seluler, permeabilitas sulfasalazine
terbukti bergantung pada protein terkait resistensi multi-obat dan mekanisme transpor
sensitif anion. Studi permeabilitas struktur menunjukkan bahwa afinitas sulfasalazine untuk
pompa penghabisan seluler dan pengangkut dalam sel Caco-2 sangat bergantung pada
gugus fungsi asam karboksilat. Sehingga dapat disimpulkan Permeabilitas sulfasalazine
melintasi monolayer sel Caco-2 sangat rendah karena interaksinya yang kuat dengan
beberapa pompa penghabisan seluler dan pengangkut.