Talanta 103 (2013) 116-122

daftar isi yang tersedia di SciVerse ScienceDirect

Talanta

jurnal homepage: www.elsevier.com/locate/talanta

Identifikasi dari terpenoid dari ephedra menggabungkan dengan massa yang akurat dan di-silico
indeks retensi

Min Dia Sebuah . 1 . Juni Yan Sebuah . 1 . Dongsheng Cao Sebuah . Shao Liu b . Chenxi Zhao c . Yizeng Liang Sebuah . n, Yaping Li d .
Zhimin Zhang Sebuah
Sebuah Pusat Penelitian Modernisasi Cina Obat, Central South University, Changsha 410.083, PR China
b Departemen Farmasi, Rumah Sakit Xiangya, Universitas Tengah Selatan, Changsha 410.008, PR China
c Departemen Teknik Biologi dan Ilmu Lingkungan, Changsha University, Changsha 410.003, PR China
d Departemen Neurologi, Rumah Sakit Xiangtan Tengah, Xiangtan 411100, PR China

articleinfo abstrak

Pasal sejarah: terpenoid di ephedra dianalisis dengan kromatografi gas-spektrometri massa (GC-MS), dan spektrum massa murni (MS) diperoleh dengan
Diterima 10 Agustus 2012 Diterima
menggunakan metode chemometric. NIST pencarian perpustakaan dan indeks retensi (RI) yang diterapkan di lebih identifikasi. Hambatan utama
dalam bentuk direvisi 1 Oktober 2012
adalah ambigu NIST MS hasil pencarian perpustakaan, oleh karena itu, kami menggunakan metode kalibrasi eksternal sederhana untuk
mendapatkan massa yang akurat dari ion molekul atau fragmen kunci, termasuk tumpang tindih resolusi struktur isotop dan Gaussian fi tting
Diterima 6 Oktober 2012 Tersedia online
12 Oktober 2012
menggunakan software Asal. Metode kalibrasi mampu membedakan berat molekul yang berbeda di antara sejumlah besar NIST MS hasil pencarian
perpustakaan diketahui. Sebagai tambahan, kuantitatif hubungan struktur-retensi (QSRR) model dengan kemampuan prediksi yang baik didirikan
Kata kunci: dan di-silico RI diterapkan secara kualitatif identifikasi dikombinasikan dengan NIST MS hasil pencarian perpustakaan. Dua senyawa kandidat
terpenoid
ditemukan memiliki pencocokan moderat antara nilai-nilai RI diprediksi terhadap nilai-nilai eksperimen ditentukan, dan formula tidak benar
ephedra
dikeluarkan. Oleh karena itu, metode ini knis con fi tambahan mampu mencerminkan tren perkembangan kimia analitik.
metode Chemometric massa
Akurat
indeks retensi dalam-silico

& 2012 Elsevier-undang.

1. Perkenalan ada di alam. Satu-dimensi massa kromatografi gas spektrometri (GC-MS) telah digunakan untuk

Terpenoid adalah senyawa yang paling melimpah dan beragam di alam, termasuk hidrokarbon
dan turunannya oksigen yang terdiri dari beberapa unit isoprena [1] . Struktur terpenoid yang sangat
kompleks, yang dapat dibagi menjadi monoterpen, seskuiterpen, diterpenes, dll Terpenoid mungkin
rantai, satu-ring, bisiklik, atau polisiklik. derivatif oksigen mereka bisa alkohol, aldehida, keton, asam
karboksilat dan ester. Terpenoid tidak hanya utama komponen fl avor pada tanaman, resin dan
pigmen [2] , Mereka juga merupakan kelas penting dari bahan-bahan farmakologis [3 - 8 ] Dalam
pengobatan herbal Cina. minyak esensial ephedra telah terbukti bertanggung jawab untuk mendorong
diaphoresis, aktivitas kardiovaskular, yang meliputi banyak terpenoid, seperti alpha-terpineol [9 . 10 ],
Salah satu farmakologis utama merupakan [11 - 13 ].
analisis senyawa organik yang mudah menguap dan semi-volatile [14] . Karena komposisi yang rumit,
itu sulit untuk benar-benar memisahkan semua senyawa yang terkandung dalam sampel minyak
esensial yang kompleks. Untuk mengatasi co-eluting puncak masalah, banyak pendekatan
chemometric klasik telah diusulkan, termasuk analisis faktor window (APK) [15] , Heuristik berkembang
proyeksi laten (HELP)
[16 . 17 ], Target berulang analisis faktor transformasi (ITTFA)
[18 . 19 ] Dan analisis faktor window otomatis (AWFA) [20] . Akhirnya, senyawa GC-MS identifikasi
dapat dicapai melalui spektrum diselesaikan murni massa (MS).
massa akurat biasanya diperoleh dari MS murni, massa eksperimen ditentukan dari ion menurut

sebuah gelar yang sesuai akurasi dan presisi. Hal ini diungkapkan oleh jumlah yang sesuai signi fi
angka-angka tidak bisa, yang dapat menyimpulkan rumus unsur ion. Its pentingnya untuk diandalkan
identifikasi telah berulang kali menekankan. Dalam banyak kasus GC-MS, senyawa pencarian
Senyawa-senyawa induk dari banyak obat berasal dari produk alami. Jadi, sangat penting untuk beberapa memiliki skor yang sama di NIST MS perpustakaan, atau beberapa senyawa yang tidak
mengidentifikasi senyawa yang diketahui mungkin tidak ditemukan dalam database gratis atau komersial. ambigu NIST MS hasil
pencarian perpustakaan ini dapat dihapus menggunakan pengukuran massa akurat, yang
meningkatkan kepastian formula elemental, dan berikut

n Penulis yang sesuai. Tel .: þ 86 731 88830824; fax: þ 86 731 88.830.831.

Alamat email: yizeng_liang@263.net (Y. Liang).

1 Pertama penulis, penulis memberikan kontribusi sama untuk penelitian ini.

0039-9140 / $ - melihat hal depan & 2012 Elsevier-undang.

http://dx.doi.org/10.1016/j.talanta.2012.10.018
 M. Dia et al. / Talanta 103 (2013) 116-122 117

up diskriminasi antara senyawa pencarian berganda dengan ion molekul yang berbeda dan fragmen kunci. Sampel disimpan selama 3 jam pada suhu kamar, dan mengalami destilasi air selama 5 jam sesuai dengan
Ada beberapa metode yang digunakan untuk pengukuran massa akurat, beberapa mahal highresolution metode ekstraksi standar yang dijelaskan dalam farmakope Cina [33] . minyak esensial yang diperoleh
instrumen MS, termasuk Fourier Transform spektrometri massa (Ftms) dan lain-lain [21] pulih dengan n heksana dan dehidrasi anhidrat natrium sulfat, akhirnya diawetkan dalam botol disegel

Yang diterapkan dalam deteksi massa akurat. instrumen resolusi rendah dengan pergeseran sistematis pada 4 1 C, dan dianalisis dalam waktu 6 jam.

yang besar, termasuk tiga spektrometri massa quadrupole, juga bisa diterapkan dalam pengukuran
tersebut, yang memerlukan beberapa metode kalibrasi matematika [22 . 23 ]. Metode ini digunakan
dalam percobaan untuk membuat deviasi massa dalam kisaran yang diinginkan. Wang dan Gu, dan Erve
et al. [24 . 25 ] Melaporkan konsep akurasi massa dan akurasi spektral yang dapat mengurangi kesalahan 2.3. GC / MS analisis
massa untuk kedua instrumen tinggi dan resolusi rendah. Proses ini meningkatkan pengukuran massa
akurat dan formula penentuan spektrometer massa quadrupole konvensional atau instrumen resolusi analisis GC-MS dilakukan pada kromatografi gas 7890A (Agilent, Santa clara, CA, USA) yang
tinggi. Akhirnya, dapat memberikan rumus akurat, dan mempersempit rentang pencarian di dilengkapi dengan spektrometer massa 5975 (Agilent, USA). Sebuah kolom kapiler HP-5 (30 m
perpustakaan NIST MS.

0,25 mm id, fi lm ketebalan 0,25 m m, Agilent, USA) digunakan untuk pemisahan. mengikuti program suhu
oven digunakan, dimulai pada 60 1 C selama 5 menit, kemudian meningkat menjadi 150 1 C pada tingkat 4 1
C min 1 selama 2 menit, akhirnya meningkat menjadi 250 1 C pada tingkat 10 1 C min 1 selama 10 menit.
Spektrometer dioperasikan dalam mode elektron-dampak (EI), memindai kisaran 35-500 Amu dan ionisasi
energi 70 eV. Injektor dan ion sumber disimpan pada 250 dan 230 1 C, masing-masing. injeksi split 1 m l
indeks retensi (RI) terkait erat dengan struktur molekul
dilakukan dengan rasio split 1:50 dan pembawa Helium gas digunakan pada tingkat yang fl ow konstan dari
[26 . 27 ], Dan di bawah fi c kondisi kromatografi tertentu, dengan suhu kolom dan kolom properti. Oleh 1,0 ml min 1. Data MS ditetapkan untuk memperoleh di '' Raw '' dan '' Scan 'mode.
karena itu, RI dikombinasikan dengan MS, dapat berfungsi sebagai alat penting untuk analisis kualitatif
[28] , Yang mampu secara efektif meningkatkan hasil kualitatif. Secara khusus, RI berguna untuk senyawa
isomer yang memiliki MS sangat homolog, dan untuk senyawa yang sesuai MS tidak tersedia. Jadi, RI
diterapkan untuk lebih lanjut identifikasi dari senyawa-senyawa yang tidak diketahui dalam sampel alami
matriks kompleks dengan menggunakan fasa diam yang berbeda. Jumlah senyawa calon dapat dikurangi
melalui RI perbandingan antara NIST perpustakaan dan percobaan hasil sementara nilai-nilai RI dari 2.4. Akuisisi MS murni dan metode fi ed mengidentifikasi

beberapa senyawa yang diketahui atau tidak diketahui tidak dapat ditemukan dalam database atau yang
tidak tersedia secara komersial. Untuk senyawa ini, solusinya melaksanakan metode RI di-silico metode BANTUAN dilaksanakan di C þþ dan MFC oleh laboratorium kami. Selektif Analisis Ion

menggunakan hubungan kuantitatif struktur-retensi (QSRR), suatu teknik yang berkaitan variasi RI (SIA) [34] dan Alternatif Pindah Jendela Analisis Faktor (AMWFA) [35 . 36 ] Diberi kode di MATLAB

dengan variasi beberapa deskriptor molekul. [29 - 31 ], Dan hasilnya memiliki kualitas statistik yang baik 2010 (a) untuk windows. The identifikasi komponen kimia dalam minyak esensial dibuat oleh perbandingan

dengan kesalahan prediksi yang rendah. Oleh karena itu, pendekatan ini menawarkan alat diakses dan indeks mereka retensi (RI) dan MS dari data NIST 08. Perhitungan RI didasarkan pada persamaan kuasi-

kuat untuk karakteristik hasil identifikasi ambigu dari minyak esensial. linear berlaku untuk kondisi GC operasi suhu diprogram linear [37] menggunakan Persamaan. (1) , Di
mana RI adalah indeks retensi temperatureprogrammed; T (x), T (n) dan T (n þ 1) adalah suhu retensi
komposisi diukur dan dua berdekatan standar n alkana yang mengandung n dan n þ 1 karbon di bawah
kondisi operasi yang sama.

Dalam tulisan ini, terpenoid yang diidentifikasi dari '' sistem hitam putih abu-abu '' menggunakan
RI ¼ 100 T ð x Þ? T ð n Þ ð1Þ
metode chemometric dan RI. massa akurat ion molekul digunakan untuk con Penegasan dari beberapa
T ðn þ 1 Þ? T ð n Þ þ n
senyawa. Dalam-silico RI dari terpenoid juga diterapkan untuk meningkatkan kepercayaan diri dari
identifikasi senyawa yang tidak diketahui.
2.5. metode kalibrasi massa ion molekul

software asal V8.6 (asal Lab Perusahaan) digunakan untuk resolusi struktur isotop tumpang tindih
2. Bahan-bahan dan metode-metode dan Gaussian fi tting (Persamaan. (2) ) Dari '' Raw '' Data MS. software tujuh aturan Emas [38]

2.1. Bahan dan identifikasi dari simplisia itu bebas didownload dari http: // fi ehnlab.ucdavis.edu/projects/ Seven_Golden_Rules / . Delapan senyawa
yang molekul ion berkisar 99-182 digunakan untuk kalibrasi. Menurut kurva kalibrasi standar statistik,

Tumbuh-tumbuhan kasar Ephedra Sinica, dan ephedra equisetina dikumpulkan pada musim gugur hasil dihitung digunakan untuk membedakan berat molekul yang berbeda dalam sejumlah besar hasil

2010 di Mongolia, China. solusi standar alkana dari C8-C20 (campuran tidak ada. 04.070) dan C21-C40 pencarian.

(campuran tidak ada. 04.071) yang dibeli dari Fluka Chemika (Buchs, Swiss). minyak minyak kamper,
minyak kayu manis dan kulit kayu manis putih yang dibeli dari Huabao Flavors & Fragrances Co, Ltd
Asal-usul botani Ephedra Sinica, dan ephedra equisetina adalah identifikasi ed oleh Dr. Shao Liu. Kimia ð Þðxx c Þ2Þ=w2
y ¼ y 0 þ ae 4 p ð2Þ
identifikasi dilakukan sesuai dengan deteksi HPLC-DAD alkaloid efedrin [32] . kromatogram simplisia Dalam ð 2

w ffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffiffi p=4Dalam2
dibandingkan dengan kromatogram efedrin, zat referensi pseudoefedrin.

2.6. Dalam-silico RI pengukuran

seleksi deskripsi dalam pemodelan QSRR penting untuk memastikan daya prediksi yang optimal dari
model. Enam jenis deskriptor molekul dihitung oleh kelompok kami, termasuk deskripsi konstitusional,
2.2. Persiapan minyak esensial dengan hidrodistilasi deskriptor topologi, indeks keadaan elektronik, deskriptor kimia kuantum, deskriptor yang berkaitan
dengan sifat molekul dan deskriptor geometris. mengingat

Setelah kering udara ephedra menghancurkan, 30 g sampel tepat ditimbang dan dicampur
dengan 300 ml air suling.
118 M. Dia et al. / Talanta 103 (2013) 116-122

deskriptor geometris struktur terendah energi, semua kimia dan dihitung berdasarkan fitur struktural 3.2. Pure akuisisi MS dari terpenoid

dioptimalkan oleh MOPAC program 2007. The spesifik langkah-langkah dapat dilihat di Referensi [39] ,
Termasuk pemodelan molekul, deskriptor generasi dan lintas validasi model dengan mengukur akurasi
dalam memprediksi respon dari data yang tersisa. Senyawa dengan diketahui RI diukur, dan eksperimental
RI itu dilambangkan sebagai RI (percobaan). dihitung-silico RI menggunakan model QSRR itu
dilambangkan sebagai RI (prediksi). Kesalahan RI relatif ditentukan dengan menggunakan rumus (3) [29] .
Kebanyakan analisis data terutama dilakukan di Matlab 2010.
kesalahan RI ¼ 100 ½ RI ð ramalan Þ? RI ð percobaan Þ = RI ð percobaan Þ? ð 3 Þ
puncak tunggal, tumpang tindih puncak dan puncak tertanam membangun sebuah '' putih / abu-
abu / sistem hitam ''. Dalam sistem ini, murni MS tidak bisa diperoleh dengan menggunakan metode
sederhana. Data matriks yang dihasilkan oleh kromatografi instrumen ditulis dgn tanda penghubung
termasuk GC-MS mengandung informasi dari kromatogram dan MS. metode resolusi multivariat
berdasarkan data formulir matriks memiliki terpenuhi ed urgensi untuk menyelesaikan data dua arah ke
kromatogram murni dan MS murni, baik secara kuantitatif maupun kualitatif. HELP, SIA dan AMWFA
metode telah terbukti metode yang efektif yang dapat menyelesaikan beberapa puncak tumpang tindih
atau tertanam dikembangkan oleh lab kami. BANTUAN adalah metode chemometric klasik yang
menggunakan informasi selektif untuk menyelesaikan puncak tumpang tindih dalam dua dimensi matriks
data yang kromatografi. Sekarang, mari kita memperkenalkan langkah-langkah metode BANTUAN.

Gambar. 1 (A) menunjukkan segmen di kisaran 12,70-13,10 menit diperoleh dari sampel Ephedra
3. Hasil dan Pembahasan equisetina. The baseline drift dari GC-MS kromatogram akan mengaburkan sinyal dan memburuk hasil
analisis. Dengan demikian, penghapusan latar belakang dan kurva fi tting diperlukan ketika kita
3.1. GC-MS hasil analisis terpenoid mendapatkan MS murni. Berikut biasa pengguna linear pemotongan atau adaptif iteratif reweighted
dihukum metode kuadrat terkecil [40] dapat memenuhi kebutuhan kita. Tiga karakteristik ion puncak
Sampel minyak esensial diencerkan menggunakan n heksana, dan kondisi kromatografi diwakili dengan luas sikat, dan daerah komponen murni ditandai dengan 1, 2, 3 dan nol-komponen wilayah
ditingkatkan untuk mendapatkan kromatografi baik pro fi le. Sampel dianalisis dalam tiga ulangan, masing-masing komponen dapat dengan mudah diamati di Gambar. 1 (A), kita juga bisa menggunakan
dan korelasi koefisien koefisien fi kromatogram melebihi metode matematis untuk membuktikan kebenaran tersebut. Data ditentukan menggunakan berkembang
grafik proyektif laten dan rankmap atas dasar analisis pelacakan eigenstructure ( Gambar. 1 (B) dan (c)).

0,985. Akhirnya, Total kromatogram ion (tics) dari minyak esensial dari ephedra didapatkan. Analisis Dari rankmap, kita bisa melihat peringkat di daerah komponen murni sama dengan satu, yang berarti

kuantitatif dilakukan dengan metode integrasi keseluruhan volume (OVI). Kualitatif identifikasi dari semua komponen tunggal. Akhirnya, tiga MS murni diselesaikan dengan cara resolusi penuh rank. Akhirnya,

puncak dengan rasio signal-to-noise tinggi diterima oleh perbandingan RI dan MS dari data NIST 08 Tetramethylpyrazine, Sebuah- Terpinolene dan
menyebabkan pengidentifikasian 33 terpenoid dalam 90 senyawa yang berbeda dari Ephedra. The terpenoid
fi ed diidentifikasi tercantum dalam Tabel 1 sesuai dengan pesanan elusi mereka pada kolom kapiler HP-5.

Tabel 1
Identifikasi terpenoid fi kasi, RI eksperimental dan kategori yang sesuai mereka (kereta diatur atau tes mengatur atau kandidat senyawa) antara minyak esensial dari ephedra dan
sampel komersial lainnya.

RI Nama Kategori RI Nama Kategori

926 Sebuah- Thujene Melatih 1411 Sebuah- Gurjunene melatih

972 2-Thujene Melatih 1424 caryophyllene melatih

Melatih 1457 Humulene melatih

975 b- pinene
998 p-Menth-2-ene Melatih 1463 (-) - Alloaromadendrene melatih

1005 Sebuah- phellandrene Sebuah Melatih 1479 germacrene D Sebuah melatih

1014 Isocineole Sebuah Melatih 1485 4- (2,6,6-Trimethylcyclohexa-1, melatih

3-dienyl) tapi-3-en-2-satu Sebuah

1016 Sebuah- terpinene Sebuah Melatih 1488 b- Ionone Sebuah melatih

1028 Limonene Sebuah Melatih 1523 Cadina-1 (10), 4-diena melatih

1030 Cineole Sebuah Melatih 1586 caryophyllene oksida melatih

Melatih 1606 Cedrol Sebuah melatih

1049 cis b- Ocimene
1058 g- terpinene Sebuah Melatih 1639 g- Eude s mol Sebuah melatih

1090 4-Isopropenyltoluene Sebuah Melatih 1654 d- Cadinol, (-) - Sebuah melatih

1121 cis-2-p-Menthen-1-ol Sebuah Melatih 1700 Eudesm-7 (11) -en-4-ol Sebuah melatih

1134 1-Terpinenol Sebuah Melatih 947 camphene uji

1138 L- Pinocarveol Melatih uji
991 b- myrcene
1145 (-)-Kamper Melatih 1024 p-cymene Sebuah uji
1193 Sebuah- terpineol Sebuah Melatih 1039 uji
trans- b- Ocimene
1198 g- terpineol Sebuah Melatih 1088 Sebuah- Terpinolene Sebuah uji
Melatih 1145 b- terpineol Sebuah uji
1240 b- citral
1248 p-Menth-4-en-3-satu Sebuah Melatih 1164 d- terpineol Sebuah uji
1256 geraniol Sebuah Melatih 1177 4-terpineol Sebuah uji
1273 trans-Citral Melatih 1352 Sebuah- Longipinene uji
1275 Perilla alkohol Sebuah Melatih 1385 geranyl asetat uji
1351 Sebuah- terpineol asetat Sebuah Melatih 1414 Sebuah- Cedrene Sebuah uji
1354 1,1,6-Trimethyl-1,2-dihydronaphthalene Sebuah Melatih 1581 (-) - Spathulenol Sebuah uji
1386 b- Damascenone Sebuah Melatih 1258 p-Menth-2-en-7-ol, trans- Sebuah senyawa
1409 1,4-Methanoazulene, decahydro-4,8,8-trimethyl9-methylene-, [1S- (1a 0, 3AA 0, 4a Melatih 1284 2-Caren-10-al Sebuah senyawa
0, 8AA 0)] -

Sebuah senyawa fi ed identifikasi berasal dari Ephedra.

 M. Dia et al. / Talanta 103 (2013) 116-122 119

hasil kuantitatif dan kualitatif [34 - 36 ]. murni MS yang diperoleh dapat memberikan jaminan untuk
penentuan massa akurat ion molekul atau fragmen kunci.

3,5 4 x 10 5

3.3. Auxiliary con Penegasan menggunakan akurasi massa ion molekul

2,5 3 The ambigu NIST MS hasil pencarian perpustakaan juga muncul setelah menggunakan MS murni.
Kadang-kadang, senyawa kandidat dengan berat molekul approximative muncul di banyak hasil
Int
en pencarian. Secara bersamaan, hasil pencarian fi nal juga diperlukan con Penegasan dari rumus molekul
sit
as mereka. Untuk '' Raw '' modus data GC-MS, ion molekul berisi informasi yang dihasilkan oleh
1,5 2 kelimpahan alami dari berbagai isotop yang terkandung dalam senyawa tersebut. pengukuran massa
2 3
akurat melalui operasi matematika canggih bisa menentukan formula elemental untuk mengecualikan
ketidakpastian. Dalam beberapa tahun terakhir, beberapa pendekatan komputasi berdasarkan informasi
isotop, termasuk Massworks [41] , Telah diterapkan di efektif komposisi penjelasan unsur.
0,5 1

0
12,7 12,75 12,8 12,85 12,9 12.95 13 13,05 13.1

Retensi Waktu (min) 1

Sebuah metode sederhana untuk membedakan berat molekul yang berbeda dalam sejumlah besar
hasil pencarian diperkenalkan di bawah ini. Puncak 1 dan puncak 2 di Gambar. 1 adalah contoh yang
diperkenalkan di 3.2, baik dengan berat molekul 136. Tetramethylpyrazine itu veri fi ed oleh bahan
referensi sebagai memiliki berat molekul

136.1943; Namun, berat molekul puncak 2 tetap tidak diketahui. Pertama, data MS ditetapkan untuk
memperoleh di '' Raw '' mode. Kedua, campuran delapan standar kalibrasi eksternal yang diberikan ion
molekul m / z 99,154, 108,1411, 121,1366, 125,191,

136.1943, 143,207, 178,2277 dan 182,2179. ion molekul mereka diekstraksi dan isotop pro fi les yang fi tted,
seperti di Gambar. 2 . Kesalahan dihitung dengan mengurangkan nilai diukur (massa akurat) dari nilai
sebenarnya (massa tepat), sesuai dengan istilah '' akurasi '' [42] . kurva statistik standar kalibrasi yang
diperoleh dari massa yang dikenal terhadap kesalahan dihitung itu linear fi tted ( Gambar. 3 ) Dan korelasi
koefisien adalah 0,9517. Ketiga, minyak esensial berjalan di GC-MS, dan ion molekul puncak 1 dan puncak 2
diekstraksi. fi ne isotop struktur mereka biasanya tumpang tindih satu sama lain karena massa
approximative, termasuk MH, M, M þ 1. Fenomena sering terjadi pada instrumen lowresolution, dan
bahkan dalam beberapa instrumen resolusi tinggi. Dalam bawah diselesaikan struktur isotop tumpang tindih
ini, informasi yang relevan dengan komposisi unsur yang paling terlibat. Menggunakan fungsi Puncak
Analyzer dalam perangkat lunak Asal, struktur isotop tumpang tindih bisa diselesaikan. Selain itu, algoritma
matematika (Gaussian) fi tting diaplikasikan pada spektrum mentah untuk mendapatkan spektrum penuh
halus dan simetris dengan menggunakan software Asal. Massa puncak pusat (sumbu) dan rasio isotop
(tinggi) dihitung dengan menggunakan parameter spesifik ( Gambar. 2 ). Menggunakan nilai yang dihitung
12
Int 10
dari fi tted isotop pro fi les dalam kombinasi dengan koreksi 0,0097 antara teori dan nilai fi tting ( Gambar. 3
ens
itas ) Diterapkan untuk mengkompensasi kesalahan massa, dan berat molekul yang dihitung dapat diperoleh.
Dalam rangka untuk menguraikan validitas dari pendekatan ini lebih efektif, isotop pro fi les ion molekul
136.1943 dari puncak 1 digunakan sebagai senyawa pengendalian mutu internal untuk memastikan
kebenaran data kalibrasi. Perbandingan antara teori isotop pro fi les dihitung dengan kalkulator elemen
68
rumus (MWTWIN) dan fi tting isotop pro fi les menggunakan software Asal dapat dilihat di Gambar. 4 .
Dua senyawa bisa dibedakan dari mereka '' Raw '' mode ion molekul isotop pro fi les, meskipun berat
molekul mereka berdua 136, yang tidak dapat dilihat dari grafik bar yang diperoleh dari '' Scan 'mode.
24

12,75 12,8 12,85 12,9 12.95 13 13,05 13.1

Retensi Waktu (min)

Gambar. 1. ( a) tumpang tindih puncak segmen di kisaran 12,70-13,10 menit diperoleh dari sampel Ephedra equisetina,

b) berkembang grafik proyektif laten dan (c) rankmap tersebut. (1). Wilayah komponen murni Tetramethylpyrazine; (2) wilayah
komponen murni Sebuah- Terpinolene dan (3) wilayah komponen murni dari Benzene, 1-metil-4-
(1-methylethenyl).

Benzene, 1-metil-4- (1-methylethenyl) - yang diidentifikasi melalui NIST MS pencarian perpustakaan.

Selain itu, AMWFA dan SIA juga ditunjukkan efektif dalam menyelesaikan puncak tumpang tindih dan algoritma tujuh aturan emas benar berubah massa akurat untuk komposisi unsur senyawa yang
puncak tertanam. Metode ini chemometric, bersama-sama dengan program suhu oven, secara efektif terdiri dari unsur-unsur C, H, N, S, O, P, F, Cl dan Br pada probabilitas tinggi, dan secara otomatis
dapat meningkatkan akurasi dapat menghambat senyawa calon mungkin.
120 M. Dia et al. / Talanta 103 (2013) 116-122
Gambar. 2. Sebuah fi tted isotop pro fi le dan sisa kumulatif m / z 136.1943 menggunakan software Asal, yang berasal dari Tetramethylpyrazine.
Gambar. 3. Kurva standar kalibrasi statistik antara massa dikenal dan kesalahan dihitung.
Dalam pengujian, perangkat lunak menghasilkan rumus unsur dalam top hits sesuai dengan berat molekul
kalibrasi puncak 2 (136.2344), dan memilih rumus molekul yang paling mungkin. Terintegrasi dengan
NIST MS hasil pencarian perpustakaan, C10H16 (136,2340) adalah rumus yang benar (berat molekul).
Menggunakan metode sederhana ini, kami juga C9H10O dibedakan (134,1751) dari C8H9NO (135,1632)
untuk puncak GC-MS terletak di 15,39 menit diperoleh dari sampel Ephedra equisetina. Senyawa
kandidat ini memiliki kesamaan yang tinggi ( 4 90%), dan tidak bisa dibedakan dengan menggunakan
metode biasa karena bagian dari RI tidak dapat ditemukan. The fi nal dihitung berat molekul dengan
menggunakan metode ini 134.1773 melalui metode; dengan demikian, jawabannya adalah C9H10O. Untuk
beberapa ion molekul lemah, metode ini juga tampaknya menjadi efektif, misalnya puncak GC MS
terletak di 4.32 min diperoleh dari sampel
Ephedra Sinica. Senyawa calon ambigu yang C9H14 (122,2075) dan C8H10O (122,1644), dan
kesamaan mereka adalah 93% dan 86% masing-masing. berat molekul yang dihitung adalah
122.1938 menggunakan isotop ion molekul lengkap pro fi les, dan C9H14 dipilih karena kesalahan
relatif lebih rendah.
senyawa Co-eluting membuatnya sulit untuk mendapatkan MS murni yang sesuai. Sementara
banyak senyawa diidentifikasi juga ada di minyak esensial, berat molekul mereka sangat dekat satu sama
lain. Banyak bahan-bahan minyak esensial juga memproduksi sisi menguntungkan bagi molekul berat
con fi knis senyawa. Tidak ada urgensi untuk menambahkan senyawa standar internal yang murni; yang
mengidentifikasi komponen fi kasi dalam minyak esensial juga dapat berfungsi sebagai standar internal.
akurasi massa dipengaruhi oleh kekuatan sinyal, kebisingan, gangguan isotop dll, dan identifikasi dan
elusidasi struktur senyawa yang tidak diketahui tetap menantang menggunakan pendekatan ini. Namun,
mencukupi untuk membedakan berat molekul yang berbeda dalam sejumlah besar hasil pencarian
dikenal.
3.4. Auxiliary con Penegasan menggunakan in-silico RI
NIST MS hasil pencarian perpustakaan biasanya memiliki berat molekul yang sama, dan beberapa ion
puncak molekul rendah atau tidak terdeteksi dalam data GC-MS. Metode akurasi massa tidak berguna
ketika menghadapi situasi yang dijelaskan di atas. RI merupakan indikator kualitatif penting, yang
berkaitan erat dengan struktur molekul. The identifikasi mungkin resor untuk RI karena data literatur
yang tersedia untuk pemeriksaan. Ada empat NIST MS hasil pencarian perpustakaan terhadap puncak 2 (
Gambar. 1 ), Dengan kesamaan lebih dari 93%, tetapi hanya bahwa dari Sebuah- Terpinolene identik
dengan RI eksperimental. Pendekatan ini bisa mengidentifikasi beberapa senyawa yang dikenal. Sayangnya,
RI dari banyak senyawa tidak dapat ditemukan dalam database komersial atau gratis, maka, satu-satunya
resor di-silico RI menggunakan metode QSRR.
RI adalah parameter standar dalam melaporkan data GC, sedangkan nilai diukur eksperimental
dipengaruhi oleh sejumlah faktor seperti jenis kolom, Program gradien suhu, dll Untuk mendapatkan
lebih RI (percobaan) data terpenoid bawah kondisi yang sama, fi fty- lima terpenoid dari minyak esensial
dari ephedra,
minyak kamper putih, minyak kayu manis, minyak kulit kayu manis ditentukan oleh GC-MS setelah
suntikan berturut-turut untuk instrumen yang sama. Terpenoid dipilih untuk menutupi berbagai relatif
besar RI, 900-1700 ( Tabel 1 ). Topologi, konstitusional, kimia kuantum dan deskripsi geometris yang
digunakan untuk menggambarkan struktur molekul. regresi linier multivariat (MLR) dipekerjakan untuk
memetakan deskriptor ke RI. Untuk lebih
 M. Dia et al. / Talanta 103 (2013) 116-122 121
100
Teori

1 2
80

kelimpahan relatif
60

40

20

0
134,5 135 135,5 136 136,5 137 137.5

m/z

100

1 2 Tepat
80

kelimpahan relatif
60

40

20

134,5 135 135,5 136 136,5 137 137.5

m/z

Gambar. 4. Perbandingan antara teori isotop pro fi les dihitung dengan kalkulator rumus unsur (MWTWIN) dan fi tting isotop pro fi les menggunakan software Asal. (1)
m / z 136.1943 berasal dari Tetramethylpyrazine; (2) m / z 136.2340 berasal dari Sebuah- Terpinolene.

Gambar. 5. Plot RI (prediksi) vs RI (percobaan) untuk set kereta api, test set dan dua senyawa kandidat.
Gambar. 6. Plot kesalahan RI relatif untuk set kereta api, test set dan dua senyawa kandidat.

proses pemodelan rinci, lihat [39] . Empat puluh terpenoid digunakan sebagai training set, 12 terpenoid tambahan con Penegasan dari beberapa senyawa yang perpustakaan NIST Data tidak tersedia.

digunakan sebagai test set, dan dua senyawa kandidat tanpa nilai-nilai perpustakaan NIST digunakan sebagai
sampel. RI (prediksi) atau kesalahan RI relatif terhadap RI (percobaan) ditunjukkan pada Gambar. 5 dan
Gambar. 6 . Kekuatan prediksi model telah divalidasi oleh lintas validasi model dan uji eksternal. parameter
statistik yang digunakan untuk menilai statistik signifikansi dari model QSRR. Kuadrat dari korelasi
koefisien ( R 2), persegi korelasi koefisien untuk cross validasi ( Q
dan persegi korelasi koefisien untuk tes eksternal (Test 2) adalah 0,961, 0,953 dan 0,954,
Meskipun kesalahan relatif besar diperkirakan RI, kombinasi di-silico RI dan murni MS
menyediakan sarana yang kuat untuk meningkatkan kepercayaan diri dari identifikasi. Dua puncak
GC-MS diperoleh hasil yang sukses dari tes, percobaan RI mereka 1258, 1284 masing-masing, dan
referensi nilai-nilai RI mereka tidak dapat ditemukan di perpustakaan NIST. Setelah mengobati
senyawa calon dua puncak GC-MS dengan metode chemometric, kesamaan dan nilai-nilai RI di

masing-masing. Akhirnya, model dengan kesalahan prediksi rendah dan korelasi yang baik koefisien perpustakaan NIST dapat dibandingkan ( Meja 2 ). nilai-nilai RI senyawa yang sangat mirip tidak
diperoleh. Model ini dapat digunakan untuk diketahui, yaitu, hasil fi ed identifikasi tidak bisa lebih jauh con fi rmed. Menggunakan di-silico RI,
kesalahan RI relatif dari dua senyawa yang sangat mirip kurang dari 5,10%.
 122 M. Dia et al. / Talanta 103 (2013) 116-122
Meja 2

Senyawa calon dua puncak GC-MS, kesamaan, nilai-nilai RI di perpustakaan NIST dan diprediksi nilai RI.

Tidak RI (percobaan) senyawa calon Kesamaan (%) RI (NIST) Diprediksi RI (kesalahan relatif RI)

1 1258 p-Menth-2-en-7-ol, trans- 92 tidak diketahui 1220 ( 5.0%) Sebuah

Bicyclo [4.1.0] heptana, 7- (1-methylethylidene) - 88 1003

2 1284 2-Caren-10-al 89 tidak diketahui 1274 (1,3%) Sebuah

Bicyclo [3.1.1] hept-2-ene-2-carboxaldehyde, 6,6-dimethyl- 80 1196

Sebuah perjanjian moderat antara nilai-nilai RI diprediksi dan eksperimental ditemukan.

nilai-nilai RI diprediksi dan eksperimental setuju untuk batas tertentu ( Gambar. 5 dan Gambar. 6 ). JJ Lu, YY Dang, M. Huang, WS Xu, XP Chen, YT Wang, J. Ethnopharmacol.
143 (2012) 406-411.
Tentu saja, hasil nal fi telah diverifikasi, nilai-nilai RI dari trans-p-Menth-2-en-7-ol, stereoisomer dari
AK Ibrahim, Nat. Melecut. Res. (2012). (Epub depan cetak). [5] T. Goto, N. Takahashi, S. Hirai, T. Kawada, PPAR
p-menth-2-en-7-ol, trans- dan bahwa dari 2-Caren-10 -al dapat ditemukan di Referensi [43 . 44 ].
Res. (2010). (Epub depan
mencetak).

S. Fukumoto, E. Sawasaki, S. Okuyama, Y. Miyake, H. Yokogoshi, Nutr.

Neurosci. 9 (2006) 73-80.
IC Sun, Y. Kashiwada, SL Morris-Natschke, KH Lee, Curr. Top Med. Chem. 3
(2003) 155-169.
4. Kesimpulan
K. Shimizu, M. Ozeki, A. Iino, S. Nakajyo, N. Urakawa, M. Atsuchi, JPN. J.
Pharmacol. 86 (2001) 223-229.

Makalah ini telah menunjukkan bagaimana menerapkan MS murni, NIST MS pencarian L. Ji, Z. Xu, G. Pan, G. Yang, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 22 (1997) 489-492. [10] LL Ding, SS Shi, J. Cui, SC
Wang, ZT Wang, Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31
perpustakaan, RI, akurat massa dan di-silico RI kendala untuk menentukan komposisi kimia dari
(2006) 1661-1664.
campuran kompleks, sehingga untuk meningkatkan akurasi senyawa identifikasi berdasarkan data MG de Oliveira, RB Marques, MF de Santana, AB Santos, FA Brito,
GC-MS. Setelah penghapusan latar belakang, kurva fi tting dan resolusi chemometric, murni MS EO Barreto, DP De Sousa, FR Almeida, DJ Badau e-Passos, AR Antoniolli,

LJ Quintans-Ju' nior, Basic Clin. Pharmacol. Toxicol. 111 (2012) 120-125.

diperoleh. Bersama dengan Kovats RI, Thirty Three terpenoid dari ephedra terutama diidentifikasi
[12] LJ Quintans-Ju' nior, MG Oliveira, MF Santana, MT Santana,
melalui NIST MS pencarian perpustakaan dan RI yang cocok. Selain itu, penentuan massa akurat
AG Guimar ~ aes, JS Siqueira, DP De Sousa, RN Almeida, Pharm. Biol. 49
dikembangkan untuk membedakan berat molekul yang berbeda dalam sejumlah besar hasil pencarian, (2011) 583-586.
menggunakan metode sederhana eksternal kalibrasi, software Asal dan tujuh algoritma aturan emas. [13] R. Souza, M. Cardoso, C. Menezes, J. Silva, D. De Sousa, J. Batista, Daru 19
(2011) 277-281. [14] B. Mendes, J.
Selain itu, RI prediksi mampu memberikan alat yang ampuh untuk meningkatkan kepercayaan diri
Gonc-alves, JS C amara, Talanta 88 (2012) 79-94.
dari identifikasi, sebagai bukti, nilai-nilai RI diprediksi dan eksperimental dari dua senyawa calon
R. Edmund, Malinowski, J Chemometr. 6 (1992) 29-40. [16] OM Kvalheim, YZ Liang, Anal. Chem. 64 (1992) 936-
sepakat untuk batas tertentu. Semua dalam semua, pendekatan matematika dan metode statistik dapat 946. [17] YZ Liang, OM Kvalheim, Chemometr. Intell. Laboratorium. Syst. 20 (1993) 115-125. [18] L. Zhang, W.
digunakan untuk memperoleh informasi yang relevan tentang sistem materi yang diteliti, dan dapat Zhang, D. Cao, M. Zeng, Y. Liang, OM Kvalheim, J. Chromatogr.

meningkatkan pemisahan dan identifikasi pada umumnya.

A. 1218 (2011) 7219-7225.
BGM Vandeginste, W. Derks, G. Kateman, Anal. Chim. Acta 173 (1985)
253-264.
ER Malinowski, J. Chemometr. 10 (1996) 273-279. [21] CL Chitescu, E. Oosterink, J. de Jong, AA Stolker, Talanta 88
(2012) 653-662. [22] HP Benton, EJ Ingin, TM Ebbels, Bioinformatika 26 (2010) 2488-2489. [23] HC k

ofeler, ML Gross, J. Am. Soc. Mass Spectrom. 16 (2005) 406-408.

pernyataan Novelty
Banyak hasil pencarian ambigu membuat kami bingung meskipun spektrum dan retensi indeks
massa murni yang diterapkan di lebih identifikasi. Dalam tulisan ini, kami mengembangkan metode
kalibrasi eksternal sederhana untuk menghasilkan massa akurat menggunakan software Asal. Selain itu,
di-silico RI juga diterapkan untuk meningkatkan kepercayaan diri dari identifikasi senyawa yang tidak
Y. Wang, M. Gu, Anal. Chem. 82 (2010) 7055-7062. [25] JC Erve, M. Gu, Y. Wang, W. DeMaio, RE Talaat, J. Am
Soc, Mass Spectrom.
20 (2009) 2058-2069.
MH Fatemi, Z. Ghorbannezhad, J. Chromatogr. Sci. 49 (2011) 476-481. [27] S. Bouzouane, M. Righezza, A.
Touabet, J. Chromatogr. Sci. 50 (2012) 137-144. [28] LX Zhang, BB Tan, MM Zeng, HM Lu, YZ Liang, Talanta
88 (2012)
311-317.
VV Mihaleva, HA Verhoeven, RC de Vos, RD Hall, RC van Ham,
Bioinformatika 25 (2009) 787-794. [30] F. Liu, Y. Liang, Cao C., N. Zhou, Talanta 72 (2007) 1307-1315. [31]
VK Gupta, H. Khani, B. Ahmadi-Roudi, S. Mirakhorli, E. Fereyduni, S. Agarwal,

diketahui.
Talanta 83 (2011) 1014-1022.
[32] M. Dia, YZ Liang, ZM Zhang, YP Li, ZD Zeng, DS Cao, YH Yun, J. Yan, J. Liq.
Chromatogr. Technol terkait. (2012). (Epub depan cetak). [33] Komisi Nasional Cina
Pharmacopoeia, Pharmacopoeia dari
Ucapan Terima Kasih Republik Rakyat Cina, Publishing House of Rakyat Kesehatan,
Beijing, 2000.
BB Tan, YZ Liang, LZ Yi, Metabolomik 6 (2010) 219-228. [35] M. Dia, YP Li, J. Yan, DS Cao, YZ Liang, J.
Karya ini secara finansial didukung oleh Komite Yayasan Alam Nasional PR China (Grant nos. Chromatogr. Sci. (2012). (Epub
20.875.104, 20.975.115 dan sebelum cetak).
ZD Zeng, YZ Liang, YL Wang, XR Li, LM Liang, QS Xu, J. Chromatogr. SEBUAH
10771217), proyek kerjasama internasional pada obat-obatan tradisional Cina pelayanan ilmu
1107 (2006) 273-285. [37] E. Kova' ts, Helv. Chim. Acta 41 (1958) 1915-1932. [38] T. Kind, O. Fiehn, BMC Bioinformatika 8 (2007)
pengetahuan dan teknologi dari Cina (Grant tidak ada. 2007DFA40680), dan Universitas Tengah 105. [39] J. Yan, DS Cao, FQ Guo, LX Zhang, M. Dia, JH Huang, QS Xu, YZ Liang,

Selatan untuk dukungan khusus dari proyek penelitian ilmiah dasar (No. 2010QZZD007). Studi
bertemu dengan persetujuan dewan review universitas.
J. Chromatogr. A. 1223 (2012) 118-125.
ZM Zhang, S. Chen, YZ Liang, Analis 135 (2010) 1138-1146. [41] K. Liu, B. Ma, YD Wang, XY Chen, DF Zhong,
Yao Xue Xue Bao 42 (2007)
1112-1114.
Referensi
AG Brenton, AR Godfrey, J. Am. Soc. Mass Spectrom. 21 (2010) 1821-1835. [43] QB Wang, Y. Yang, XM Zhao, B.
Zhu, P. Nan, JY Zhao, L. Wang, F. Chen,
E. Realdon, Boll. Chim. Tanah pertanian. 99 (1960) 52-58. ZJ Liu, Y. Zhong, Food Chem. 98 (2006) 52-58.
L. Caputi, E. Aprea, Terbaru Pat. Makanan Nutr. Agric. 3 (2011) 9-16. JF Ciccio', C. Chaverri, Rec. Nat. Melecut. 6 (2012) 371-375.