Diterjemahkan dari bahasa Inggris ke bahasa Indonesia - www.onlinedoctranslator.

com

Jurnal Ilmu Farmasi Dunia

ISSN (Cetak): 2321-3310; ISSN (Online): 2321-3086 Diterbitkan
oleh Penerbit Atom dan Sel© Seluruh hak cipta
Tersedia online di: http://www.wjpsonline.org/
Mengulas artikel

Kemajuan dalam kromatografi kolom: Sebuah tinjauan

Ranjith Reddy Kondeti1*, Kranti Sri Mulpuri2, Bharathi Meruga3

1Laboratorium Darurat Pvt. Ltd, Hyderabad, Telangana,2Sekolah Tinggi Farmasi SSJ, Hyderabad, Telangana dan
3Institut Farmasi Sree Datta, Hyderabad, Telangana, India

Diterima: 08-05-2014 / Revisi: 25-08-2014 / Diterima: 09-12-2014

ABSTRAK

Kromatografi adalah suatu metode yang digunakan untuk memisahkan senyawa organik dan anorganik. Kata kromatografi berarti "tulisan warna". Kromatografi didasarkan pada migrasi diferensial. Fase gerak bergerak melalui fase diam

(kolom) mengambil senyawa yang akan diuji. Karena fase gerak terus bergerak melalui fase diam, ia membawa senyawa bersamanya. Kolom kromatografi preparatif klasik, adalah tabung gelas dengan diameter dari 5 mm sampai 50 mm

dan tinggi 5 cm sampai 1 m. Jadi, 25 g adsorben diperlukan untuk memberikan pemisahan yang lebih baik dalam kolom berdiameter 1 cm daripada di kolom berdiameter 2 cm. Karena teknik kromatografi kolom lebih produktif dalam aspek

kualitatif dan kuantitatif, para ilmuwan berpikir untuk meningkatkan penerapannya di banyak bidang. Mereka mengerjakan teknik untuk mengurangi kerugian dengan mengubah ukuran kolom, ukuran partikel fase diam, mengubah

komposisi fase gerak, dll. Dalam kemajuan karya mereka, mereka mengembangkan teknik seperti Kromatografi Flash, Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, Kromatografi Gas, Kromatografi Cair Kinerja Ultra dan Kromatografi Konvergensi

Kinerja Ultra (Kromatografi Super Kritis). Tujuan artikel ini adalah untuk menentukan perubahan yang telah dibuat oleh para ilmuwan di setiap langkah untuk meningkatkan teknik (kromatografi kolom). Sekarang lebih dari 60% analisis kimia

di seluruh dunia saat ini dilakukan dengan kromatografi. Dalam kemajuan karyanya mereka mengembangkan teknik seperti Flash chromatography, High Performance Liquid Chromatography, Gas Chromatography, Ultra Performance Liquid

Chromatography dan Ultra Performance Convergence Chromatography (Super Critical chromatography). Tujuan artikel ini adalah untuk menentukan perubahan yang telah dibuat oleh para ilmuwan di setiap langkah untuk meningkatkan

teknik (kromatografi kolom). Sekarang lebih dari 60% analisis kimia di seluruh dunia saat ini dilakukan dengan kromatografi. Dalam kemajuan karyanya mereka mengembangkan teknik seperti Flash chromatography, High Performance

Liquid Chromatography, Gas Chromatography, Ultra Performance Liquid Chromatography dan Ultra Performance Convergence Chromatography (Super Critical chromatography). Tujuan artikel ini adalah untuk menentukan perubahan yang

telah dibuat oleh para ilmuwan di setiap langkah untuk meningkatkan teknik (kromatografi kolom). Sekarang lebih dari 60% analisis kimia di seluruh dunia saat ini dilakukan dengan kromatografi. Tujuan artikel ini adalah untuk menentukan

perubahan yang telah dibuat oleh para ilmuwan di setiap langkah untuk meningkatkan teknik (kromatografi kolom). Sekarang lebih dari 60% analisis kimia di seluruh dunia saat ini dilakukan dengan kromatografi. Tujuan artikel ini adalah

untuk menentukan perubahan yang telah dibuat oleh para ilmuwan di setiap langkah untuk meningkatkan teknik (kromatografi kolom). Sekarang lebih dari 60% analisis kimia di seluruh dunia saat ini dilakukan dengan kromatografi.

Kata Kunci: Kromatografi, Fase Gerak, Elusi, Estimasi, Pemisahan

PENGANTAR berhenti bergerak dan terpisah dari

komponen lainnya.
Kata kromatografi berarti "tulisan warna".
Kromatografi adalah metode yang digunakan oleh Estimasi Obat dalam Bentuk Sediaan:Pemberian dua
para ilmuwan untuk memisahkan senyawa organik atau lebih obat sekaligus menjadi keharusan karena
dan anorganik sehingga dapat dianalisis dan beberapa alasan terapeutik. Formulasi multi-komponen
dipelajari. Kromatografi adalah metode fisik yang telah mendapatkan banyak kepentingan sekarang hari
bagus untuk mengamati campuran dan pelarut. karena penerimaan pasien yang lebih besar,
Kromatografi adalah teknik yang sangat penting peningkatan potensi, beberapa tindakan, lebih sedikit
sehingga dua hadiah Nobel telah dianugerahkan efek samping dan bantuan lebih cepat.[2,3]
kepada para ahli kromatografi. Lebih dari 60% Metode analitik untuk obat-obatan yang digabungkan
analisis kimia di seluruh dunia saat ini dilakukan [1] bentuk sediaan meliputi:
dengan kromatografi. Kromatografi didasarkan
pada migrasi diferensial. Dalam semua ✓ Metode analisis non-instrumental
kromatografi ada fase gerak dan fase diam. Fase ✓ Metode analisis instrumental
gerak bergerak melalui fase diam mengambil
senyawa yang akan diuji. Karena fase gerak terus Saya. Metode analisis elektro
bergerak melalui fase diam, ia membawa senyawa ii. Metode fisik
bersamanya. Pada titik yang berbeda dalam fase aku aku aku. Metode spektral
diam, komponen senyawa yang berbeda akan iv. Metode kromatografi
diserap dan akan berhenti bergerak dengan fase Kromatografi: Modern farmasi
gerak. Ini adalah bagaimana hasil kromatografi formulasi adalah campuran kompleks
diperoleh, dari titik di mana komponen senyawa termasuk di samping satu atau lebih bahan
yang berbeda aktif terapeutik, sejumlah bahan inert seperti:

* Alamat Penulis yang Sesuai: Ranjith Reddy Kondeti, Laboratorium Emergent Pvt. Ltd, Hyderabad, Telangana, India; Email:
ranjithreddykondeti@gmail.com
 Ranjith Reddy Kondeti dkk., Dunia J Pharm Sci 2014; 2(9): 1375-1383
pengencer, penghancur, warna dan rasa. Untuk
memastikan kualitas dan stabilitas produk akhir, analis
farmasi harus dapat memisahkan campuran menjadi
komponen individu sebelum analisis kuantitatif. Di
antara teknik yang paling kuat yang tersedia untuk
analis untuk pemisahan campuran ini adalah kelompok
metode yang sangat efisien secara kolektif disebut
kromatografi. Ini adalah sekelompok teknik untuk
pemisahan senyawa campuran yang bergantung pada
afinitas zat terlarut antara dua fase yang tidak dapat
bercampur. Salah satu fase adalah unggun yang
ditempelkan dengan luas permukaan yang besar,
sedangkan yang lainnya adalah fluida yang bergerak
melalui permukaan fase tetap. Fase tetap disebut fase
diam dan fase lainnya disebut fase gerak.[4]
Berdasarkan jenis bahan stasioner yang digunakan
untuk pemisahan, ada dua jenis:
Fase normal: Fase diam (Polar)
Fase gerak (Non-polar)
Senyawa Non polar Terelusi terlebih dahulu.Fase
terbalik: Fasa Stasioner (Non-polar)
Fase gerak (Polar)
Senyawa polar Terelusi terlebih dahulu.
Dalam sebagian besar analisis, Fase Balik
digunakan karena banyak obat bersifat polar.
Tergantung pada jenis kromatografi yang digunakan,
fase gerak dapat berupa cairan murni atau campuran
larutan (misalnya: Penyangga dll) atau dapat berupa
gas (campuran murni atau homogen).
Metode kromatografi dapat diklasifikasikan
menurut sifat fase diam dan fase gerak.
Macam-macam Kromatografi adalah
▪ Kromatografi adsorpsi
▪ Kromatografi partisi
▪ Kromatografi pertukaran ion
▪ Eksklusi ukuran atau kromatografi
permeasi gel.
Teknik instrumental modern dari GLC dan HPLC memberikan
pemisahan yang sangat baik dan memungkinkan pengujian
yang akurat dari konsentrasi yang sangat rendah dari berbagai
macam zat dalam campuran kompleks.
Kromatografi Adsorpsi: Dalam kromatografi
adsorpsi, fase gerak yang mengandung zat terlarut
melewati permukaan fase diam. Retensi komponen
dan pemisahan konsekuennya tergantung pada
kemampuan atom di permukaan untuk
menghilangkan zat terlarut dari fase gerak dan
mengadsorbsinya sementara melalui gaya
elektrostatik. Biasanya silika atau alumina
digunakan sebagai adsorben dengan pelarut yang
relatif non polar seperti heksana sebagai fase gerak
pada adsorpsi fase normal sedangkan pada
adsorpsi fase terbalik unggun non polimer dengan
1376
pelarut polar relatif seperti air, asetonitril
metanol sebagai fase gerak.
Partisi Kromatografi: Di dalam partisi
kromatografi bahan padat inert seperti silika gel
atau tanah diatom berfungsi untuk mendukung
lapisan tipis cairan yang merupakan fase diam
efektif. Sebagai fase gerak yang mengandung zat
terlarut lewat di dekat fase cair ini, retensi dan
pemisahan terjadi karena kelarutan analit dalam
dua cairan seperti yang ditentukan oleh koefisien
partisi mereka. Metode ini menderita kerugian
karena beberapa kelarutan fase diam dalam fase
gerak. Oleh karena itu tindakan pencegahan
harus diambil untuk membatasi pembubaran
fase diam.
Kromatografi Pertukaran Ion: Dalam kromatografi
penukar ion, fase diam terdiri dari matriks resin
polimer pada permukaan yang gugus fungsi
ioniknya, misalnya asam karboksilat atau amina
kuaterner, telah terikat secara kimia. Saat fase gerak
melewati permukaan ini, zat terlarut ionik
dipertahankan dengan membentuk ikatan kimia
elektrostatik dengan gugus fungsi. Fasa gerak yang
digunakan dalam jenis ini selalu cair.
Kromatografi Pengecualian Ukuran: Dalam
kromatografi eksklusi ukuran, fase diam adalah zat
polimer yang mengandung banyak pori-pori
dengan dimensi molekuler. Zat terlarut yang ukuran
molekulnya cukup kecil akan meninggalkan fase
gerak untuk berdifusi ke dalam pori-pori. Molekul
besar yang tidak akan masuk ke dalam pori-pori
tetap berada dalam fase gerak dan tidak tertahan.
Metode ini paling cocok untuk pemisahan campuran
di mana zat terlarut sangat bervariasi dalam ukuran
molekul. Fasa gerak dalam jenis ini dapat berupa
cair atau gas.
KROMATOGRAFI KOLOM: [5,6]
Kromatografi kolom dalam kimia adalah metode A
yang digunakan untuk memurnikan senyawa kimia
individu dari campuran senyawa. Ini sering
digunakan untuk aplikasi persiapan pada skala dari
mikrogram hingga kilogram. Kolom kromatografi
preparatif klasik, adalah tabung gelas dengan
diameter dari 5 mm hingga 50 mm dan tinggi 5 cm
hingga 1 m dengan keran dan semacam filter (kaca
frit atau sumbat wol kaca – untuk mencegah
kehilangan fase diam) di bagian bawah. Dua metode
umumnya digunakan untuk menyiapkan kolom:
metode kering, dan metode basah. Teknik ini
biasanya membutuhkan silika gel mesh 70 – 230 (63
– 200 m).
Kolom: Kolom yang tersedia di departemen ini adalah tabung
kaca sederhana, dengan panjang dan diameter yang bervariasi.
Mereka biasanya memiliki stopcock yang terpasang untuk
mengontrol aliran pelarut, dan mungkin memiliki fritted
 Ranjith Reddy Kondeti dkk., Dunia J Pharm Sci 2014; 2(9): 1375-1383
piring untuk mendukung adsorben. Beberapa kolom
mungkin memiliki labu yang melekat pada bagian atas
kolom untuk bertindak sebagai reservoir pelarut. Variasi
ukuran memungkinkan seseorang untuk memilih kolom
terbaik untuk pemisahan. Kolom berdiameter besar akan
menangani jumlah senyawa yang lebih besar. Resolusi
kolom tergantung baik pada diameter dan panjang
adsorben dalam kolom. Resolusi meningkat dengan
bertambahnya panjang, dan berkurang dengan
bertambahnya diameter. Dengan demikian, 25 g adsorben
akan memberikan pemisahan yang lebih baik dalam kolom
berdiameter 1 cm daripada di kolom berdiameter 2 cm.
Menambahkan Sampel: Hanya gunakan jumlah minimum
pelarut saat menambahkan sampel ke kolom. Setelah
pengepakan selesai, sampel dapat dimuat langsung ke bagian atas
kolom. Biasanya, jumlah minimum pelarut polar, 5-10 tetes,
digunakan untuk melarutkan campuran. Larutan kemudian
ditambahkan secara hati-hati ke bagian atas kolom menggunakan
pipet tanpa mengganggu permukaan atas kolom yang rata. Pita
sampel horizontal tipis adalah yang terbaik untuk pemisahan yang
optimal. Setelah sampel dimuat, lapisan kecil pasir putih
ditambahkan ke bagian atas kolom. Ini akan membantu menjaga
ketinggian kolom bagian atas saat menambahkan eluen pelarut.
Setelah campuran ditambahkan dan lapisan pelindung pasir sudah
terpasang, terus tambahkan eluen pelarut sambil mengumpulkan
fraksi kecil di bagian bawah kolom. Menggunakan pipet untuk
menambahkan sedikit pertama pelarut di atas kemasan, sampel,
dan pasir akan meminimalkan gangguan kolom dan pengenceran
sampel. Mengumpulkan pecahan kecil (1-3 ml) penting untuk
keberhasilan pemisahan kolom Anda. Pecahan yang terlalu kecil
selalu dapat digabungkan; namun, jika pecahan yang terkumpul
terlalu besar, Anda mungkin mendapatkan lebih dari satu senyawa
dalam pecahan tertentu. Jika ini terjadi, satu-satunya cara untuk
menyelesaikan pemisahan adalah dengan mengulang kromatografi.
Karena kromatografi kolom memakan waktu, pengumpulan fraksi
besar tidak disarankan. satu-satunya cara untuk menyelesaikan
pemisahan adalah dengan mengulang kromatografi. Karena
kromatografi kolom memakan waktu, pengumpulan fraksi besar
tidak disarankan. satu-satunya cara untuk menyelesaikan
pemisahan adalah dengan mengulang kromatografi. Karena
kromatografi kolom memakan waktu, pengumpulan fraksi besar
tidak disarankan.
Memantau Kolom: Jika campuran yang akan
dipisahkan mengandung senyawa berwarna, maka
pemantauan kolom sangat sederhana. Pita berwarna
akan bergerak ke bawah kolom bersama dengan
pelarut dan saat mendekati ujung kolom, kumpulkan
warna dalam wadah individu. Gunakan warna sebagai
panduan Anda. Namun, sebagian besar molekul
organik tidak berwarna. Dalam hal ini, reaksi harus
dipantau dengan KLT. Tempatkan setiap fraksi pada
pelat KLT. Empat atau lima fraksi dapat terlihat pada
pelat KLT tunggal. Kembangkan pelat dan gunakan titik
atau bintik yang diamati untuk menentukan senyawa
mana yang ada di setiap fraksi yang terkumpul. Melihat
beberapa bahan awal atau
produk (jika tersedia) pada pelat TLC sebagai standar
akan membantu dalam identifikasi.
Mengisolasi Senyawa Terpisah: Penguapan:
Setelah Anda yakin semua bahan telah
dikeluarkan dari kolom, warna bahan atau hasil
KLT harus menunjukkan fraksi mana yang
mengandung senyawa yang ingin Anda isolasi.
Gabungkan fraksi yang sejenis atau sama dan
menguapkan pelarutnya. Senyawa murni yang
dipisahkan akan tertinggal. Rekristalisasi dapat
digunakan untuk lebih memurnikan produk
padat. Namun, pada skala miligram, biasanya
tidak ada cukup bahan untuk melakukan ini.
KROMATOGRAFI FLASH:
Flash dapat membantu mempercepat laju aliran
kolom Anda: Kromatografi kolom seringkali sangat
memakan waktu. Membiarkan pelarut terelusi melalui
kolom setetes demi setetes membutuhkan kesabaran.
Salah satu cara untuk mempercepat proses tersebut
adalah dengan menggunakan Flash Chromatography.
Metode ini menggunakan tekanan sekitar 10 psi udara
atau nitrogen untuk memaksa fase gerak melalui
kolom. Karena laju fase gerak meningkat, secara
umum, metode ini memberikan pemisahan yang lebih
buruk. Namun, dengan menggunakan kadar alumina
atau silika yang lebih halus, kromatografi flash dapat
digunakan untuk meningkatkan kecepatan tanpa
menurunkan kualitas pemisahan. Ukuran partikel fase
diam umumnya lebih halus dalam kromatografi kolom
kilat daripada kromatografi kolom gravitasi. Nilai silika
gel dalam teknik ini adalah mesh 230 – 400 (40 – 63 m)
[7- 9] Kolom kromatografi cair awal adalah tabung kaca
dengan diameter mungkin 10 hingga 50 mm yang
menampung partikel padat sepanjang 50-500 cm untuk
fase diam. Untuk memastikan laju aliran yang wajar,
ukuran partikel padatan dijaga lebih besar dari 150
hingga 200µm; bahkan saat itu, laju aliran paling baik
hanya sepersepuluh mililiter per menit. Upaya untuk
mempercepat prosedur klasik ini dengan penerapan
vakum atau tekanan tidak efektif karena peningkatan
laju aliran disertai dengan peningkatan ketinggian
pelat dan penurunan efisiensi kolom yang
menyertainya. Pada awal pengembangan kromatografi
cair, disadari bahwa penurunan tinggi pelat yang besar
dapat diharapkan menyertai penurunan ukuran
partikel kemasan. Namun, baru pada akhir 1960-an,
teknologi untuk memproduksi dan menggunakan
kemasan dengan diameter partikel sekecil 5 hingga 10
m Dikembangkan. Teknologi ini membutuhkan
instrumen canggih yang sangat kontras dengan
perangkat sederhana yang mendahuluinya. Nama
kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) sering
digunakan untuk membedakan prosedur yang lebih
baru ini dari pendahulunya, yang masih banyak
digunakan untuk tujuan persiapan.
1377
 Ranjith Reddy Kondeti dkk., Dunia J Pharm Sci 2014; 2(9): 1375-1383
Sistem otomatis akan mencakup komponen yang
biasanya ditemukan pada sistem kromatografi cair
kinerja tinggi (HPLC) yang lebih mahal seperti pompa
gradien, port injeksi sampel, detektor UV, dan
pengumpul fraksi untuk mengumpulkan eluen.
Biasanya sistem otomatis ini dapat memisahkan
sampel dari beberapa miligram hingga skala beberapa
kilogram industri dan menawarkan solusi yang jauh
lebih murah dan lebih cepat untuk melakukan
beberapa injeksi pada sistem persiapan HPLC.
HPLC:
HPLC adalah salah satu alat yang paling berguna
yang tersedia untuk analisis kuantitatif.
Kromatografi fase terbalik mengacu pada
penggunaan fase gerak polar dengan fase diam non
polar berbeda dengan fase normal yang digunakan
dengan fase gerak non polar.[10,11]
HPLC dibandingkan dengan teknik klasik
ditandai dengan:
• Diameter (2-5 mm), kolom baja tahan karat yang dapat digunakan
kembali;
• Pengepakan dengan partikel yang sangat kecil (3, 5
dan 10 mm) dan pengembangan zat baru yang
berkelanjutan untuk digunakan sebagai fase diam;
• Tekanan masuk yang tinggi dan aliran fase gerak
yang terkontrol;
• Pengenalan sampel tanpa perlu sampel
besar;
• Detektor aliran kontinu mampu menangani laju
aliran kecil dan mendeteksi jumlah yang sangat
kecil;
Elusi dengan pelarut tunggal dengan komposisi
konstan disebut isokratis.
Dalam elusi gradien, dua (dan kadang-kadang lebih)
sistem pelarut yang berbeda secara signifikan dalam
polaritas digunakan. Rasio kedua pelarut bervariasi
dengan cara yang telah diprogram sebelumnya,
terkadang terus menerus dan terkadang dalam
serangkaian langkah. Elusi gradien sering
meningkatkan efisiensi pemisahan. Instrumen
kromatografi cair kinerja tinggi modern sering
dilengkapi dengan katup proporsional yang
memasukkan cairan dari dua atau lebih reservoir
dengan laju yang bervariasi terus menerus.[12]
Kemajuan dalam teknologi kolom, sistem pemompaan
tekanan tinggi, dan detektor sensitif telah mengubah
kromatografi kolom cair menjadi metode pemisahan
dengan kecepatan tinggi dan efisiensi tinggi. Teknologi
canggih ini didasarkan pada penggunaan kolom
lubang kecil (diameter internal 2,5 mm) dan ukuran
partikel kecil (3-50 m) yang memungkinkan
keseimbangan cepat antara fase diam dan fase gerak.
Teknologi kolom partikel kecil ini membutuhkan sistem
pemompaan bertekanan tinggi yang mampu
mengalirkan fase gerak pada tekanan tinggi, sebanyak
300 atmosfer, untuk mencapai laju aliran beberapa ml
per menit. Karena seringkali perlu menggunakan
sedikit analit (biasanya kurang dari 20
1378
g) dengan pengepakan kolom, diperlukan detektor
yang sensitif.
Kolom adalah salah satu komponen terpenting dari
kromatografi HPLC karena pemisahan komponen
sampel dicapai ketika komponen tersebut melewati
kolom. Biasanya, kolom diisi dengan silika gel
karena bentuk partikelnya, sifat permukaannya, dan
struktur porinya membantu mendapatkan
pemisahan yang baik. Silika dibasahi oleh hampir
setiap fase gerak potensial, inert terhadap sebagian
besar senyawa dan memiliki aktivitas permukaan
tinggi yang dapat dimodifikasi dengan mudah
dengan air dan agen lainnya. Silika dapat digunakan
untuk memisahkan berbagai macam senyawa kimia,
dan sifat kromatografinya umumnya dapat
diprediksi dan direproduksi.
Sistem Pemompaan: Persyaratan untuk pompa
kromatografi cair sangat berat dan mencakup: (1)
Pembangkitan tekanan hingga 6000 psi (lb/in2);
(2) Keluaran bebas pulsa;
(3) Laju aliran mulai dari 0,1 hingga 10 ml/menit;
(4) Reproduksibilitas aliran 0,5% relatif atau lebih
baik; dan
(5) Ketahanan terhadap tumbukan oleh berbagai
pelarut. Perlu dicatat bahwa tekanan tinggi yang
dihasilkan oleh kromatografi cair
pompa tidak menimbulkan bahaya ledakan
karena cairan tidak terlalu kompresibel.
Jadi, pecahnya suatu komponen hanya menghasilkan
kebocoran pelarut. Yang pasti, kebocoran tersebut dapat
menimbulkan bahaya kebakaran
Sistem Injeksi Sampel: Metode pengenalan sampel
yang paling banyak digunakan dalam kromatografi
cair didasarkan pada loop sampling. Perangkat ini
sering merupakan bagian integral dari peralatan
kromatografi cair modern dan memiliki loop yang
dapat dipertukarkan yang menyediakan pilihan
ukuran sampel mulai dari 5 hingga 500 l.
Reproduksibilitas injeksi dengan loop sampling
tipikal adalah beberapa persepuluh persen relatif.
Menjelaskan 5 komponen utama HPLC dan
fungsinya:
Pompa:
▪ Peran pompa adalah untuk memaksa cairan
(disebut fase gerak) melalui kromatografi
cair pada laju aliran tertentu, dinyatakan
dalam mililiter per menit (ml/menit).
▪ Laju aliran normal dalam HPLC berada dalam kisaran 1 hingga
2 ml/menit.
▪ Pompa tipikal dapat mencapai tekanan dalam kisaran
6000-9000 psi
(400 hingga 600 batang).
▪ Selama percobaan kromatografi, pompa dapat
menghasilkan komposisi fase gerak yang
konstan (isokrat) atau komposisi fase gerak
yang meningkat (gradien).
 Ranjith Reddy Kondeti dkk., Dunia J Pharm Sci 2014; 2(9): 1375-1383
Penyuntik:
▪ Injektor berfungsi untuk memasukkan
sampel cairan ke dalam aliran aliran fase
gerak.
▪ Volume sampel tipikal adalah 5 hingga 20
mikroliter (μL).
▪ Injektor juga harus mampu menahan
tekanan tinggi dari sistem cairan.
▪ Sampler otomatis adalah versi otomatis ketika
pengguna memiliki banyak sampel untuk
dianalisis atau ketika injeksi manual tidak praktis.
Kolom:
▪ Dianggap sebagai "jantung kromatografi"
fase diam kolom memisahkan komponen
sampel yang diinginkan menggunakan
berbagai parameter fisik dan kimia.
▪ Partikel kecil di dalam kolom inilah yang
menyebabkan tekanan balik yang tinggi pada laju
aliran normal.
▪ Pompa harus mendorong keras untuk
memindahkan fase gerak melalui kolom dan
hambatan ini menyebabkan tekanan tinggi di
dalam kromatografi.
Detektor:
▪ Detektor dapat melihat (mendeteksi)
molekul individu yang keluar (elusi) dari
kolom.
▪ Detektor berfungsi untuk mengukur jumlah
molekul tersebut sehingga ahli kimia dapat
menganalisis komponen sampel secara kuantitatif.
▪ Detektor memberikan output ke perekam
atau komputer yang menghasilkan
kromatogram cair (yaitu, grafik respons
detektor).
Komputer:
▪ Sering disebut sistem data, komputer tidak
hanya mengontrol semua modul instrumen
HPLC tetapi juga mengambil sinyal dari
detektor dan menggunakannya untuk
menentukan waktu elusi (waktu retensi)
komponen sampel (analisis kualitatif) dan
jumlah sampel (analisis kuantitatif).
Identifikasi (ID) senyawa individu dalam
sampel:
▪ Parameter yang paling umum untuk ID senyawa
adalah waktu retensinya (waktu yang dibutuhkan
senyawa tertentu untuk terelusi dari kolom setelah
injeksi);
▪ Tergantung pada detektor yang digunakan, ID
senyawa juga didasarkan pada struktur kimia,
berat molekul atau beberapa parameter molekul
lainnya.
Pengukuran jumlah senyawa dalam sampel
Ada dua cara utama untuk menginterpretasikan suatu
kromatogram (yaitu melakukan kuantifikasi):
1379
▪ Penentuan tinggi puncak puncak
kromatografi yang diukur dari garis dasar;
▪ Penentuan luas puncak.
KROMATOGRAFI GAS-CAIR: Kromatografi gas (GC),
adalah jenis kromatografi umum yang digunakan
dalam kimia analitik untuk memisahkan dan
menganalisis senyawa yang dapat diuapkan tanpa
dekomposisi. Penggunaan khas GC termasuk
pengujian kemurnian zat tertentu, atau memisahkan
komponen yang berbeda dari campuran (jumlah relatif
dari komponen tersebut juga dapat ditentukan). Dalam
beberapa situasi, GC dapat membantu dalam
mengidentifikasi suatu senyawa. Dalam kromatografi
preparatif, GC dapat digunakan untuk membuat
senyawa murni dari suatu campuran.[13,14]
Dalam kromatografi gas, fase gerak (atau "fase
bergerak") adalah gas pembawa, biasanya gas
inert seperti sebagai helium atau gas yang tidak reaktif
seperti nitrogen. Fasa diam berupa A
lapisan mikroskopis cairan atau polimer NS
dukungan padat inert, dalam A bagian
tabung kaca atau logam yang disebut kolom
(penghormatan untuk kolom fraksinasi yang digunakan
dalam distilasi). Instrumen yang digunakan untuk
melakukan kromatografi gas disebut kromatografi gas
(atau "aerograph", "pemisah gas").
Senyawa gas yang dianalisis berinteraksi dengan dinding kolom, yang dilapisi
dengan fase diam. Hal ini menyebabkan setiap senyawa terelusi pada waktu
yang berbeda, yang dikenal dengan waktu retensi senyawa. Perbandingan
waktu retensi inilah yang memberi GC kegunaan analitisnya. Kromatografi gas
pada prinsipnya mirip dengan kromatografi kolom (serta bentuk kromatografi
lainnya, seperti HPLC, KLT), tetapi memiliki beberapa perbedaan penting.
Pertama, proses pemisahan senyawa dalam campuran dilakukan antara fase
diam cair dan fase gerak gas, sedangkan pada kromatografi kolom fase diam
adalah padatan dan fase gerak adalah cairan. (Oleh karena itu nama lengkap
dari prosedur ini adalah "Kromatografi Gas-cair", mengacu pada fase gerak dan
stasioner, masing-masing.) Kedua, kolom yang dilalui fase gas terletak dalam
oven di mana suhu gas dapat dikontrol, sedangkan kromatografi kolom
(biasanya) tidak memiliki kontrol suhu seperti itu. Ketiga, konsentrasi senyawa
dalam fase gas semata-mata merupakan fungsi dari tekanan uap gas.
Kromatografi gas juga mirip dengan distilasi fraksional, karena kedua proses
memisahkan komponen campuran terutama berdasarkan perbedaan titik didih
(atau tekanan uap). Namun, distilasi fraksional biasanya digunakan untuk
memisahkan komponen campuran dalam skala besar, sedangkan GC dapat
digunakan pada skala yang jauh lebih kecil (yaitu skala mikro). konsentrasi
senyawa dalam fase gas semata-mata merupakan fungsi dari tekanan uap gas.
Kromatografi gas juga mirip dengan distilasi fraksional, karena kedua proses
memisahkan komponen campuran terutama berdasarkan perbedaan titik didih
(atau tekanan uap). Namun, distilasi fraksional biasanya digunakan untuk
memisahkan komponen campuran dalam skala besar, sedangkan GC dapat
digunakan pada skala yang jauh lebih kecil (yaitu skala mikro). konsentrasi
senyawa dalam fase gas semata-mata merupakan fungsi dari tekanan uap gas.
Kromatografi gas juga mirip dengan distilasi fraksional, karena kedua proses
memisahkan komponen campuran terutama berdasarkan perbedaan titik didih
(atau tekanan uap). Namun, distilasi fraksional biasanya digunakan untuk
memisahkan komponen campuran dalam skala besar, sedangkan GC dapat
digunakan pada skala yang jauh lebih kecil (yaitu skala mikro).
 Ranjith Reddy Kondeti dkk., Dunia J Pharm Sci 2014; 2(9): 1375-1383
Perangkat berikut adalah jenis umum dari
detektor GC:
▪ Detektor Konduktivitas Termal (TCD)
▪ Detektor Ionisasi Api (FID)
▪ Detektor Nitrogen-Fosfor
▪ Detektor Penangkap Elektron (ECD)
▪ Spektrometer Massa
▪ Detektor Termionik (TID)
▪ Detektor Emisi Atom (AED)
Pilihan detektor akan tergantung pada analit dan
bagaimana metode GC digunakan (yaitu, skala
analitik atau preparatif)
Dalam GC gas pembawa hanya dinyatakan sebagai
pembawa untuk mengangkut molekul zat terlarut
yang diuapkan melalui kolom selama proses partisi.
Gas pembawa adalah gas kompresibel yang
mengembang dengan meningkatnya suhu. Hal ini
menyebabkan perubahan viskositas gas. Pemilihan
dan kecepatan linier gas pembawa akan
mempengaruhi resolusi dan waktu retensi. Gas
pembawa harus inert ke fase diam dan bebas dari
kontaminan yang dapat dideteksi. Helium adalah
fase gerak yang paling umum dalam kromatografi
gas-cair.
Contoh Injektor: (jarum suntik/septum)Kolom: Pipa 1/8”
atau 1/4” atau 6-50” dikemas dengan ukuran kecil yang
seragam, penyangga inert yang dilapisi dengan lapisan
tipis cairan nonvolatil.
Viskositas Gas Pembawa (μP): Pemrograman suhu
mengubah viskositas gas pembawa yang
menghasilkan penurunan kecepatan/aliran linier di
atas rentang terprogram saat dijalankan dalam
mode tekanan konstan. Hidrogen adalah pilihan
terbaik untuk GC kapiler karena difusivitas dan
jangkauan kerja yang luas selama masalah
keamanan dan kontrol yang tepat diterapkan.[15]
ULTRA PERTUNJUKAN CAIRAN
KROMATOGRAFI:
Kromatografi cair kinerja ultra (UPLC) adalah teknik
terbaru dalam kromatografi cair, yang memungkinkan
pengurangan waktu pemisahan dan konsumsi pelarut
yang signifikan. Literatur menunjukkan bahwa sistem
UPLC memungkinkan penurunan waktu analisis sekitar
sembilan kali lipat dibandingkan dengan sistem HPLC
konvensional yang menggunakan kolom analisis
ukuran partikel sub-2µm, dan penurunan waktu
analisis sekitar tiga kali lipat dibandingkan dengan
kolom analisis ukuran partikel 3-5µm tanpa kompromi
pada pemisahan keseluruhan . Mengurangi waktu
pemisahan ini tanpa mengurangi kualitas pemisahan
akan berarti bahwa informasi analitis yang penting
dapat dihasilkan lebih cepat. Partikel-partikel ini
beroperasi pada kecepatan linier fase gerak tinggi
untuk mempengaruhi peningkatan dramatis dalam
resolusi, sensitivitas dan kecepatan analisis. Seperti
diketahui dari persamaan Van Deemter,
1380
proses kromatografi sebanding dengan penurunan ukuran
partikel. Menurut model yang menggambarkan pelebaran
pita ini, menggambarkan hubungan antara tinggi ekivalen
pelat teoretis (HETP) dan kecepatan linier, salah satu istilah
(istilah tergantung jalur), tergantung pada diameter
partikel yang dikemas ke dalam kolom analitik. Diameter
partikel yang lebih kecil dapat secara signifikan
mengurangi HETP yang menghasilkan efisiensi yang lebih
tinggi dan profil kurva Van Deemter yang lebih datar.
Akibatnya, peningkatan laju alir fase gerak tidak memiliki
pengaruh negatif terhadap efisiensi karena dapat diamati
pada partikel 10 atau 5 m. Aspek negatif dari kolom
partikel kecil yang dikemas yang digunakan dalam HPLC
adalah, bagaimanapun, menghasilkan tekanan balik yang
tinggi.[16,17]
Detektor:
Detektor UV (TUV) Merdu adalah detektor ultraviolet/visible
(UV/Vis) dengan panjang gelombang ganda yang dapat disetel
yang menawarkan linearitas, resolusi, dan sensitivitas optimal
untuk UPLC®/pemisahan UV.Detektor Photodiode Array
(PDA) memungkinkan laboratorium Anda mendeteksi dan
menghitung konsentrasi analit sampel yang lebih rendah dan
membandingkan spektrum di seluruh panjang gelombang dan
rentang konsentrasi yang luas.
Detektor Penghamburan Cahaya Evaporatif (ELS)
dirancang khusus untuk UPLC yang optimal®/ELS
kinerja dalam jejak kecil.
Ketika analit Anda memiliki respons UV/Vis yang buruk
atau tidak sama sekali, atau tidak terionisasi dengan
baik oleh spektrometri massa, ACQUITY UPLC ELS
Detector dengan Sistem UPLC ACQUITY
memungkinkan Anda menganalisis lebih banyak
molekul (termasuk gula, trigliserida, fosfolipid,
antibiotik, dan produk alami ) dalam satu kali analisis.
TQD- Tandem Quadrupole MS Detector untuk
aplikasi UPLC/MS/MS dan HPLC/MS/MS.SQD
-Menggabungkan resolusi, sensitivitas, dan
kecepatan teknologi UltraPerformance dengan
Single Quadrupole MS Detection.
FLR-Menyediakan deteksi selektif dan sensitif untuk
aplikasi fluoresensi berbasis UPLC.
QDa Detektor adalah detektor massa yang dibangun
berdasarkan kebutuhan ilmuwan analitik untuk analisis
kromatografi. Kuat, andal, dan tidak memerlukan
penyesuaian sampel, ini terintegrasi dengan sistem LC,
ACQUITY UPLC, UPC2, dan pemurnian Anda saat ini.
Detektor RI - Deteksi dispersi rendah untuk analisis
isokratik analit yang tidak memiliki kromofor UV.
Memberikan sensitivitas tinggi, stabilitas baseline, dan
integrasi berulang dari puncak UPLC yang sempit.
ULTRA PERFORMANCE CONVERGENCE
CHROMATOGRAFI (UPC .)2 )
Alat baru untuk mengatasi senyawa yang sulit
dianalisis termasuk senyawa hidrofobik dan kiral,
lipid, sampel labil termal, dan polimer. Bekerja
berdasarkan prinsip Fluida Superkritis
 Ranjith Reddy Kondeti dkk., Dunia J Pharm Sci 2014; 2(9): 1375-1383
Kromatografi (SFC). Superkritis
kromatografi adalah salah satu metode
kromatografi kolom yang paling penting setelah
kromatografi gas (GC) dan kromatografi cair
kinerja tinggi (HPLC). SFC menggabungkan
keunggulan GC dan HPLC. Juga, ekstraksi cairan
superkritis adalah teknik analisis yang canggih.
SFE tidak memiliki masalah yang dialami dengan
cairan.[18] Fluida superkritis adalah fase suatu
material pada temperatur kritis dan tekanan
kritis material tersebut. Cairan superkritis
menggabungkan sifat yang berguna dari fase
gas dan cair.UPC2 menyediakan teknik untuk
analisis ekstrakable non-volatil dan semi-volatil,
serta senyawa polar dan non-polar.[19]
UPC2 adalah peralatan yang paling mirip dengan
UPLC. Ini adalah jenis teknik kromatografi paling
canggih yang ada di pasaran. UPC2 berjalan dalam
kromatografi Fase Normal.
▪ Hindari penggunaan air untuk UPC2
▪ Bilas botol fase gerak (MP) secara
menyeluruh dengan MP/metanol sebelum
mengisinya dengan MP.
▪ Karbon dioksida adalah fase gerak di
UPC2. (Polaritas CO2 n-Heptana).
▪ Rentang suhu kolom 40-70 °C.
cairan ▪ Rentang tekanan ABPR 1750-2200psi.Jenis
kolom yang digunakan:
▪ BEH 2-EP(Etil Piridin)
▪ BEH (Hibrida Jembatan Etilen)
▪ CSH Fluoro-Phenyl (Permukaan Berisi
Hibrida)
▪ HSS C18 SB (Ikatan Silika-Stabil Kekuatan
Tinggi) untuk gliserida
Komposisi fase Seluler:
▪ Rentang komposisi CO2 60-100%.
▪ Rentang komposisi pelarut biner 0-40%.
(0020mengatur komposisi pelarut biner
berdasarkan manual referensi kolom)
Volume injeksi: 1-5 l
Detektor:
Detektor Photo diode Array (PDA) memungkinkan
laboratorium Anda mendeteksi dan menghitung konsentrasi
analit sampel yang lebih rendah dan membandingkan
spektrum di seluruh panjang gelombang dan rentang
konsentrasi yang luas.
QDa Detektor adalah detektor massa yang dibangun
berdasarkan kebutuhan ilmuwan analitik untuk analisis
kromatografi. Kuat, andal, dan tidak memerlukan
penyesuaian sampel, ini terintegrasi dengan sistem LC,
ACQUITY UPLC, UPC2, dan pemurnian Anda saat ini.

Tabel 1: Berbagai detektor yang digunakan dalam HPLC

Jenis Detektor Sub Jenis Detektor

Indeks bias Detektor efek Christiansen pengukur interfero Lensa Termal
Detektor Detektor Detektor
Detektor Ultraviolet Panjang gelombang variabel Panjang gelombang tetap Beberapa
Detektor Penyerapan UV Detektor UV dispersif
Detektor UV
Berpendar Eksitasi panjang gelombang tunggal Multi panjang gelombang Diinduksi Laser
Detektor Detektor Fluoresensi Detektor Fluoresensi Fluoresensi
Detektor

Detektor Transportasi Kawat bergerak Detektor Rantai Detektor Cakram

Detektor
Elektrokimia Detektor Dinamis/ Detektor Kesetimbangan
Detektor Multi Elektroda
Detektor array
Detektor konduktivitas listrik
Cahaya cair Detektor hamburan Laser multi sudut
Penyebaran sinar laser sudut rendah penyebaran
Detektor Detektor
Detektor Tingkat Lanjut
Berbasis aerosol Detektor hamburan cahaya Detektor aerosol yang terisi daya Nano aerosol
Detektor evaporatif Detektor

Detektor kiral Detektor polarimetri Dikroisme melingkar

Detektor
Detektor amperometrik berdenyut

1381
 Ranjith Reddy Kondeti dkk., Dunia J Pharm Sci 2014; 2(9): 1375-1383

Tabel 2: Berbagai detektor yang digunakan dalam Kromatografi Gas

Jenis Sampel yang Berlaku Batas Deteksi Khas

Ionisasi Api Hidrokarbon 1 hal/dtk

Konduktivitas termal Detektor universal 500 pg/ml

Penangkapan Elektron Senyawa terhalogenasi 5fg/dtk

Spektrometer Massa (MS) Merdu untuk semua spesies 0,25 hingga 100 hal

termionik Senyawa nitrogen & fosfor 0,1 pg/dtk (P), 1 pg/dtk (N)

Konduktivitas Elektrolit Senyawa yang mengandung halogen, belerang, 0,5 pg Cl/s, 2 pg S/s, 4pg
nitrogen N/s

Ionisasi foto Senyawa terionisasi oleh radiasi UV 2 hal C/s

Transformasi Fourier IR (FT- Senyawa organik 0,2 hingga 40 ng

Tabel 3: Keuntungan & kerugian dari Gas Pembawa berbeda yang digunakan di GC
Gas Pembawa Keuntungan Kekurangan
Nitrogen Murah, Tersedia Waktu jangka panjang

Helium Kompromi yang bagus, Aman Mahal

Hidrogen Waktu berjalan lebih pendek, Murah Eksplosif

Gambar 1: Diagram Skema Kromatografi Kolom

Gambar 2: Representasi skematis HPLC

1382
 Ranjith Reddy Kondeti dkk., Dunia J Pharm Sci 2014; 2(9): 1375-1383

Gambar 3: Representasi Skema Kromatografi Gas

Gambar 4: Representasi skema UPCC

REFERENSI

1. Kaushal C, Srivastava B. Proses pengembangan metode: Pendekatan kromatografi. J Chem Pharm Res 2010; 2 (2): 519-
545.
2. Reynolds DW, Facchine KL, Mullaney JF, Alsante KM, Hatajik TD, Mott MG. Tersedia Panduan dan Praktik Terbaik untuk
Melakukan Studi Degradasi Paksa. Teknologi Farmasi, 2002; P. 48-56.
3. Christie WW, Gill S, Nordbäck J, Itabashi Y, Sanda S, Slabas AR. Prosedur baru untuk penyaringan cepat komponen lipid daun dari
Arabidopsis. Anal Fitokimia 1998;9:53-57.
4. Wiklund AE, Dag B, Brita S. Evaluasi toksisitas dengan menggunakan sedimen utuh dan ekstrak sedimen. Buletin Polusi Laut
2005; 50(6): 660-667.
5. Kwok YC, Hsieh DPH, Wong PK. Evaluasi identifikasi toksisitas (TIE) air pori sedimen laut yang terkontaminasi
dikumpulkan dari perairan Hong Kong. Buletin Polusi Laut. 2005; 51(8-12): 1085-1091.
6. Haginaka J dkk. Degradasi alkali dan penentuan dengan kinerja tinggi dengan kromatografi cair kinerja tinggi. Chem
Pharm Banteng 1984; 32: 2752-2758.
7. Liu Y, Lee ML. Kromatografi cair tekanan ultra tinggi menggunakan suhu tinggi. Jurnal Kromatografi. 2006;1104(1-2):198–
202.
8. Patel RM dkk. Stabilitas Menunjukkan Pengembangan Metode HPLC- Tinjauan. Apotek Int Res J 2011; 2 (5): 79-87.
9. http://www.scribd.com/doc/9508765/Physical-Properties-of-Drug.
10. Kupiec T. Metode analisis kendali mutu: Kromatografi cair kinerja tinggi. PJPK 2004; 8(3): 223-227.
11. Arayne, MS, Sultana NF, Siddiqui A. Pak J Pharm Sci 2006; 19(4): 326-329.
12. Ngwa G, Studi Degradasi Paksa. Degradasi Paksa sebagai bagian integral dari Pengembangan Metode Indikasi Stabilitas HPLC Teknologi
Pengiriman Obat. 2010; 10(5).
13. Reynolds DW, Facchine KL, Mullaney JF, Alsante KM, Hatajik TD, Mott MG. Tersedia Panduan dan Praktik Terbaik untuk
Melakukan Studi Degradasi Paksa. Teknologi Farmasi, 2002; 48-56.
14. Gentili A, Caretti F, Ascenzo GD. Penentuan vitamin yang larut dalam air secara simultan dalam matriks makanan tertentu dengan
kromatografi cair/ionisasi elektrospray dan spektrometri massa, Komunikasi Cepat dalam Spektrometri Massa. 2008. hal. 2029– 2043.

15. Swartz SAYA. Kromatografi cair kinerja ultra (UPLC): Sebuah Pengantar, Ilmu Pemisahan Didefinisikan Kembali, Suplemen LCGC.
2005. hal. 11.
16. Encyclopedia of Chemical, Drugs and Biologicals, edisi ke-13., Merck Research Laboratories. Divisi Merck & Co Inc.
Stasiun Whitehouse, NJ. Indeks Merck. 2001. hal. 245.
17. Buku Teks Analisis Kimia Kuantitatif Jeffery GH dan Basselt J. Vogel. edisi ke-6 Pendidikan Pearson pvt. Ltd Singapura; 2003. Hal.
21-23.
18.Michael E.Swartz. Ultra Performance Liquid Chromatography (UPLC): Sebuah Pengantar dan Tinjauan. Jurnal
Kromatografi Cair & Teknologi Terkait. 2005; 28: 1253–1263.
19. Lucie Novakova, Ludmila Matysova, Petr Solich. Keuntungan penerapan UPLC dalam analisis farmasi. Talanta: 2006.
H. 908-918.

1383