Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain )

Imobilisasi Enzim- Metode dan Aplikasi

1. Apa itu Imobilisasi Enzim?

Imobilisasi mengacu pada pembatasan mobilitas enzim atau protein dan memperbaikinya menjadi a .

keadaan tanpa mengganggu kemampuan fungsionalnya. Suatu enzim yang tidak bergerak difiksasi pada suatu inert,

pembawa yang tidak hanya memungkinkan pertukaran substrat dan aliran keluar produk tetapi juga membatasi

perubahan konformasi enzim karena perubahan pH atau suhu.

Dengan demikian imobilisasi enzim dapat mengurangi sensitivitas enzim asli terhadap ini

parameter fisik sehingga meningkatkan efisiensi fungsional enzim. Yang paling pertama

enzim amobil adalah Amino Cyclase dari Aspergillus oryzae di Jepang.

2. Kebutuhan Imobilisasi Enzim:

Enzim tidak dapat bergerak akhir-akhir ini karena beberapa alasan:

Peningkatan Stabilitas: Karena enzim difiksasi ke pembawa inert dalam fungsi yang paling stabil

membentuk resistensi mereka terhadap variasi pH dan suhu dapat diminimalkan sebagai situs untuk

merasakan variasi ini terkunci dalam melumpuhkan enzim.

Sifat Ekonomi: Imobilisasi enzim ke pembawa inert memungkinkan pemanfaatan kembali enzim

untuk reaksi batch berikutnya. Enzim amobil dapat dengan mudah dihilangkan dari reaksi

campuran sehingga mengurangi biaya enzim.

Down streaming lebih mudah: Karena katalis dipasang pada carrier, down streaming menjadi

lebih mudah karena hanya membutuhkan pemisahan reaktan dan produk akhir. Jadi itu membuat down

streaming lebih mudah, murah, dan sederhana.

3. Cara melumpuhkan enzim

Berdasarkan dukungan atau matriks dan jenis ikatan yang terlibat, ada lima metode berbeda:

imobilisasi enzim atau seluruh sel.

(1) Adsorpsi

(2) Ikatan kovalen

(3) Jebakan

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur

Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 2

(4) Kopolimerisasi

(5) Enkapsulasi

(1) Adsorpsi

Adsorpsi adalah metode imobilisasi enzim yang tertua dan paling sederhana. Nelson & Griffin

menggunakan arang untuk mengadsorpsi invertase untuk pertama kalinya pada tahun 1916. Dalam metode ini enzim

teradsorpsi ke permukaan luar penyangga. Dukungan atau operator yang digunakan mungkin berbeda

jenis seperti:

(1) Dukungan mineral (Misalnya aluminium oksida, tanah liat)

(2) Dukungan organik (Misalnya pati)

(3) Resin sepharose dan penukar ion yang dimodifikasi

Tidak ada pembentukan ikatan permanen antara pembawa dan enzim dalam metode adsorpsi.

Hanya ikatan lemah yang menstabilkan enzim ke pendukung atau pembawa. Ikatan lemah (energi rendah

obligasi) yang terlibat terutama:

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur

Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 3

(a) Interaksi ionik

(b) Ikatan hidrogen

(c) Gaya Van der Waal

Untuk ikatan permukaan yang signifikan, ukuran partikel pembawa harus kecil (500 hingga 1 mm

diameter). Keuntungan terbesar dari metode adsorpsi adalah bahwa tidak akan ada "pori"

keterbatasan difusi” karena enzim diimobilisasi secara eksternal pada penyangga atau pembawa.

Metode adsorpsi:

(1) Proses statis: Imobilisasi ke pembawa dengan membiarkan larutan yang mengandung enzim untuk

hubungi pembawa tanpa diaduk.

(2) Proses batch dinamis: Pembawa ditempatkan dalam larutan enzim dan dicampur dengan mengaduk atau

agitasi.

(3) Proses pemuatan reaktor: Pembawa ditempatkan di reaktor, dan kemudian larutan enzim adalah

dipindahkan ke reaktor dengan pengadukan terus menerus.

(4) Proses posisi elektroda: Pembawa ditempatkan di dekat elektroda dalam penangas enzim dan

arus dinyalakan; di bawah medan listrik enzim bermigrasi ke pembawa dan disimpan
di permukaannya.

Keuntungan dari metode adsorpsi:

(a) Tidak ada batasan difusi pori

(b) Mudah dilakukan

(c) Tidak ada reagen yang diperlukan

(d) Langkah aktivasi minimum yang terlibat

(e) Metode imobilisasi yang relatif murah

(f) Kurang mengganggu enzim daripada metode kimia

Kekurangan metode adsorpsi:

(a) Desorpsi enzim dari pembawa HR Patel

Institute of Pharmaceutical Education and Research, Shirpur
Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain )

(b) Efisiensi kurang

(2) Ikatan kovalen:

Metode ini melibatkan pembentukan ikatan kovalen antara gugus kimia dalam

enzim dan kelompok kimia pada pendukung atau pembawa. Ini adalah salah satu yang banyak digunakan

metode imobilisasi enzim. Gugus hidroksil dan gugus amino pendukung atau

enzim lebih mudah membentuk ikatan kovalen. Gugus kimia dalam pendukung atau pembawa yang dapat

membentuk ikatan kovalen dengan dukungan adalah gugus amino, gugus imino, gugus hidroksil, karboksil

gugus tiol, gugus metiltiol, gugus guanidil dan cincin fenol.

Gugus fungsi penting dari enzim yang menyediakan gugus kimia untuk membentuk kovalen

obligasi dengan dukungan atau pembawa adalah:

1. Gugus alfa karboksil pada terminal Cÿ enzim

2. Gugus alfa amino pada terminal Nÿ enzim

3. Gugus amino epsilon dari Lysine dan Arginine dalam enzim

4. Gugus dan karboksil Aspartat dan Glutamat

5. Cincin fenol dari Tirosin

6. Gugus tiol dari Sistein

7. Gugus hidroksil dari Serin dan Treonin

8. Kelompok imidazol dari Histidin

9. Cincin indol triptofan

Pembawa atau pendukung yang biasa digunakan untuk ikatan kovalen adalah:

(a) Karbohidrat: Mis. Selulosa, DEAE selulosa, Agarose

(b) Agen sintetis: Mis. Poliakrilamida

(c) Pembawa protein: Kolagen, Gelatin

(d) Pembawa bantalan grup amino: Mis. amino benzil selulosa

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur

Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 5

(e) Pembawa anorganik: Kaca berpori, silika

(f) Sianogen bromida (CNBr)-agarosa dan CNBr Sepharose

Metode ikatan kovalen

(1) Diazoasi: Ikatan antara gugus amino pendukung dan gugus tirosil atau histidil dari

enzim.

(2) Ikatan peptida: Ikatan antara gugus amino atau karboksil penyangga dan gugus

enzim.

(3) Reagen polifungsional: Penggunaan reagen bi-fungsional atau multifungsi

(glutaraldehid) yang membentuk ikatan kovalen antara gugus amino penyangga dan

gugus amino dari enzim.

Keuntungan ikatan kovalen:

(a) Keterkaitan enzim yang kuat dengan pendukung

(b) Tidak ada masalah kebocoran atau desorpsi

(c) Metode yang relatif sederhana

(d) Berbagai dukungan dengan kelompok fungsional yang berbeda tersedia

(e) Penerapan yang luas

Kekurangan ikatan kovalen (masalah utama dengan ikatan kovalen):

(a) Modifikasi kimia enzim yang menyebabkan hilangnya konformasi fungsional

enzim.

(b) Inaktivasi enzim melalui perubahan konformasi ketika mengalami reaksi pada

situs aktif. Hal ini dapat diatasi melalui imobilisasi dengan adanya enzims

substrat atau inhibitor kompetitif.

(3) Jebakan:

Dalam metode ini enzim secara fisik terperangkap di dalam matriks berpori. Obligasi yang terlibat dalam

menstabilkan enzim ke matriks mungkin kovalen atau non-kovalen. Matriks yang digunakan akan

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur

Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 6

menjadi polimer yang larut dalam air. Bentuk dan sifat matriks bervariasi dengan enzim yang berbeda.

Ukuran pori matriks disesuaikan untuk mencegah hilangnya enzim. Ukuran pori matriks dapat

disesuaikan dengan konsentrasi polimer yang digunakan. Agar-agar dan karagenan memiliki

ukuran pori yang relatif besar. Kerugian terbesar dari metode ini adalah bahwa ada

kemungkinan kebocoran enzim dengan berat molekul rendah dari matriks.

Contoh matriks yang umum digunakan untuk jebakan adalah:

(1) Gel poliakrilamida

(2) Selulosa triasetat

(3) Agar

(4) Gelatin

(5) Karagenan

(6) Alginat

Metode jebakan:

(a) Inklusi dalam gel: enzim terperangkap di dalam gel.

(b) Inklusi dalam serat: enzim yang didukung pada serat yang terbuat dari bahan matriks.

(c) Inklusi dalam mikrokapsul: Enzim terperangkap dalam mikrokapsul yang dibentuk oleh monomer

campuran seperti poliamina dan kalsium alginat.

Keuntungan dari jebakan:

(a) Metode imobilisasi cepat

(b) Murah (matriks biaya rendah tersedia)

(c) Mudah dipraktikkan dalam skala kecil

(d) Kondisi ringan diperlukan

(e) Lebih sedikit kemungkinan perubahan konformasi enzim

(f) Dapat digunakan untuk aplikasi penginderaan

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur

Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 7

Kerugian dari jebakan:

(a) Kebocoran enzim

(b) Keterbatasan difusi pori

(c) Kemungkinan kontaminasi mikroba

(d) Tidak banyak berhasil dalam proses industri

(4) Penautan silang (kopolimerisasi):

Metode ini juga disebut sebagai kopolimerisasi. Dalam metode ini enzim imobilisasi

dihubungkan langsung oleh ikatan kovalen antara berbagai kelompok enzim melalui polifungsional

reagen. Tidak seperti metode lain, tidak ada matriks atau dukungan yang terlibat dalam metode ini.

Reagen polifungsional yang umum digunakan adalah glutaraldehid dan garam diazonium.

Teknik ini murah dan sederhana tetapi tidak sering digunakan dengan enzim murni. Metode ini adalah

banyak digunakan dalam persiapan komersial dan aplikasi industri. Terbesar

Kerugian atau kerugian dari metode ini adalah bahwa reagen polifungsional yang digunakan untuk cross

menghubungkan enzim dapat mendenaturasi atau memodifikasi secara struktural enzim yang menyebabkan hilangnya

sifat katalitik.

(5) Enkapsulasi:

Jenis imobilisasi ini dilakukan dengan memasukkan enzim ke dalam kapsul membran. Itu

kapsul akan terdiri dari membran semi permeabel seperti nitro selulosa atau nilon. Di dalam

metode efektivitas tergantung pada stabilitas enzim di dalam kapsul.

Keuntungan enkapsulasi:

(a) Metode yang murah dan sederhana

(b) Sejumlah besar enzim dapat diimobilisasi dengan enkapsulasi

Kekurangan enkapsulasi:

(a) Batasan ukuran pori

(b) Hanya molekul substrat kecil yang dapat melewati membran

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur

Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 8

Aplikasi imobilisasi enzim:

(1) Produksi industri: Produksi industri antibiotik, minuman, asam amino, dll.

menggunakan enzim amobil atau sel utuh.

(2) Aplikasi biomedis: Enzim amobil banyak digunakan dalam diagnosis dan

pengobatan banyak penyakit. Enzim amobil dapat digunakan untuk mengatasi metabolisme bawaan

gangguan oleh pasokan enzim amobil. Teknik imobilisasi efektif

digunakan dalam sistem pengiriman obat terutama ke situs onkogenik.

(3) Industri makanan: Enzim seperti pektinase dan selulase diimobilisasi pada pembawa yang sesuai

berhasil digunakan dalam produksi selai, jeli dan sirup dari buah-buahan dan sayuran.

(4) Penelitian: Suatu kegiatan penelitian secara ekstensif menggunakan banyak enzim. Penggunaan imobilisasi

enzim memungkinkan peneliti untuk meningkatkan efisiensi enzim yang berbeda seperti Lobak Kuda

Peroksidase (HRP) dalam percobaan blotting dan Protease berbeda untuk lisis sel atau organel.

(5) Produksi biodiesel dari minyak nabati.

(6) Pengelolaan air limbah: pengolahan limbah dan limbah industri.

(7) Industri tekstil: scouring, bio-polishing dan desizing kain.

(8) Industri deterjen: imobilisasi enzim lipase untuk menghilangkan kotoran secara efektif dari
kain.

Mendukung atau Matriks yang digunakan dalam teknologi imobilisasi:

Matriks atau penyangga melumpuhkan enzim dengan menahannya secara permanen atau sementara selama a

periode waktu yang singkat. Ada berbagai macam matriks atau operator atau dukungan yang tersedia untuk

imobilisasi. Matriks yang digunakan harus murah dan mudah didapat. Reaksi mereka dengan

komponen media atau dengan enzim harus minimum. Matriks atau pendukung

untuk imobilisasi enzim atau seluruh sel dikelompokkan menjadi tiga kategori utama:

(1) Polimer alami

(2) Polimer sintetis

(3) bahan anorganik

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur

Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 9

(1) Polimer alami:

(a) Alginat: Polimer alami yang berasal dari dinding sel beberapa alga. Kalsium atau

magnesium alginat adalah matriks yang paling umum digunakan. Mereka lembam dan memiliki air yang baik

kapasitas.

(b) Kitosan dan kitin: Mereka adalah polisakarida struktural yang terjadi secara alami di dalam sel

dinding jamur dan eksoskeleton Arthropoda. Berbagai gugus fungsi dalam enzim

dapat mengikat gugus – OH kitin dan dapat membentuk ikatan kovalen.

(c) Kolagen: Ini adalah dukungan protenaceous dengan porositas yang baik dan kapasitas menahan air.

Rantai samping asam amino dalam kolagen dan enzim dapat membentuk kovalen

ikatan untuk secara permanen menahan enzim pada penyangga.

(d) Karagenan: Ini adalah polisakarida sulfat yang diperoleh dari beberapa ganggang merah. Kebaikan mereka

sifat pembentuk gel bersama dengan kapasitas penahanan proteinnya yang tinggi menjadikannya dukungan yang baik untuk

enzim imobilisasi.

(e) Gelatin: Gelatin adalah kolagen terhidrolisis sebagian dengan kapasitas menahan air yang baik.

(f) Selulosa: Polimer alam yang paling melimpah dan merupakan pendukung termurah yang tersedia sebagai

pembawa enzim. Gugus hidroksil dari unit monomer (glukosa) dapat membentuk kovalen

berikatan dengan asam amino enzim.

(g) Pati: Polimer alami dari amilosa dan amilo-pektin. Ini memiliki daya tahan air yang baik

kapasitas.

(h) Pektin: Ini adalah polisakarida struktural tanaman yang ditemukan di dinding sel utama mereka dan mereka

juga bertindak sebagai bahan penyemenan antar sel dalam jaringan tanaman. Pektin adalah agen pembentuk gel dengan

kapasitas menahan air yang baik.

(2) Polimer sintetis:

Mereka adalah resin atau polimer penukar ion dan merupakan penyangga yang tidak larut dengan permukaan berpori.

Permukaannya yang berpori dapat menjebak dan menahan enzim atau seluruh sel. Contoh:

Diethylaminoethyl cellulose (DEAE cellulose), Polyvinyl chloride (PVC), UV diaktifkan

Polietilen glikol (PEG)

(3) Bahan anorganik:

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur
Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 10

(a) Zeolit: Mereka adalah mineral mikropori, aluminosilikat dengan sifat penyerap yang baik

dan banyak digunakan untuk melumpuhkan enzim dan seluruh sel.

(b) Keramik: Mereka adalah padatan bukan logam yang terdiri dari atom logam dan non-logam yang ditahan

ikatan ionik dan kovalen. Komposisi dan pola ikatan bervariasi dengan jenis yang berbeda.

(c) Tanah diatom: Mereka adalah batuan sedimen silika yang dibentuk oleh fosil
akumulasi dinding sel diatom. Celite adalah nama dagang dari tanah diatom. Dia

adsorben yang baik dan tahan terhadap pH dan suhu tinggi.

(d) silika:

(e) Kaca:

(f) Karbon aktif

(g) Arang

Keuntungan dari enzim amobil:

(1) Peningkatan efisiensi fungsional enzim

(2) Peningkatan reproduktifitas dari proses yang mereka lakukan

(3) Penggunaan kembali enzim

(4) Penggunaan enzim secara terus menerus

(5) Lebih sedikit input tenaga kerja dalam proses

(6) Penghematan biaya modal dan investasi proses

(7) Waktu reaksi minimum

(8) Lebih sedikit kemungkinan kontaminasi dalam produk

(9) Lebih banyak stabilitas produk

(10) Pasokan produk yang stabil di pasar

(11) Peningkatan kontrol proses

(12) Rasio substrat enzim tinggi

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur
Machine Translated by Google

Unit I- Imobilisasi dan Aplikasi Enzim (SN Jain) 11

Kerugian dari imobilisasi enzim:

(1) Meskipun ada banyak keuntungan dari enzim amobil, ada beberapa
kerugian juga.

(2) Biaya tinggi untuk isolasi, pemurnian dan pemulihan enzim aktif (paling penting
kerugian)

(3) Aplikasi industri terbatas dan hanya sedikit industri yang menggunakan tidak bergerak
enzim atau sel utuh yang diimobilisasi.

(4) Sifat katalitik dari beberapa enzim berkurang atau hilang sama sekali setelah
imobilisasi pada dukungan atau pembawa.

(5) Beberapa enzim menjadi tidak stabil setelah imobilisasi.

(6) Enzim dinonaktifkan oleh panas yang dihasilkan dalam sistem.

Institut Pendidikan dan Penelitian Farmasi HR Patel, Shirpur