DNA/RNA QUANTITATIVE

ANALYSIS
 Estimation of DNA/RNA amount (concentration) and purity is
very crucial in molecular analysis because it gives us picture of
further analysis suitability
Uji Kuantitatif DNA/RNA:

Spektrofotometer UV Vis:
260 nm : Pita ganda DNA/RNA menyerap cahaya UV
280 nm : menyerap kontaminan protein dan fenol

Kemurnian dapat dihitung dengan nilai absorbansi 260/280 =

1,8-2,0
Konsentrasi DNA:
DNA = Absorbansi 260 nm x 50 x factor pengenceran
Akan keluar Absorbansi 260 dan Absorbansi 280

Contoh:

A260 = 0,030
A280 = 0,015

Kemurnian DNA= A260/A280

=2

Jika kemurnian <1,8= DNA produk masih terdapat pengotor fenol/etanol (saat
pengeringan pellet atau kolom setelah washing step belum sempurna)
Jika kemurnian >2 = kemungkinan DNA produk mengandung RNA atau protein
pengotor
Perhitungan Kosentrasi DNA:
DNA diencerkan 50x artinya= 1 μl DNA + 49 μl dH2O

Rumus = Absorbansi 260 x 50 x faktor pengenceran

Ada yang tau kenapa
= 0,030 x 50 x 50 50?
= 75 μg/ml berapa ng/μl?

75 μg x 1000 ng/1000 μl= 75 ng/μl

Next, jika dibutuhkan untuk PCR 10 ng, berapa μl yang akan

diambil dari stok konsentrasi DNA 75 ng/ μl?

10 ng:75 ng/μl = 0,13 μl DNA yang diambil untuk running PCR

Uji Kuantitatif DNA menggunakan
NanoDrop Spektrofotometri
Kuis: Latihan
Hitung
• Kemurnian
• Konsentrasi dengan pengenceran 100x faktor pengenceran
• Berapa μl DNA yang diperlukan untuk restriksi enzim jika
konsentrasi DNA yang dibutuhkan 500 ng/μl
Jika diketahui:
• A260 = 0.121
• A280 = 0.067
Terimakasih