SPEKTROFOTOMETRI UV-VIS

Spektrofotometri UV-Vis adalah anggota teknik analisis

spektroskopik yang memakai sumber radiasi elektromagnetik
ultraviolet dekat (190 – 380 nm) dan sinar tampak (380 – 780 nm)
dengan memakai instrumen spektrofotometer.

Radiasi ultraviolet jauh (100 – 190 nm) tidak dipakai, sebab pada
daerah radiasi tersebut radiasi UV juga diabsorpsi oleh udara.
Adakalanya spektrofotometer UV-Vis yg beredar diperdagangkan
memberikan rentang pengukuran panjang gelombang 190 – 1100
nm. Hal ini perlu diperhatikan lebih seksama sebab diatas panjang
gelombang 780 nm merupakan daerah radiasi inframerah. Oleh
sebab itu pengukuran diatas panjang gelombang 780 nm harus
dipakai detektor dg kualitas sensitif terhadap radiasi infra merah
(infrared sensitive)

SR M SK D A VD/R

Keterangan : SR = sumber radiasi, M = Monokromator, SK =

Sampel kompartemen
D = Detektor, A = Amflifier, VD/R = Visual
display/Recorder
* Spektrofotometer UV-Vis melibatkan energi elektronik yg
cukup besar pada molekul yg dianalisis, sehingga
spektrofotometer UV-Vis lebih banyak dipakai untuk
analisis kuantitatif dibandingkan kualitatif

Interaksi elektron π, σ, dan n dengan REM

> Ada tiga macam distribusi elektron di dalam suatu
senyawa organik secara umum, yaitu orbital elektron pi
(π), sigma (σ), dan elektron tidak berpasangan (n).
Ketiga orbital elektron tersebut ada pada senyawa
organik formal dehid sebagai contoh :

> Apabila pada molekul tersebut dikenakan radiasi

elektromagnetik maka akan terjadi eksitasi elektron ke
tingkat energi yg lebih tinggi yg dikenal sebagai orbital
elektron “antibonding”.
 σ* Anti bonding
π* Anti bonding

E
n Non bonding
π Bonding

σ Bonding

Diagram tingkat energi elektronik

> Eksitasi elektron (σ  σ*) memberikan energi yg besar dan terjadi

pada daerah ultraviolet jauh yg diberikan oleh ikatan tunggal,
sebagai contoh pada alkana.
 Sedangkan eksitasi elektron (ππ*) diberikan oleh ikatan
rangkap dua atau tiga (alkena dan alkuna) juga terjadi
pada daerah ultraviolet jauh. Pada gugus karbonil
(dimetilketon dan asetaldehid) akan terjadi eksitasi
elektron (nσ*) yg terjadi pada daerah ultraviolet jauh.
Disamping itu gugus karbonil juga memberikan eksitasi
elektron (nπ*) yg terjadi pada λ = 280-290 nm tapi
eksitasinya terlarang karena memberikan harga Єmaks =
12 -16 (<1000).

>Contoh2 yg dikemukakan di atas hampir mewakili

senyawa2 organik pada umumnya dan semua gugus
atau gugusan atom yg mengabsopsi radiasi UV-Vis yg
disebut sebagai Kromofor.

>Pada senyawa organik dikenal pula gugus Auksokrom,

adalah gugus fungsonil yg mempunyai elektron bebas
seperti –OH; O-NH2 dan OCH3 yg memberikan transisi
(nσ*).
> Terikatnya gugus ausokrom pada gugus kromofor akan
mengakibatkan pergeseran pita absorpsi menuju ke panjang
gelombang yg lebih panjang (pergeseran merah=batokromik)
disertai peningkatan intensitas (efek hiperkromik). Pergeseran
batokromik juga terjadi pada ikatan rangkap yg terkonjugasi –C=C-
C=C-.

Analisis Kuantitatif

> Radiasi ultraviolet dan sinar tampak diabsorpsi oleh molekul

organik aromatik, molekul yg mengandung elektron-π terkonjugasi
dan atau atom yg mengandung elektron-n, menyebabkan transisi
elektron di orbit terluarnya dari tingkat enersi elektron dasar ke
tingkat energi elektron tereksitasi lebih tinggi. Besarnya absorban
radisasi tersebut sebanding dg banyaknya molekul analit yg
mengabsorpsi dan dapat digunakan analisa kuantitatif.

> Analisis dengan spektrofotometer UV-Vis selalu melibatkan

pembacaan absorban REM oleh molekul (A) tampa satuan, atau
REM yg diteruskan/transmitan dg satuan persen (%T).
> Apabila suatu REM dikenakan pada suatu larutan dg intensitas
radiasi semula (Io) maka sebagian radiasi tersebut akan diteruskan
(It), dipantulkan (Ir), dan diabsorpsi (Ia), sehingga :

Io = Ir + Ia + It

> Harga Ir (± 4 %) dg demikian dapat diabaikan karena pengerjaan dg

metode spektrifotometri UV-Vis dipakai larutan pembanding
sehingga :

Io = Ia + It

> Bouguer, Lambert dan Beer membuat formula secara matematik

hubungan antara transmitan atau absorban terhadap intensitas
radiasi atau konsentrasi zat yg dianalisis dan tebal larutan yg
mengabsorpsi sebagai :

T = It/Io = 10 -ε c b
 A = log 1/T = ε c b

Dimana : T = persen transmitan

Io = intensitas radiasi yg datang (awal)
It = intensitas radiasi yg diteruskan
ε = absorbansi molar (Lt mol-1cm-1)
c = konsentrasi (mol Lt-1)
b = tebal larutan (cm)
A = absorban
*Persoalannya adalah bagaimana membaca rentang A dan T yg
memenuhi syarat sehingga akan meminimumkan galat sistemik
(galat individual). Untuk pembacaan absorban (A) atau transmitan
(T) pada daerah yg terbatas, kesalahan penentuan kadar hasil
analisis dinyatakan sebagai :
∆C/C = 0,4343/log T . ∆T/T
∆T adalah harga rentang skala transmitan terkecil dari alat yg masih
dapat terbaca pada analisis dg Sp UV-Vis.
> Harga ∆T untuk tiap spektrofotometer UV-Vis biasanya bervariasi
antara 0,2 – 1 % dan selalu dicantumkan sebagai spesifikasi
instrumen. Dari rumus tersebut diatas dapat diperhitungkan
kesalahan pembacaan A atau T pada analisis dg metode
Spektrofotometer UV-Vis. Pembacaan A (0,2 – 0,8 ) atau %T (15 –
65 %) akan memberikan persentase kesalahan analisis yg dapat
diterima (0,5 – 1 %) untuk ∆T = 1%

> Analisis kuantitatif zat tunggal dilakukan dg pengukuran harga A pada

panjang gelombang (λ) maksimum atau dilakukan pengukuran %T
pada panjang gelombang minimum. Alasan dilakukan pengukuran
pada panjang gelombang tersebut adalah perubahan perubahan
absorban untuk setiap satuan konsentrasi adalah paling besar pada
panjang gelombang maksimal, sehingga akan diperoleh kepekaan
analisis yg maksimal. Disamping itu pita serapan di sekitar panjang
gelombang maksimal datar dan pengukuran ulang dg kesalahan yg
kecil dg demikian akan memenuhi hukum Lambert-Beer. Ada empat
cara pelaksanaan analisis kuantitatif zat tunggal yaitu :

1. Dg cara membandingkan absorban atau % transmitan zat yagng

dianalisis dg referennce standard
Persyaratan pembacaan nilai absorban sampel dan reference standard
tidak jauh berbeda.

A(S) / C(s) = A(RS) / C(RS)

A(S) = absorban larutan sampel
C(S) = konsentrasi larutan sampel
A(RS)= absorban reference standard

C(RS) = konsentrasi larutan reference standard

2. Dg memakai kurva baku dari larutan reference standard dg pelarut

tertentu pada panjang gelombang maksimum. Dibuat grafik sistem
koordinat Cartesian dimana sebagai ordinat adalah absorban dan sebagai
absis adalah konsentrasi.

3. Dg jalan menghitung harga absorbansi larutan sampel (E 1% 1cm,

λmaks) pada pelarut tertentu dan dibandingkan dg absorbansi zat yg
dianalisis yg tertera pada buku resmi.
4. Dg memakai perhitungan nilai ekstingsi molar (absorbansi molar ε),
sama seperti cara (3) hanya saja pada perhitungan absorbansi
molar lebih tepat karena melibatkan massa molekul relatif (MR).

ε = E(1%,1cm) . MR . 10-1
Ad2.
A

1 2 3 4 C
Pemilihan Pelarut

 Spektrofotometer UV-Vis dapat melakukan penentuan terhadap

sampel yg berupa larutan, gas atau uap. Untuk sampel berupa
larutan perlu diperhatikan beberapa persyaratan pelarut yg dipakai,
antara lain :
 - Pelarut yg dipakai tidak mengandung sistem ikatan rangkap
terkonjugasi pada struktur molekulnya dan tidak bewarna.
- Tidak terjadi interaksi dg molekul senyawa yg dianalisis.
- Kemurniannya harus tinggi atau derajat untuk analisis (pa)

> Pada umumnya pelarut yg sering digunakan dalam analisis

Spektrofotometer UV-Vis adalah air, etanol, sikloheksan dan
isopropanol. Namun demikian perlu diperhatikan absorpsi pelarut yg
dipakai di daerah UV-Vis (penggal UV = UV cut off). Hal lain yg
perlu diperhatikan dalam masalah pemilihan pelarut adalah polaritas
pelarut yg dipakai, karena akan sangat berpengaruh terhadap
pergeseran spektrum molekul yg dianalisis.