Metode Komparatif

Spektroskopi, Kromatografi, dan Elektroforesis

Gelombang 3
FA2-Matrikulasi
Anggota Kelompok :
Nazia Apriliana Daus 191FF04048
Nenden rahayu 191FF04049
Ni Kadek Mita Pratiwi N. 191FF04050
Nurani Hafsyah 191FF04052
Permatasari 191FF04053
Nor Maulida 191FF04051
Rant Galih 191FF04059
 Definisi Kromatografi
Kromatografi adalah prosedur pemisahan senyawa campuran zat-zat kimia yang
berdasarkan perbedaan migrasi dari masing-masing komponen campuran yang
terpisah pada fase diam di bawah pengaruh fase yang bergerak.

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi merupakan salah satu metode kromatografi cair
yang fase geraknya dialirkan secara cepat dengan bantuan tekanan dan hasil yang
diperoleh dideteksi dengan instrument.
 Metode Penetapan Kadar
Metode “One Point” digunakan untuk penentuan kadar secara rutin pada max, suhu
pelarut, dan instrument yang sama. Larutan uji dibandingkan terhadap larutan baku yang
telah diketahui kadar dan kemurniannya : CU = (Au/Ab).Cb .

Dalam analisis menggunakan one point method, konsentrasi baku yang digunakan
hanya satu tingkat. Karena hanya satu tingkat maka kemungkinan galat akan lebih besar
daripada jika digunakan beberapa tingkat konsentrasi. Untuk meminimalkan galat, gunakan
nilai A = 0,434yang berdasarkan teori akan memberikan galat minimum. Sedangkan
dengan Multi point method dibuat larutan dengan pengenceran bertingkat sehingga
menghasilkan kurva kalibrasi atau regresi liner Antara konsentrasi dengan absorbansi/AUC.
 Prinsip HPLC
Dengan bantuan pompa fase gerak cair dialirkan melalui kolom menuju
detector. Cuplikan dimasukkan ke dalam aliran fase gerak dengan cara
penyuntikkan. Di dalam kolom terjadi pemisahan komponen-komponen
campuran. Karena perbedaan kekuatan interaksi antara  solute-solut terhadap fase
diam.
Solut-solut yang kuat interaksinya dengan fase diam akan keluar dari kolom
terlebih dahulu. Sebalikya, solute-solut yang kuat berinteraksinya dengan fase
diam maka solute tersebut akan keluar kolom, dideteksi oleh detector kemudian
direkam dalam bentuk kromatogram kromatografi gas. Seperti pada kromatografi
gas, jumlah peak menyatakan konsentrasi komponen dalam campuran. Komputer
dapat digunakan untuk mengontrol kerja system HPLC dan mengumpulkan serta
mengolah hasil data pengukuran HPLC.
Bagian-Bagian Alat HPLC
3
2
4
1
5
PROSEDUR
 Siapkan alat-alat dan bahan yang telah ditentukan
 Buat fase gerak methanol air 70 : 30
 Tentukan panjang gelombang deteksi dan dibandingkan waktu retensi
sampel dan baku.
 Buat kurva kalibrasi dengan berbagai konsentrasi, dengan cara
ditimbang sejumlah zat aktif dan dilarutkan dalam fase gerak yang
ditentukan.
 Lakukan pengenceran (FP 5 kali)
 Hitung persamaan garis, ukur luas area sampel dan ditentukan kadarnya
 CONTOH PERHITUNGAN ONE POINT METHODS

 
jawab :
Diketahui : berat sampel Cs = x Cb
paracetamol 50 mg = /ml
V1 = 100ml = 4,9348 µg/ml
C1 = Cs x Fp
Fp = 100 x = 4,9348 µg/ml x 100
A U Cs = 98125 = 493,48 µg/ml
Massa = C1 x V1
A U Cb = 99421 = 493,48 µg/ml x 100 ml
Cb = 5 µg/ml = 49348 µg
= 49,348 mg
Ditanya : kadar analit Kadar =
dalam sampel =
= 98,696%
Contoh perhitungan multipoint
method
Penetapan Kadar Parasetamol dan Kafein:
Diket:
Fp = 5 x
Bobot sampel yang ditimbang = kurang lebih 130 mg
Bobot rata-rata tablet = 651,9 mg
Kandungan zat/tablet: Parasetamol 250 mg/tablet dan Kafein 50 mg/tablet
Rumus:
Kadar zat dalam sampel (ug/mL) = C (dari kurva kalibrasi) x FP
Kadar zat dalam tablet (mg/tab) = (bobot rata-rata tablet/bobot sampel yang ditimbang) x kadar zat dalam sampel
Data Penetapan Kadar:

No Sampel W sampel AUC PCT AUC Kafein

1 130.9 1561124 387454
2 130.4 1552563 382636
3 130.25 1546345 388743
4 130.15 1572226 387993
5 130.17 1616641 380889
6 130.2 1621691 384831
Contoh perhitungan multipoint
method
Diketahui:
1. Rata-rata kadar zat dan RSD-nya
2. Kadar analit dalam sampel (mg/tablet)
3. Kadar analit terhadap kandungan zat (% b/b)
Hasil pengamat
Hasil pengamatan:

Kurva Baku Paracetamol Kurva Baku Kafein

2000000 600000
1800000 f(x) = 148162.41 x + 109827.13
R² = 0.99 500000 f(x) = 180338.49 x + 16391.99
1600000 R² = 1
1400000
400000
1200000
1000000 300000
AUC

AUC
800000
600000 200000
400000
100000
200000
0 0
3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
C (ug/mL) C (ug/mL)
Contoh perhitungan multipoint
method
Perhitungan kadar sampel:
Paracetamol -> Sampel 1:
AUC = 1261124
Y= 148162 x + 109827
1261124 = 148162 x + 109827
X = 1261124 – 148162/148162
X = 7,7705 µg/mL
Kadar zat dalam sampel (µg/mL)
= 7,7705 µg/mL x 5 = 38,8525 µg/mL
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 38,8525 mg
= 194,83 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 194,83 mg/200 mg x 100 %
= 97,415 %
Perhitungan kadar sampel:
Kafein -> Sampel 1:
AUC = 387454
Y= 180338 x + 16392
387454 = 180338 x + 16392
X = 387454 – 16392 /180338
X = 2,05759 µg/mL
Kadar zat dalam sampel (µg/mL)
= 2,05759 µg/mL x 5 = 10,28795 µg/mL
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 10,28795 mg
= 51,59011 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 51,59011 mg/50 mg x 100 %
= 103,18022 %
Contoh perhitungan multipoint
method
Perhitungan kadar sampel:
Paracetamol -> Sampel 2:
AUC = 1252563
Y= 148162 x + 109827
1252563 = 148162 x + 109827
X = 1252563 – 148162/148162
X = 7,7127 µg/mL
Kadar zat dalam sampel (µg/mL)
= 7,7127 µg/mL x 5 = 38,5635 µg/mL
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 38,5635
= 193,381
 
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 193,381mg/200 mg x 100 %
= 96,6905 %
Perhitungan kadar sampel:
Kafein -> Sampel 2:
AUC = 382636
Y= 180338 x + 16392
382636 = 180338 x + 16392
X = 382636 – 16392 /180338
X = 2,03087 µg/mL
Kadar zat dalam sampel (µg/mL)
= 2,03087 µg/mL x 5 = 10,15435 µg/mL
 
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 10,15435 mg
= 50,92015 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 50,92015 mg/50 mg x 100 %
= 101,8403 %
Contoh perhitungan multipoint
method
Perhitungan kadar sampel:
Paracetamol -> Sampel 3:
AUC = 1246345
Y= 148162 x + 109827
1246345 = 148162 x + 109827
X = 1246345 – 148162/148162
X = 7,6704 µg/Ml
Kadar zat dalam sampel (µg/Ml)
= 7,6704 µg/Ml x 5 = 38,3535 µg/Ml
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 38,3535
= 192,328 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 192,328 mg /200 mg x 100 %
= 96,164 %
Perhitungan kadar sampel:
Kafein -> Sampel 3:
AUC = 388743
Y= 180338 x + 16392
388743 = 180338 x + 16392
X = 388743 – 16392 /180338
X = 2,0647 µg/mL
Kadar zat dalam sampel (µg/mL)
= 2,0647 µg/mL x 5 = 10,3235 µg/mL
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 10,3235 mg
= 51,76838 mg
 Kadar analit terhadap zat kandungan
= 51,76838 mg/50 mg x 100 %
= 103,53676 %
Contoh perhitungan multipoint
method
Perhitungan kadar sampel:
Paracetamol -> Sampel 4:
AUC = 1272226
Y= 148162 x + 109827
1272226 = 148162 x + 109827
X = 1272226 – 148162/148162
X = 7,8454 µg/Ml
Kadar zat dalam sampel (µg/Ml)
= 7,8454 µg/Ml x 5 = 39,227 µg/Ml
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 39,227 mg
= 196,708 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 196,708 mg /200 mg x 100 %
= 98,354 %
Perhitungan kadar sampel:
Kafein -> Sampel 4:
AUC = 387993
Y= 180338 x + 16392
387993 = 180338 x + 16392
X = 387993 – 16392 /180338
X = 2,06058 µg/mL
Kadar zat dalam sampel (µg/mL)
= 2,06058 µg/mL x 5 = 10,3029 µg/mL
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 10,3029 mg
= 51,66508 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 51,66508 mg /50 mg x 100 %
= 103,33016 %
Contoh perhitungan multipoint
method
Perhitungan kadar sampel:
Paracetamol -> Sampel 5:
AUC = 1216641
Y= 148162 x + 109827
1216641 = 148162 x + 109827
X = 1216641– 148162/148162
X = 7,47029 µg/Ml
Kadar zat dalam sampel (µg/Ml)
= 7,47029 µg/Ml x 5 = 37,351 µg/Ml
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 37,351 mg
= 187,3 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 187,3 mg /200 mg x 100 %
= 93,65 %
Perhitungan kadar sampel:
Kafein -> Sampel 5:
AUC = 380889
Y= 180338 x + 16392
380889 = 180338 x + 16392
X = 380889 – 16392 /180338
X = 2,02118 µg/mL
Kadar zat dalam sampel (µg/mL)
= 2,02118 µg/mL x 5 = 10,1059 µg/mL
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 10,1059 mg
= 50,6772 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 50,6772 mg /50 mg x 100 %
= 101,3544 %
Contoh perhitungan multipoint
method
Perhitungan kadar sampel:
Paracetamol -> Sampel 6:
AUC = 1221691
Y= 148162 x + 109827
1221691 = 148162 x + 109827
X = 1221691 – 148162/148162
X = 7,5043 µg/Ml
Kadar zat dalam sampel (µg/Ml)
= 7,5043 µg/Ml x 5 = 37,5215 µg/Ml
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 37,5215 mg
= 188,155 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 188,155 mg /200 mg x 100 %
= 94,0775 %
Perhitungan kadar sampel:
Kafein -> Sampel 6:
AUC = 384831
Y= 180338 x + 16392
384831= 180338 x + 16392
X = 384831 – 16392 /180338
X = 2,04304 µg/mL
Kadar zat dalam sampel (µg/mL)
= = 2,04304 µg/mL x 5 = 10,2152 µg/mL
Kadar zat dalam tablet (mg/tab)
= 651,9 mg/ 130 mg x 10,2152 mg
= 51,225299 mg
Kadar analit terhadap zat kandungan
= 51,225299 mg /50 mg x 100 %
= 102,450598 %
Contoh perhitungan multipoint
method
Perhitungan rata-rata kadar zat dan RSD Parasetamol

Perhitungan rata-rata kadar zat dan RSD Kafein