Hyaluronan Oral Mengurangi Keriput: Studi Double-

Blinded, Kontrol-Plasebo Selama 12 Minggu

Mariko Oe, Seigo Sakai, Hideto Yoshida, Nao Okado, Haruna Kaneda, Yasunobu
Masuda dan Osamu Urushibata

Latar Belakang
Hyaluronan (HA) memiliki sifat pelembab dan kapasitas penyimpanan air yang
tinggi terutama untuk kulit manusia. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi
pengaruh asupan oral HA.
Metode
Berat molekul rata-rata (MW) HA adalah 2 k dan 300 k. Enam puluh subjek pria
dan wanita Jepang berusia 22-59 tahun yang mengalami kerutan seperti garukan
kaki gagak (crow’s feet) secara acak diberikan HA 2 k atau HA 300 k,120 mg/hari
atau kelompok plasebo. Subyek diberikan HA pada tingkat 120 mg/hari atau
plasebo selama 12 minggu. Keriput pada kulit dievaluasi dengan analisis citra
replika kulit keriput dan kondisi kulit mereka dievaluasi dengan menggunakan
survei kuesioner.
Hasil
Selama masa studi, kelompok HA menunjukkan tingkat rasio volume sulkus, rasio
area keriput, dan rasio volume kerutan yang lebih baik dibandingkan kelompok
plasebo. Setelah 8 minggu mengkonsumsi, kelompok HA 300 k menunjukkan
keriput yang berkurang secara signifikan dibandingkan dengan kelompok plasebo.
Kilauan dan kelenturan kulit meningkat secara signifikan setelah 12 minggu pada
semua kelompok dibandingkan dengan baseline.
Kesimpulan
Hasilnya menunjukkan bahwa HA oral (baik HA 2 k dan HA 300 k) menghambat
keriput pada kulit dan memperbaiki kondisi kulit.

Kata kunci: asam hyaluronic, suplemen makanan, kulit, volume keriput, berat
molekul

Latar Belakang
Hyaluronan (HA) adalah komponen tubuh yang ada di setiap jaringan ikat
dan organ, seperti kulit, cairan sinovial, pembuluh darah, serum, otak, tulang
rawan, katup jantung, dan umbilikus. Secara khusus, kulit memiliki jumlah HA
terbanyak dalam tubuh, dengan 50% total HA tubuh terdapat di kulit.1
Kerutan pada kulit terbentuk di bawah pengaruh berbagai faktor, seperti
penuaan, sinar ultraviolet (UV), dan kekeringan. Secara khusus, degradasi
kolagen dan HA akibat kerusakan UV menyebabkan keriput.2,3 Diperkirakan
penyebab Crow’s feet adalah sama.
Kandungan HA di kulit dianggap terkait dengan faktor penyebab keriput.
Kawada et al4 mengobati tikus tanpa rambut dengan dosis 200 mg/kg berat badan
per hari selama 6 minggu dengan paparan radiasi UV dan mengukur kondisi
kulitnya. Kelompok HA menunjukkan penurunan yang signifikan dengan
kerusakan UV pada kulit dibandingkan dengan kelompok kontrol (p <0,05). Efek
keriput pada kulit melalui penggunaan HA oral ini diharapkan karena penurunan
kerusakan kulit menyebabkan kulit terbebas dari keriput. Selain itu, kulit kering
diperbaiki dengan konsumsi HA secara oral.5–8. Jumlah HA di kulit secara
bertahap menurun karena penuaan. Misalnya, orang berusia 75 tahun hanya
memiliki seperempat dari jumlah HA di kulit mereka dibandingkan dengan orang
berusia 19 tahun.9
Sehubungan dengan kulit keriput, ada beberapa teknik bedah yang
menggunakan pengisi sebagai pengobatan simptomatik. Namun, biaya
pengobatan tinggi, dan ada risiko rasa sakit dan pembengkakan.10 Meskipun
pengobatan topikal seperti suntikan HA berpengaruh cepat, efeknya akan
berkurang secara bertahap.11 Di sisi lain, dibutuhkan waktu untuk menghilangkan
keriput dengan mengonsumsi suplemen; Namun, efeknya akan dipertahankan
dengan terus menerus memotretnya. Dengan demikian, permintaan diet suplemen
meningkat karena suplemen mudah dikonsumsi terus menerus dan mendukung
tubuh bagian dalam. Beberapa penelitian melaporkan beberapa efek yang dimiliki
suplemen diet untuk menjaga kesehatan kulit.12
Dua uji klinis HA oral telah dilakukan. Kim et al mengobati 52 subjek
wanita Korea berusia di atas 30 tahun yang memiliki crow’s feet (kelompok
plasebo n=26, kelompok HA n=26) dengan HA (MW, 75 k, 240 mg/hari) selama
8 minggu. Kelompok HA secara signifikan menunjukkan pengurangan keriput
dibandingkan dengan kelompok plasebo (p <0,05).13
Watanabe et al mengolah 28 subyek wanita Jepang berusia 30-49 tahun
yang memiliki crow’s feet (kelompok plasebo=14, kelompok HA n=14) dengan
HA (MW, 38 k, 240 mg/hari) selama 8 minggu. Kelompok HA menunjukkan
penurunan kedalaman kerutan secara signifikan dibandingkan dengan kelompok
plasebo (p <0,01).14
Tidak dipastikan apakah efek anti keriput HA oral tergantung pada MW
atau jumlah asupannya. Namun, diketahui bahwa bioavailabilitas HA bergantung
pada berat molekul.15 Hisada et al melaporkan bahwa berat molekul HA yang
lebih rendah mengindikasikan semakin banyak HA yang terserap melalui
monolayer sel Caco-2 usus manusia.16
Dengan demikian, kami mengevaluasi efek anti-keriput dan MW dari
konsumsi HA (MW, 2 k dan 300 k, 120 mg/hari dalam studi double-blind dan
kontrol plasebo selama 12 minggu dengan subjek pria dan wanita Jepang berusia
22-59 tahun. Kedua jenis HA (MW, 2 k dan 300 k) terdiri dari sekuens disakarida
sederhana (asam d-glukosonic dan d-N-acetylglucosamine, yang terikat melalui
alternating β-1,4-dan β-1,3-ikatan glikosidik). HA 2 k sedikit lebih mudah larut
daripada HA 300 k.

Metode
Subjek
Subjeknya adalah relawan pria dan wanita Jepang berusia 22-59 tahun yang
hadir dengan keriput crow’s feet. Informed consent diperoleh secara tertulis dari
masing-masing subjek sebelum masuk dalam penelitian. Enam puluh sukarelawan
dipilih. Kriteria eksklusi kami ditunjukkan pada Tabel 1. Subjek yang dipilih
ditugaskan secara acak ke tiga kelompok, yaitu kelompok perlakuan plasebo, HA
2 k, dan HA 300 k. Setelah pengelompokan, dilakukan penelitian double-blind,
plasebo-kontrol.

Tabel 1. Kriteria Eksklusi

1. Sedang menggunakan obat oral atau topikal yang dapat mempengaruhi hasil tes
2. Hamil, kemungkinan hami atau menyusui
3. Sedang mengkonsumsi alkohol berlebih
4. Kemungkinan memiliki alergi kulit (dengan gejala dermatitis atopik)
5. Kemungkinan alergi akut terhadap bahan uji
6. Berpartisipasi dalam tes klinis lain
7. Terus mengkonsumsi HA sebagai obat atau suplemen diet
8. Gejala diare biasa atau sakit perut
Singkatan: HA, Hyaluronan

Suplemen dan Dosis

Kedua jenis HA, Hyabest® (A) dan Hyabest® (S) LF-P, yang digunakan
dalam penelitian ini diproduksi oleh Kewpie Corporation (Tokyo, Jepang) dan
memiliki kemurnian 95% sesuai dengan analisis kromatografi cair kinerja tinggi
(HPLC). MW rata-rata masing-masing ~2 k dan 300 k. Selulosa mikrokristalin
diperoleh dari Asahi Kasei Chemicals Corporation (Tokyo, Jepang). Kelompok
plasebo menerima dua kapsul (210 mg mikrokristalin per kapsul), dan kelompok
HA 2 k menerima dua kapsul (60 mg HA dengan selulosa mikrokristalin, total
210 mg per kapsul) setiap hari. Kelompok HA 300 k menerima dua kapsul (60 mg
HA dengan selulosa mikrokristalin, total 210 mg per kapsul) setiap hari. Tidak
ada perbedaan dalam penampilan dan rasa dari kapsul HA dan plasebo. Kapsul
diproduksi oleh Aliment Industry Co. Ltd (Yamanashi, Jepang).

Desain Uji Klinis

Penelitian ini dilakukan oleh Kewpie Corporation, yang melakukan
percobaan acak, double-blind, plasebo-kontrol. Subjek secara acak diberikan pada
kelompok HA 2 k, HA 300 k, atau plasebo sebelum memulai penelitian sesuai
dengan pengacakan terstratifikasi berdasarkan usia oleh koordinator studi, MO.
Alokasi didokumentasikan dalam file elektronik yang hanya dapat diakses oleh
koordinator studi. Pengamat studi, NO dan HK, yang tidak mengetahui
alokasinya, menyerahkan sampel yang tidak ada bedanya dengan subjek. Subyek
mengkonsumsi dua kapsul setiap hari selama 12 minggu berturut-turut. Evaluasi
kulit dilakukan sebelum konsumsi dan setelah 4, 8, dan 12 minggu pengobatan.
Evaluasi kondisi kulit dilakukan dengan menggunakan analisis citra replika kulit
keriput dan survei kuesioner.

Daftar Uji Klinis

Penelitian ini didaftarkan pada Center for Clinical Trials, Japan Medical
Association. Nomor registrasi percobaan klinis adalah JMA-IIA00234.
 Uji coba klinis ini dilakukan sesuai dengan prinsip-prinsip Deklarasi
Helsinki dan disetujui oleh dewan peninjau institusional (Shinkohkai Medical
Corporation Institutional Review Board, Tokyo, Jepang).

Evaluasi Kulit
Analisis citra tiruan keriput
Pengumpulan dan analisis replika dilakukan sebagai berikut, sesuai dengan
Pedoman Evaluasi Produk Anti Keriput (Japanese Cosmetic Science Society).17
Untuk menjaga kondisi pengukuran tetap sebanyak mungkin, subjek mencuci
muka dan beristirahat selama 20 menit di ruang tunggu dengan kondisi
lingkungan yang ringan (suhu kamar: 22±2°C, kelembaban relatif: 50%±15%).
Pada hari evaluasi, subjek menerapkan agen replika kulit (Asahi Techno Lab
Corporation, Kanagawa, Jepang) di sudut mata mereka. Setelah dikeringkan
cukup, para peserta mengelupas replika dari kulit dan membiarkan replika itu
menjadi kering kembali. Replika dievaluasi menggunakan perangkat lunak
analisis tiga dimensi (3D) untuk jenis refleksi digital ASA-03RXD Ver3.18
(Asahi Techno Lab Corporation). Jumlah perubahan relatif nilai awal terhadap
nilai rata-rata pada setiap item dibandingkan di antara kelompok yang berkenaan
dengan kelompok plasebo.

Survei Kuesioner
Survei kuesioner telah diselesaikan oleh subjek untuk menilai kilau,
kekenyalan, dan keriput pada kulit wajah dengan menggunakan skala evaluasi-
lima poin (Tabel 2) pada waktu berikut: sebelum konsumsi dan setelah 4, 8, dan
12 minggu proses menelan. Untuk kilau dan kelenturan kulit, poin satu adalah
yang terburuk dan poin lima adalah yang terbaik. Untuk keriput, poin satu paling
tidak keriput; tidak khawatir, dan poin lima paling banyak keriput; paling peduli.
Jumlah perubahan relatif nilai awal terhadap nilai rata-rata skor pada masing-
masing item dibandingkan di antara kelompok yang berkenaan dengan kelompok
plasebo.

Tabel 2. Metode yang Digunakan untuk Mengevaluasi Kondisi Kulit Dalam Kuesioner
Skor Evaluasi Item
Kilauan kulit Kekenyalan kulit Keriput
1 Tidak ada kilau Tidak kenyal Tidak khawatir
2 Tidak cukup Tidak cukup Sedikit perawatan
3 Normal Normal Normal
4 Rata-rata Rata-rata Beberapa perawatan
5 Cukup Cukup Paling peduli

Survei kuesioner tentang efek samping, seperti reaksi alergi, diare, dan sakit
perut, dilakukan selama penelitian berlangsung.

Gambar Kamera Mikroskop

Permukaan kulit di sudut mata diamati oleh mikroskop digital VHX-2000
(Keyence Corporation, Osaka, Jepang).
Analisis Statistik
Analisis varians berulang (ANOVA) dan uji Dunnett digunakan untuk
membandingkan analisis citra replika antara nilai awal dan setiap titik
pengukuran. ANOVA one way dan beberapa tes perbandingan Tukey digunakan
untuk membandingkan kelompok plasebo dan kelompok HA. Untuk survei
kuesioner, sebuah Wilcoxon signed-rank sum test digunakan untuk
membandingkan nilai awal dan setiap titik pengukuran. ANOVA satu arah dan
beberapa uji perbandingan Bonferroni digunakan untuk membandingkan
kelompok plasebo dan kelompok HA. Semua nilai yang diperoleh dinyatakan
sebagai mean ± standard error (SEs). Hasil tes dinyatakan sebagai mean ± SE.
Nilai p <0,05 dianggap signifikan secara statistik, dan Nilai p <0,1 adalah trend
signifikan. Analisis statistik perangkat lunak komputer menggunakan SPSS versi
20 (IBM Corporation, Armonk, NY, USA).

Hasil
Analisis Citra Tiruan Keriput
Untuk evaluasi replika keriput, dua orang dari kelompok plasebo dan empat
orang dari kelompok HA 2 k dan kelompok HA 300 k (yang semula memiliki 60
orang) tidak menyelesaikan percobaan karena alasan pribadi. Sebanyak 50 orang
dinilai seperti ditunjukkan pada Tabel 3. Perubahan temporal dalam keseluruhan
rasio volume sulkus, rasio area keriput, dan rasio volume keriput selama masa
studi ditunjukkan pada Tabel 4. Pada kelompok plasebo, keseluruhan rasio
volume sulkus, rasio area keriput, dan rasio volume keriput memiliki nilai lebih
tinggi namun tidak signifikan dibandingkan dengan waktu sebelum konsumsi.
Pada kelompok HA 2 k dan kelompok HA 300 k, seluruh rasio volume sulkus,
rasio area keriput, dan rasio volume keriput menunjukkan nilai yang rendah secara
konsisten dibandingkan dengan sebelum konsumsi.

Tabel 3. Karakteristik Dasar Subjek

Karakteristik Plasebo HA 2 k HA 300 k
(n = 18) (n = 16) (n = 16)
Jumlah
Rentang Usia, Tahun
22–29 7 7 5
30–39 6 5 6
40–49 3 2 3
50-59 2 2 2
Jenis Kelamin
Laki-laki 7 7 6
Perempuan 11 9 10
Singkatan: HA, hyaluronan.
Tabel 4. Perubahan Hasil Analisis Replika Kerutan dengan Waktu Setelah Konsumsi
Oral Hyaluronan atau Plasebo
Replika Kerutan Plasebo HA 2 k HA 300 k
Rasio volume sulkus (Σ WD/XY)
Baseline 137.37 ± 21.02 173,38 ± 30,98 161,19 ± 27,03
4 minggu 135,52 ± 19,83 162,64 ± 31,48 157,11 ± 26,56
8 minggu 157.09 ± 23.90 163,82 ± 29,82 153,16 ± 24,10
12 minggu 142,38 ± 24,85 157,73 ± 30,04 154,24 ± 27,24
Rasio area kerutan (Σ W '/XY)
Baseline 4,93 ± 0,84 6,47 ± 1,24 5,99 ± 1,04
4 minggu 4,93 ± 0,75 6.19 ± 1.26 5,77 ± 0,98
8 minggu 5.70 ± 0.90 6,24 ± 1,20 5,72 ± 0,94
12 minggu 5.24 ± 0.96 5,98 ± 1,19 5,78 ± 1,05
Rasio volume kerutan (Σ W'D '/XY)
Baseline 85,66 ± 17.75 114,57 ± 24,73 107,18 ± 22,85
4 minggu 84.81 ± 16.71 110,80 ± 24,55 104,21 ± 23,52
8 minggu 100,23 ± 19,95 107,59 ± 22,32 99,72 ± 19,48
12 minggu 93,61 ± 20,59 108,15 ± 23,27 106,84 ± 22,93
Catatan: Tes Tukey digunakan untuk membandingkan ketiga kelompok. Data disajikan
sebagai mean ± SE. W: lebar sulkus (µm), D: kedalaman sulkus (µm), X: luas area
evaluasi (mm), Y: garis bilangan, W’: lebar kerutan (µm), D’: kedalaman kerutan (µm).

Gambar 1. Perubahan dari awal hasil analisis pada replika keriput dengan waktu setelah
konsumsi HA oral atau plasebo.
Catatan: Hasil (A) ⊿rasio volume sulkus, (B) ⊿rasio daerah kerutan, dan (C) ⊿volume
kerutan relatif terhadap baseline ditampilkan. ○ menunjukkan kelompok plasebo; ■
menunjukkan kelompok HA 2 k; □ menunjukkan kelompok HA 300 k. Tes Tukey
digunakan untuk membandingkan ketiga kelompok. Data disajikan sebagai mean ± SE.
*p <0,05, **p <0,1 vs kelompok plasebo.
Singkatan: HA, hyaluronan; SE, kesalahan standar; AU, Arbitary unit
 Besarnya perubahan dalam seluruh rasio volume, rasio area keriput dan
rasio volume keriput selama periode uji ditunjukkan pada Gambar 1. Dalam rasio
volume kerutan setelah konsumsi 8 minggu (Gambar 1C), kelompok HA 300 k
menunjukkan nilai yang jauh lebih rendah daripada kelompok plasebo (p <0,05).
Nilai sebelum konsumsi tidak mempengaruhi hasilnya, oleh karena itu analisis
kovarian (analisis kovariansi [ANCOVA]) tidak dilakukan.

Survei Kuesioner
Gejala subyektif tentang kilau, kekenyalan, dan keriput dievaluasi dengan
menggunakan kuesioner. Dalam evaluasi kuesioner, satu orang dari kelompok
plasebo dan dua dari kelompok HA 2 k dan kelompok HA 300 k (dari 60 orang
asli) tidak melengkapi kuesioner karena alasan pribadi. Sebanyak 55 orang ikut
berpartisipasi. Dalam kilau dan kelenturan, semua kelompok secara signifikan
meningkatkan skor setelah 12 minggu (p <0,05) dibandingkan dengan sebelum
konsumsi. Untuk kilau, kelompok HA 2 k dan kelompok HA 300 k menunjukkan
peningkatan skor dibandingkan dengan kelompok plasebo pada semua titik
terukur setelah 4, 8, dan 12 minggu. Untuk keriput, kelompok plasebo, kelompok
HA 2 k, dan kelompok HA 300 k menunjukkan penurunan skor signifikan setelah
8 dan 12 minggu dibandingkan sebelum konsumsi (Gambar 2 ).
Dalam penelitian ini, dilakukan survei dan observasi kuesioner dan tidak
ada kejadian buruk.

Gambar 2. Perubahan kondisi kulit subjektif dengan waktu setelah konsumsi HA oral
atau plasebo.
Catatan: Hasil (A) ⊿ skor kilau kulit, (B) ⊿skor kelenturan, dan ( C ) ⊿skor keriput relatif
terhadap garis dasar ditunjukkan. ○ menunjukkan kelompok plasebo; ■ menunjukkan kelompok
HA 2 k; □ menunjukkan kelompok HA 300 k. Uji Wilcoxon signed-rank digunakan untuk
membandingkan ketiga kelompok. Data disajikan sebagai mean ± SE.

Gambar Kamera Mikroskop

Kami tidak dapat mengkonfirmasi perubahan permukaan kulit setelah
konsumsi pada subyek yang mencerna plasebo; Namun, permukaan kulit subyek
yang menelan HA cenderung membaik. Sebagai contoh setiap kelompok, gambar
mikroskopis sudut luar mata ditunjukkan sebelum konsumsi dan setelah 8 minggu
konsumsi (Gambar 3).

Gambar 3. Gambar mikroskop khas masing-masing kelompok.

Catatan: Gambar mikroskopis sudut luar mata sebelum konsumsi dan setelah 8 minggu
konsumsi ditampilkan untuk masing-masing kelompok.
Singkatan: HA, hyaluronan.

Diskusi
Ini adalah penelitian double-blind, placebo-kontrol acak terhadap orang
berusia 22-59 tahun yang merupakan pria dan wanita Jepang yang sehat dan yang
memiliki kerutan crow’s feet. Mereka diberi HA 120 mg MW 2 k atau 300 k per
hari selama 12 minggu. Akibatnya, dalam analisis citra replika keriput dan survei
kuesioner tentang gejala subjektif pada kulit, dikonfirmasi bahwa konsumsi HA
memperbaiki kilau dan kelenturan kulit dan menyebabkan penurunan keriput pada
kulit.
Perubahan temporal dalam keseluruhan rasio volume sulkus, rasio area
keriput, dan rasio volume keriput selama masa studi ditunjukkan pada Tabel 4.
Pada kelompok plasebo, keseluruhan rasio volume sulkus, rasio area keriput, dan
rasio volume keriput meningkat pada 8 minggu, mungkin karena penelitian ini
dilakukan di musim kemarau dari bulan Januari sampai April. Dalam analisis citra
replika kelompok HA 2 k dan kelompok HA 300 k, peralihan jumlah perubahan
rasio volume keseluruhan, rasio area keriput, dan rasio volume keriput
menunjukkan nilai yang rendah dibandingkan dengan kelompok plasebo dan
ditunjukkan dengan penekanan keriput dibandingkan dengan waktu sebelum
konsumsi. Jumlah perubahan dalam rasio volume kerutan menurun secara
signifikan pada 8 minggu setelah konsumsi di kelompok HA 300 k dibandingkan
dengan kelompok plasebo (Gambar 1). Kelompok HA 300 k dan kelompok HA 2
k menunjukkan kerutan tertekan dibandingkan dengan kelompok plasebo (HA
300 k, p=0,046; HA 2 k, p=0,052). Sebuah penelitian randomized controlled trial
(RCT) sebelumnya menunjukkan konsumsi HA dari MW 38 k dapat menekan
keriput secara signifikan dibandingkan dengan kelompok plasebo.14 Dalam
sebuah studi pemberian oral sebelumnya menggunakan HA berlabel untuk
mengkonfirmasi lokalisasi dengan autoradiografi pada tikus, disarankan agar HA
pada MW rendah terdekomposisi oleh bakteri usus, diserap ke dalam tubuh, dan
beberapa HA yang terdekomposisi bermigrasi ke kulit.18 Untuk alasan ini, khasiat
HA oral pada keriput tidak harus tergantung pada MW dari HA.
Mengingat peran HA di kulit, disarankan agar migrasi HA ke kulit bekerja
pada kulit yang keriput sebagai berikut:
Ada fibroblas di dermis kulit. Pada fibroblas ini, serat kolagen, serat elastin,
dan HA disintesis. Secara in vitro, HA mendorong proliferasi fibroblast di dermis,
dan dikonfirmasi bahwa asupan HA mendorong sintesis HA pada fibroblas.19,20
Diperkirakan bahwa bagian dari HAs yang dicerna secara oral mempromosikan
sintesis HA pada fibroblas dermis, mempertahankan kulit normal, dan terlibat
dalam pencegahan keriput. Selain itu, karena sel fibroblas tumbuh, adalah
mungkin untuk menekan keriput dengan memicu sintesis kolagen.
Epidermis di atas dermis terdiri dari stratum korneum, lapisan granular,
lapisan spinous, dan lapisan basal yang dimulai dari lapisan paling atas. HA yang
diperlukan di epidermis disintesis dalam keratinosit lapisan basal.21,22 Dilaporkan
bahwa HA mengikat reseptor (CD44) pada permukaan keratinosit dan
menormalkan fungsi kulit melalui pemberian sinyal.23 Selain itu, diketahui bahwa
HA memiliki retensi air yang tinggi.24 Di kulit, HA bekerja menghambat
pembentukan kerutan melalui fungsi normal kulit dan berfungsi sebagai retensi
yang menghasilkan kelembaban yang tinggi. Selain itu, diduga bahwa penekanan
pembentukan kerutan, HA terlibat sebagai faktor penyebab.
Dari mekanisme ini, HA telah diyakini menyebabkan kemanjuran melawan
keriput, perbaikan gejala subjektif pada kulit, dan perbaikan kondisi kulit melalui
pengamatan visual dalam penelitian ini.
Karena onset untuk kulit dikatakan 28 hari, fungsi melalui konsumsi oral
HA akan memerlukan asupan kontinu jangka panjang.25 Telah dikonfirmasi
bahwa HA aman pada manusia saat HA 200 mg/hari dicerna selama 12 bulan;
konsumsi jangka panjang.26 Selain itu, berbagai penelitian keselamatan juga
dilakukan, dan keamanan dikonfirmasi.27-37 Oleh karena itu, HA dapat dikatakan
bahan makanan yang cocok untuk asupan kontinu jangka panjang.
Penelitian sebelumnya tentang MW 38 k dan 75 k HA menunjukkan efek
pada keriput setelah konsumsi 4 dan 8 minggu dibandingkan dengan kelompok
plasebo. Tidak ada penelitian tentang efek HA di bawah 38 k atau di atas 75 k
pada keriput. Penelitian ini mengklarifikasi bahwa MW 2 k dan 300 k HA
memiliki efek pada keriput. Oleh karena itu, kami memastikan bahwa HA antara
MW 2 k dan 300 k memiliki efek pada keriput.
Dalam penelitian ini, kami mengevaluasi efek HA 120 mg/hari pada keriput.
Itu tidak dipelajari untuk dosis efektif minimum. Itu juga belum diverifikasi
apakah ada keefektifan serupa di MW selain 2 k dan 300 k. Selain itu, tidak
dipastikan bahwa perubahan kandungan HA di kulit disebabkan oleh konsumsi
HA secara oral dan apa yang mempengaruhi HA terkait dengan faktor penekanan
keriput. Mengenai masalah ini, penelitian lebih lanjut diperlukan di masa depan.
Kesimpulan
Studi ini menunjukkan bahwa konsumsi HA oral MW 2 k atau 300 k selama
12 minggu dapat menekan keriput dan memperbaiki kelenturan kulit pada pria
dan wanita Jepang yang sehat berusia 22-59 tahun. Dari sini, konsumsi HA
diharapkan bisa digunakan sebagai metode untuk menjaga kesehatan kulit.

Ucapan Terima Kasih

Kami dengan penuh syukur mengakui individu-individu yang berpartisipasi dalam
penelitian ini. Studi ini didanai oleh Kewpie Corporation.

Disclosure
Ms. Mariko Oe, Mr. Seigo Sakai, Mr. Hideto Yoshida, Ms. Haruna Kaneda, Ms.
Nao Okado, Dr. Yasunobu Masuda are employees of Kewpie Coroporation. MD
Osamu Urushibata is a professor of Toho University. The authors report no other
conflicts of interest in this work.

References
1. Laurent TC, Fraser JR. Hyaluronan. FASEB J. 1992;6(7):2397–2404.
2. Fisher GJ, Wang ZQ, Datta SC, Varani J, Kang S, Voorhees JJ.
Pathophysiology of premature skin aging induced by ultraviolet light. N Engl
J Med. 1997;337(20):1419–1428.
3. Dai G, Freudenberger T, Zipper P, et al. Chronic ultraviolet B irradiation
causes loss of hyaluronic acid from mouse dermis because of downregulation
of hyaluronic acid synthases. Am J Pathol. 2007;171(5): 1451–1461.
4. Kawada C, Kimura M, Masuda Y, Nomura Y. Oral administration of
hyaluronan prevents skin dryness and epidermal thickening in ultraviolet
irradiated hairless mice. J Photochem Photobiol B. 2015;153: 215–221.
5. Kajimoto O, Odanaka W, Sakamoto W, Yoshida K, Takahashi T. [Clinical
effect of hyaluronic acid diet for dry skin -objective evaluation with
microscopic skin surface analyzer]. J New Rem Clin. 2001;50:548–560.
Japanese.
6. Sato T, Sakamoto W, Odanaka W, Yoshida K, Urushibata O. [Clinical effects
of hyaluronic acid diet for dry and rough skin]. Aesthe Derma. 2002;12:109–
120. Japanese.
7. Sato T, Yoshida T, Kanemitsu T, Yoshida K, Hasegawa M, Urushibata O.
[Clinical effects of hyaluronic acid diet for moisture content of dry skin].
Aesthe Derma. 2007;17:33–39. Japanese.
8. Yoshida T, Kanemitsu T, Narabe O, Tobita M. [Improvement of dry skin by a
food containing hyaluronic acids derived from microbial fermentation]. J
New Rem Clin. 2009;58:143–155. Japanese.
9. Longas MO, Russell CS, He XY. Evidence for structural changes in dermatan
sulfate and hyaluronic acid with aging. Carbohydr Res. 1987;159(1):127–
136.
10. Haneke E. Adverse effects of fillers and their histopathology. Facial Plast
Surg. 2014;30(6):599–614.
11. Mashiko T, Kinoshita K, Kanayama K, Feng J, Yoshimura K. Perpendicular
strut injection of hyaluronic acid filler for deep wrinkles. Plast Reconstr Surg
Glob Open. 2015;3(11):e567.
12. Szyszkowska B, Lepecka-Klusek C, Kozłowicz K, Jazienicka I, Krasowska
D. The influence of selected ingredients of dietary supplements on skin
condition. Postepy Dermatol Alergol. 2014;31(3):174–181.
13. Kim HK, Moon TK, Kim NS. [Effect of hyaluronan on wrinkle]. Food Style
21. 2007;11:42–46. Japanese.
14. Watanabe M, Matsui K, Kondo S. [Effects of low molecular weight
hyaluronic acid by oral intake to beautify skin -placebo-controlled double-
blind comparative study]. Jpn Pharmacol Ther. 2015;43:57–64.
15. Japanese.Cyphert JM, Trempus CS, Garantziotis S. Size matters: molecular
weight specificity of hyaluronan effects in cell biology. Int J Cell Biol.
2015;2015:563818.
16. Hisada N, Satsu H, Mori A, et al. Low-molecular-weight hyaluronan
permeates through human intestinal Caco-2 cell monolayers via the
paracellular pathway. Biosci Biotehnol Biochem. 2008;72(4):1111–1114.
17. Task Force Committee for Evaluation of Anti-aging Function. Guideline for
evaluation of anti-wrinkle products. J Jpn Cosmet Sci Soc. 006;30:316–332.
18. Oe M, Mitsugi K, Odanaka W, et al. Dietary hyaluronic acid migrates into the
skin of rats. ScientificWorldJournal. 2014;2014:378024.
19. Greco RM, Iocono JA, Ehrlich HP. Hyaluronic acid stimulates human
fibroblast proliferation within a collagen matrix. J Cell Physiol. 1998;177(3):
465–473.
20. Lüke HJ, Prehm P. Synthesis and shedding of hyaluronan from plasma
membranes of human fibroblasts and metastatic and non-metastatic
melanoma cells. Biochem J. 1999;343(pt 1):71–75.
21. Tammi R, Ripellino JA, Margolis RU, Maibach HI, Tammi M. Localization
of epidermal hyaluronic acid using the hyaluronate binding region of cartilage
proteoglycan as a specific probe. J Invest Dermatol. 1988;90(3):412–414.
22. Sakai S, Yasuda R, Sayo T, Ishikawa O, Inoue S. Hyaluronan exists in the
normal stratum corneum. J Invest Dermatol. 2000;114(6):1184–1187.
23. Bourguignon LY. Matrix hyaluronan-activated CD44 signaling promotes
keratinocyte activities and improves abnormal epidermal functions. Am J
Pathol. 014;184(7):1912–1919.
24. Comper WD, Laurent TC. Physiological function of connective tissue
polysaccharides. Physiol Rev. 1978;58(1):255–315.
25. Halprin KM. Epidermal “turnover time” – a re-examination. Br J Dermatol.
1972;86(1):14–19.
26. Tashiro T, Seino S, Sato T, Matsuoka R, Masuda Y, Fukui N. Oral
administration of polymer hyaluronic acid alleviates symptoms of knee
osteoarthritis: a double-blind, placebo-controlled study over a 12-month
period. ScientificWorldJournal. 2012;2012:167928.
27. Morita H, Kawakami Y, Shimomura K, Sunaga M. [Acute toxicity study of
sodium hyaluronate(SL-1010) in rats and dogs]. Jpn Pharmacol Ther.
991;19:13–18. Japanese.
28. Morita H, Kawakami Y, Suzuki S, Hirata M, Koizumi H. [Thirteen-week
subcutoneous toxicity study on sodium hyaluronate(SL-1010) with 4-week
recovery test in rats]. Jpn Pharmacol Ther. 1991;19:19–52. Japanese.
29. Oe M, Yoshida T, Kanemitsu T, Matsuoka R, Masuda Y. [Repeated 28-day
oral toxicological study of hyaluronic acid in rats]. Pharmacometrics.
2011;81:11–21. Japanese.
30. Hasegawa T, Miyoshi K, Nomura A, Nakazawa M. [Subacute toxicity test on
sodium hyaluronate(SPH) in rats by intraperitoneal administration for 3
months and recovery test]. Pharmacometrics. 1984;28:1021–1040. Japanese.
31. Miyoshi K, Hasegawa T, Nakazawa M. [Chronic toxicity test on sodium
hyaluronate(SPH) in beagle dogs by intra-articular administration for 6
months and recovery test (1) General findings]. Pharmacometrics.
1985;29:49–81. Japanese.
32. Ono C, Iwama A, Nakajima Y, Kitsuya A, Nakamura T. [Reproductive and
developmental toxicity study on sodium hyaluronate(SH)-(1) Study on
subcutaneous administration to rats during the period of organogenesis]. Jpn
Pharmacol Ther. 1992;20:11–26. Japanese.
33. Guo F, Geng G, Wang H, Liu H, Zhi Y. [Teratogenicity test of sodium
hyaluronate]. Food Drug. 2010;12:321–323.Chinese. 34. Onishi M, Nagata
T, Saigou K, Sameshima H, Nagata R. [Mutagenicity studies of sodium
hyaluronate(SH)]. Jpn Pharm Ther. 1992;20:65–72. Japanese.
34. Aruga F, Miwa Y, Fuzimura T, Ohta S. [Micronucleus test of sodium
hyaluronate(SH) with mice]. Jpn Pharmacol Ther. 1992;20:73–75. Japanese.
35. Takemoto M, Ohzone Y, Asahi K. [Antigenicity test of sodium
hyaluronate(SH)]. Jpn Pharmacol Ther. 1992;20:59–64. Japanese.
36. Seino S, Takashita F, Asari A, Masuda Y, Kunou M, Ochiya T. No Influence
of exogenous hyaluronan on the behavior of human cancer cells or
endothelial cell capillary formation. J Food Sci. 2014;79(7): 1469–1475.