BAB I

PENDAHULUAN

A. Latar Belakang
Produk Biologi merupakan segmen yang tumbuh dari
farmasi industri. Studi stabilitas ini biologis yang kompleks
tantangan hadir di luar yang ditemukan khas molekul kecil farmasi.
Produk biologis adalah biasanya hanya sedikit stabil, tidak
sepenuhnya dipahami, dapat menunjukkan non Perilaku Arrhenius,
menurunkan oleh beberapa jalur dan jalur yang mungkin berbeda
selama tahap-tahap yang berbeda dari kehidupan rak. Selanjutnya,
perubahan halus yang disebabkan oleh tekanan dapat memiliki
efek besar pada sifat terapeutik dari produk. Ada analitis tantangan
metodologi yang berkaitan dengan stabilitas monitoring juga,
khususnya varians yang lebih tinggi dan kompleksitas produk dan
metodologi. Itu isu dan strategi yang terlibat dalam mempelajari
stabilitas produk protein biologis, terutama untuk tujuan tujuan
registrasi produk dibahas sebagai serta gambaran dari ICH Q5C
Kualitas bioteknologi dirancang dengan mengingat kekhasan
biologis serta formulasi, analitis, manufaktur, dan pengetahuan
peraturan yang diperoleh selama pembangunan.

1
 BAB II
TINJAUAN PUSTAKA

A. Pengertian Biologis
Bab ini membahas masalah dan strategi yang terlibat dalam
mempelajari stabilitas produk biologis, terutama untuk keperluan
registrasi produk, tetapi juga untuk tujuan pengembangan produk.
Banyak dari apa yang diperlukan untuk mencapai tujuan ini seperti
dengan apa yang akan dilakukan untuk produk molekul kecil;
namun, sifat zat biologis aktif dan hasil pengetahuan yang terbatas
sehingga memerlukan beberapa pemikiran yang cermat dan
pendekatan yang berbeda. Yang termasuk biologik seperti produk
protein, antibodi monoklonal, sistem protein terkonjugasi, beberapa
polipeptida (beberapa polipeptida dapat diperlakukan sebagai
molekul kecil obat obatan). Secara umum, zat aktif yang telah
diproduksi atau setidaknya berasal dari proses biologis, baik
dengan fermentasi atau sistem ekspresi sel-budaya tertentu,
dengan proses biotek seperti teknologi DNA rekombinan (rDNA),
atau dengan panen dari hidup organisme. Kelas produk terkait,
biasanya disebut sebagai biologi, adalah produk farmasi yang
diperoleh langsung dari organisme hidup. Contoh-contoh biologis
adalah produk plasma darah, vaksin, antivenom, imunoglobulin dan
ekstrak alergenik. Produk potensial lainnya dapat dianggap produk
biologi atau bioteknologi.
Bab ini akan menekankan produk berbasis protein, yang
merupakan obat-obatan biologis yang paling umum. Aspek kunci
dari zat obat biologis dan produk adalah bahwa mereka lebih labil
dibandingkan dengan kebanyakan obat-obatan tradisional molekul
kecil. Umumnya, mereka membutuhkan kondisi penyimpanan suhu
rendah seperti pendingin (2◦-8◦C), pembekuan (-10◦ Untuk -20◦C),
atau suhu penyimpanan bahkan ultra-rendah (-40◦ ke -80◦C). Di sisi
lain, untuk produk dingin atau beku, tidak ada perbedaan apakah
pendaftaran ditargetkan untuk iklim Zona I, II, III, atau IV. Aspek
lain yang perlu diingat adalah bahwa biologik umumnya sangat
mahal dan sering memakan waktu untuk menghasilkan dan
beberapa mungkin diproduksi hanya dalam batch kecil karena sifat
teknologi yang terlibat. Karena kerapuhan molekul, biaya dan suhu
rendah molekul, setelah bahan biologis di produksi, menyimpan
dalam persediaan dan melalui distribusi adalah sangat penting.

2
 Munculnya rantai dingin menjadi sangat penting, terutama ketika
pengiriman biologis melintasi batas internasional di mana
penundaan dapat ditemui. Ilmuwan stabilitas harus menyadari
metode pengiriman dan perlu merancang studi stabilitas yang akan
mendukung kunjungan yang mungkin akan dihadapi. Demikian
juga, keterbatasan stabilitas karena stress testing ditemukan
selama pengembangan produk perlu dikomunikasikan kepada
pengiriman dan pengemasan sehingga metode pengiriman yang
memadai dapat direncanakan dan memenuhi syarat sebelum
peluncuran produk.

B. Biologis Versus Molekul Kecil.

Seperti disebutkan sebelumnya, biologis perlu diperlakukan
dengan beberapa pertimbangan ekstra ketika menangani stabilitas
farmasi mereka. Aktivitas biologis protein, misalnya, tidak hanya
berasal dari struktur utama terikat secara kovalen, tetapi juga dari
konformasi dilipat yang membentuk struktur sekunder dan tersier.
Konformasi dapat dengan mudah diubah tanpa melanggar ikatan
kovalen, dan sekali dalam keadaan terdenaturasi ini, beberapa atau
semua aktivitas biologis yang membuat protein obat terapi yang
berguna mungkin akan hilang. Sebuah metode divalidasi atau
metode untuk menentukan aktivitas biologis molekul diperlukan.
Sedangkan konsentrasi protein biasanya diuji sebagai bagian dari
spesifikasi, hal ini juga biasanya disertai dengan satu atau lebih
metode yang mengukur atau berkorelasi untuk aktivitas biologis. Ini
adalah bioassay. Metode pemindaian ini adalah tes interaksi
protein berbasiskan hewan atau berbasis sel, metode pengikatan
seperti resonansi permukaan plasmon atau ELISA (enzyme-linked
immunosorbent assay) dan metode imunoblot.pengecualian ukuran
HPLC (SE-HPLC), peptida mencerna pemetaan, sodium dodecyl
sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), isoelektrik
fokus (IEF), dan metode gel elektroforesis lainnya bersama-sama
memberikan ukuran yang baik dari distribusi protein, fragmen, dan
modifikasi rantai samping. Untuk studi stabilitas, kemungkinan
beberapa jenis tes ini akan digunakan, masing-masing memberikan
informasi mengenai karakteristik yang berbeda dari molekul atau
informasi tentang berbagai jenis jalur degradasi. Adalah umum
bahwa banyak tes (elatif terhadap apa yang dilakukan untuk
molekul kecil) dilakukan untuk mengkarakterisasi biologis suatu

3
 bahan atau produk untuk memberikan jaminan potensi, kemurnian,
dan kualitas.

C. Jalur Umum Degradasi Untuk Protein

Ada beberapa rute degradasi umum untuk produk protein
yang biasanya dipelajari untuk menentukan stabilitas produk
biologis. Poin penting untuk diingat adalah bahwa baik kekuatan
kovalen dan nonkovalen dapat menyebabkan perubahan halus
dalam konformasi protein dan karena itu secara drastis mengubah
aktivitas biologis atau stabilitas fisiknya. Sedangkan, degradasi
dengan memecah ikatan kovalen membutuhkan jumlah energi yang
cukup (200–400 kJ / mol), gaya yang lebih lemah, seperti interaksi
hidrofobik dan ikatan hidrogen, hanya membutuhkan sekitar 4-30
kJ / mol untuk menghancurkan. Jalur degradasi utama dapat
dikategorikan sebagai agregasi, denaturasi, oksidasi, dan
deamidasi.

D. Pertimbangan Stabilitas Lainnya

Seperti disebutkan sebelumnya, sifat produk biologis
membawa serta beberapa tantangan menarik. Formulasi biasanya
parenteral, hanya dengan pengecualian yang jarang. Sementara
banyak aspek studi stabilitas parenteral berlaku baik untuk molekul
kecil atau molekul besar, penting untuk mengulangi beberapa
aspek untuk biologis karena secara praktis diberikan ketika
mengembangkan produk biologis, maka berarti sedang
mengembangankan sebuah parenteral. Produk lyophilized
menawarkan beberapa stabilitas tambahan, tetapi formulasi cair
dan produk siap digunakan jika diinginkan oleh dokter karena ini
lebih mudah digunakan dan terdapat dalam beberapa kasus yang
diatur sendiri oleh pasien. Dalam beberapa kasus, bagaimanapun,
produk mungkin memerlukan langkah konstitusi dan / atau
pengenceran sebelum pemberian. Kompatibilitas pengencer serta
semua bahan kontak, misalnya jarum stainless steel, polyvinyl
chloride (PVC) dan tas non-PVCIV, filter dan tubing terkait, semua
harus dipertimbangkan dalam penelitian. Faktor-faktor lain yang
perlu dipertimbangkan juga. Konstitusi dapat dilakukan dalam vial
dengan penggunaan jarum suntik untuk menambahkan pengencer.
Perawatan harus diambil untuk tidak mengganggu protein selama
proses ini karena hal ini dapat menyebabkan degradasi.

4
 Dalam pandangan sebelumnya, telah dibahas bahwa produk
biologis mengandung molekul yang rumit, yang hanya sedikit stabil
dan tidak dipahami dengan baik, perilaku yang tidak selalu
Arrhenius, dan di mana perubahan halus yang disebabkan oleh
tekanan besar atau kecil dapat memiliki efek luas pada sifat
terapeutik produk. Untuk alasan ini, tipe beku-mencair dan stres
panas jangka pendek biasanya dilakukan untuk mendukung
penyimpanan dan pengiriman barang mungkin tidak cukup untuk
menjamin kualitas produk selama masa penyimpanan produk.
Bahkan jika suatu produk cair terbukti dapat bertahan dalam
pengujian beku-mencair setelah beberapa siklus pembekuan jika
dibandingkan dengan spesifikasi, data yang dikumpulkan dari
penelitian semacam itu mungkin tidak mengungkapkan kasus-
kasus terburuk yang diakibatkan oleh pemalsuan. Suatu formulasi
protein dapat bertahan dari perubahan fasa yang terjadi dengan
cepat dalam siklus pembekuan klasik, misalnya antara -20 ◦C dan
25 ◦C. Namun, tingkat pembekuan (atau pencairan) mungkin lebih
lambat dalam skenario pengiriman nyata. Tingkat pembekuan telah
terbukti mempengaruhi denaturasi protein dalam siklus
lyophilization dan kemungkinan formulasi cair menghabiskan
waktu yang signifikan dalam kondisi “cair” yang sedikit membeku
dapat menginduksi lebih banyak protein yang terbentang dan
agregasi berikutnya daripada pembekuan cepat.

E. Pedoman Q5C ICH Pedoman desain studi stabilitas

Panduan untuk desain studi stabilitas registrasi biologi dapat
ditemukan di ICH Guideline Q5C, Kualitas Produk Bioteknologi:
Pengujian Stabilitas Produk Bioteknologi / Biologi, bersama dengan
semua pedoman stabilitas ICH Q1. Pedoman ICH Q5C
memberikan panduan umum tentang harapan untuk tubuh data
stabilitas yang diperlukan untuk mendaftar biologi di negara-negara
ICH. Itu tidak selalu berlaku untuk produk seperti vaksin, antibiotik,
heparin, vitamin, ekstrak alergenik, dan produk lain yang berasal
dari proses biologis atau fermentasi tradisional. Konsultasi dengan
departemen regulasi dan peraturan spesifik negara dianjurkan
untuk mengkonfirmasi penerapan panduan untuk produk tertentu.
Bagian ini akan meninjau poin-poin penting untuk studi stabilitas
biologis dan khususnya yang mungkin berbeda dari pedoman ICH
Q1A (R2) umum, Stability Testing of New Drug Substancesand
Products.

5
1. Stabilitas zat obat : Serupa dengan persyaratan untuk molekul
kecil, setidaknya tiga batch zat obat pilot atau ukuran bets skala
penuh dan perwakilan dari proses yang digunakan dalam
praklinis, klinis, dan skala manufaktur yang diusulkan harus
dipelajari. Wadah yang digunakan untuk menyimpan sampel
mungkin mengurangi ukuran, tetapi harus
terbuat dari bahan yang sama dan dilengkapi dengan wadah /
sistem penutupan yang sama diusulkan untuk proses
manufaktur. Poin penting saat menentukan wadah untuk
biologis adalah kemungkinan bahwa zat obat akan disimpan
jangka panjang dalam suhu dingin, ke − 80◦C. Wadah plastik
dan sistem penutupnya harus diperiksa ketahanan dan
kerapuhannya saat terkena suhu dingin seperti itu. Apa yang
tidak disebutkan secara khusus adalah bahwa zat obat yang
membeku jelas akan dicairkan sebelum digunakan dalam
pembuatan produk. Kadang-kadang proses pencairan dilakukan
dengan cara bertahap agar tidak merusak makromolekul, dan
bahan yang dicairkan disimpan pada suhu penahan sampai
akhirnya digunakan untuk produk manufaktur. Biasanya waktu
penahanan maksimum ditentukan dan waktu yang lebih pendek
dapat digunakan pada kebijaksanaan perencana manufaktur.
Waktu penahanan maksimum ini perlu didukung oleh data
stabilitas dan waktu penahanan perlu dipertimbangkan dalam
menentukan periode penggunaan akhir dari substansi obat
massal.
2. Stabilitas produk obat : Informasi Stabilitas Untuk Produk Obat-
obatan Biologik diharapkan dapat menghasilkan tiga lembar
yang mewakili batch skala produksi, dikemas dalam wadah
primer, dan mewakili produk yang digunakan dalam uji klinis.
3. Matriksing dan Bracketing : Matrixing dan bracketing yang
potensial digunakan selama perawatan diambil untuk
menunjukkan bahwa sampel stabilitas benar diuji mewakili
stabilitas semua sampel. Bahkan, mengingat biaya produk dan
metode uji bioanalytical, matrixing dan bracketing harus selalu
diperhatikan.
4. Uji stabilitas : Uji stabilitas untuk biologi akan ditentukan oleh
sifat dari produk tertentu, proses manufaktur, dan formulasi.
Beberapa tes tersebut penting untuk memantau stabilitas zat
atau produk obat. Spesifikasi dan tes untuk zat obat dan produk
obat dikategorikan dalam pedoman ICH sebagai berikut :

6
 Penampilan dan deskripsi, kotoran, potensi dan kuantitas.
Selain itu, tes lain yang spesifik untuk substansi obat dan
formulasi mungkin berlaku, seperti kemandulan, batas mikroba,
endotoksin bakteri, dan pH. Jenis tes ini juga akan diminta untuk
memenuhi persyaratan farmakope lokal. Tes untuk partikel yang
dapat dilihat di luar apa yang diperlukan farmakope mungkin
juga diperlukan karena masalah imunogenisitas.
5. Protokol stabilitas : Hampir tidak ada perbedaan dalam
persyaratan umum untuk protokol stabilitas untuk biologi dari
yang diperlukan untuk molekul kecil. Pengujian stabilitas harus
dilakukan pada kondisi penyimpanan jangka panjang sampai
setidaknya umur simpan yang dimaksud. Tes akselerasi dan
fotostabilitas juga akan dilakukan. Karena Biologis Biasanya
tidak stabil pada suhu kamar, kondisi penyimpanan stabilitas
akan disesuaikan untuk produk penyimpanan dingin. Selain itu,
perlu lebih sering menguji biologik karena ketidakstabilan relatif
ini.
a. Contoh obat substansi protokol :

Tabel 17.4 memberikan contoh protokol zat obat biologis

yang disimpan pada –70◦C, kemudian dicairkan sebelum
digunakan dan disimpan di penyimpanan yang didinginkan
sampai beberapa minggu sebelum digunakan dalam
pembuatan produk. Kondisi 5◦C berfungsi sebagai kondisi
dipercepat. Dalam desain tes lengkap ini, tes bioanalitik
dilakukan pada setiap titik waktu yang ditunjuk dengan a.
Tes endotoksin bakteri dan tes batas mikroba dilakukan
setiap titik waktu yang ditentukan dengan b. Pada titik waktu
yang ditentukan dengan ac, sebagian dari substansi obat
dikeluarkan dari kondisi deepfreeze dan dicairkan sesuai
dengan instruksi peleburan yang spesifik terhadap substansi
obat dan ukuran wadah. Zat obat yang dicairkan disimpan
pada suhu penahanan, dalam contoh ini 5◦C, dan sampel ini
dikenai uji stabilitas lebih lanjut untuk waktu maksimum yang
ditentukan, seperti yang ditunjukkan pada Tabel 17.5. Dalam
hal ini, substansi obat dicairkan dan ditahan pada suhu

7
 penahan 5◦C dan diuji secara berkala untuk menunjukkan
stabilitas selama waktu penahanan.

b. Contoh protokol produk obat :

Tabel 17.6 memberikan contoh protokol untuk produk obat

biologis parenteral terliofilisasi. Di sini kondisi jangka panjang
adalah 5◦C, dan 25◦C / 60% RH adalah kondisi dipercepat.
Tes bioanalitik terjadi pada setiap titik waktu yang ditetapkan
dengan tes a, dan sterilitas dan endotoksin dilakukan setiap
titik waktu yang ditentukan dengan b. Selain itu, sampel 5◦C
yang dibentuk untuk digunakan waktu awalnya dan setiap
tahun sampai akhir penelitian. Dalam tabel, studi waktu-
penggunaan yang dijadwalkan ditetapkan dengan huruf u.
Sekarang misalkan, untuk contoh yang diberikan, bahwa
produk tersebut merupakan produk biologis aliquid dan
sensitif terhadap cahaya. Kami juga ingin jaminan bahwa
biologinya akan bertahan dalam perjalanan. Ekskursi
mungkin terjadi secara tidak sengaja saat pengiriman dan
penyimpanan, atau mungkin dialami selama penanganan,
atau contoh selama proses pelabelan di area pelabelan suhu
ruangan. Seperti disebutkan sebelumnya, biologi labil
mungkin tidak segera menunjukkan masalah dari stres.
Dalam contoh pada Tabel 17.7, beberapa tekanan
digabungkan, yaitu beku-mencair, suhu kamar, dan paparan
cahaya, untuk mengurangi jumlah pengujian yang akan
diperlukan jika setiap stres diuji secara individual.

8
 Ini, tentu saja, adalah pilihan hemat waktu hanya jika studi
pengembangan atau pengetahuan produk lainnya
menunjukkan bahwa produk tersebut kemungkinan akan
bertahan hidup seperti itu. Beku-mencair untuk produk cair
akan menempatkan produk melalui beberapa perubahan
fase untuk menunjukkan pengaruh stres pada produk. Untuk
biologi, juga akan menguntungkan untuk mengetahui apa
yang terjadi jika produk dimasukkan ke dalam kondisi beku
sebagian yang mungkin terjadi selama pengiriman. Untuk
biologi, juga akan menguntungkan untuk mengetahui apa
yang terjadi jika produk dimasukkan ke dalam kondisi beku
sebagian yang mungkin terjadi selama pengiriman. Ini dapat
dilakukan dengan melewati banyak siklus pembekuan atau
mencoba untuk menahan sampel pada kondisi yang
membeku sebagian.

F. Pengaturan Spesifikasi
Menetapkan spesifikasi untuk biologi telah menjadi bahan
perdebatan antara industri dan badan pengatur selama bertahun-
tahun. Sebagian besar pusat perdebatan tentang apa yang tes
analitis benar-benar katakan tentang kualitas produk, sejauh mana
bioasai dapat memprediksi potensi klinis, dan apa yang tes
ketidakmurnian benar-benar menceritakan tentang kualitas
keseluruhan. Jumlah spesifikasi yang diperlukan dalam hal
pengujian, dan untuk informasi hanya pengujian yang
diperdebatkan. Karena kita memiliki pengetahuan yang tidak
sempurna dari makromolekul kompleks, spesifikasi lebih banyak
yang dibutuhkan. Tidak semua tes ini akan menunjukkan stabilitas,

9
 namun dalam kasus apapun, seperti dengan obat molekul kecil,
data stabilitas yang baik pada beberapa batch produk diperlukan,
bersama dengan pengalaman klinis, pengetahuan tentang
konsistensi proses (ukuran variabilitas banyak-ke-banyak) dan
variabilitas analitis, untuk membantu mengatur spesifikasi.
Variabilitas banyak-ke-banyak dan variabilitas analitis dapat relatif
tinggi untuk biologis. Spesifikasi pengaturan untuk biologis dibahas
dalam pedoman ICH Q6B dan dalam literatur [30, 31].

G. Stabilitas untuk Perubahan Proses

Perubahan proses untuk produk biotek mungkin memiliki
dampak yang buruk terhadap suatu substansi produk. Untungnya,
banyak dari parameter proses dapat meminjamkan diri pada
pendekatan Quality by Design untuk mengurangi beban regulasi
dari perubahan tersebut. Bahkan perubahan kecil dalam proses
bioteknologi memerlukan evaluasi yang cermat seperti apa, jika
ada, studi stabilitas diperlukan untuk memastikan apakah kualitas
produk akan terpengaruh. Sekali lagi, perubahan halus mungkin
memiliki pengaruh besar pada kualitas biologis, dan beberapa
efeknya mungkin tidak dapat dideteksi segera setelah pembuatan
produk. Proses produksi biologis lebih sensitif terhadap perubahan
bahan awal dan perubahan di lokasi produksi. Bahkan perubahan
dalam ruang produksi di fasilitas yang sama mungkin cukup untuk
menjamin studi stabilitas tambahan. Studi stabilitas jangka panjang
dan dipercepat mungkin diperlukan untuk menunjukkan bahwa
produk akan mempertahankan atribut kualitasnya setelah proses
berubah. Perubahan proses dibahas dalam Panduan ICH Q5E,
Keterbandingan Produk Bioteknologi / Biologis yang Bergantung
pada Perubahan Proses Manufakturnya.

10
 BAB III
KESIMPULAN

Produk biologi mewakili segmen industri farmasi yang terus

berkembang. Kepentingan dalam biologis berasal dari kekhususan
mereka dalam berinteraksi dengan kompleks proses biologis dalam tubuh.
Studi Stabilitas Dari Biologis kompleks Hadir tantangan di luar obat-obatan
kecil-molekul yang khas. Produk biologis biasanya hanya sedikit stabil,
tidak sepenuhnya dipahami, dapat menunjukkan perilaku non Arrhenius,
terdegradasi oleh beberapa jalur dan jalur yang mungkin berbeda selama
tahap kehidupan rak yang berbeda, dan perubahan halus yang
disebabkan oleh tekanan besar atau kecil dapat memiliki efek besar pada
sifat terapeutik produk. Ada tantangan metodologi analitis yang berkaitan
dengan pemantauan stabilitas juga, khususnya varians dan kompleksitas
produk dan metodologi yang lebih tinggi. Protokol stabilitas harus
dirancang dengan mengingat idiosinkrasi ini serta formulasi, analitis,
manufaktur, dan pengetahuan pengaturan yang diperoleh selama
pengembangan.

11
 DAFTAR PUSTAKA

1. Mikkelsen SR, Cort´on E (2004) Bioanalytical Chemistry. Wiley

Interscience, Hoboken.
2. Jacob S, Shirwaikar AA, Srinivasan KK, Alex J, Prabu SL, Mahalaxmi
R, Kumar R (2006) Stability of proteins in aqueous solution and solid
state. Indian J Pharm Sci 68(2):154–163.
3. Chan H, Dill K (1998) Protein folding in the landscape perspective:
chevron plots and nonarrhenius kinetics. Proteins: Struct Funct Genet
30:2–33.
4. Collet O, Chipot C (2003) Non-arrhenius behavior the unfolding of a
short hydrophobic helix.complementarity ofmolecular dynamics and
latticemodel simulations.JAm Chem Soc 125:6573–6580.
5. Roberts CJ, Darrington RT, Whitley MB (2003) Irreversible
aggregation of recombinant bovine granulocyte-colony stimulating
factor (bG-CSF) and implications for predicting protein shelf life. J
Pharm Sci 92(5):1095–1111.
6. Pan B, Abel J, Ricci MS, Brems DN, Wang DIC, Trout BL (2006)
Comparative oxidation studies of methionine residues reflect a
structural effect of chemical kinetics in rhG-CSF. Biochemistry
45:15430–15443.
7. Yoshioka S, Aso Y, Izutsu K, Terao T (1994) Application of
accelerated testing to shelf-life prediction of commercial protein
preparations. J Pharm Sci 83(3):454–456.
8. Kerwin BA, Remmele RL (2007) Protect from light: photostability and
protein biologics. J Pharm Sci 96(6):1468–1479.
9. Mizutani, T (1981) Estimation of protein and drug adsorption onto
silicone-coated glass surfaces. J Pharm Sci 70(5):493–496.
10. Cohen S, Price C, Vlasak J (2007) β-Elimination and peptide bond
hydrolysis: two distinct mechanisms of human IgG1 hinge
fragmentation upon storage. JACS 129:6976–6977.
11. Cordoba AJ,ShyongB,BreenD,HarrisRJ(2005) Non-enzymatic hinge
region fragmentation of antibodies in solution. J Chrom B 818:115–
121. Werner R, Kopp K, Schlueter, M (2007) Glycosylation of
therapeutic proteins in different production systems. Acta Paediatr
Suppl 96(455):17–22.
12. WerneSJ,CreightonTE(1989) Effect ofproteinconformation
onrateofdeamidation:ribonuclease a. Proteins: Struct Funct Genet
5:8–12.

12
13. Tsai AM, Van Zanten JH, Betenbaugh MJ (1998) Study of protein
aggregation due to heat denaturation: a structural approach using
circular dichroism spectroscopy, nuclear magnetic resonance and
static light scattering. Biotechnol Bioeng 59:273–280.
14. Kendrick BS, Cleland JL, Lam X, Nguyen T, Randolph TW, Manning
MC, Carpenter JF (1998) Aggregation of recombinant human
interferon gamma: kinetics and structural transitions. J Pharm Sci
87(9):1069–1076.
15. Chi EY,Krishnam S, Randolph TW, Carpenter JF (2003) Physical
stability of proteins in aqueous solution: mechanism and driving forces
in nonnative protein aggregation. Pharm Res 20(9):1325–1336.
16. Li S, Sh¨oneich C, Borchardt, RT (1995) Chemical instability of protein
pharmaceuticals: mechanisms of oxidation and strategies for
stabilization. Biotechnol Bioeng 48:490–500.
17. Xie M, Schowen R, (1999) Secondary structure and protein
deamidation. J Pharm Sci 88(1): 8–13.
18. Luo D, Smith SW, Anderson BD (2005) Kinetics and mechanism of the
reaction of cysteine and hydrogen peroxide in aqueous solution. J
Pham Sci 94(2):304–316.
19. Cleland JL, Lam X, Kendrick B, Yang J, Yang T, Overcashier D,
Brooks D, Hsu C, Carpenter J (2001) A specific molar ratio of stabilizer
to protein is required for storage stability of a lyophilized monoclonal
antibody. J Pharm Sci 90(3):310–321.
20. Constantino HR, Carrasquillo, KG, Cordero RA, Mumenthaler M, Hsu
CC, Gribenow K(1998) Effect of excipients on the stability and
structure of lyophilized recombinant human growth hormone. J Pharm
Sci 87(11):1412–1420.
21. Lai MC, Topp EM (1999) Solid-state chemical stability of proteins and
peptides. J Pharm Sci 88(5):489–500.
22. LiS,Patapoff TW,Overcashier, D,HsuC,Nguyen TH,Borchardt
RT(1996) Effects ofreducing sugars on the chemical stability of human
relaxin in the lyophilized state. J Pharm Sci 85(8):873–877.
23. Kreilgaard L,Jones LS,Randolph TW,Frokjaer, Flink JM,Manning
MC,Carpenter JF(1998) Effect of tween 20 on freeze–thawing- and
agitation-induced aggregation of recombinant human factor XIII. J
Pharm Sci 87(12):1597–1603.
24. Jones LS, Kaufmann A, Middaugh CR (2005) Silicon oil induced
aggregation of proteins. J Pharm Sci 94(4):918–927.
25. PDA (Parenteral Drug Association) (2007) Technical report no.39,
Guidancefor temperaturecontrolled medicinal products: maintaining

13
 the quality of temperature-sensitive medicinal products through the
transportation environment.
26. The Gold Sheet, (September 2006) Global effort to control drug
temperature in transit heats up. 40(9):1–19.
27. Martin SWH, Mo J (2007) Stability considerations for lyophilized
biologics. Am Pharm Rev 10(4):31–36.
28. Carpenter JF, Randolph TW, Jiskoot W, Crommelin DJA, Middaugh
CR, Winter G, Fan YX, Kirshner S, Verthelyi D, Kozlowski S, Clouse
KA, Swann PG, Rosenberge A, Cherney B (2008) Overlooking
subvisible particles in therapeutic protein products: gaps that may
compromise product quality. J pharm sci (early view):1–5.
29. Fairweather WR,MoggR, Bennett PS, Zhong J,Morrisey C, Schofield
TL (2003) Monitoring the stability of human vaccines. J Biopharm Stat
13(3):395–413.
30. Schofield T, Apostol I, KoehlerG, Powers S, Stawicki M,WolfeR (2008)
A rational approach to setting and maintaining specifications for
biological and biotechnology-derived products. Biopharm International,
(July 2008): 1–4.

14