Ocing KKK

FRAKSINASI DAN IDENTIFIKASI KROMATOGRAFI KOLOM KONVENSIONAL
PADA FRAKSI N-HEKSAN : ETIL ASETAT EKSTRAK DAUN COKLAT(Theobroma

cacao L.)ASAL DESA SIMBANG KECAMATAN SIMBANG
KABUPATEN MAROS
BAB I
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Metode pemisahan merupakan aspek penting dalam bidang
kimia karena kebanyakan materi yang terdapat di alam berupa campuran.
Untuk memperoleh materi murni dari suatu campuran, harus dilakukan
pemisahan. Kromatografi kolom merupakan salah satu metode pemisahan
kromatografi konvensional yang bersejarah karena dari sinilah bermula
metode kromatografi.
Kromatografi kolom merupakan metode kromatografi klasik
yang masih digunakan. Kromatografi kolom digunakan untuk memisahkan
senyawa-senyawa dalam jumlah yang banyak berdasarkan absorbsi dan
partisi. Dalam kromatografi lapis tipis, fase diam adalah lapisan tipis sel
silika atau alumina pada sebuah lempengan gelas, logam atau plastik.
Kolom kromatografi bekerja berdasarkan skala lebih besar menggunakan
material terpadatkan pada sebuah kolom gelas vertikal.
Kolom biasanya dikemas dengan partikel fase diam yang kecil.
Fase gerak melewatinya dan membawa molekul-molekul sampel yang ada
didalamnya. Beberapa molekul meninggalkan kolom terlebih dahulu
dibandingkan molekul lainnya. Beberapamolekul ada yang meninggalkan
kolom belakangan disebabkan karena mengalami beberapa pengalihan
(diversi) selama perjalanannya.
INTAN PURNAMA SARI S.N NUR FADHILAH SYAHID

15020150246
KABUPATEN MAROS
B. Rumusan Masalah
Adapun rumusan masalah pada praktikum kali ini berapa jumlah
fraksi yang diperoleh dari metode Kromatografi Kolom Konvensional dan
warna apa saja yang diperoleh dari fraksi daun coklat (Theobroma cacao
L.) pada proses Kromatografi Kolom Konvensional
C. Maksud Praktikum
Adapun maksud dari praktikum kali ini yaitu untuk mengetahui dan
memahami penggunaan serta prinsip kerja kromatografi kolom
konvensional menggunakan fraksi halus dari daun coklat (Theobroma
cacao L.)
D. Tujuan Praktikum
Adapun tujuan dari praktikum ini adalah memisahkan senyawa
kimia fraksinasidaun coklat (Theobroma cacao L.)dengan menggunakan
metode kromatografi kolom konvensional berdasarkan intensitas warna
dan tingkat kepolaran.
E. Manfaat Praktikum
1. Manfaat umum
Adapun manfaat umum dari praktikum kali ini yaitu agar dapat
mengetahui cara memisahkan senyawa menggunakan metode
kromatografi kolom konvensional terhadap fraksi daun coklat
(Theobroma cacao L.).
2. Manfaat khusus

15020150246
KABUPATEN MAROS
Adapun manfaat khusus dari praktikum kali ini yaitu agar dapat
mengetahuicaramemisahkan senyawa menggunakan metode
kromatografi kolom konvensional terhadapfraksi daun coklat
(Theobroma cacao L.) dengan melihat intensitas warna yang
dihasilkan.
BAB II

15020150246
KABUPATEN MAROS
TINJAUAN PUSTAKA
A. Uraian Tanaman
1. Klasifikasi Tanaman (Integrated Taxonomic Information System :
2018)
Regnum : Plantae
Subkingdom : Viridiplantae
Infrakingdom : Sreptophyta
Superdivision : Embryophyta
Division : Tracheophyta
Subdivision : Spermatophytina
Class : Magnoliopsida
Superorder : Rosane
Order : Malvales
Family : Malvaceae
Genus : Theobroma L.
Spesies : Theobroma cacao L.
2. Nama Lain
Nama lain dari coklat adalah sikola (Bugis), kawi (Jawa)
(Prastowo, 2010).
3. Morfologi Tanaman
Tanaman kakao termasuk golongan tanaman tahunan yang
tergolong dalam kelompok tanaman caulofloris, yaitu tanaman yang
berbunga dan berbuah pada batang dan cabang. Tanaman ini pada

15020150246
KABUPATEN MAROS
garis besarnya dapat dibagi atas dua bagian, yaitu bagian vegetatif
yang meliputi akar, batang serta daun dan bagian generatif yang
meliputi bunga dan buah (Siregar at al., 1989).
a. Akar
Akar tanaman kakao mempunyai akar tunggang,
pertumbuhannya dapat mencapai 8 meter kearah samping dan 15
meter kearah bawah. Kakao yang diperbanyak secara vegetatif
pada awal pertumbuhannya tidak membentuk akar tunggang,
melainkan akar-akar serabut yang banyak jumlahnya. Setelah
dewasa tanaman tersebut akan membentuk dua akar jumlahnya.
Setelah dewasa tanaman tersebut akan membentuk dua akar
yang menyerupai akar tunggang. Pada kecambah yang telah
berumur 1 – 2 minggu terdapat akar-akar cabang (Radik lateralis)
yang merupakan tempat tumbuhnya akar-akar rambut (Fibrilla)
dengan jumlah yang cukup banyak. Pada bagian ujung akar ini
terdapat bulu akar yang dilindungi oleh tudung akar (Calyptra).
Bulu akar inilah yang berfungsi menyerap larutan dan garam-
garam tanah. Diameter bulu akar hanya 10 mikro dan panjang
maksimum hanya 1 milimeter.
b. Batang
Diawal pertumbuhannya tanaman kakao yang diperbanyak
dengan biji akan membentuk batang utama sebelum tumbuh
cabang-cabang primer. Letak pertumbuhan cabang-cabang primer

15020150246
KABUPATEN MAROS
disebut jorquette, dengan ketinggian yang ideal 1,2 – 1,5 meter
dari permukaan tanah dan jorquette ini tidak terdapat pada kakao
yang diperbanyak secara vegetatif. Ditinjau dari segi
pertumbuhannya, cabang-cabang pada tanaman kakao tumbuh
kearah atas dan samping. Cabang yang tumbuh kearah atas
disebut cabang Orthotrop dan cabang yang tumbuh kearah
samping disebut dengan Plagiotrop. Dari batang dan kedua jenis
cabang tersebut sering ditumbuhi tunas-tunas air (Chupon) yang
banyak menyerap energi, sehingga bila dibiarkan tumbuh akan
mengurangi pembungaan dan pembuahan (Siregar et al., 1989).
c. Bunga
Bunga kakao tergolong bunga sempurna, terdiri atas daun
kelopak (Calyx) sebanyak 5 helai dan benang sari ( Androecium)
berjumlah 10 helai. Diameter bunga 1,5 centimeter. Bunga
disangga oleh tangkai bunga yang panjangnya 2 – 4 centimeter
(Siregar et al., 1989).
Pembungaan kakao bersifat cauliflora dan ramiflora, artinya
bunga-bunga dan buah tumbuh melekat pada batang atau
cabang, dimana bunganya terdapat hanya sampai cabang
sekunder (Ginting, 1975).Tanaman kakao dalam keadaan normal
dapat menghasilkan bunga sebanyak 6000 – 10.000 pertahun
tetapi hanya sekitar lima persen yang dapat menjadi buah (Siregar
et al., 1989).

15020150246
KABUPATEN MAROS
d. Buah dan Biji
Buah kakao berupa buah buni yang daging bijinya sangat
lunak. Kulit buah mempunyai sepuluh alur dan tebalnya 1 – 2
centimeter (Siregar et al., 1989).
Bentuk, ukuran dan warna buah cacao bermacam-macam
serta panjangnya sekitar 10 – 30 centimeter, umumnya ada tiga
macam warna buah cacao, yaitu hijau muda sampai hijau tua,
waktu muda dan menjadi kuning setelah masak, warna merah
serta campuran antara merah dan hijau. Buah ini akan masak 5 –
6 bulan setelah terjadinya penyerbukan. Buah muda yang
ukurannya kurang dari 10 centimeter disebut cherelle (pentil).
Buah ini sering sekali mengalami pengeringan (cherellewilt)
sebagai gejala spesifik dari tanaman kakao. Gejala demikian
disebut physiological effect thinning, yakni adanya proses
fisiologis yang menyebabkan terhanbatnya penyaluran hara yang
menunjang pertumbuhan buah muda. Gejala tersebut dapat juga
dikarenakan adanya kompetisi energi antara vegetatif dan
generatif atau karena adanya pengurangan hormon yang
dibutuhkan untuk pertumbuhan buah muda (Siregar et al., 1989).
Biji kakao tidak mempunyai masa dormasi sehingga
penyimpanan biji untuk benih dengan waktu yang agak lama tidak
memungkinkan. Biji ini diselimuti oleh lapisan yang lunak dan
manis rasanya, jika telah masak lapisan tersebut pulp atau

15020150246
KABUPATEN MAROS
micilage. Pulp ini dapat menghambat perkecambahan dan
karenanya biji yang akan digunakan untuk menghindari dari
kerusakan biji dimana jika pulp ini tidak dibuang maka didalam
penyimpanan akan terjadi proses fermentasi sehingga dapat
merukkan biji.
4. Kandungan Kimia
Cokelat terbuat dari biji cacao yang kaya akan senyawa beraroma
bernama falovonoid, yang juga terdapat di daun teh, kebanyakan
buah-buahan dan sayur-sayuran. Sampai saat ini, lebih dari 4000
macam flavonoid yang telah diidentifikasikan. Tumbuh-tumbuhan
mensintesis senyawa yang dapat larut dalam air ini dari asam amino
phenylalanine dan asetat. Flavonoid berperan sebagai antioksida,
menetralkan efek-efek buruk dari radikal bebas yang dapat
menghancurkan sel-sel dan jaringan-jaringan tubuh. Satu setengah
ons batang cokelat hitam kira-kira memiliki 800 miligram antioksida,
kira-kira sama jumlahnya seperti yang terdapat di dalam secangkir teh
hitam. Karbohidrat yang dibentuk oleh senyawa kimia dalam cokelat
menghasilkan serotonin, yang membantu stimulasi otak sehingga kita
merasa santai dan tenang. Dengan mengonsumsi coklat, tubuh akan
menghasilkan antioksi dan yang membantu mencegah serangan
jantung dan mempertahankan daya tahan tubuh. Peneliti dari
Univeristy California menemukan kandungan senyawa flavan-3-ols

15020150246
KABUPATEN MAROS
dalam coklat yang terbukti dapat menurunkan risiko penyakit
kardiovaskular.
5 Khasiat Tanaman
Secara umum, kakao dianggap sumber kaya antioksidan seperti
procyanidins dan flavonoids, yang mungkin memberikan sifat
antipenuaan. Cacao juga mengandung tingkat tinggi flavonoid,
khususnya epicatechin yang mungkin memliki efek menguntungkan
pada kesehatan jantung.
B. Uraian Kromatografi Kolom Konvensional
Kromatografi merupakan suatu proses pemisahan yang mana
analit-analit dalam sampel terdistribusi antara 2 fase, yaitu fase diam dan
fase gerak. Fase diam dapat berupa bahan padat atau porus dalam
bentuk molekul kecil, atau dalam bentuk cairan yang dilapiskan pada
pendukung padat atau dilapiskan pada pendukung padat atau dilapiskan
pada dinding kolom. Fase gerak dapat berupa gas atau cairan (Rohman,
2009).
Saat ini kromatografi yang melibatkan kolom (tempat terdapatnya
fase diam seperti kromatografi cair kinerja tinggi dan kromatografi gas
digunakan secara lebih luas dibanding dengan kromatografi planar
(Rohman, 2009).
Kromatografi kolom konvensional adalah metode kromatografi
klasik yang sampai saat ini masih banyak digunakan. Kolom kromatografi
digunakan untuk memisahkan senyawa-senyawa dalam jumlah banyak.

15020150246
KABUPATEN MAROS
Prinsip dari kromatografi kolom jenis ini adalah kecenderungan komponen
kimia untuk terdistribusi ke dalam fase diam atau fase gerak dengan
proses elusi berdasarkan gaya gravitasi (Raymond et al, 2006).
Pada kromtografi kolom, campuran yang akan dipisahkan
diletakkan berupa pita pada bagian atas penjerap yang berada dalam
kolom kaca, logam atau bahkan plastic. Eluen (fase gerak) dibiarkan
mengalir melalui fase diam dalam kolom dan hanya disebabkan oleh gaya
gravitasi (Raymond et al, 2006).
Kolom kromatografi atau tabung untuk pengaloran karena gaya
tarik bumi (gravitasi) atau system bertekanan rendah biasanya terbuat dari
kaca yang dilengkapi dengan kran (Raymond et al, 2006).
Sebagian besar prinsip pemisahan kromatografi kolom didasarkan
pada afinitas kepolaran analite dengan fase diam, sedangkan fase gerak
selalu memiliki kepolaran yang berbeda dengan fase diam. Pada sebagian
besar kromatografi kolom menggunakan fase diam yang bersifat polar
dengan fase gerak yang non-polar dengan begitu waktu retensi akan
menjadi lebih singkat. Semakin cepat pergerakan fase gerak akan
meminimalkan waktu yang diperlukan untuk bergerak di sepanjang kolom.
Laju aliran kolom dapat ditingkatkan dengan memperluas aliran eluent di
dalam kolom dengan mengisi fase diam pada bagian bawah atau
dikurangi dengan mengontrol keran. Laju aliran yang lebih baik dapat
dicapai dengan menggunakan pompa atau dengan menggunakan gas

15020150246
KABUPATEN MAROS
dengan kompresi (misalnya udara,nitrogen, argon) untuk mendorong
pelarut melalui kolom (Sastrohamidjojo, 2005).
Kolomnya (tabung gelas) diisi dengan bahan seperti alumina, silika
gel atau pati yang dicampur dengan adsorben, dan pastanya diisikan
kedalam kolom. Larutan sampel kemudian diisikan kedalam kolom dari
atas sehingga sampel diasorbsi oleh adsorben. Kemudian pelarut (fasa
mobil; pembawa) ditambahkan tetes demi tetes dari atas kolom. Partisi zat
terlarut berlangsung di pelarut yang turun ke bawah (fasa mobil) dan
pelarut yang teradsorbsi oleh adsorben (fasa stationer). Selama
perjalanan turun, zat terlarut akan mengalami proses adsorpsi dan partisi
berulang-ulang (Sastrohamidjojo, 2005).
Aplikasi persiapan digunakan untuk menentukan jumlah komponen
campuran digunakan untuk memisahkan dan purifikasi substansi.
Kerugian kromatografi kolom yaitu untuk mempersiapkan kolom
dibutuhkan kemampuan teknik dan manual, metode ini sangat
membutuhkan waktu yang lama (time consuming) (Rohman, 2009).

15020150246
KABUPATEN MAROS
BAB III
METODE PRAKTIKUM
A. Alat dan Bahan
1. Alat
Adapun alat yang digunakan adalah batang pengaduk, botol UC,
cawan porselin, corong kaca, gelas kimia, klem, kolom konvensional,
statif, timbangan analitik dan vial.
2. Bahan
Adapun bahan yang digunakan adalah aluminium foil, eluen (n-
heksan : etil asetat), fraksidaun coklat (Theobroma cacao L.), kapas,
kertas saring, silica gel, dan tisu.
B. Prosedur Kerja (Najib, A & Malik. A, 2018)
1. Penyiapan Alat Isolasi
Kolom dipasangkan tegak lurus pada statif, kemudian
dibebas lemakkan dengan cara dibilas menggunakan metanol.
Setelah itu bagian dasar kolom dilapisi kapas, kertas saring dan
silika dan siap untuk digunakan.
2. Pengemasan Silika
Silika halus ditimbang berdasarkan perbandingan 1 gram
ekstrak; 30 gram silica gel. Dalam praktikum inipengemasan fase

15020150246
KABUPATEN MAROS
diam menggunakan metode kering dimana silika halus dimasukkan
ke dalam kolom kemudian dimampatkan dengan eluen (n-heksan
:etil asetat) atau diketuk-ketuk sampai tidak terbentuk gelembung
udara.
3. Penyiapan Fraksi
Ekstrak daun coklat (Theobroma cacao L.), ditimbang
sebanyak 1 gram lalu dimasukkan pada cawan porselin dan
dilarutkan.
4. Proses Pemisahan / Isolasi
Silika halus ditimbang berdasarkan perbandingan 1 gram
ekstrak : 30 gram silika gel dan dikemas dengan metode kering
digunakan eluen (n-heksan : etil asetat) dengan perbandingan 10:0
dalam 50 mL, selapis diatas permukaan kertas saring selanjutnya
dielusi sampai menghasilkan fraksi-fraksi dan ditampung dalam
vial. Eluen yang sebelumnya telah habis diganti dengan eluen 10:0,
9:1, kemudian secara berturut dilanjutkan dengan eluen
perbangingan 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8, 1:9 dan 0:10.
Kemudian hasil isolasi ditampung pada masing-masing vial yang
telah dikalibrasi sebanyak 5 mL. Diamati warna yang dihasilkan dan
dipisahkan sesuai perbandingan eluen yang digunakan.

15020150246
KABUPATEN MAROS
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari praktikum Kromatografi Kolom Konvensional didapatkan hasil
sebagai berikut :
1. Table fraksi dibedakan berdasarkan eluen
No. Fase gerak ( eluen ) Fraksi
1. n-heksan (10) : etil asetat (0) Fraksi 1 (1 – 10)
2. n-heksan (9) : etil asetat (1) Fraksi 2 (11-19)

15020150246
KABUPATEN MAROS
2. T
No. Fraksi Warna Nomor Vial
abl
1. Fraksi 1 Bening 1-10,11,13,15- e
18,21,22,25-28 fra
ksi
2. Fraksi 2 Agak keruh 12,14
dib
3. Fraksi 3 Keruh 23, 24 ed
ak
4. Fraksi 4 Agak kuning 19,20,100-104
an
5. Fraksi 5 Kuning 65-67,79-94
ber
6. Fraksi 6 Kuning pekat 96-99,105 da
sar
7. Fraksi 7 Hijau kekuningan 40,68-69,70,78
ka
8. Fraksi 8 Hijau lumut 64
n
9. Fraksi 9 Hijau pekat wa
rna
10. Fraksi 10 Coklat 29,35-39
11. Fraksi 11 Hijau kehitaman 45-57

15020150246
KABUPATEN MAROS
B. Pembahasan
Kromatografi kolom adalah suatu metode yang sederhana dan
masih sering digunakan dimana prinsipnya yaitu adsorbsi, partisi dan
gravitasi.
Kromatografi kolom konvensional merupakan metode kromatografi
proses elusi berdasarkan gaya gravitasi
Pada praktikum kromatografi kolom konvensional dilakukan
percobaan identiikasi sampel ekstrak daun coklat (Theobroma cacao L.)
yang dilakukan dengan metode kering
Tujuan percobaan ini yaitu tentang mengidentifikasi suatu zat yang
berkhasiat dari ekstrak daun coklat (Theobroma cacao L) dengan
menggunakan kromotografi kolom konvensional.
Prinsip dari kromatografi kolom jenis ini adalah kecenderungan
komponen kimia untuk terdistribusi ke dalam fase diam atau fase gerak
dengan proses elusi berdasarkan gaya gravitasi. Kolom kromatografi atau
tabung untuk pengaloran karena gaya tarik bumi (gravitasi) atau system
bertekanan rendah biasanya terbuat dari kaca yang dilengkapi dengan
kran.

15020150246
KABUPATEN MAROS
Pada percobaan ini digunakan eluen dengan tingkat kepolaran
yang rendah terlebih dahulu sampai yang tinggi kepolarannya karena jika
yang dimasukkan terlebih dahulu adalah pelarut polar maka ditakutkan
senyawa non polar pada sampel akan tertarik juga sementara kita akan
melakukan proses pemisahan antara senyawa polar dan nonpolar. Dan
pada akhir dari proses isolasi tidak ada lagi senyawa non polar yang akan
ditarik jika pelarut non polar digunakan lebih akhir. Adapun alasan pada
kromatogarfi kolom digunakan kolom dengan adsorben sillika gel karena
kolom yang dibentuk dengan silika gel memiliki tekstur dan struktur yang
lebih kompak dan teratur. Silika gel memadat dalam bentuk tetrahedral
raksasa, sehingga ikatannya kuat dan rapat. Dengan demikian, adsorben
silika gel mampu menghasilkan proses pemisahan yang lebih optimal.Silica gel
dapat membentuk ikatan hidrogen di permukaannya, karena pada permukaannya
terikat gugus hidroksil. Oleh karenanya, silica gelsifatnya sangat polar.
Sementara itu, fasa gerak yang digunakan sifatnya non-polar. Apabila digunakan
lebih dari satu jenis fase diam senyawa yang akan keluar dikhawatirkan akan
sangat lama tertahan pada kolom. Sampel atau fraksi yang turun itu sesuai
dengan kepolaran pelarut yang digunakan. Bila pelarut yang digunakan adalah n-
heksana (non polar)
Adapun prosedur kerja dari percobaan ini yaitu silika halus ditimbang
berdasarkan perbandingan 1 gram ekstrak : 30 gram silika gel dan
dikemas dengan metode kering digunakan eluen (n-heksan : etil asetat)
dengan perbandingan 10:0 dalam 50 mL, selapis diatas permukaan kertas
saring selanjutnya dielusi sampai menghasilkan fraksi-fraksi dan

15020150246
KABUPATEN MAROS
ditampung dalam vial. Eluen yang sebelumnya telah habis diganti dengan
eluen 9:1, kemudian secara berturut dilanjutkan dengan eluen
perbangingan 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8, 1:9 dan 0:10. Kemudian hasil
isolasi ditampung pada masing-masing vial yang telah dikalibrasi
sebanyak 5 mL. Diamati warna yang dihasilkan dan dipisahkan sesuai
perbandingan eluen yang digunakan.
Adapun hasil berdasarkan eluen yang di dapat pada percobaan ini
adalah pada eluen n-heksan (10) : etil asetat (0) menghasilkan fraksi 1 (1-
10); eluen n-heksan (9) : etil asetat (1) menghasilkan fraksi 2 (11-19); n-
heksan (8) : etil asetat (2) menghasilkan fraksi 3 (20-34); n-heksan (7) :
etil asetat (3) menghasilkan fraksi 4 (34-43); n-heksan (6) : etil asetat (4)
menghasilkan fraksi 5 (44-52); n-heksan (5) : etil asetat (5) menghasilkan
fraksi 6 (53-62); n-heksan (4) : etil asetat (6) menghasilkan fraksi 7 (63-
73); n-heksan (3) : etil asetat (7) menghasilkan fraksi 8 (74-82); n-heksan
(2) : etil asetat (1) menghasilkan fraksi 9 (83-90); n-heksan (1) : etil asetat
(9) menghasilkan fraksi 10 (91-98); n-heksan (0) : etil asetat (10)
menghasilkan fraksi 11 (99-105).
Adapun hasil berdasarkan warna perbandingan fraksi 1 adalah
berwarna bening pada vial no 1-10,11-13, 15-18, 21, 22, 25-28;
perbandingan fraksi 2 adalah berwarna agak keruh pada vial no 12-14 ;
perbandingan fraksi 3 adalah berwarna keruh pada vial no 23,24;
perbandingan fraksi 4 adalah berwarna agak kuning pada vial no
19,20,100-104; perbandingan fraksi 5 adalah berwarna kuning pada vial

15020150246
KABUPATEN MAROS
no 65-67, 79-94; perbandingan fraksi 6 adalah berwarna kuning pekat
pada vial no 96-99,105; perbandingan fraksi 7 adalah berwarna hijau
kehijauan pada vial no 40,68-69,70,78; perbandingan fraksi 8 adalah
berwarna hijau lumut pada vial no 64; perbandingan fraksi 9 adalah
berwarna hijau pekat pada vial no 30; perbandingan fraksi 10 adalah
berwarna coklat pada vial no 29, 35-39; perbandingan fraksi 11 adalah
berwarna hijau kehitaman pada vial no 45-57.
Dari hasil pemisahan dengan kromatografi kolom konvensional
diperoleh sebanyak 105 fraksi yang dipisahkan berdasarkan perbandingan
eluen dan fraksi dipisahkkan berdasarkan warna yang dihasilkan, pada
percobaan ini dihasilkan 11 perubahan warna. Dimana jika semakin
terang warna yang terlihat maka semakin polar dan sebaliknya semakin
pudar warna yang dihasilkan maka fraksi juga kurang polar.
Adapun kelebihan dari kromatografi kolom konvensional adalah
dapat digunakan untuk analisis dan aplikasi preparative, digunakan untuk
menentukan jumlah komponen campuran, digunakan untuk memisahkan
dan purifikasi substansi, dan kekurangannya adalah untuk
mempersiapkan kolom dibutuhkan kemampuan teknik dan manual dan
metode ini sangat membutuhkan waktu yang lama (time consuming)

15020150246
KABUPATEN MAROS
BAB V
PENUTUP
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan pada estrak daun
coklat (Theobroma cacao L.)dapat disimpulkan bahwa dari hasil
kromatografi kolom konvensional ini diperoleh hasil sebanyak 11 fraksi
berdasarkan eluen dan sebanyak 13 fraksi berdasarkan warna.
B. Saran
Sebaiknya dalam pengerjaan para praktiken harus lebih teliti agar
tidak terjadi kesalahan dalam praktikum.

15020150246
KABUPATEN MAROS
SKEMA KERJA
Kolom disiapkan dan dipasang pada statif
Masukkan kapas kedalam kolom
Tambahkan kertas saring
Tambahkan silica gel sebanyak 30 gr
Tambahkan eluen
Tambahkan kertas saring
Tambahkan sampel
Ditampung didalam vial yang telah dikalibrasi
(diatur berdasarkan warna dan kepekatan)
DAFTAR PUSTAKA

15020150246
KABUPATEN MAROS
Anonim, 2017, Penuntun dan Buku Kerja Praktikum Fitokima 2, Fakultas
Farmasi Universitas Muslim Indonesia, Makassar.
Raymond G. Reid and Satyajit D. sarker., 2006, Isolation of Natural

Products by Low-Pressure Column Chromatography, In sarker,
Sd., Latif, Z., and Gray, Al. (Ed). Natural Products Isolation.
Humana Press Inc. Totowa, New Jersey
Rohman, Abdul., 2009, Kromatografi untuk Analisis Obat, Graha Ilmu,

Jakarta.
Sastrohamidjojo, 2005, CaraMengidentifikasiFlavonoid, Bandung,

PenerbitITB.
Siregar, Tumpal., Slamet Riyadi., Laeli Nuraeni, 1989, Budidaya,

pengolahan, dan pemasaran Cokelat, Penebar Swadaya,
Jakarta.
Tjitrosoepomo, G., 1998, Taksonomi Umum: Dasar- Dasar Taksonomi

Tumbuhan, Gadjah Mada University Press, Hal. 150-154,
Yogyakarta.
Lampiran 1. Gambar

15020150246
KABUPATEN MAROS

15020150246
KABUPATEN MAROS

15020150246
KABUPATEN MAROS
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari praktikum Kromatografi Kolom Konvensional didapatkan hasil
sebagai berikut :
3. Table fraksi dibedakan berdasarkan eluen
No. Fase gerak ( eluen ) Fraksi
1. n-heksan (10) : etil asetat (0) Fraksi (1 – 10)

15020150246
KABUPATEN MAROS

15020150246
KABUPATEN MAROS
4. T
No. Fraksi Warna Nomor Vial
abl
1. Fraksi 1 Bening 1-10,11,13,15- e
18,21,22,25-28 fra
ksi
2. Fraksi 2 Agak keruh 12,14
dib
3. Fraksi 3 Keruh 23, 24 ed
ak
4. Fraksi 4 Agak kuning 19,20,100-104
an
5. Fraksi 5 Kuning 65-67,79-94
ber
6. Fraksi 6 Kuning pekat 96-99,105 da
sar
7. Fraksi 7 Hijau kekuningan 40,68-69,70,78
ka
8. Fraksi 8 Hijau lumut 64
n
9. Fraksi 9 Hijau pekat wa
rna
10. Fraksi 10 Coklat 29,35-39
11. Fraksi 11 Hijau kehitaman 45-57

15020150246
KABUPATEN MAROS
Kromatografi merupakan suatu proses pemisahan yang mana
analit-analit dalam sampel terdistribusi antara 2 fase, yaitu fas diam dan
fase gerak. Fase diam dapat berupa bahan padat atau porus dalam
bentuk molekul kecil, atau dalam bentuk cairan yang dilapiskan pada
pendukung padat atau dilapiskan pada pendukung padat atau dilapiskan
pada dinding kolom. Fase gerak dapat berupa gas atau cairan
Kromatografi kolom konvensional adalah metode kromatografi
proses elusi berdasarkan gaya gravitasi. Pada kromatografi kolom ini
diperoleh beberapa fraksi yang di tampung dalam vial berdasarkan warna
yang dihasilkan dari beberapa perbandingan eluen yang digunakan.
Tujuan dilakukannya percobaan kali ini adalah untuk memisahkan
campuran senyawa dalamdaun coklat (Theobroma cacao L.)dengan
metode kromatografi kolom.
Pada percobaan ini dilakukan identifikasi sampel ekstrak daun
coklat (Theobroma cacao L.) dengan metode kromatografi kolom
konvensional. Dimana metode ini dapat memisahkan suatu komponen
kimia dan suatu sampel dalam jumlah yang banyak.
Kakao (Theobroma cacao L.) merupakan salah satu tanaman
perkebunan yang dikembangkan untuk peningkatan sumber devisa

15020150246
KABUPATEN MAROS
negara dari sektor nonmigas. Indonesia merupakan daerah tropis yang
mempunyai potensi baik untuk pengembangan kakao.
Prinsip kerja kromatografi kolom adalah dengan adanya perbedaan
daya serap dari masing-masing komponen, campuran yang akan diuji,
dilarutkan dalam sedikit pelarut lalu di masukan lewat puncak kolom dan
dibiarkan mengalir kedalam zat menyerap. Senyawa yang lebih polar akan
terserap lebih kuat sehingga turun lebih lambat dari senyawa non polar
terserap lebih lemah dan turun lebih cepat. Zat yang di serap dari larutan
secara sempurna oleh bahan penyerap berupa pita sempit pada kolom.
Pelarut lebih lanjut / dengan tanpa tekanan udara masin-masing zat akan
bergerak turun dengan kecepatan khusus sehingga terjadi pemisahan
dalam kolom
Kolom biasanya dikemas dengan partikel fase diam yang kecil.
Fase gerak melewatinya dan membawa molekul-molekul sampel yang ada
didalamnya. Beberapa molekul meninggalkan kolom terlebih dahulu
dibandingkan molekul lainnya. Beberapa molekul ada yang meninggalkan
kolom belakangan disebabkan karena mengalami beberapa pengalihan
(diversi) selama perjalanannya.
Pada percobaan ini digunakan metode kering, metode ini dilakukan
dengan cara silika gel langsung di masukkan kedalam kolom yang telah
berisi kapas kemudian diatasnya diletakkan kertas saring yang telah
digunting sesuai dengan ukuran kolom tersebut.

15020150246
KABUPATEN MAROS
Pada Praktikum Kromatografi kolom, dilakukan dengan
menggunakan 11 perbandingan eluen n-heksan: etil asetat, yaitu (10 : 0)
sampai 0:10. Adapun alasan dari penggunaan eluen dari tingkat kepolaran
yang rendah (kurang polar) terlebih dahulu ke dalam kolom yaitu karena
jika yang dimasukkan pelarut polar terlebih dahulu maka dikhawatirkan
senyawa non polar yang ada pada sampel akan tertarik juga sementara
yang kita inginkan yaitu melakukan proses pemisahan antara senyawa
polar dan nonpolar. Dan pada akhir dari proses isolasi ini tidak ada lagi
senyawa non polar yang akan tertarik jika pelarut non polar digunakan di
akhir.
Setelah itu silika dimasukkan kedalam kolom kemudian dimasukkan
lagi kertas saring, lalu masukkan fraksidaun coklat (Theobroma cacao L.).
Kemudian eluen n-heksan : etil asetat dimasukkan ke dalam kolom mulai
dari kepolaran terrendah hingga kepolaran tinggi (10:0, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4,
5:5, 4:6, 7:3, 8:2, 1:9, dan 0:10). Kemudian hasil isolasi tersebut
ditampung pada masing-masing vial yang telah dikalibrasi sebanyak 5 mL.
Adapun hasil yang di dapat pada percobaan ini adalah pada
perbandingan fraksi 1 adalah berwarna bening pada vial no 1-10,11-13,
15-18, 21, 22, 25-28; perbandingan fraksi 2 adalah berwarna agak keruh
pada vial no 12-14 ; perbandingan fraksi 3 adalah berwarna keruh pada
vial no 23,24; perbandingan fraksi 4 adalah berwarna agak kuning pada
vial no 19,20,100-104; perbandingan fraksi 5 adalah berwarna kuning
pada vial no 65-67, 79-94; perbandingan fraksi 6 adalah berwarna kuning

15020150246
KABUPATEN MAROS
pekat pada vial no 96-99,105; perbandingan fraksi 7 adalah berwarna
hijau kehijauan pada vial no 40,68-69,70,78; perbandingan fraksi 8
adalah berwarna hijau lumut pada vial no 64; perbandingan fraksi 9
adalah berwarna hijau pekat pada vial no 30; perbandingan fraksi 10
adalah berwarna coklat pada vial no 29, 35-39; perbandingan fraksi 11
adalah berwarna hijau kehitaman pada vial no 45-57.
Dari hasil pemisahan dengan kromatografi kolom konvensional
diperoleh sebanyak 105 fraksi yang dipisahkan berdasarkan perbandingan
eluen dan fraksi dipisahkkan berdasarkan warna yang dihasilkan, pada
percobaan ini dihasilkan 11 perubahan warna. Dimana jika semakin
terang warna yang terlihat maka semakin polar dan sebaliknya semakin
pudar warna yang dihasilkan maka fraksi juga kurang polar.
Pada kromatografi kolom konvensional mempunyai kelebihanyaitu
dapat digunakan untuk analisis dan aplikasi preparative, digunakan untuk
menentukan jumlah komponen campuran, digunakan untuk memisahkan
dan purifikasi substansi. Kekurangan yaituuntuk mempersiapkan kolom
dibutuhkan kemampuan teknik dan manual dan metode ini sangat
membutuhkan waktu yang lama (time consuming).

15020150246
KABUPATEN MAROS
BAB V
KESIMPULAN & SARAN
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil praktikum yang telah dilakukan pada estrak daun
coklat (Theobroma cacao L.)dapat disimpulkan bahwa dari hasil
kromatografi kolom konvensional ini diperoleh hasil sebanyak 11 fraksi
berdasarkan eluen dan sebanyak 13 fraksi berdasarkan warna.
B. Saran
Diharapkan kepada laboratorium agar menyediakan pereaksi yang
sesuai untuk pengerjaan sehingga hasil yang diperoleh juga maksimal
dan sesuai dengan literatur yang ada dan untuk asisten diharapkan
untuk selalu mendampingi praktikan hingga selesai agar tidak terjadi
kekesalahan pada saat melakukan percobaan.

15020150246
KABUPATEN MAROS
LAMPIRAN
Lampiran 1. Skema Kerja Praktikum

Metode Kering
Siapkan alat dan bahan
Pasangkan kolom pada statif kemudian diklem
Masukkan kapas pada bagian bawah kolom, lalu masukkan kertas

saring yang telah dipotong sesuai kolom
Masukkan silica halus sebanyak 30 gram ke dalam kolom kemudian

lapisi denga kertas saring
Masukan 1 gram ekstrak, kemudian tambahkan eluen (n-heksan : etil

asetat) dengan perbandingan 10:0
Dielusi sampai menghasilkan fraksi-fraksi dan ditampung dalam vial
Eluen yang sebelumnya telah habis dengan eluen10:0, 9:1, di ganti

eluen kemudian berturut-turut dilanjutkan dengan perbandingan 8:2,
7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8, 1:9 dan 0:10
Fraksi ditampung pada masing-masing vial yang telah dikalibrasi

sebanyak 5 mL
Diamati kemudian dipisahkan fraksi sesuai perbandingan eluen yang

digunakan dan fraksi dipisahkan sesuai warna.

15020150246
KABUPATEN MAROS

15020150246

Ocing KKK

Diunggah oleh

Informasi Dokumen

Deskripsi Asli:

Judul Asli

Hak Cipta

Format Tersedia

Bagikan dokumen Ini

Bagikan atau Tanam Dokumen

Opsi Berbagi

Apakah menurut Anda dokumen ini bermanfaat?

Apakah konten ini tidak pantas?

Hak Cipta:

Format Tersedia

Ocing KKK

Diunggah oleh

Hak Cipta:

Format Tersedia

FRAKSINASI DAN IDENTIFIKASI KROMATOGRAFI KOLOM KONVENSIONAL

PADA FRAKSI N-HEKSAN : ETIL ASETAT EKSTRAK DAUN COKLAT(Theobroma

Metode pemisahan merupakan aspek penting dalam bidang

kimia karena kebanyakan materi yang terdapat di alam berupa campuran.

Untuk memperoleh materi murni dari suatu campuran, harus dilakukan

pemisahan. Kromatografi kolom merupakan salah satu metode pemisahan

kromatografi konvensional yang bersejarah karena dari sinilah bermula

Kromatografi kolom merupakan metode kromatografi klasik

yang masih digunakan. Kromatografi kolom digunakan untuk memisahkan

senyawa-senyawa dalam jumlah yang banyak berdasarkan absorbsi dan

Kolom kromatografi bekerja berdasarkan skala lebih besar menggunakan

material terpadatkan pada sebuah kolom gelas vertikal.

Kolom biasanya dikemas dengan partikel fase diam yang kecil.

Fase gerak melewatinya dan membawa molekul-molekul sampel yang ada

didalamnya. Beberapa molekul meninggalkan kolom terlebih dahulu

dibandingkan molekul lainnya. Beberapamolekul ada yang meninggalkan

kolom belakangan disebabkan karena mengalami beberapa pengalihan

(diversi) selama perjalanannya.

INTAN PURNAMA SARI S.N NUR FADHILAH SYAHID

Adapun rumusan masalah pada praktikum kali ini berapa jumlah

fraksi yang diperoleh dari metode Kromatografi Kolom Konvensional dan

L.) pada proses Kromatografi Kolom Konvensional

memahami penggunaan serta prinsip kerja kromatografi kolom

konvensional menggunakan fraksi halus dari daun coklat (Theobroma

Adapun tujuan dari praktikum ini adalah memisahkan senyawa

kimia fraksinasidaun coklat (Theobroma cacao L.)dengan menggunakan

metode kromatografi kolom konvensional berdasarkan intensitas warna

dan tingkat kepolaran.

mengetahui cara memisahkan senyawa menggunakan metode

kromatografi kolom konvensional terhadap fraksi daun coklat

(Theobroma cacao L.).

INTAN PURNAMA SARI S.N NUR FADHILAH SYAHID

mengetahuicaramemisahkan senyawa menggunakan metode

kromatografi kolom konvensional terhadapfraksi daun coklat

(Theobroma cacao L.) dengan melihat intensitas warna yang

INTAN PURNAMA SARI S.N NUR FADHILAH SYAHID

1. Klasifikasi Tanaman (Integrated Taxonomic Information System :

Spesies : Theobroma cacao L.

Nama lain dari coklat adalah sikola (Bugis), kawi (Jawa)

Tanaman kakao termasuk golongan tanaman tahunan yang

tergolong dalam kelompok tanaman caulofloris, yaitu tanaman yang

INTAN PURNAMA SARI S.N NUR FADHILAH SYAHID

meliputi bunga dan buah (Siregar at al., 1989).

Akar tanaman kakao mempunyai akar tunggang,

pertumbuhannya dapat mencapai 8 meter kearah samping dan 15

meter kearah bawah. Kakao yang diperbanyak secara vegetatif

pada awal pertumbuhannya tidak membentuk akar tunggang,

melainkan akar-akar serabut yang banyak jumlahnya. Setelah

dewasa tanaman tersebut akan membentuk dua akar jumlahnya.

Setelah dewasa tanaman tersebut akan membentuk dua akar

yang menyerupai akar tunggang. Pada kecambah yang telah

berumur 1 – 2 minggu terdapat akar-akar cabang (Radik lateralis)

yang merupakan tempat tumbuhnya akar-akar rambut (Fibrilla)

terdapat bulu akar yang dilindungi oleh tudung akar (Calyptra).

Bulu akar inilah yang berfungsi menyerap larutan dan garam-

garam tanah. Diameter bulu akar hanya 10 mikro dan panjang

maksimum hanya 1 milimeter.

Diawal pertumbuhannya tanaman kakao yang diperbanyak

dengan biji akan membentuk batang utama sebelum tumbuh

cabang-cabang primer. Letak pertumbuhan cabang-cabang primer

INTAN PURNAMA SARI S.N NUR FADHILAH SYAHID

yang diperbanyak secara vegetatif. Ditinjau dari segi