TEORI DASAR PENENTUAN TETAPAN KROMATOGRAFI RM

 Nilai logaritma koefisien partisi (log P s!at! sen"a#a $apat $itent!kan se%ara
 per%o&aan $engan per'it!ngan teoritis %ara ans%)F!*ita+ %ara Rekker+ $an $an %ara ans%),eo-
a- Penent!an Nilai ,ogaritma Koefisien Partisi se%ara Per%o&aan
S!ta! sen"a#a $apat lar!t $alam $!a pelar!t "ang ti$ak saling &er%amp!r maka sen"a#a
akan ter$istri&!si ke$alam fasa polar $an fasa non polar- Setela' ter%apai kesetim&angan
tern"ata
tern"ata ka$ar sen"a#a $alam ke$!a
ke$!a pelar!t
pelar!t terse&!t
terse&!t selal! tetap se'ingga
se'ingga $apat $itent!kan
$itent!kan
nilai koefisien partisi- Koefisien partisi a$ala' tetapan kesetim&angan
kesetim&angan s!at! sen"a#a
sen"a#a $alam
sistem pelar!t polar $an non polar+ "ang se%ara logaritma &er'!&!ngan $engan energi &e&as-
Koefisien partisi (P $apat $i'it!ng melal!i persamaan .
P / 0O1023
02 . Ka$ar pelar!t o&at $alam air (pelar!t polar
0O . Ka$ar pelar!t o&at $alam mi"ak
mi"ak (pelar!t non polar
4ila ti$ak a$a interaksi antara 5at $an pelar!t+ maka .
0O / 0m ) 0#
0m . Ka$ar 5at m!la)m!la
Unt!k sen"a#a "ang terionisasi+ pengar!' $era*at ionisasi (3 ti$ak &ole' $ia&aikan-
P / 0o 1 0# (6)3
 Nilai P sen"a#a sangat &er7ariasi $engan *arak "ang"ang sangat &esar+ !nt!k mem!$a'kan
mem!$a'kan
 per'it!ngan &iasan"a $ig!nakan $alam &ent!k
&ent!k logaritman"a (log P+ se'ingga .
log P / log 0o 8 log 0#
Unt!k sen"a#a "ang terionisasi+
log P / log 0o 8 log 0# (6)3
Unt!k meng'it!ng nilai 3+ $apat $i%ari melal!i persamaan Henderson-Hasselbach
persamaan  Henderson-Hasselbach se&agai
 &erik!t .
 p / pKa 9 log 0610!

0! / 6)3+ 0 6 / 3
 pKa / tetapan ionisasi
0! / ka$ar &ent!k molek!l sen"a#a 1 &ent!k "ang ti$ak terionisasi
06 / ka$ar sen"a#a "ang terionisasi

al 8 'al "ang 'ar!s $iper'atikan $alam penent!an koefisien partisi a$ala' .
6- Sen"a#a+ pelar!t non polar $an $apar "ang $ig!nakan 'ar!s memp!n"ai kem!rnian "ang
tinggi-
:- Meto$e penetapan ka$ar sen"a#a 'ar!s memp!n"ai ketelitian "ang tinggi+ pa$a !m!mn"a
a$ala' $engan meto$e spektrofotometri U;-
<- Pela
Pelar!
r!tt polar
polar++ non
non pola
polarr $an
$an $apa
$aparr "ang
"ang $ig!
$ig!na
naka
kann 'ar!
'ar!ss s!$a
s!$a'' salin
saling
g $i*en
$i*en!'
!'ka
kan-
n-
Pen*en!'an $ilak!kan $engan menggo*ok ke$!a pelar!t "ang ti$ak saling &er%amp!r $an
$i$iamkan semalam+ kem!$ian $ipisa'kan-
=- Sen"a#a $ilar!tkan $alam pelar!t "ang le&i' m!$a' melar!tkan-
>- Sen"a#a
Sen"a#a $igo*ok
$igo*ok $engan tangan+
tangan+ $alam &otol go*ok selama >)6> menit- Pemisa'an pelar!t
 polar $an non polar $ilak!kan $engan %ara $isentrif!ge pa$a :??? rpm selama 6 *am+ ata!
$i$iamkan selama semalam-
@- 4atas peng!k!ran log P antara )< $an 9<+ $il!ar &atas terse&!t kem!ngkinan ter*a$in"a
kesala'an peng!k!ran %!k!p &esar-

 &- Penent!an Nilai ,ogaritma Koefisien Partisi Teoritis

Teoritis 0ara ans%')F!*ita
 Hansch $an Fujita (6@= memperkenalkan s!at! tetapan parameter lipofilik B $ari s!at!
s!&tit!en &er$asarkan koefisien partisi $alam sistem pelar!t 6)oktanol1air+ "ang $i$apatkan
melal!i persamaan se&agai &erik!t .
B
C / log P S) log P S
B
C . tetapan $!k!ngan g!g!s  trr'a$ap sifat kelar!tan sen"a#a sen"a#a in$!k $alam sistem pelar!t 6) 6)
oktanol1air-
PS . koefisien partisi sistem 6)oktanol1air sen"a#a in$!k "ang ters!&tit!si g!g!s -
PS . koefisien partisi sistem 6)oktanol1air sen"a#a in$!k-
Men!r!t ans%'+ nilai B $ari g!g!s)g!g!s $apat $i'it!ng se%ara a$itif $engan s"arat ti$ak
a$a interaksi antara
antar a g!g!s+ se'ingga '!&!ngan nilai log P sen"a#a $engan nilai B g!g!s)
g!g!s $apat $in"atakan melal!li persamaan se&agai &erik!t .
%- Penent!an Nilai ,ogaritma Koefisien Partisi Teoritis 0ara Rekker 
Nys $an Rekker  (6<+ memperkenalkan tetapan fragmentasi 'i$rofo&ik (f $ari g!g!s ata!
atom $alam s!at! molek!l "ang $apat $ig!nakan !nt!k meng'it!ng nilai log P melal!i
 persamaan &erik!t .
log P / a nf n
a . *!mla' fragmen ata! g!g!s $alam str!kt!r 
f . tetapan fragmentasi 'i$rofo&ik 
Pa$a
Pa$a per'it
per'it!ng
!ngan
an nilai
nilai log P sen"a#a
sen"a#a $engan
$engan str!kt!
str!kt!rr molek!
molek!ll "ang
"ang komple
kompleksks $engan
$engan
mengg!
mengg!nak nakan
an pen$ek
pen$ekata
atan
n N"s)Re
N"s)Rekkekkerr perl!
perl! $iper'
$iper'atik
atikan
an a$an"
a$an"aa efek $ekatan
$ekatan $engan
$engan
mengg!nakan tetapan a*ai& (magic( magic constant = %M karena a$an"a pengar!' pemisa'an g!g!s)
g!g!s elektronegatif+ a$an"a kon*!gasi+ kon$ensasi aromatik+ ikatan 'i$rogen $an faktor 
keelktronegatifan "ang lain- Nilai % M !nt!k faktor koreksi / ?-:
log P /  f 9  kn - % M
(key number ) . kelipatan % M "ang terkait $engan str!kt!r sen"a#a "ang $iteliti-
kn (key
Kek!
Kek!ra rang
ngan
an per'
per'it
it!n
!nga
gann log
log P mo$emo$ell N"s)
N"s)Re
Rekk kker
er anta
antara
ra lain
lain a$al
a$ala'
a' ti$a
ti$akk $apa
$apatt
$i'!&!ngkann"a faktor koreksi )?+=@ !nt!k atom elektronegatif "ang terikat pa$a sisi alkil
 &esar $engan faktor %M $an ti$ak ter$apat '!&!ngan "ang &ermakna nilai log P per%o&aan
$engan
$engan nilai
nilai log P per'it
per'it!ng
!ngan
an !nt!k
!nt!k 'i$rok
'i$rokar&
ar&onon alifatik
alifatik $an 'i$rok
'i$rokar&
ar&on
on se$er'
se$er'ana
ana
 &er'alogenasi-
Ole' karena it! Rekker $an MannholdMannhold (6:+ men"emp!rnakan nilai f "ang $i&!at ole'
Nys-Rekker !nt!k !nt!k memper&
memper&aikaikii kesala
kesala'an
'an per'it
per'it!ng
!ngan
an log P- Pa$a
Pa$a prinsi
prinsipn"
pn"aa koreks
koreksii
 per'it!ngan log P melal!i pen$ekatan N"s)Rekker $engan mengg!nakan faktor % M  tetap
 &erlak! ke%!ali !nt!k nilai %M "ang s!$a' $isemp!rnakan-
Pengar!' konformasi ter'a$ap nilai log P $apat $i'it!ng melal!i persamaan se&agai &erik!t .
Konformasi tras)antiperipianar . log P /  f 9 0Transs /  f 8 ?+:= H ?+6=
Konformasi ga!%'e . log P /  f 9 0Ga!%'e /  f 8 ?+=6 H ?+6<
0 mer!pa
mer!pakankan faktor
faktor koreks
koreksii "ang
"ang $iperl!
$iperl!kan
kan !nt!k
!nt!k men"es
men"es!!a
!!aika
ikan
n antara
antara nilai
nilai log P
 per%o&aan $engan nilai log P per'it!ngan-

$- Penent!an Nilai ,ogaritma Koefisien Partisi Teoritis

Teoritis 0ara ans%'),eo
Selain sistem 'i$rofo&ik fragmental $ari N"s)Rekker+ "ang kem!$ian $isemp!rnakan ole'
Rekker)Mann'ol$- Hans $an Leo (6+ *!ga memp!&likasikan %ara meng'it!ng koefisien
 partisi $engan meto$e fragmen mengg!nakan tetapan fragmentasi  f melal!i persamaaan
 &erik!t .
log P / a nf n 9 &mFm
a . *!mla' fragmen
 & . *!mla' $ari faktor F
F . faktor
faktor "ang
"ang memp
mempeng
engar!
ar!'i
'i keseti
kesetim&a
m&anga
ngan
n partis
partisii pa$a
pa$a str!kt!
str!kt!rr "ang
"ang le&i'
le&i' kompl
kompleks
eks--
 Nilai f
 Nilai f g!g!s  $i%ari melal!i persamaa &erik!t .
  f  / log P (R ) f 
 ) f R 
R 
 ,og P (R $iperole' melal!i per%o&aan+ se$ang f 
se$ang f R 
R  "ang
 "ang mer!pakan sifat lipofilik-
Dari &er&agai meto$e penent!an log P+ tetapan 'i$rofo&ik B ans%')F!*ita+ tetapan f 
Rekker
Rekker)Ma
)Mann'
nn'ol$
ol$ $an tetapan
tetapan  f  'ans%')
'ans%'),eo ,eo pa$a
pa$a !m!mn"
!m!mn"aa $ig!na
$ig!nakan
kan $alam
$alam men%ari
men%ari
'!&!ngan k!antitatif str!kt!r $an akti7itas $ari s!at! t!r!nan o&at-
Tetapan B ans%')F!*ita $ig!nakan !nt!k men%ari per!&a'an str!kt!r sen"a#a in$!k 
"ang 'an"a ter*a$i pa$a sat! g!g!s+ se$ang !nt!k per!&a'an str!kt!r "ang le&i' kompleks
$ig!nakan per'it!ngan $engan tetapan f Rekker)Mann'ol$ ata! tetapan  f  'ans%'),eo-
 'ans%'),eo-
Karena &an"akn"a faktor)faktor koreksi pa$a penent!an nilai log P se%ara per'it!ngan+
maka "ang paling i$eal a$ala' langs!ng menent!kan log P se%ara pear%o&aan- Nilai log P
se%ara per'it!ngan
per'it!ngan !m!mn"a
!m!mn"a $ig!nakan
$ig!nakan !nt!k st!$i '!&!ngan k!antitatif
k!antitatif str!kt!r
str!kt!r akti7itas
akti7itas
$ari s!at! t!r!nan sen"a#a-

B. PENENT!N L"P#F"L"T!$ %EN&!N MET#%E 'R#M!T#&R!F"

Boycee $an Milorro   (6@> memperkenalkan meto$e se$er'ana $an relatif %epat
Boyc
!nt!k menent!kan lipofilitas $ari s!at! seri sen"a#a $engan %ara penent!an nilai Rf sen"a#a
$engan Kromatografi ,apis Tipis Fasa 4alik (K,T (K,TF4+
F4+ kem!$ian nilai Rf terse&!t $ig!nakan
!nt!k meng'it!ng nilai tetapan kromatografi Rm-
Ke!nt!ngan mengg!nakan meto$e K,TF4 $alam penent!an lipofilitas a$ala' $apat
$ilak!kan $engan ka$ar sen"a#a "ang relatif ke%il $an sen"a#a "ang ti$ak memerl!kan
kem!rnian "ang tinggi- Unt!k sen"a#a "ang ti$ak m!rni 'ar!s $apat $i&e$akan &er%ak1no$a
$ari sen"a#a !tama $an &er%ak $ari 5at pengotor-
Pa$a K,TF4 se&agai fasa $iam $ig!nakan silika gel ata! kiesel gel "ang $iimpregnasi
$eng
$engan
an pela
pelar!
r!tt non
non polar
polar++ sepert
sepertii 6)ok
6)oktatano
nol+
l+ para
parafin
fin %air
%air ata!
ata! min"
min"ak
ak silik
silikon
on-- Unt!
Unt!k 
k 
memp
mempermerm!$
!$a'
a' $alam
$alam impr
impregegna
nasi
si !m!m
!m!mn" n"aa $ig!
$ig!na
nakan
kan &ant
&ant!a
!an
n pelar
pelar!t
!t "ang
"ang m!$a
m!$a'
'
meng!ap- Ka$ar pelar!t non polar &er7ariasi $ari >):?+ $engan #akt! impregnasi antara 6)
: *am+ setela' selesai lempeng kromatografi $ikeringkan pa$a s!'! =? O  0 selama k!rang
le&i' <? menit !nt!k mengel!arkan sisa pelar!t- Se$angkan fasa gerak (el!en !m!mn"a
a$ala' %amp!ran $ari pelar!t "ang &ersifat
&ersif at polar- Selan*!tn"a $ilak!kan prose$!r seperti pa$a
kromatografi lapis tipis &iasa-
 Nilai Rf $apat $i'it!ng $ari nilai Rf "ang $iperole' terse&!t melal!i persamaan se&agai
 &erik!t .
Rm / log J (61Rf 8 6 
Sen"a#a
Sen"a#a $engan lipofilitas
lipofilitas tinggi akan memp!n"ai
memp!n"ai nilai Rf "ang ke%il+ se'ingga nilai
Rm &ernilai positif- Se$ang sen"a#a $engan lipofilitas "ang ren$a' akan memp!n"ai nilai Rf 
tinggi+ se'ingga nilai Rm akan &ernilai negatif-

P!staka
6- Sis#an$on
Sis#an$ono+o+ Soekar$*o-
Soekar$*o-4am&a
4am&ang+
ng+ :??6+
:??6+ Kimia Me$isinalL6
Me$isinalL6-- Airlangga
Airlangga Uni7ersit"
Uni7ersit"-- Press-
S!ra&a"a
:- Sis#an$ono+ Pen$a'!l!an Kimia Me$isinal- ,a&oratori!m Kimia Far masi-p$f 
<- S!silo
S!silo#at
#at++ R!ll"
R!ll"-- Meto$e
Meto$e Penent
Penent!an
!an Nilai
Nilai Parame
Parameter
ter Sifat
Sifat ,ipofi
,ipofilik
lik Sen"a
Sen"a#a
#a O&at-
O&at-
,a&oratori!m Kimia Me$isinal- Fak!ltas Farmasi- Uni7ersitas Airlangga+ S!ra&a"a
 Pengeta'!an tentang partisi penting !nt!k a'li farmasi karena prinsip ini meli&atkan

 &e&erapa &i$ang ilm! farmasetik- Termas!k $i sini penga#etan s"stem min"ak)air+ ker*a o&at

 pa$a "ang ti$ak spesifik+ a&sor&si $an $istri&!si o&at ke sel!r!' t!&!'-Teori)teori
t!&!'-Teori)teori tentang

a&so
a&sorp
rpsi+
si+ ekstr
ekstrak
aksi
si $an
$an krom
kromat
atog
ograf
rafii &an"
&an"ak
ak terk
terkai
aitt $eng
$engan
an teor
teorii koef
koefisi
isien
en part
partik
ikel
el

(Mar
(Marti
tin
n+Alf
+Alfre
re$-
$- 6?
6?-
- Ke%ep
e%epat
atan
an a&so
a&sorp
rpsi
si o&at
&at san
sangat
gat $ip
$ipeng
engar!
ar!'i ole'
le' koef
koefis
isie
ien
n

 partisin"a- al ini $ise&a&kan ole' komponen $in$ing !s!s "ang se&agian &esar ter$iri $ari

lipi$a- Dengan $emikian o&at)o&at "ang m!$a' lar!t $alam lipi$a akan $engan melal!in"a-

Se&alikn"a o&at)o&at s!kar lar!t $alam lipi$a akan s!kar $ia&sorpsi- O&at)o&at "ang m!$a'

lar!t
lar!t $alam
$alam lipi$
lipi$aa terse
terse&!
&!tt $eng
$engan
an sen$i
sen$irin
rin"a
"a memi
memili
liki
ki koefi
koefisi
sien
en parti
partisi
si "ang
"ang &esa
&esar+
r+

se&alikn"a o&at)o&at "ang s!kar lar!t $alam lipi$a akan memiliki koefisien partisi lipi$a air 

ke%il- ,ipofilisitas &isa $ili'at $ari koefisien partisi $an ikatan 'i$rogen- Koefisien partisi

mer!pakan per&an$ingan kelar!tan $i $alam lemak $i&an$ing air (Sri+et

(Sri+ et al - :?66-

Pa$a !m!mn"a o&at)o&at &ersifat asam lema' ata! &asa lema'- ika o&at terse&!t

$ilar
$ilar!t
!tka
kan
n $alam
$alam air
air se&ag
se&agia
ian
n akan
akan terio
terioni
nisas
sasi-
i- 4esar
4esarn"
n"aa fraks
fraksii o&at
o&at "ang
"ang terio
terionk
nkan
an

tergant!ng pa$a p lar!tann"a- O&at)o&at "ang ti$ak terionkan le&i' m!$a' lar!t $alam

lipi$a+ se&alikn"a "ang $alam &ent!k ion kelar!tann"a ke%il ata! &a'kan praktis ti$ak lar!t-

Dengan $emikian pengar!' p sangat &esar ter'a$ap ke%epatan a&sorpsi o&at "ang &ersifat

asam lema' ata! &asa lema' (Sar$*oko+ 6-

Koefisien partisi tiap 5at a$ala' tetap ses!ai $engan sifat alamia' 5at it! sen$iri-

(Sar#oko+ et al- :??>- ,ipofilisitas &isa $ili'at $ari koefisien partisi $an ikatan 'i$rogen-

Koefisien partisi mer!pakan per&an$ingan kelar!tan $i $alam lemak $i&an$ing air- 0l &ersifat

lipofil (9+ se$angkan O 'i$rofil ( )- Proses a#al penent! o&at $alam men%apai target

a$ala'
a$ala' penetr
penetrasi
asi ata! a&sorp
a&sorpsi-
si- Penetra
Penetrasi
si o&at
o&at $alam
$alam mem&ran
mem&ran &iolog
&iologii tergant
tergant!ng
!ng pa$a
pa$a

kelar!tan o&at $alam lipi$- Makin m!$a' lar!t $alam lipi$+ o&at terse&!t makin m!$a'

menem&!s mem&ran $an makin &an"ak "ang $ia&sorp)si- al ini $ise&a&kan se&agian &esar 
mem&ran &iologi ters!s!n ole' lipi$+ seperti mem&ran sel pem&!ngk!s lam&!ng+ m!kosa

!s!s 'al!s $an mem&ran *aringan s"a)raf >+@ O&at s!pa"a m!$a' lar!t $alam lipi$ 'ar!s

 &ersifat non polar ata! lipofilik- ,ipofilisitas o&at $apat $i$efinisikan se&agai ka$ar 

keseim&
keseim&ang
angan
an n!merik
n!merik ka$ar o&at
o&at $alam
$alam fase polar $i&agi
$i&agi ka$ar o&at
o&at $alam
$alam fase non

 polar->+
 polar->+ A$ap!n parameter lipofilisitas "ang sering $ig!nakan $alam '!&!ngan k!antitatif 

str!kt!r $an akti7itas &io)logi antara lain a$ala' logaritma koefisien partisi+ tetap)an pi (B

ans%'+ tetapan fragmentasi F N"s Rekker $an 'arga Rm- A$a &e&erapa meto$e analisis

!nt!k menent!kan lipo)filisitas o&at+ "ait! se%ara spektrofotometri+ kromato)grafi %air kiner*a

tinggi (K0KT1P,0+ kromatografi gas $an kromatografi lapis tipis fase ter&alik (RPT,0/

reversed phase thin layer

lay er chromatography-
chromatography- (Ratna+et
(Ratna+et al - :??