I.

Alat & Bahan Yang Digunakan Bahan

Kit ELISA yang terdiri dari :
 plate ELISA yang telah dilapisi (coated) dengan antibodi atau antigen
 Antigen yang dimurnikan (jika sampel yang hendak dideteksi atau dikuantifikasi
berupa antibodi).
 Antibodi yang dimurnikan (jika sampel yang hendak dideteksi atau dikuantifikasi
berupa antigen).
 Larutan standard (kontrol positif dan negatif).
 Sampel yang ingin dites.
 standar antibiotik
 Konjugate atau enzim penanda
 Substrat yang bersifat spesifik terhadap enzim signal
 Larutan pencuci ( Buffer )
 Larutan penghenti reaksi (stop solution)

Peralatan
- Timbangan
- Gelas ukur
- Single mikro pipet 5-50 μl, 50-1000 μl
- Multi channel mikro pipet 5-50 μl, 50-300 μl
- Bak reservoar
- Homogenizer/stomacher/mortar,
- Sentrifuger atau filter
- Penangas air
- Inkubator
- ELISA Plate washer atau labu semprot
- ELISA Plate Reader dengan filter panjang gelombang 400-600 nm untuk pengukuran
kuantitatif
- Komputer
II. Contoh Langkah Kerja Teknik ELISA
Secara singkat tahapan kerja dalam metode ELISA dapat digambarkan sebagai berikut:
1. 10 ml antigen ditambah coating buffer dengan perbandingan 1:9
2. Dimasukkan dalam sumuran plat ELISA dan diinkubasi semalam pada suhu 4c
3. Dicuci dengan PBS-Tween sebanyak 3x
4. Ditambah 50 ml blocking buffer ( BSA 1% dalam PBS)
5. Dicuci dengan PBS-Tween sebanyak 3x
6. Ditambah 100 ml antibodi primer dalam larutan PBS-BSA 1% dengan perbandingan
1:500 dan diinkubasi 2 jam
7. Dicuci dengan PBS-Tween sebanyak 3x
8. Ditambah 100 ml antibodi sekunder dalam tris buffer salin dengan perbandingan
1:2500 dan diinkubasi 1,5 jam
9. Dicuci dengan PBS-Tween sebanyak 2x
10. Ditambah 50 ml substrat PNPP
11. Diinkubasi selama 30 menit
12. Ditambah NaOH 1 N sebanyak 50 ml sebagai penghenti reaksi
13. Dibaca absorpsinya dengan ELISA reader pada panjang gelombang 450 nm