PENGARUH LAMA WAKTU MASERASI TERHADAP EFEKTIVITAS

ANTIBAKTERI EKSTRAK BEE POLLEN PADA BAKTERI

(Salmonella sp, Escherichia coli, Staphylococcus aureus)

USULAN PENELITIAN
Diajukan untuk memenuhi syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Teknologi
Pertanian pada Departemen Teknologi Industri Pangan
Fakultas Teknologi Industri Pertanian

Oleh :

NADILA ZULFA FITHRIYAH

240210160075

UNIVERSITAS PADJADJARAN
FAKULTAS TEKNOLOGI INDUSTRI PERTANIAN
PROGRAM STUDI TEKNOLOGI PANGAN
JATINANGOR
2019

i
 KATA PENGANTAR

Puji dan syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT yang telah

memberikan rahmat dan karunia-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan

usulan penelitian yang berjudul “Pengaruh Lama Waktu Maserasi Terhadap

Efektivitas Antibakteri Ekstrak Bee Pollen Pada Bakteri (Salmonella sp,

Escherichia coli, Staphylococcus aureus)”, sebagai salah satu syarat

menyelesaikan studi S1 di Program Studi Teknologi Pangan, Departemen

Teknologi Industri Pangan, Fakultas Teknologi Industri Pertanian, Universitas

Padjadjaran. Penelitian ini merupakan rangkaian penelitian ekstrak bee pollen

tentang aktivitas antimikroba.

Selama penyusunan usulan penelitian ini, penulis mendapat bimbingan,

saran, masukan, dan dukungan dari berbagai pihak. Oleh karena itu, pada

kesempatan ini penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada berbagai pihak

yang telah membantu dan membimbing, yaitu kepada:

1. Indira Lanti Kayaputri, S.Pt. M.Si, selaku Ketua Komisi Pembimbing atas

waktu, ilmu, bimbingan, dan arahan dalam penyelesaian usulan penelitian ini.

2. Ketua Program Studi Teknologi Pangan, Fakultas Teknologi Industri

Pertanian, Universitas Padjajaran.

3. Kepala Departemen Teknologi Industri Pangan, Fakultas Teknologi Industri

Pertanian, Universitas Padjajaran.

4. Dekan Fakultas Teknologi Industri Pertanian, Universitas Padjajaran.

ii
5. Drs. Zaida, M.Si., selaku dosen wali yang telah memberikan arahan selama

menjalankan perkuliahan

6. Bunda dan Ayah, serta seluruh keluarga besar atas semua doa, kasih sayang,

serta semangat yang telah diberikan selama ini.

7. Algi, Amel, Bella, Erlin, Dwi, Diah, Febrina dan teman-teman angkatan 2016

yang telah memberikan dukungan dan semangat dalam penyelesaian usulan

penelitian ini.

8. Segenap pihak yang telah membantu kelancaran serta kemudahan bagi

penulis selama proses penyusunan usulan penelitian.

Kritik dan saran dari pembaca diperlukan guna menyempurnakan usulan

penelitian ini. Semoga usulan penelitian ini bermanfaat tidak hanya bagi penulis,

tetapi juga bagi semua pihak yang memerlukan.

Jatinangor, April 2019

Penulis

iii
 DAFTAR ISI

Halaman
KATA PENGANTAR............................................................................................ii

DAFTAR ISI..........................................................................................................iv

DAFTAR TABEL................................................................................................vii

DAFTAR GAMBAR..........................................................................................viii

DAFTAR LAMPIRAN.........................................................................................ix

I. PENDAHULUAN...........................................................................................1

1.1 Latar Belakang.................................................................................................10

1.2 Identifikasi masalah.........................................................................................12

1.3 Maksud dan Tujuan..........................................................................................12

1.4 Kegunaan Hasil Peneliatian............................................................................13

II. TINJAUAN PUSTAKA................................................................................14

2.1 Bee Pollen........................................................................................................14

2.1.1 Deskripsi Bee Pollen.....................................................................................14

2.1.2 Jenis dan Kualitas..........................................................................................15

2.1.3 Kandungan Kimia.........................................................................................16

2.1.4 Komponen Aktivitas Antibakteri Bee Pollen................................................19

2.2 Ekstraksi...........................................................................................................22

2.2.1 Metode Maserasi...........................................................................................23

iv
2.2.2 Faktor Mempengaruhi Metode Maserasi......................................................24

2.3 Bakteri Patogen Produk Pangan......................................................................25

2.3.1 Escherichia coli.............................................................................................26

2.3.2 Staphylococcus aureus.................................................................................27

2.3.3 Salmonella sp................................................................................................29

2.4 Antibakteri.......................................................................................................30

2.4.1 Mekanisme Antibakteri.................................................................................30

2.4.2 Uji Aktivitas Antibakteri...............................................................................31

III. KERANGKA PIKIRAN DAN HIPOTESIS..............................................33

3.1 Kerangka Pikiran..............................................................................................33

3.2 Hipotesis...........................................................................................................37

IV. BAHAN DAN METODE PENELITIAN....................................................38

4.1 Waktu dan Tempat Percobaan.........................................................................38

4.2 Bahan dan Alat Percobaan...............................................................................38

4.2.1 Bahan Percobaan...........................................................................................38

4.2.2 Alat Percobaan..............................................................................................38

4.3 Metode Penelitian.............................................................................................39

4.4 Pelaksanaan Percobaan....................................................................................42

4.4.1 Pembuatan Ekstrak Bee Pollen.....................................................................42

4.4.2 Persiapan Kultur Mikroba Uji.......................................................................44

v
4.4.3 Pengujian Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Sumuran................45

4.5 Kriteria Pengamatan.........................................................................................46

DAFTAR PUSTAKA...........................................................................................48

vi
 DAFTAR TABEL

No. Judul Halaman

1. Komposisi Nutrien Bee Pollen..........................................................................8

2. Ezim dalam Bee Pollen.....................................................................................9

3. Tata Letak Percobaan......................................................................................29

4. Daftar Analisis Ragam Percobaan RAK ........................................................30

 DAFTAR GAMBAR

No. Judul Halama

Y

1. Bee Pollen.........................................................................................................6

2. Sel Bakteri Escherichia coli............................................................................18

3. Sel Bakteri Staphylococcus aureus.................................................................19

4. Sel Bakteri Salmonella sp...............................................................................20

5. Diagram Alir Pembuatan Ekstrak Bee Pollen.................................................20

6. Diagram Alir Proses Persiapan Kultur Cair Bakteri Uji.................................20

7. Diagram Alir Pengujian Efektivitas Antibakteri Ekstrak Bee Pollen.............20

 DAFTAR LAMPIRAN

No. Judul Halaman

1. YProsedur Pelaksanaan........................................................................................

ix
ix
I. PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang

Pangan merupakan kebutuhan primer bagi manusia, umumnya pangan

masih memiliki ancaman keamanan, salah satunya adalah keracunan. Keracunan

dapat disebabkan oleh berbagai jenis bakteri. Bakteri patogen yang dapat

menimbulkan keracunan makanan diantaranya adalah S.aureus, Escherichia coli,

dan Salmonella sp. Menurut Dinkes Depok yang menguji total 34 sampel jenis

pangan yang kemudian didapati mengandung bakteri E.coli. Pangan yang diuji

Dinkes Depok di antaranya es kacang hijau, es buah, susu kedelai, dan sebagainya

(Lova, 2018). Alhasil, terdapat 156 siswa yang sakit dengan gejala diare, demam,

dan muntah secara bergantian karena penyebab bakteri E.coli (Lova, 2018). Sama

halnya dengan bakteri Salmonella sp. Ochiai (2008) mengkatagorikan Indonesia

sebagai salah satu negara dengan kejadian endemic salmonellosis tertinggi di Asia

setelah China dan India, dan diikuti Pakistan dan Vietnam. Di Indonesia,

khususnya di Malang diketahui bahwa 3 dari 36 sampel hasil penelitian sampel

karkas ayam segar terdeteksi positif tercemar Salmonella sp. (Primajati, 2011).

Selain itu terdapat furunkel, selulitis, dan infeksi gastroenteritis yang diakibatkan

enterotoksin dari bakteri Staphylococcus aureus (WHO, 2012).

Berdasarkan beberapa kasus di atas, maka perlu dilakukan pencegahan

untuk menghambat pertumbuhan bakteri pada bahan pangan menggunakan

antibakteri dari bahan alami. Indonesia dipercaya negara yang kaya akan sumber

1
daya alamnya baik flora maupun fauna. Pemanfaatan flora dan fauna kini sudah

mulai berkembang, salah satunya adalah pemanfaatan lebah. Lebah lebih dikenal

1
 2

sebagai hewan penghasil madu, royal jelly dan bee pollen (Krell, 1996 dalam

Puspitasari, 2015). Diperkirakan rata-rata produksi madu seluruh Indonesia

sekitar 4000 ton setiap tahunnya (Kuntadi, 2008). Madu dan produk turunannya,

memiliki kaya akan khasiat salah satunya adalah bee pollen.

Bee pollen adalah bahan seperti bubuk yang diproduksi oleh serbuk sari

tanaman berbunga, dicampuri dengan nektar dan sekresi lebah yang dikumpulkan

oleh lebah madu. Di dalam pollen ini mengandung konsetrasi fitokimia dan nutrisi

yang kaya akan senyawa metabolit sekunder. Suku Mesir pada zaman dahulu

mendeskripsikan pollen sebagai “a life giving dust.” (Graikou et al., 2011).

Namun belum ada penelitian mendalam secara kimia tentang kandungan kimia

bee pollen (Syafrizal, N. Hariani, Budiman, 2013). Hingga saat ini, bee pollen

hanya dikembangkan sebagai produk obat-obatan dan produk herbal saja, padahal

di dalam kandungan ekstrak bee pollen dapat berperan sebagai pengawet pangan,

karena bee pollen memiliki senyawa-senyawa yang dapat mendukung

penghambatan aktivitas bakteri patogen pada produk pangan.

Penelitian Sholikhah (2012) dalam analisis fitokimia ekstrak etanol bee

pollen, positif mengandung senyawa flavonoid dan fenolik. Telah dibuktikan

bahwa ekstrak etanol bee pollen memiliki aktivitas antibakteri yang kuat dalam

efektivitas menghambat pertumbuhan bakteri patogen, contohnya pada bakteri

gram positif Staphylococcus aureus dan pada bakteri gram negatif Escherichia

coli (Venskutonis, 2007). Perlakuan pengujian terhadap ekstrak bee pollen juga

sangat penting karena dapat diketahui mana perlakuan yang paling efektif dalam

menghambat pertumbuhan bakteri patogen produk pangan. Saat ini, belum banyak
 3

riset yang mendalam mengenai pengaruh perbedaan lama waktu maserasi

terhadap efektivitas antibakteri ekstrak bee pollen. Menurut Ratri (2011) lama

proses maserasi mempengaruhi penarikan ekstrak karena semakin lama proses

maserasi, diharapkan semakin banyak ekstrak yang tersari kedalam cairan penyari

hingga mencapai kesetimbangan. Unsur pengadukan pada maserasi mempercepat

terjadinya kesetimbangan.

Berdasarkan uraian diatas maka perlu dilakukan pencegahan untuk

menghambat aktivitas pertumbuhan bakteri produk pangan dengan

mengidentifikasi berapakah lama waktu maserasi yang paling efektif terhadap

ekstrak bee pollen untuk menghambat pertumbuhan bakteri patogen pada produk

pangan.

1.2 Identifikasi masalah

Berdasarkan latar belakang tersebut, maka dapat dirumuskan suatu

masalah sebagai berikut: “Berapakah lama waktu maserasi yang paling efektif

terhadap ekstrak bee pollen yang dapat menghambat aktivitas bakteri Salmonella

sp, Staphylococcus aureus, dan Escheria coli?”

1.3 Maksud dan Tujuan

Maksud dari penelitian ini adalah untuk mengetahui pengaruh perbedaan

lama waktu maserasi terhadap ekstrak bee pollen untuk penghambatan aktivitas

bakteri patogen pada produk pangan.

 4

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mendapatkan hasil dari lama waktu

maserasi ekstrak bee pollen yang paling efektif dalam menghambat aktivitas

bakteri patogen pada produk pangan.

1.4 Kegunaan Hasil Peneliatian

Hasil penelitian ini diharapkan dapat memberikan informasi kepada

masyarakat bahwa bee pollen bukan hanya dijadikan sebagai produk obat dan

produk herbal saja tetapi juga dapat berperan sebagai pengawet pangan, serta

memberikan informasi kepada industri pangan dan masyarakat umum tentang

pengaruh lama waktu maserasi yang efektif dalam menghambat aktivitas

pertumbuhan bakteri patogen pada produk pangan.

II. TINJAUAN PUSTAKA

2.1 Bee Pollen

2.1.1 Deskripsi Bee Pollen

Bee pollen adalah bahan seperti bubuk yang diproduksi oleh serbuk sari

tanaman berbunga, dicampuri dengan nektar dan sekresi lebah yang dikumpulkan

oleh lebah madu. Pollen atau serbuk sari adalah sel reproduksi jantan yang

terdapat pada bunga, serta sebagai sumber makanan untuk lebah. Di dalam pollen

ini mengandung konsetrasi fitokimia dan nutrisi yang kaya akan senyawa

metabolit sekunder. Suku Mesir pada zaman dahulu mendeskripsikan pollen

sebagai “a life giving dust.” Pollen disebut sebagai satu-satunya makanan yang

lengkap sempurna dan komponen biologis utama dari bee pollen adalah turunan

asam fenolik dan senyawa polifenol, kebanyakan adalah glikosida flavonoid.

Flavonoid disebut senyawa tanaman sekunder yang memiliki aktivitas fisiologis.

(Graikou et al., 2011; Bogdanov, 2013 dalam Yerlikaya, 2014).

Bee pollen terjadi pada bagian organ reproduksi jantan dari tanaman dalam

bentuk 2.5-250 µm butiran. Butiran ini ditutupi oleh dinding sel berlapis ganda.

Dinding sel internal disebut intine, sedangkan dinding sel eksternal disebut exine.

Exine mendefinisikan dirinya dengan resistensi yang kuat terhadap faktor

fisikokimia. Selain itu, pada permukaannya ada banyak pori-pori dan alur

berfungsi sebagai lapisan balsam untuk melekatkan pollen pada kaki lebah (Costo,

2006 dalam Vassev et al., 2015)

5
 6

Warna dari pollen dari kuning cerah sampai hitam. Keranjang pollen yang

dibawa ke sarang, biasanya terdiri atas serbuk sari dari satu tanaman. Namun,

terkadang lebah mengumpulkan serbuk sari dari berbagai spesies tanaman.

Kelompok tanaman yang hanya mengumpulkan serbuk sari termasuk poppy,

jagung, dan lupin, sedangkan dari tanaman melliferous (tanaman yang bisa

mengeluarkan zat, dikumpulkan oleh lebah, dan diubah menjadi madu) lebah

mengumpulkan nektar dan pollen. Lebah tidak mengumpulkan pollen dari

rumput, karena dapat ikut terbawa spora jamur (W´ojcicki, 1987 dalam Vassev et

al., 2015)

Gambar 1. Bee Pollen

(Benech, 2004)

2.1.2 Jenis dan Kualitas

Jenis polen lebah ditentukan oleh jenis bunga yang menjadi sumber serbuk

sari, karena setiap bunga dapat menghasilkan warna, rasa dan aroma yang
 6

berbeda. Polen lebah tersusun dari berjuta mikrospora yang diproduksi di benang

sari bunga tersebut (Caron, 2004 dalam Suranto, 2004

 7

Berdasarkan asal serbuk sari bunga, polen lebah dibedakakan atas dua

jenis, yaitu polen lebah anemophile dan enthomopile. Anemophile adalah serbuk

sari yang memerlukan angin untuk penyerbukan, umumnya pada tumbuhan jenis

rerumputan. Enthomophile adalah serbuk sari yang memerlukan bantuan serangga

untuk penyerbukan. Jenis polen lebah enthomopile lebih berat bobotnya karena

ditambahkan madu serta zat lain yang dihasilkan lebah kemudian dibentuk

gumpalan-gumpalan kecil (Suranto, 2004).

2.1.3 Kandungan Kimia

Polen lebah merupakan salah satu makanan alami terkaya dan paling

murni yang pernah ditemukan. Nilai gizi dan kemampuan terapi kumpulan serbuk

sari ini telah dikenal selama berabad-abad. (Mulu et al., 2004). Polen lebah

mengandung berbagai macam nutrien, senyawa fitokimia, enzim, dan asam-asam

organik (National Honey Board, 2001 dalam Miraglio, 2002) yaitu:

1. Nutrien

Nutrien bee pollen dapat dilihat pada Tabel 2.1 terkandung dalam polen

lebah meliputi karbohidrat, asam amino, vitamin dan mineral. Karbohidrat

merupakan nutrien dengan presentase paling tinggi, yaitu sekitar 70%.

Asam amino dalam polen lebah terdiri dari 18 asam amino, baik esensial

maupun non-esensial dengan prolin dan lisin sebagai asam amino utama.

Asam-asam amino lainnya adalah fenilalanin, tirosin, glutamat, dan asam

aspartat. Adapun komposisi nutrien yang ada dalam bee pollen, dimuat

pada Tabel 1
 8

Tabel 1. Komposisi Nutrien dalam Bee Pollen (Miraglio, 2002)

Jumlah nutrien rata- Jumlah nutrient rata-

rata/21 g rata/100 g
Air 3,62 g 17,10 g
Kalori 64 kkal 304 kkal
Karbohidrat total 17,46 g 82,40 g
Fruktosa 8,16 g 38,50 g
Glukosa 6,57 g 31,00 g
Maltosa 1,53 g 7,20 g
Galaktosa 0,32g 1,50 g
Karbohidrat lain 0,85 g 4,00 g
Serat 0,04 g 0,20 g
Lemak Total 0 0
Kolesterol 0 0
Protein Total 0,06 g 0,30 g
Abu 0,04 g 0,20 g
Vitamin
Tiamin 0 0
Riboflavin 0,01 mg 0,04 mg
Niasin 0,03 mg 0,12 mg
Asam 0,01 mg 0,07 mg
pantotenat
Vitamin B-6 0,01 mg 0,02 mg
Vitamin B-12 0 0
Folat 0,42 mg 2,00 mg
Vitamin C 0,11 mg 0,50 mg
Vitamin A 0 0
Vitamin D 0 0
Vitamin E 0 0
Vitamin K 0 0
Mineral
Kalsium 1,27 mg 6,00 mg
Fosfor 0,85 mg 4,00 mg
Natrium 0,85 mg 4,00 mg
Kalium 11,02 mg 52,00 mg
Besi 0,09 mg 0,42 mg
Seng 0,05 mg 0,22 mg
Magnesium 0,42 mg 2,00 mg
Selenium 0,17 mg 0,80 mg
Tembaga 0,01 mg 0,04 mg
Mangan 0,02 mg 0,08 mg
2.
 9

2. Senyawa Fitokimia

Senyawa fitokimia dalam polen lebah meliputi senyawa turunan flavonoid,

alkaloid, dan asam askorbat. Beberapa penelitian sebelumnya telah

membuktikan bahwa senyawa fitokimia tersebut mendukung aktivitas bee

pollen, baik sebagai zat antioksidan atau sebagai senyawa antibakteri.

Senyawa turunan flavonoid dalam polen lebah diantaranya adalah

pinosembrin, pinobanksin, krisin, galangin, kuersetin, luteolin, dan

kaemferol (Miraglio, 2002).

2. Enzim

Polen lebah mengandung sejumlah enzim seperti glukosa oksidase,

invertase, diastase (amilase), katalase, dan asam fosfatase. Enzim-enzim

berserta fungsinya disajikan pada Tabel 2

Jenis Fungsi
Diastase, amilase Mengubah amilum menjadi karbohidrat yang lebih
sedrhana (dekstrin, oligo-, di-, dan monosakarida)
Invertase, sukrose Mengubah sukrosa menjadi glukosa dan fruktosa
Glukosa oksidase Mengubah glukosa menjadi glukolakton yang dapat
diubah menjadi asam glutamat dan hidrogen peroksida
Katalase Menguraikan hidrogen peroksida menjadi air dan
oksigen
Asam fosfatase Menghilangkan fosfat dari fosfat-fosfat organik
Protease Mengubah protein dari polipeptida menjadi senyawa
penyusunnya yang lebih sederhana
Tabel 2. Jenis Enzim yang Terkandung dalam Bee Pollen (Kartika, 2013)

Hidrogen peroksida yang dihasilkan dari reaksi antara glukosa oksidase

dan glukosa merupakan salah satu senyawa yang turut bertanggung jawab

terhadap aktivitas antibakteri pada bee pollen (Kartika, 2013)

 10

3. Asam-asam Organik

Asam-asam organik bee pollen berperan dalam menentukan rasa dan

aktivitas antibakteri bee polen. Asam organik utama dalam polen lebah

adalah asam glukonat. Asam-asam organik lainnya antara lain adalah asam

butirat, asam asetat, asam formiat, asam laktat, asam suksinat, asam malat,

asam sitrat, asam maleat, dan asam piroglutamat (Kartika, 2013).

2.1.4 Komponen Aktivitas Antibakteri Bee Pollen

Bee pollen diketahui mempunyai aktivitas bakterisida dan bakteriostatik

terhadap bakteri, baik bakteri Gram positif atau Gram negatif (Mulu et al., 2004).

Polen lebah telah terbukti mempunyai aktivitas antibakteri terhadap

Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Proteus

mirabilis, Streptococcus pyogenus (Wilix et al., 1992 dalam Rostinawati, 2009).

Berdasarkan penelitian sebelumnya, dalam analisis fitokimia ekstrak etanol bee

pollen, positif mengandung senyawa flavonoid dan fenolik (Sholikhah, 2012

dalam Syafrizal et al., 2013).

Flavonoid dapat menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara merusak

dinding sel dari bakteri, dengan terganggunya dinding sel akan menyebabkan lisis

pada sel. Senyawa flavonoid berperan dalam perusakan fosfolipid pada membran

sitoplasma bakteri, ion H+ dari flavonoid akan menyerang gugus polar (gugus

fosfat) sehingga molekul fosfolipid akan terurai menjadi gliserol, asam karboksilat

dan asam fosfat. Hal ini mengakibatkan fosfolipid tidak mampu mempertahankan

bentuk membran sitoplasma, akibatnya membran sitoplasma akan bocor dan zat-
 11

zat untuk metabolisme sel bakteri akan terbuang keluar hingga bakteri akan mati.

(Agustina 2007 dalam Prestianti et al., 2018).

Menurut penelitian (Rebiai & Lanez, 2015), ekstrak metanol bee pollen

mengandung sejumlah besar senyawa fenolik dan flavonoid yang mana

bertanggung jawab atas aktivitas antioksidan yang nyata. Efek antioksidan dari

bee pollen mungkin disebabkan oleh aktivitas enzim antioksidan serta kandungan

senyawa metabolit sekunder seperti zat fenolik, karotenoid, vitamin C, vitamin E,

dan glutathione. Aktivitas antioksidan dari senyawa fenolik tergantung pada

struktur kimianya dan dapat ditentukan dengan aksi molekul sebagai agen

pereduksi (kecepatan inaktivasi radikal bebas, dan potensi pengkelat logam)

(Rebiai & Lanez, 2015). Menurut (Giese, 1996) Antioksidan dapat berfungsi

sebagai:

1. Berperan sebagai donor atom hidrogen pada radikal bebas untuk

membentuk kembali molekul lemak. Jika antioksidan diberikan maka akan

memperlambat proses autooksidasi.

2. Antioksidan berperan sebagai donor atom hidrogen pada radikal bebas

untuk membentuk hidroperoksida dan sebuah radikal bebas antioksidan.

Radikal bebas antioksidan ini stabil daripada radikal bebas lemak karena

struktur resonansi elektron dalam cincin aromatik antioksidan. Dengan

demikian antioksidan akan menghentikan reaksi oksidasi berantai.

Oleh karena itu, adanya antioksidan alam maupun sintetik dalam bahan

makanan dapat untuk menghambat oksidasi lipid, mencegah kerusakkan,

perubahan dan degradasi komponen organik dalam bahan pangan, sehingga dapat
 12

memperpanjang waktu simpan (Sukardi, 2001). Selain itu, juga terdapat faktor-

faktor yang berpengaruh terhadap aktivitas antibakteri bee pollen diantaranya

(Molan, 1999):

1. Tekanan Osmotik/ Aktivitas Air (Aw)

Bee pollen merupakan serbuk sari bunga sangat jenuh (supersaturated)

dengan aktivitas air (Aw) yang rendah. Hal itu berarti polen lebah

mengandung sedikit air dan kurang mendukung pertumbuhan bakteri dan

jamur. Beberapa spesies bakteri dapat tumbuh pada medium Aw antara

0,94-0,99. Sedangkan, nilai Aw polen lebah sekitar 0,56-0,62.

2. pH

Nilai pH polen lebah rata-rata sekitar 3,2-4,5 sehingga dapat menghambat

pertumbuhan beberapa patogen yang mempunyai pH minimum

pertumbuhan sekitar 7,2 -7,4 seperti Escherichia coli, Salmonella,

Pseudomonas aeruginosa dan Streptococcus pyogenes.

3. Enzim Glukosa Oksidase

Glukosa oksidase merupakan enzim yang diekskresikan oleh lebah madu

untuk menghasilkan polen lebah dari nektar. Enzim ini merubah glukosa

menjadi asam glukonat dan hidrogen peroksida. Oleh karena itu, aktivitas

antibakteri polen lebah sangat berhubungan dengan jumlah hidrogen

peroksidase dan glukosa oksidase.

4. Komponen Antibakteri

Bee pollen mengandung beberapa senyawa antibakteri yaitu, pinosembrin,

terpen, benzil alkohol, 3,5-dimetoksi-4 asam hidroksi benzoat (asam

 13

siringat), metil-3,5-dimetoksi-4-hidroksibenzoat (metil siringat), 3,4,5 asam

trimetoksi benzoat, dan 1,4-dihidroksibenzen. Senyawa-senyawa tersebut adalah

faktor pendukung aktivitas antibakteri non-peroksida (Molan, 1999).

Aktivitas antibakteri polen lebah dapat berkurang karena beberapa faktor,

diantaranya adanya ion logam, asam askorbat, dan katalase dari nektar yang dapat

merusak hidrogen peroksida, serta adanya cahaya dan pemanasan yang dapat

merusak enzim glukosa oksidase (Molan, 1999).

2.2 Ekstraksi

Ekstraksi merupakan salah satu metode pemisahan dua atau lebih

komponen dengan menambahkan suatu pelarut yang tepat. Tujuan ekstraksi

adalah untuk menarik komponen-komponen kimia yang terdapat dalam suatu

sampel dengan menggunakan pelarut tertentu. Teknik ekstraksi berbeda untuk

masing-masing bahan. Hal ini dipengaruhi oleh tekstur, kandungan bahan, sifat

pelarut yang akan digunakan, sifat komponen yang akan diekstrak, dan

penggunaan ulang pelarut (Houghton dan Raman, 1998). Pelarut yang umum

dipakai adalah air dan pelarut organik seperti kloroform, eter dan alkohol. Pelarut

yang digunakan harus dapat mengekstraksi subtansi diiginkan tanpa melarutkan

material lainya. Ekstraksi mengikuti prinsip “like dissolves like” yang berarti

bahwa senyawa polar akan mudah larut dalam pelarut polar dan sebaliknya

(Harborne, 1996 dalam Armanzah & Tri, 2016). Ekstraksi yang digunakan untuk

mengekstrak bee pollen adalah dengan menggunakan metode maserasi.

 14

2.2.1 Metode Maserasi

Maserasi adalah salah satu metode pemisahan senyawa dengan cara

perendaman menggunakan pelarut organik pada temperatur ruangan. (Lenny,

2006 dalam Koirewoa et al., 2012) Teknik maserasi merupakan usaha paling

sederhana dalam mendapatkan ekstrak yang optimal. Dalam proses maserasi ini

cairan penyari akan menembus dinding sel dan masuk ke dalam rongga sel yang

mengandung zat aktif, zat aktif tersebut akan larut, karena adanya perbedaan

konsentrasi antara larutan zat aktif di dalam sel dengan yang di luar sel, maka

larutan yang terpekat didesak ke luar. Peristiwa tersebut berulang sehingga terjadi

keseimbangan konsentrasi antara larutan di luar sel dan di dalam sel. Agar cairan

penyari dapat menembus sel perlu ada putaran. (Direktorat Jendral Pengawasan

Obat dan Makanan RI, 1986 dalam Ratri, 2011).

Metode maserasi sangat menguntungkan untuk menguji senyawa

flavonoid karena golongan senyawa flavonoid tidak tahan panas dan mudah

teroksidasi pada suhu yang tinggi. Semakin lama waktu ekstraksi, kesempatan

untuk bersentuhan makin besar sehingga hasilnya juga bertambah sampai titik

jenuh larutan. Kontak antara sampel dan pelarut dapat ditingkatkan apabila

dibantu dengan pengocokan agar kontak antara sampel dan pelarut semakin sering

terjadi, sehingga proses ekstraksi lebih sempurna (Koirewoa et al., 2012). Pelarut

yang biasa digunakan dalam metode maserasi adalah pelarut etanol. Etanol

digunakan sebagai pelarut dalam proses ekstraksi karena memiliki toksisitas yang

rendah, biaya murah, dan ramah lingkungan (Rostagno et al., 2009). Penggunaan
 6

etanol lebih direkomendasi sebagai pelarut jika dilihat dari sisi toksisitas dan

ekonominya.
 15

2.2.2 Faktor Mempengaruhi Metode Maserasi

Salah satu unsur dalam maserasi adalah pengadukan. Pengadukan

diperlukan untuk meratakan konsentrasi larutan di luar butir serbuk simplisia,

sehingga dengan pengadukan tersebut tetap terjaga adanya derajat perbedaan

konsentrasi yang sebesar-besarnya antara larutan di dalam sel dengan larutan di

luar sel. Penggunaan mesin pengaduk yang berputar terus-menerus, waktu proses

maserasi dapat dipersingkat menjadi 6 sampai 24 jam (Direktorat Jendral

Pengawasan Obat dan Makanan RI, 1986 dalam Ratri, 2011) Pada alat maserasi

orbital shaker pengadukan memiliki satuan rpm (kecepatan putar). Selain itu,

unsur lain yang berperan dalam proses maserasi ini adalah waktu. Diharapkan

semakin lama sejumlah simplisia dimaserasi maka ekstrak yang didapat semakin

banyak. (Ratri, 2011). Namun demikian waktu tetap perlu dibatasi, karena

menurut Direktorat Jendral Pengawasan Obat dan Makanan RI (1986) apabila

terlalu lama simplisia tersebut akan ditumbuhi mikroorganisme.

Keuntungan utama metode ekstraksi maserasi yaitu prosedur dan peralatan

yang digunakan sederhana, metode ekstraksi tidak dipanaskan sehingga bahan

alam tidak menjadi terurai. Ekstraksi dingin memungkinkan banyak senyawa

terekstraksi, meskipun beberapa senyawa memiliki kelarutan terbatas dalam

pelarut ekstraksi pada suhu kamar (Nurhasnawati & Handayani, 2017). Selain itu,

etanol memiliki toksisitas yang lebih rendah daripada metanol karena etanol

memiliki dosis toksik minimum yang lebih tinggi daripada metanol (etanol 700

mg/kg sedangkan metanol 100 mg/kg) (Olson et al., 2012).

 16

Maserasi termasuk ekstraksi cara dingin. Metode ini digunakan untuk

ekstraksi simplisia yang kandungan kimia aktifnya tidak tahan terhadap

pemanasan seperti flavonoid. Selain itu, senyawa flavonoid mudah teroksidasi

pada suhu yang tinggi. Proses maserasi sangat menguntungkan dalam isolasi

senyawa bahan alam karena selain murah dan mudah dilakukan, dengan

perendaman sampel tumbuhan akan terjadi pemecahan dinding dan membran sel

akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel, sehingga metabolit

sekunder yang ada dalam sitoplasma akan terlarut dalam pelarut. Pelarut yang

mengalir ke dalam sel dapat menyebabkan protoplasma membengkak dan bahan

kandungan sel akan larut sesuai dengan kelarutannya.

2.3 Bakteri Patogen Produk Pangan

Bakteri merupakan suatu organisme prokariotik yang hidup bebas dan

tersebar luas dibandingkan dengan makhluk hidup lainnya dengan ukuran tubuh

bervariasi rata-rata 1-5µm. Bentuk dasar dari sel bakteri beraneka ragam, yaitu

kokus (bulat), basil (batang), dan spirila (spiral) (Aryulina, et al., 2006). Beberapa

sifat morfologi sangat penting dalam hubungannya dengan pertumbuhannya pada

makanan dan ketahanannya terhadap pengolahan. Sifat-sifat tersebut misalnya

bentuk dan pengelompokkan sel, susunan dinding sel, pembentukan kapsul dan

pembentukan spora (Fardiaz, 1992).

Bakteri patogen merupakan mikroorganisme indikator keamanan pangan,

dapat menyebabkan keracunan makanan melalui intoksikasi, serta dapat

 6

menyebabkan infeksi pada manusia. Bakteri patogen mempunyai patogenitas,

yaitu
 17

kemampuan organisme untuk menimbulkan penyakit tertentu (Pelczar dan Chan,

2007). Beberapa contoh bakteri patogen pada manusia adalah genus Salmonella

thyposa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Clostridium botulinum, dan

lain-lain (Naufalin et al., 2005).

2.3.1 Escherichia coli

Salah satu agen penyebab infeksi bakterial adalah bakteri Escherichia coli

(E. coli) Bakteri ini merupakan bakteri yang berada di dalam saluran pencernaan

bagian bawah dan dapat berubah menjadi patogen jika perkembangannya di dalam

tubuh melebihi batas normal. Bakteri ini dapat menyebar melalui kontaminasi

debu atau melalui makanan dan minuman yang terkontaminasi feses (Darsana,

2012).

Bakteri E.coli ditunjukkan pada Gambar 2 merupakan bakteri Gram

negatif yang memiliki peptidoglikan tipis yakni 5-10% (Pelczar dan Chan, 2005).

Sel E.coli memiliki ukuran panjang 2,0-6,0µm, tersusun tunggal berpasangan.

Bakteri ini tumbuh pada suhu 10-40oC dengan suhu optimum 37oC memiliki pH

optimum untuk pertumbuhannya adalah 7.0-7.5. Bakteri ini sangat sensitif

terhadap panas dan dapat diinaktifkan pada suhu pasteurisasi (Supardi dan

Sukamto, 1999). Pelczar dan Chan (2007), menambahkan bahwa bakteri

anaerobik fakultatif, yang artinya bakteri ini termasuk ke dalam bakteri anaerobik

fakultatif, yang artinya bakteri ini dapat hidup dalam keadaan aerobik maupun

anaerobik serta merupakan bakteri gram negatif. Berikut adalah gambar bakteri

Escherichia coli pada Gambar 2.

 18

Gambar 2. Sel Bakteri Escheria coli

(Panchangam, 2015)

Membran luar bakteri Gram negatif ini terdiri atas tiga lapis, yaitu

lipopolisakarida (LPS), lipoprotein, dan fosfolipid, terdapat porin yang terbentuk

dari protein. Porin merupakan saluran yang dapat dilalui beberapa molekul

(Lamothe et al., 2009). Membran luar ini berfungsi sebagai penghalang terhadap

antibiotik, enzim pencernaan, dan kondisi kekeringan, namun tidak bisa menjadi

penghalang terhadap semua subtansi (Tortora et al,. 2007).

2.3.2 Staphylococcus aureus

Bakteri S. aureus ditunjukkan pada Gambar 3 merupakan bakteri Gram

positif berbentuk bulat berdiameter 0,7-0,12µm, tersusun dalam kelompok-

kelompok yang tidak teratur seperti buah anggur, fakultatif anaerob, tidak

membentuk spora, dan tidak bergerak. Bakteri ini tumbuh pada suhu optimum 37 0

C, tetapi membentuk pigmen paling baik pada suhu kamar (20-25 oC). Koloni

pada
 19

i
perbenihan padat berwarna abu-abu sampai kuning keemasan, berbentuk bundar,

halus, menonjol, dan berkilau. Lebih dari 90% isolat klinik menghasilkan

S.aureus yang mempunyai kapsul polisakarida atau selaput tipis yang berperan

dalam virulensi bakteri (Jawetz et al., 2007).

Gambar 3. Fotomikroskopik Staphylococcus aureus

(Toelle & Lenda, 2014)
Sebagian bakteri Staphylococcus merupakan flora normal pada kulit,

saluran pernafasan dan saluran pencernaan makanan pada manusia. Bakteri ini

juga ditemukan di udara dan di lingkungan sekitar. S. aureus yang patogen

bersifat invasif, menyebabkan hemolisis, membentuk koagulan, dan mampu

meragikan manitol (Warsa, 1994). Di Indonesia, banyak sekali kasus keracunan

makanan yang disebabkan oleh bakteri Staphylococcus aureus ini. Keracunan

makanan dapat disebabkan oleh kontaminasi enterotoksin dari S.aureus. Waktu

onset dari gejala keracunan biasanya cepat dan akut, tergantung pada daya tahan

tubuh dan banyaknya toksin yang termakan. Jumlah toksin yang dapat

menyebabkan keracunan ditandai oleh rasa mual, muntah-muntah, dan diara

yanng hebat tanpa disertai demam (Warsa, 1994).

 20

2.3.3 Salmonella sp

Bakteri Salmonella sp ditunjukkan pada Gambar 4 merupakan bakteri

batang Gram negatif bersifat motil, tidak berspora dengan panjang 1,0 sampai

3,0µm dan lebar 0,8 sampai 1,0µm. Jika dilakukan pewarnaan gram maka pada

pemeriksaan mikroskopis akan tampak batang berwarna merah muda. Salmonella

dapat memfermentasikan glukosa, memproduksi gas serta tidak

memfermentasikan laktosa dan sukrosa. Sebagian besar Salmonella sp

menghasilkan H2S. Bakteri ini patogen terhadap manusia atau binatang bila

tertelan (Ernest, 1995).

Gambar 4. Bakteri Salmonella sp

(Aguskrisno 2012 dalam Arifin, 2015)

Cemaran bakteri enterik pathogen yang membahayakan manusia dan

secara nasional maupun internasional tidak boleh ada keberadaannya pada

makanan siap saji mau pun makanan yang belum diolah adalah bakteri

Salmonella sp (Anonimus, 1995 dalam Yuliani, Ewaldus, Petrus, 2016).

Salmonella spp adah bakteri yang dapat menyebabkan penyakit zoonosis yaitu

dapat menyerang dan menular pada hewan maupun manusia tetapi tidak pada

ikan. Infeksi salmonella diantaranya adalah penyebab demam typhus pada

manusia. Demam typhus merupakan penyakit gastro enteritis yang sering

menyerang penduduk di Negara-negara Asia khususnya di Negara sedang

 6

berkembang yang mempunyai tingkat sanitasi yang rendah, salah satunya adalah

Indonesia (Mahatmi, 2003 dalam Yuliani et al., 2016).

 21

2.4 Antibakteri

Antibakteri adalah suatu sifat senyawa dalam menghambat pertumbuhan

bakteri. Antibakteri berdasarkan asalnya dibagi menjadi antibiotik (antibakteri

kimia sintetik) dan antibakteri yang berasal dari bahan alami. Berdasarkan sifat

toksisitas selektifnya, ada antibakteri yang bersifat menghambat pertumbuhan

bakteri (bakteriostatik) dan ada yang bersifat membunuh bakteri (bakterisidal)

(Dwijoseputro, 2008). Aktivitas antimikroba senyawa fenolik yaitu dengan

merusak lipida pada membran plasma mikroorganisme, sehingga menyebabkan isi

sel keluar (Pratiwi, 2008).

2.4.1 Mekanisme Antibakteri

1. Inhibisi Sintesis Dinding Sel

Dinding sel yang terdiri dari lapisan peptidoglikan, apabila terjadi cedera atau

inhibisi pada pembentuknya menyebabkan sel menjadi lisis, apabila diberi

antibiotik aktif dinding sel mengakibatkan bakteri membengkak atau

mengalami kerusakan bentuk. Contoh agen yang bekerja dengan cara inhibisi

sinensis dinding sel adalah penisilin (Jawetz et al., 2007) .

2. Inhibisi Fungsi Membran Sel

Membran plasma bersifat semipermeabel dan mengendalikan transport

berbagai metabolit ke dalam dan keluar sel. Adanya gangguan atau kerusakan

struktur pada membran plasma dapat menghambat atau merusak kemampuan

membran plasma sebagai penghalang (barrier) osmosis dan mengganggu

sejumlah proses biosintesis yang diperlukan dalam membran (Pratiwi, 2008).

 22

Menurut Jawetz et al (2007), membran sitoplasma bakteri lebih mudah rusak

oleh agen tertentu dibandingkan membran sel pada hewan. Apabila terjadi

integrasi fungsional membran sitoplasma terganggu, makromolekul dan ion

dapat keluar dari sel dan menyebabkan kerusakan atau kematian sel.

3. Inhibisi Sintesis Protein

Setiap komposisi kimia ribosom bakteri hanya terdiri dari 70S ribosom,

sedangkan pada mamalia 80S ribosom. Obat antimikroba dapat menghambat

sintesa protein pada ribosom bakteri tanpa berefek besar pada ribosom

mamalia (Jawetz et al., 2007).

4. Toksisitas Selektif

Toksisitas selektif menunjukkan bahwa obat tersebut bersifat racun bagi

pathogen dan tidak berbahaya bagi penjamunya. Toksisitas selektif berfungsi

sebagai penghantar spesifik yang dibutuhkan untuk melekatkan obat, atau

bergantung pada inhibisi proses biokimia yang dibutuhkan pathogen (Jawetz

et al., 2007).

2.4.2 Uji Aktivitas Antibakteri

Terdapat bermacam-macam metode yang dapat dilakukan dalam uji

antibakteri, yaitu sebagai berikut (Pratiwi, 2008):

1. Metode Difusi

Pada metode ini, yang paling sering digunakan dalam pengujian

antibakteri adalah metode disc diffusion (tes Kirby & Bauer) dan metode cup
 22

plate. Metode disc diffusion digunakan untuk menentukan aktivitas agen

antimikroba. Piringan
 23

yang berisi agen antimikroba diletakkan pada media Agar yag telah ditanami

mikroorganisme yang akan berdifusi pada media Agar tersebut. Area jernih

mengindikasikan adanya hambatan pertumbuhan mikroorganisme oleh agen

antimikroba pada permukaan media Agar. Metode cup plate serupa dengan

metode disc diffusion, dimana dibuat sumuran pada media Agar yang telah

ditanami dengan mikroorganisme dan pada sumuran tersebut diberi agen

antimikroba yang akan diuji.

2. Metode Dilusi

Metode dilusi dibedakan menjadi dua yaitu dilusi cair (broth dilution) dan

dilusi padat (solid dilution). Pada dilusi cair, metode ini mengukur MIC

(minimum inhibitory concentration) dan MBC (minimum bactericidal

concentration). Cara yang dilakukan adalah dengan membuat seri pengenceran

agen antimikroba pada medium cair yang ditambahkan dengan mikroba uji.

Larutan uji agen antimikroba pada kadar terkecil yang terlihat jernih tanpa adanya

pertumbuhan mikroba uji ditetapkan sebagai MIC. Larutan yang ditetapkan

sebagai KHM tersebut selanjutnya dikulturkan ulang pada media cair tanpa

penambahan mikroba uji atau gen antimikroba, dan diinkubasi selama 18-24 jam.

Media cair yang tetap terlihat jernih setelah diinkubasi ditetapkan sebagai MBC.

Pada metode dilusi padat serupa dengan metode dilusi cair namun menggunakan

media padat. Keuntungan dari metode ini adalah satu konsesntrasi agen

antimikroba yang diuji dapat digunakan untuk menguji beberapa mikroba uji.
III. KERANGKA PIKIRAN DAN HIPOTESIS

3.1 Kerangka Pikiran

Bahan pangan diketahui selama penyimpanan dapat berisiko mengalami

kerusakan. Bahan pangan dapat mengalami kerusakan karena disebabkan oleh

aktivitas mikroba, contohnya adalah bakteri. Bakteri patogen sering

mengontaminasi makanan, seperti Staphylococcus aureus, Escherichia coli dan

Salmonella sp. Contohnya pada bakteri S. aureus menyebabkan keracunan

makanan karena adanya enterotoksin yang dihasilkan oleh S. aureus yang terdapat

pada makanan yang tercemar. Gejala yang muncul akibat keracunan makanan ini

yaitu sakit kepala, mual, muntah, disertai diare yang muncul setelah empat sampai

lima jam mengkonsumsi makanan tersebut (Salmenlina, 2002).

Selain itu, hasil penelitian Sirait (2009) pada susu kedelai yang dipasarkan

di kota Medan, didapatkan bahwa susu kedelai yang diproduksi pada usaha kecil

dan dipasarkan di kota Medan terbukti dari 10 sampel susu kedelai yang diuji

menunjukkan 4 sampel minuman mengandung Escherichia coli sebanyak 50

sampai 120 per 100 ml sampel. E. coli menghasilkan enterotoksin yang

menyebabkan beberapa kasus diare (Brooks et al., 2004). Bakteri Salmonella sp

juga dapat menimbulkan penyakit pada tubuh manusia atau biasa yang disebut

salmonellosis. Salmonellosis ditandai dengan gejala seperti diare, mual muntah,

nyeri abdomen dan demam yang timbul secara akut (Mishra, 2012). Diketahui

bahwa beberapa bahan alami memiliki senyawa fitokimia yang berpotensi

dijadikan sebagai antimikroba. Sebagai contoh zat kimia yang terkandung dalam

24
 25

bahan alami yang biasa digunakan adalah alkaloid, flavonoid, glikosida,

terpenoid, saponin, dan polifenol. Salah satu bahan alami tersebut adalah bee

pollen, senyawa fitokimia dalam polen lebah meliputi senyawa turunan flavonoid,

alkaloid, dan asam askorbat. Beberapa penelitian sebelumnya telah membuktikan

bahwa senyawa fitokimia tersebut mendukung aktivitas bee pollen, baik sebagai

zat antioksidan atau sebagai senyawa antibakteri. Berdasarkan penelitian

sebelumnya, dalam analisis fitokimia ekstrak etanol bee pollen, positif

mengandung senyawa flavonoid dan fenolik (Sholikhah, 2012 dalam Syafrizal et

al., 2013). Senyawa turunan flavonoid dalam polen lebah diantaranya adalah

pinosembrin, pinobanksin, krisin, galangin, kuersetin, luteolin, dan kaemferol

(Miraglio, 2002).

Untuk itu dibutuhkan metode yang tepat agar ekstrak bee pollen tersebut

efektif menghambat pertumbuhan mikroba. Menurut Koirewoa (2012), proses

maserasi sangat menguntungkan dalam isolasi senyawa bahan alam karena selain

murah dan mudah dilakukan, dengan perendaman sampel tumbuhan akan terjadi

pemecahan dinding dan membran sel akibat perbedaan tekanan antara di dalam

dan di luar sel, sehingga metabolit sekunder yang ada dalam sitoplasma akan

terlarut dalam pelarut organik dan ekstraksi senyawa akan sempurna karena dapat

diatur lama perendaman yang dilakukan. Pemilihan pelarut untuk proses maserasi

akan memberikan efektivitas yang tinggi dengan memperhatikan kelarutan

senyawa bahan alam dalam pelarut tersebut. Pelarut ekstrak etanol diketahui dapat

mengidentifikasi senyawa metabolit lebih banyak, hal ini dikarenakan ekstrak

 25

etanol mempunyai kesamaan tingkat kepolaran dengan senyawa yang didapatkan

(Markham, 1998).
 26

Penggunaan etanol 70% sebagai pelarut merupakan pilihan tepat karena

sesuai dengan penelitian Muli dan Maingi (2007) bahwa etanol 70% merupakan

pelarut yang dapat melarutkan bahan aktif propolis paling aktif dibandingkan

dengan konsentrasi etanol lainnya (30, 50 dan 90%). Penggunaan etanol 70%

sebagai pelarut memungkinkan terjadinya pelarutan bahan aktif larut etanol

maupun yang larut dalam air secara bersamaan. Sehingga flavonoid akan terlarut

lebih banyak etanol 70% dibandingkan dengan konsentrasi etanol lainnya (Kim et

al . 2007: Muli dan Maingi 2007). Menurut Park dan Ikegaki (1998) penggunaan

etanol 70% sebagai pelarut menghasilkan propolis dengan aktivitas antioksidan

terbesar. Hal tersebut sesuai dengan penelitian (Dian, 2014) dalam penelitiannya

tentang propolis. Pelarut yang digunakan akan mempengaruhi kadar kandungan

zat aktif yang di dalam ekstrak. Hal ini dapat dilihat dari nilai total flavonoid yang

diperoleh sebesar 5,01% dengan pelarut etanol 70%, 3,14% dengan pelarut etanol

96%, dan 1,04 dengan pelarut air. Hal ini menunjukkan bahwa senyawa-senyawa

flavonoid yang terkandung dalam propolis memiliki kelarutan yang lebih tinggi

pada pelarut etanol 70%.

Tetapi saat ini belum ada penelitian tentang pengaruh lama waktu maserasi

terhadap efektivitas antibakteri ekstrak bee pollen. Menurut Ratri (2011) lama

proses maserasi mempengaruhi penarikan ekstrak karena semakin lama proses

maserasi, diharapkan semakin banyak ekstrak yang tersari kedalam cairan penyari

hingga mencapai kesetimbangan. Unsur pengadukan pada maserasi mempercepat

terjadinya kesetimbangan (Ratri, 2011).

 27

Penelitian Syafrizal (2016) hasil maserasi ekstrak bee pollen pada maserasi

selama 5 menit menyatakan bahwa fraksi etanol memiliki bioaktivitas paling

tinggi terhadap larva udang yang ditunjukkan dengan nilai LC50 paling kecil

yaitu 249,60 ppm. Nilai ini menunjukkan bahwa pada konsentrasi 249,60 ppm

fraksi etanol mampu membunuh larva udang sampai 50% populasi. Semakin kecil

nilai LC50 (Lethal Concentration 50%) dari suatu sampel maka semakin tinggi

toksisitasnya. Tingginya aktivitas toksisitas dari fraksi etanol terhadap larva udang

dibandingkan dengan ekstrak kasar dan fraksi etil asetat diperkirakan adanya

kandungan senyawa alkaloid yang cukup tinggi, hal tersebut dikarenakan pada

fraksi etanol senyawa alkaloid lebih aktif yaitu dalam fase yang polar (Harborne,

1987).

Hasil penelitian Kurniawati (2013) ekstraksi propolis lebah madu Trigona

spp menggunakan waktu maserasi selama 24 jam dengan pelarut etanol 70%

dihasilkan ekstraksi propolis berwarna coklat tua dengan rendemen sebesar

18,41%. Serta, hasil uji aktivitas antibakteri ekstrak propolis terhadap bakteri E.

coli menunjukkan ekstrak propolis 100% aktif sebagai antibakteri ditandai dengan

adanya zona hambat di sekitar sumur, dengan diameter daya hambat sebesar 2,15

cm. Berbeda dengan penelitian (Hasan, 2013) penggunaan teknik maserasi selama

18 jam belum memberikan hasil yang memuaskan karena hanya memperoleh hasil

rendemen yaitu sebesar 12,67%. Kecilnya nilai rendemen yang diperoleh

dibandingkan dengan hasil pada setiap satuan percobaan kemungkinan adanya

komponen yang menguap selama waktu ekstraksi. Srijanto (2010) menyatakan

bahwa semakin lama waktu ekstraksi yang digunakan, waktu kontak antara
 25

sampel dan pelarut semakin lama sehingga jumlah senyawa yang akan terekstraksi

semakin
 28

banyak. Kondisi ini akan terus berlanjut hingga tercapai kondisi kesetimbangan

antara konsentrasi senyawa didalam bahan baku dengan konsentrasi senyawa di

pelarut. Waktu maserasi yang melewati waktu optimum akan merusak zat terlarut

yang ada didalam bahan dan berpotensi meningkatkan proses hilangnya senyawa-

senyawa pada larutan karena penguapan (Cikita et al., 2016). Penurunan kadar

total fenol setelah waktu maserasi 24 jam mengindikasikan adanya kemungkinan

senyawa fenol mengalami kerusakan atau terdegradasi seiring dengan lamanya

waktu ekstraksi. Peningkatan waktu ekstraksi menaikkan kemungkinan terjadinya

dekomposisi atau oksidasi senyawa fenolik karena kontak yang relative lama

dengan faktor lingkungan seperti oksigen (Kristiani dan Halim, 2014). Oleh

karena itu, diharapkan dapat diperoleh pengaruh perbedaan lama waktu maserasi

terhadap efektivitas antibakteri ekstrak bee pollen. Target penelitian yaitu dengan

mengamati zona bening, semakin besar area zona bening maka semakin tinggi

efektivitasnya. Pengujian kualitatif dan kuantitatif terhadap ekstrak juga

dilakukan untuk mengetahui senyawa apakah yang berperan sebagai antibakteri.

3.2 Hipotesis

Berdasarkan kerangka pikir tersebut, maka dapat diambil hipotesis sebagai

berikut: “Lama waktu maserasi ekstrak bee pollen tertentu paling efektif

menghambat aktivitas bakteri patogen pada produk pangan.”

IV. BAHAN DAN METODE PENELITIAN

4.1 Waktu dan Tempat Percobaan

Percobaan dilakukan pada bulan September 2019 – Desember 2019.

Penelitian dilakukan di Laboratorium Mikrobiologi Pangan, Laboratorium Kimia

Pangan, Laboratorium Teknologi Pengolahan Pangan, dan Laboratorium

Keteknikan Pengolahan Pangan, Departemen Teknologi Industri Pangan, Fakultas

Teknologi Industri Pertanian, Universitas Padjadjaran.

4.2 Bahan dan Alat Percobaan

4.2.1 Bahan Percobaan

Bahan baku yang digunakan pada percobaan adalah bee pollen dan serta

pelarut etanol 70% untuk ekstraksi. Bahan yang digunakan pada proses yaitu bee

pollen, aquades, spirtus, NaCl Fis 0,85%, media NB (Nutrient Broth), kertas

cakram, asam sulfat (H2SO4), larutan HCl pekat, besi (III) klorida (FeCl3) 1%,

etanol 95, Na2CO3 15%, Mg, AlCl3 2%, pereaksi Dragendroff, kultur murni

Escherichia coli, kultur murni Salmonella sp, kultur murni Staphylococcus

aureus, etanol 70%, natrium klorida (NaCl) 0,9%, media nutrient agar (NA) dan

nutrient broth (NB).

29
 25

4.2.2 Alat Percobaan

Alat-alat yang digunakan pada proses, yaitu oven, kompor, refrigerator,

perforator, rotary evaporator, autoclave, waterbath, grinder, ayakan 80 mesh,

lalu
 30

vacuum filter, corong pisah, vortex, labu rotary, erlenmeyer, beaker glass, gelas

ukur, neraca analitik, spatula, kertas saring Whattman No. 4, alumunium foil,

clingwrap, inkubator, cawan petri, bunsen, pipet, bulb, mikropipet, tabung reaksi,

ose, tip mikropipet, kassa, kapas, erlenmeyer, kuvet, Spektrofotometer UV-Vis,

dan HPLC – MS.

4.3 Metode Penelitian

Metode penelitian yang digunakan adalah metode Rancangan Acak

Kelompok (RAK) dengan empat variabel waktu. Perbandingan waktu lamanya

metode maserasi yang akan digunakan adalah pada waktu 0 jam, 6 jam, 18 jam,

dan 24 jam. Adapun perlakuan tersebut adalah sebagai berikut:

A = Ekstrak etanol bee pollen waktu maserasi 0 jam

B = Ekstrak etanol bee pollen waktu maserasi 12 jam

C = Ekstrak etanol bee pollen waktu maserasi 18 jam

D = Ekstrak etanol bee pollen waktu maserasi 24 jam

Percobaan dengan empat perlakuan pada ekstrak etanol bee pollen

tersebut pada waktu 0 jam, 12 jam, 18 jam dan 24 jam dilakukan dengan tiga kali

pengulangan, selanjutnya hasil percobaan dilakukan uji lanjut dengan Uji Duncan.

Adapun tata letak rancangan acak kelompok dengan 4 perlakuan dan 3 kali

pengulangan yaitu terdapat pada Tabel 3.

 31

Tabel 3. Tata Letak Rancangan Acak Kelompok Dengan 4 Perlakuan dan 3

Pengulangan
Ulangan 1 2 3
B A C
Perlakuan A D B
C B A
D C D
Sumber: Dokumentasi Pribadi (2019)
Data hasil pengamatan kemudian didistribusikan melalui model linier

untuk Rancangan Acak Kelompok sebagai berikut:

Yij = μ + τ i + βj + εij

i = 1,2,3,4, ; j = 1,2,3,

Keterangan:

Yij = nilai pengamatan perlakuan ke-i dan ulangan/kelompok ke-j

μ = rata-rata umum / nilai tengah populasi

τ i = pengaruh perlakuan ke-i

βj = pengaruh kelompok ke-j

εij = komponen acak dari perlakuan ke-i dan kelompok ke-j

Berdasarakan model linier di halaman sebelumnya, dapat disusun tabel

sidik ragam sebagai berikut:

Tabel 4. Sidik Ragam Rancangan Acak Kelompok

Sumber Ragam DB JK KT Fh F0.05
2

Kelompok (K) r – 1 2 ∑ Y .t j – JKK/DB KTK/KT

4.67
j
K G
FK
 32

Sumber Ragam DB JK KT Fh F0.05

2

Perlakuan (P) t–1 3 ∑ Yir. – JKP/DB KTP/KT

4.67
i
P G
FK
(r – 1) (t – JKT – JKK JKG/DB
Galat (G) 6
1) – JKP G
2
Total (T) tr – 1 11 ∑ Yij - FK
i, j
Sumber: Dokumentasi Pribadi (2019)

Y ..2
FK =
tr

t t
2
JKT = ∑ ∑ ( Ý ij−Ý ..)2 = ∑ Yij - FK
i, j
i=1 j=1

t 2
Y.j
JKK = t ∑ ( Y´ . j−Ý ..)2 = ∑ - FK
j=1 j t

t
Yi .2
JKP = r ∑ ( Ý i.−Ý ..)2 = ∑ - FK
i=1 i r

Hipotesis yang diuji :

H0 : P1 = P2 = P3 = … = Pi = 0

H1 : paling sedikit ada sepasang Pi yang tidak sama

Kaidah Keputusan :

 Jika F0,05 < F hitung; maka terima H1 pada taraf nyata 5% (ada perbedaan

pengaruh perlakuan terhadap respon yang diamati).

 Jika F hitung < F0,05; maka terima H0 (tidak ada perbedaan pengaruh perlakuan

terhadap respon yang diamati)

 32

Bila terdapat perbedaan atau keragaman antar perlakuan, maka dilakukan

pengujian lanjutan berupa Uji Beda Jarak Nyata Duncan pada taraf 5% untuk

mengetahui beda pengaruh antar perlakuan.

LSR = SSR × S x́
 33

S x́ = KT galat
√ r

Perbedaan pengaruh antar perlakuan ditentukan dengan cara mengurutkan rata-

rata nilai percobaan dari yang terkecil hingga terbesar, kemudian menghitung

selisih nilai tengah perlakuan. Nilai rata-rata sampel tiap perlakuan dibandingkan

berdasarkan LSR, jika selisih LSR antar perlakuan lebih kecil dari selisih nilai

tengah maka perlakuan tidak memberikan perbedaan yang nyata, sebaliknya jika

selisih LSR antar perlakuan lebih besar dari selisih nilai tengah maka perlakuan

memberikan perbedaan yang nyata terhadap perlakuan lainnya.

Analisis deskriptif dilakukan dengan mengamati karakteristik fisik bahan,

analisis kualitatif dan kuantitatif komponen fitokimia pada ekstrak bee pollen

setelah dilakukan maserasi. Pengujian kualitatif meliputi pengujian komponen

bioaktif, diantaranya pengujian alkaloid, pengujian flavonoid, pengujian fenolik,

pengujian saponin, pengujian steroid, pengujian triterpenoid. pengujian steroid

dan triterpenoid. Pengujian kuantitatif meliputi pengujian total fenolik, dan

pengujian total flavonoid.

4.4 Pelaksanaan Percobaan

4.4.1 Pembuatan Ekstrak Bee Pollen

Bee pollen yang akan diekstrak sebelumnya dilakukan pengecilan ukuran

dengan memotong bee pollen menjadi bagian yang lebih kecil. Pembuatan ekstrak

bee pollen dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut etanol 70%
 32

selama 0 jam, 12 jam, 18 jam dan 24 jam pada suhu ruang, kedap udara, dan

kedap
 34

cahaya dengan perbandingan bahan dan pelarut 1:5 (b/v). Diagram alir proses

maserasi dengan etanol 70% dapat dilihat pada Gambar 5.

Bee pollen kering

Pengayakan 80 mesh

Etanol
Serbuk Bee Pollen
70%,
serbuk :
pelarut
1:5
(b/v) Maserasi, Maserasi, Maserasi, Maserasi,
T = 25oC, t = 0 T = 25oC, t = 12 T = 25oC, t = 18 T = 25oC, t = 24
jam jam jam jam

Filtrasi Ampas

Pemekatan dengan rotary evaporator,

T = 40 °C

Ekstrak bee pollen pekat

Gambar 5. Diagram Alir Pembuatan Ekstrak Bee Pollen

(Yuliana, 2015)
Gambar 5. Diagram Alir Pembuatan Ekstrak Bee Pollen
 35

4.4.2 Persiapan Kultur Mikroba Uji

Uji efektivitas antibakteri dilakukan melalui dua tahapan proses yaitu

persiapan kultur cair bakteri uji dan tahap uji antibakteri dengan menggunakan

difusi sumuran dan metode kontak. Tahapan persiapan kultur cair dilakukan untuk

menumbuhkan bakteri uji dalam media cair agar bisa dicampurkan dengan media

yang digunakan untuk pengujian aktivitas antibakteri. Diagram alir proses

persiapan kultur cair dapat dilihat pada Gambar 6.

Kultur Murni

Strake di agar miring NA

Inkubasi (T = ± 37OC, t = 24 jam)

NaCl fis
Peluruhan
0,85%
Pengukuran absorbansi dengan
spektrofotometer (panjang gelombang Ampas
625 nm)

Kultur cair bakteri uji

Gambar 6. Diagram Alir Proses Persiapan Kultur Cair Bakteri Uji

(Modifikasi Cappucino dan Sherman, 2001)
 36

4.4.3 Pengujian Aktivitas Antibakteri dengan Metode Difusi Sumuran

Uji efektivitas antibakteri ekstrak bee pollen dilakukan dengan

menggunakan metode difusi sumuran dilihat dari diameter zona bening yang

dihasilkan di sekitar sumuran. dapat dilihat pada Gambar 7.

Medium Nutrien Broth Cair

Pemasukan 20 ml medium ke tabung

reaksi steril

Sterilisasi dengan autoclave, T = 121 D = ± 5 mm

°C, t = 15 menit V ekstrak = 40 µl
A = 0 Jam
20 µl B = 12 Jam
kultur C = 18 Jam
Homogenisasi menggunakan vortex
cair D = 24 Jam
bakteri
uji Penuangan ke cawan petri

Pendiaman hingga agar memadat

Pembuatan sumuran
A B

Pemasukan ekstrak ke agar C D

Penyimpanan dalam refrigerasi, t = 15

menit

Inkubasi, T = 35 °C, t = 24 jam

Pengamatan diameter zona bening

Gambar 7. Diagram Alir Uji Antibakteri Ekstrak Etanol Bee Pollen

(Modifikasi Cappuccino dan Sherman, 2001)
 37

4.5 Kriteria Pengamatan

A. Karakterisasi bahan

1) Serbuk bee pollen meliputi warna, aroma, tekstur, dan rendemen

2) Ekstrak bee pollen meliputi warna, aroma, tekstur, kekentalan, dan

rendemen

3) Ekstrak bee pollen dengan perbandingan waktu maserasi etanol 0 jam, 6

jam, 18 jam, 24 jam meliputi warna, aroma, tekstur, kekentalan, dan

rendemen.

B. Pengujian aktivitas antibakteri

1. Secara kualitatif

Pengujian efektivitas antibakteri bee pollen terhadap penghambatan aktivitas

bakteri patogen menggunakan metode difusi sumuran meliputi pengukuran

diameter zona bening (Modifikasi Cappuccino dan Sherman, 2001)

2. Secara kuantitatif

Perhitungan persentase penghambatan bakteri menggunakan metode kontak

(Modifikasi Parish and Davidson, 1993)

C. Pengujian kadar etanol ekstrak bee pollen

D. Pengujian komponen fitokimia campuran ekstrak bee pollen

1. Secara kualitatif

1) Uji alkaloid (Raaman, 2006)

2) Uji flavonoid (Departemen Kesehatan RI, 1989)

3) Uji fenolik (Departemen Kesehatan RI, 1989)

4) Uji saponin (Departemen Kesehatan RI, 1989)

 32

5) Uji steroid dan triterpenoid (Kokate et al., 2008)

 38

2. Secara kuantitatif

1) Pengujian total fenolik dan total flavonoid

2) Pengujian senyawa fenol campuran ekstrak kulit biji kakao dan kulit

buah kakao secara kuantitatif menggunakan HPLC – MS.

 DAFTAR PUSTAKA

Acharya U, Mishra M, Tripathy R, Mishra I. 2006. Testicular dysfunction and

antioxidative defense system of swiss mice after chromic acid exposure.
Reprod Toxicol. 22:87-91

Arifin, I. M. 2015. Deteksi Salmonella sp pada Daging Sapi di Pasar Tradisional

dan Pasar Modern di Kota Makassar. [skripsi] Fakultas Kedokteran
Universitas Hassanaufnuddin: Makassar
Armanzah R.S, Tri Y.H. 2016. Pengaruh Waktu Maserasi Zat Antosianin sebagai
Pewarna Alami dari Ubi Jalar Ungu (Ipomea batatasL. poir) Fakultas
Teknik Universitas Muhammadiyah: Jakarta
Aryulina, Diah. 2006. Biologi 1, Jakarta: Esis.
Banowati, Eva. dan Sriyanto. (2013). Geografi Pertanian. Yogyakarta: Penerbit
Ombak.
Benech, A. Honey: Functional Sweetness for Wellness Food. Wellness Food
Europe. 2004 [cited 23 March 2019]. Available from: URL:
http://www.harnisch.com/wfe/ausg/pdf/honey.pdf
Brooks G.F., Butel J.S., Morse S.A. 2004. Jawetz, Melnick, & Adelberg
Mikrobiologi Kedokteran. 23rd ed. New York: McGraw-Hill Companies
Inc. p. 623-651.
Campos et al., 2008. Pollen composition and standardisation of analytical
methods. Journal of Apicultural Research and Bee World 47(2): 156–163
(2008) REVIEW
Cappuccino, J.G. dan Sherman. 2001. Microbiologi: A Laboratory Manual. Sixth
Edition. Benjamin Cummings, San Fransisco
Carpes et al., 2008. STUDY OF PREPARATIONS OF BEE POLLEN
EXTRACT, ANTTIOXIDANT AND ANTIBACTERIAL ACTIVITY. Journal
Ciência e Agrotecnologia
Cikita dkk. 2016. Pemanfaatan Flavonoid Ekstrak Daun Katuk (Sauropus
androgynus (L) Merr) Sebagai Antioksidan pada Minyak Kelapa. Jurnal
Teknik Kimia USU Vol.5 No.1 : 45-46
Darsana, I.G.O., Besung, I.N.K., Mahatmi, H. (2012). Potensi binahong
(Anredera cordifolia (Tenore) Steenis) dalam menghambat pertumbuhan
bakteri Escheria coli secara in vitro. Indonesia Medicus
Dewi, Ni Kadek K., Made J., Dian A., 2014, Pengaruh Ekstrak Rimpang Kunyit
(Curcuma Domestica Val) Metode Maserasi dan Dekok Terhadap
Penurunan Suhu Tubuh Tikus Putih (Rattu Norvegicus) Yang Diberi
Vaksin DPT, Jurnal, Fakultas Kedokteran Universitas Udayana, Denpasar.

39
 40

Departemen Kesehatan R.I. 1989. Materia Mediaka Indonesia. Depkes RI,

Jakarta.
Direktorat Jenderal Pengawasan Obat dan Makanan. 1986. Sediaan Galenik.
Departemen Kesehatan RI, Jakarta
Dwidjoseputro. 2008 .Dasar-Dasar Mikrobiologi, Malang: Djambatan
Fardiaz. 1992. Mikrobiologi Pangan I. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta
Giese, J. 1996. Fats, Oils, and Fat Replacers. Food Technology, 50, 48-83
Graikou, K., Kapeta, S., Aligiannis, N., Sotiroudis, G., Chondrogianni, N., Gonos,
E., Chinou, I. (2011): Chemical analysis of Greek pollen - Antioxidant,
antimicrobial and proteasome activation. Chemistry Central Journal 5, 33.
Hasan, A. E. Z., Mangunwidjaja, D., Sunarti, T. C., Suparno, O., & Setiyono, A.
(2014). Investigating the antioxidant & anticytotoxic activities of propolis
collected from five regions of Indonesia & their abilities to induce
apoptosis. Emirates Journal of Food & Agriculture, 26(5), 390–398.
https://doi.org/10.9755/ejfa.v26i5.16549
Harborne, J.B. 1996. Metode Fitokimia, Penuntun Cara Modern Menganalisa
Tumbuhan. ITB Press, Bandung.
Houghton, P.J. dan A. Raman. 1998. Laboratory Handbook for the Fractionation
of Natural Extracts. Thomson Science Publ, London.
Jawetz., et al. 2007. Mikrobiologi Kedokteran Jawetz, Melnick, & Adelberg,
Ed.23, Translation of Jawetz, Melnick, and Adelberg’s Medical Microbiology,
23thEd. Alih bahasa oleh Hartanto, H., et al. Jakarta: EGC
J. Wojcicki, A. Hinek, and L. Samochowiec, “The protective effect ofpollen
extracts against allyl alcohol damage ofthe liver,” Archivum
Immunologiae et Therapiae Experimentalis,vol.33, no. 6, pp. 841–849,
1985.
Kartika, A. 2013. Aktivitas Antibakteri Polen Lebah terhadap Salmonella thypi
NCTC786 BCC712. Skripsi Fakultas Farmasi:UNPAD
Koirewoa, Y.A., Fatimawali, and W.I. Wiyono, Isolasi dan Identifikasi Senyawa
Flavonoid dalam Daun Beluntas (Pluchea indica L.), 2008, Universitas
Sam Ratulangi: Manado: p. 83-96.
Kokate, C.K., Purohit, A.P. & Gokhale, S.B. 2008. Pharmacognosy. Nirali
Prakashan, Maharashtra
Krell, R.. 1996. VALUE-ADDED PRODUCTS FROM BEEKEEPING Table of
Contents by, Fao Agriculture Services Bulletin.
Kuntadi. 2008. Pengembangan Budidaya Lebah Madu Dan Permasalahannya.
 32

Jurnal. Pusat Penelitian dan Pengembangan Konsevasi dan Rehabilitasi

Badan penelitian dan Pengembangan kehutanan. Bogor.
 41

Lamothe, R.G., et al. 2009. Plant Antimicrobial Agents and Their Effects on Plant
and Human Pathogens. Int J Mol Sci. 2009 Aug; 10(8): 3400–3419.
10.3390/ijms10083400 [cited 25 Maret 2019]
Lenny, S., Senyawa Flavonoida, Fenilpropanoida dan Alkaloida, 2006,
Universitas Sumatera Utara: Medan: p. 73-82.
Mahatmi, 2003. Penigkatan Kesadaran Nelayan Dengan Pendekatan Edukasi
Kesehatan Masyarakat di Pantai Bali Barat
Markham, K.R., 1988, Cara Mengidentifikasi Flavonoid, diterjemahkan oleh
Kosasih Padmawinata, 15, Penerbit ITB, Bandung.
Miraglio, A. M. 2002. Honey Health and Therapeutic Qualities. National Honey
Board.http://www.biologiq.nl/UserFiles/Compendium%Honey%202002.p
df honey health. (Diakses pada tanggal 23 Maret 2019)
Muli, E.M., Maingi, .M., Macharia, J., 2008, Antimicrobial Properties of Propolis
and Honey from the Kenyan Stingless bee, Dactylurina Schimidti,
Apiacta, 43, 49-61.
Mulu, A., B. Tessema, and F. Derby, 2004. In vitro Assesment of The
Antimicrobial Potential of Honey on Common Human Pathogens. Ethiop.
J. Health Dev. 2004:18 (2).
Naufalin, R Laksmi, JBS Kusnandar, F Sudarwamto, M Herastuti, 2005. Aktivitas
Antibakteri Ekstrak Bunga Kecombrang terhadap Bakteri Patogen dan
Perusak Pangan. Jurnal Teknol. dan Industri Pangan, Vol. XVI No. 2
Nurhasnawati et al., 2017. Perbandingan Metode Ekstraksi Maserasi dan Sokletasi
terhadap Aktivitas Antioksidan Ekstrak Etanol Daun Jambu Bol
(Syzygium malaccense L. Akademi Farmasi: Samarinda
Nurilmala M, Ochiai Y. 2016. Molecular characterization of southern bluefin tuna
myoglobin (Thunnus maccoyii). Fish Physiology and Biochemistry. 42(5):
1407141Olson, et al., 2012, Poisoning & Drug Overdose, 6th Edition,
McGraw-Hill Companies, Inc., United States, pp. 204, 278
P.C. Molan, The limitations of the methods of identifying the floral source of
honeys, Bee World, 79 (1998) 59–68.
Pangchangam, S.C., 2015. Escheria coli. [article] Annamacharya Institute of
Technology & Science.
Parish, M. E. dan P. M. Davidson. 1993. Method for Evaluation. Dalam
Antimicrobials in Foods. P. M. Davidson dan A. L. Branen (Eds.) 2 nd
Edition. Marcel Dekker, New York.
Park, Y.K., Koo, M.H., Abreu, J.A.S., Ikegaki, M., Cury, J.A., dan Rosalen, P.L.,
1998, Antimicrobial Activity of Propolis on Oral Microorganism, Curr
Microbiol., 36: 24-8.
 42

Pelczar, M. J. dan Chan, E. C. S., 2005, “Dasar-dasar Mikrobiologi 1”, Alih

bahasa: Hadioetomo, R. S., Imas, T., Tjitrosomo, S.S. dan Angka, S. L., UI
Press, Jakarta
Pelczar, Michael J dan Chan, E. C. S. 2007. Dasar-Dasar Mikrobiologi Jilid I.
Jakarta: UI Press.
Pratiwi, S.T., 2008. Mikrobiologi farmasi. Erlangga, Jakarta
Prestianti et al., 2018. Uji Aktivitas Antibakteri Ekstrak Sarang Lebah Hutan
(Apis dorsata) terhadap pertumbuhan Staphylococcus aureus, Escherichia
coli dan Pseudomonas aeruginosa. Jurnal Penelitian Kimia, Vol. 14(2)
2018, 314-322
Primajati SE. 2011. Deteksi Bakteri Patogen Salmonella spp dan Listeria
Monocytogenes pada karkas ayam broiler segar yang beredar di kota
Malang. (abstrak) Universitas Brawijaya. Malang
Puspitasari A.D. dan Suwijoyo P. 2015. Perbandingan Metode Pembuatan Ekstrak
Terpurifikasi Bee Propolis dari Lebah Madu (Apis mellifera) berdasarkan
Kadar Flavonoid Total Dihitung Sebagai Rutin. Fakultas Farmasi UGM:
Yogyakarta
Raaman, N. 2006. Phytochemical Techniques. New India Publishing Agency,
New Delhi.
Ratri. 2011. Pengaruh Lama Proses dan Kecepatan Putar pada Maserasi Daging
Buah Asam Jawa. [skripsi] Fakultas Farmasi: Yogyakarta
Rebiai & Lanez. 2015. Chemical Composition and Antioxidant Activity of (Apis
mellifera) Bee Pollen from Northwest Algeria. Université d’El Oued,
VTRS Laboratory, P.O. Box 789, 39000, El Oued, Algeria
R.H.N.Couto and L.A.Couto, Apicultura: Manejo e Produtos, Funep, Jaboticabal,
Brazil, 3rd edition, 2006
Rostagno, M. A., Villares, A., Guillamon, E., Lafuente, A. G., and Martinez, J.
A., 2009. Sample Preparation for the Analysis of Isoflavones from
Soybeans and Soy foods, Journal of Chromatography A, 1216 (2009), 2-
29.
Rostinawati. 2009. Aktivitas Antibakteri Madu Amber dan Madu Putih terhadap
Bakteri Pseudomonas aeruginosa multiresisten dan Staphylococcus aureus
resisten metisilin. Fakultas Farmasi: UNPAD
Salmenlina, S. 2002. Molecular Epidemiology of Methicillin-Resistant
Staphylococcus aureus in Finland. PhD Dissertation. University of
Helsinki. The National Public Health Institute. pp. 88-92.
Sholikhah, M. 2012. Analisis Fitokimia dan Uji Daya Antimikroba Ekstrak
Produk Sarang Lebah Trigona incisa Terhadap Streptococcus sobinus dan
 32

Candida albicans. Skripsi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuam

Alam :UNMUL
 43

Sirait, E. U. 2009.“Hygiene Sanitasi Pengolahan dan Pemeriksaan Escherichia

coli Dalam Susu Kedelai Pada Usaha Kecil Di Kota Medan”. Skripsi. Medan:
Fakultas Kesehatan Masyarakat, Universitas Sumatra Utara
Sukardi, et al., 2001. Optimasi Penurunan Oligosakarida pada Pembuatan Tepung
Ubijalar dengan Cara Fermentasi. Jurusan Teknologi Industri Pertanian,
Fakultas Teknologi Pertanian, Universitas Brawijaya
Supardi, I. dan V Sukamto. 1999. Mikrobiologi dalam Pengolahan dan Keamanan
Pangan. Penerbit Alumni, Bandung.
Suranto, A,. 2004. Khasiat dan Manfaat madu Herbal. Agromedia Pustaka Jakarta
Syafrizal, Nova H, Budiman. 2013. Analisis Fitokimia dan Antioksidan Ekstrak
Serbuk Sari (Bee Pollen) Lebah Trigona spp. Fakultas Matematika dan
Ilmu Pengetahuan Alam: UNMUL
Toelle & Lenda. 2014. Identifikasi dan Karakteristik Staphylococcus sp dan
Streptococcus sp dari Infeksi Ovarium pada Ayam Petelur
Komersial.Politeknik Pertanian: Kupang
Tortora G.J. and Amitrano R.J. 2007.Laboratory Exercises in Anatomy and
Physiology with Cat Dissection. California: Thomson Brooks /Cole
Vassev et al, 2015. Bee Pollen: Chemical Composition and Therapeutic
Application. Hindawi Publishing Corporation Evidence-Based
Complementary and Alternative Medicine Volume 2015, Article ID
297425, 6 pages
Venskutonis. 2007. Antibacterial Activity of Honey and Beebread of Different
Against S. aureus and S.epidermis.Journal Food Technology and
Biotechnology,pp. 201-208.

Warsa, U C .1994. Buku Ajar Mikrobiologi Kedokteran. EGC. Jakarta.

World Health Organization (WHO). Angka Kematian Bayi. Amerika: WHO;

2012.

Willix DJ, Molan PC, Harfoot CG (1992). A comparision of the sensitivity of

wound-infecting species of bacteria to the antibacterial activity of Manuka
honey and other honey. J. Appl. Bacteriol. 73(5): 388-394

Yerlikaya. 2014. Effect of bee pollen supplement on antimicrobial, chemical,

rheological, sensorial properties and probiotic viability of fermented milk
beverages. Faculty of Agriculture Department of Dairy Technology
: Izmir,Turkey.

Yuliana, Renita. 2015. Daya Antimikrobia Sarang Lebah Madu Trigona spp
terhadap Mikrobia Patogen. UGM: Yogyakarta.
 44

Yulianingtyas & Kusmartono. 2016. Optimasi Volume Pelarut dan Waktu

Maserasi Pengambilan Flavonoid Daun Belimbing Wuluh (Averrhoa
bilimbi). Jurnal Teknik Kimia Vol.10, No.2, April 2016
32
i