RESUME VIDEO 1

“TISSUE CUTTING/TISSUE CUTTING IN HISTOPATHOLOGY/TISSUE

CUTTING MACHINE/STAR LABORATORY”

Sumber : https://www.youtube.com/watch?v=3IPSgksBdZ0&feature=youtu.be

Alat kerja :
- Mikrotom dan pisau pemotong yang bagus
- Blok jaringan yang disiapkan dengan baik
- Water bath 50 derajat Celcius
- Alkohol Bath 30 Derajat Celcius
- Piring dingin untuk ice box
- Kaca Objek bersih
- Diamond Pencil
- Jarum dan persyaratan terkait lainnya

Prinsip :
Kita dapat meningkatkan dua langkah utama pemotongan khusus, jadi yang pertama adalah
Pemangkasan jaringan (tissue trimming) dan yang kedua adalah prinsip pemotongan akhir
jaringan (tissue final cutting).

Prinsip dari trimming adalah menghilangkan lilin lapisan di atas jaringan untuk mengekspos
jaringan sepenuhnya ke pisau. Dan yang kedua adalah pemotongan akhir jaringan, jadi akhir
pemotongan berarti jaringan tertanam potong menjadi ketebalan yang konstan dalam sekian
micron bagian tipis hingga siap untuk ditempatkan pada slide.

Metode :
Disini digunakan mikrotom tipe putar, jadi pada mikrotom tipe putar juga ada dua tipe yaitu
tipe lanjutan dan tipe lama. Saat ini sebagian besar sudah menggunakan mikrotom tipe putar
yang canggih ini.
Pada microtome tipe ini kita menggunakan silet sekali pakai, tetapi jika kita mengambil
microtome tipe ini tidak seperti itu, karena pisau ini tidak sekali pakai sehingga ada
kekokohan yang besar yang bisa digunakan disini. Pisau jenis ini dapat digunakan kembali.

Sekarang kita lihat bagaimana kita bisa menggunakan mikrotom prototipe lanjutan ini. Di
mikrotom ini kita akan menggunakan dua pelat terpisah jadi satu untuk pemotongan awal
dan satu lagi untuk pemotongan jaringan terakhir ini. Jadi pisau tumpul dapat digunakan
untuk memotong awal dan pisau yang sangat tajam harus digunakan untuk pemotongan
jaringan akhir

Oke sekarang kita bisa menyimpan pisau pemotong ini pada tempat pisau. Maka sekarang
mari kita sesuaikan sudut pisau ini. Di sini kita perlu memiliki blok VEX yang disiapkan
dengan baik untuk dipasang pada dudukannya dalam posisi penuh.

Sebelum memasang blok ini pada dudukan mikrotom, balok terbaik harus cukup dingin
sehingga kita dapat menggunakan pelat dingin atau balok es ini untuk pendinginan.
Selanjutnya sesuaikan sudut pemangkasan ini biasanya 25 mikrometer hingga 30
mikrometer dapat digunakan untuk pemangkasan ini. Disini saya menyesuaikan ke 25
mikrometer.

Saat kita sudah mulai melakukan pemangkasan atau pemotongan akhir jaringan, semua
harus disimpan dalam posisi kokoh. Blok jaringan harus dipasang dengan kuat pada
dudukannya kemudian pisau harus dipasang dengan kuat tanpa melonggarkan jadi harus
dipasang dengan kuat.
Setelah itu, lakukan pemangkasan. Ketika kita bekerja menggunakan mikrotome selalu
mengatakan kita harus mengikuti SOP yang sudah standar prosedur operasi dan kita bisa
melaksanakan satu persatu prosedur sesuai SOP

Kuas dapat digunakan untuk keperluan pembersihan karena sikat tidak boleh merusak pisau
dan bagian lain dari mikrotom.

Sekarang kita hampir menyelesaikan pemangkasan awal ini, jadi sekarang katakanlah
pindah untuk pemotongan akhir jaringan, jadi untuk pemotongan akhir jaringan ini kita
merubah pisau menjadi pisau pemotong. Pisau pemotong ini harus sangat tajam sehingga
kita bisa mendapatkan bagian yang besar.

Di sini kita bisa menggunakan 3 sampai 5 mikrometer untuk pemotongan akhir jaringan ini
jadi sekarang saya menyesuaikan untuk mikrometer. lalu hati-hati kita lakukan penyesuaian
ini lalu kita lakukan pemotongan akhir jaringan sama seperti pemangkasan ini.

pemotongan pada mikrotom ini harus diputar secara perlahan dan alami agar mendapat hasil
dengan bagian yang tipis, oleh karena itu diperlukan pengalaman yang baik ketika semakin
berkembangnya mikrotom ini mikrotom.
Setelah mendapatkan pita yang bagus kita harus mengeluarkan pita dengan bantuan jarum
dan mentransfernya ke dalam alkohol bath 30%, tapi disini saya tidak menggunakan
alkohol bath saya hanya langsung menaruhnya ke dalam 50oC water bath. Bedasarkan
standar operasional prosedur kita harus memakai alkohol bath 30% untuk mendapatkan
hasil yang baik , tapi sayangnya di sini saya tidak menggunakannya. Dengan bantuan jarum
secara hati – hati kita harus melakukan tissue orientation ini untuk memilih tissue yang baik
untuk memperbaiki bagian atas lapisan.

Sekarang kita akan memilih jaringan untuk fiksasi, sekarang kita ambil keluar jaringan ini
dengan baantuan deck glass. Setelah jaringan yang benar dapat diambil, dengan bantuan
pensil berlian kita beri label pada deck glass dengan hati – hati.

Setelah itu kita hampir selesai pada pemotongan jaringan ini, lalu kita bisa menyimpan
slidenya (deck glass) diatas hot plate untuk melelehkan bagian punggungnya, kemudian kita
terus melakukan proses ini dengan pewarnaan.

Sekarang kita lihat cara menggunakan old rotary tipe mikrotom, prinsip dan mekanisme
sama antara tipe lama dan tipe lanjutan, tapi hanya ada perbedaan pada pisau mikrotom tipe
lama ini lebih besar, padatan dapat direduksi secara permanen dan pisau yang ini dapat
melakukannya.
Sekarang kita mulai pemotongannya, jadi kita juga bisa menggunakan pisau yang terpisah
untuk pemotongan dan pemotongan jaringan akhir, pisau yang tumpul bisa digunakan untuk
pemotongan ini dan pisau yang tajam harus menggunakan untuk pemotongan jaringan akhir.
Sudut pemotongannya sama saja jadi kita bisa menyesuaikan 25 – 30 mikrometer.

Setelah memotong dengan pisau tajam harus digunakan saat pemotongan jaringan akhir.
Sekarang kita berpindah ke pemotongan jaringan akhir, dan sama biasanya kita dapat
mengurangi 3- 5 mikrometer untuk pemotongan jaringan akhir ini. Lalu kembali ke proses
dimana pita jaringan di tempatkan pada water bath hingga pada proses pelabelan dan
penyimpanan di hot plate.

Kepedulian dan pemeliharaan pada mikrotom ini di laboratorium sangat penting, sehingga
setelah kita menggunakan mikrotom ini kita harus mengembalikan atau memposisikan pisau
dan kita harus menghapusnya diluar secara perlahan dan hati – hati dengan bantuan sikat
kimia. Dan terakhir kita simpan pisaunya di dalam kotak kayu untuk menjaga dari
kontaminasi dengan bahan kimia.
 RESUME VIDEO 2
“TISSUE PROCESSING FOR LIGHT MICROSCPY”

Sumber : https://www.youtube.com/watch?v=P0cZKCfyUwE&feature=youtu.be

Ini adalah pandangan di bawah sebuah mikroskop bagian tipis ginjal yang dimiliki ginjal
yang telah diproses dipotong-potong dan diwarnai

Jika anda mencoba untuk memotong sepotong jaringan segar dan melihatnya dengan
mikroskop, semua itu bisa dilihat sebagai struktur yang menggumpal. Ada beberapa masalah
yang jelas, itu tidak permanen sehingga jaringan membusuk.
Bagian yang sulit dipotong tipis-tipis, pastikan cukup untuk memungkinkan cahaya masuk
dan itu tidak memiliki warna. Kesulitan diatasi dengan fiksasi, penyediaan media
pendukung untuk jaringan dan pewarnaan untuk mengawetkan jaringan segar

Itu ditempatkan di fiksatif untuk waktu yang lama sesuai dengan ukuran potongannya dan
jenis fiksatif yang digunakan. Misalnya spesimen dengan ukuran ini akan di fiksasi dalam
formalin selama kurang lebih 36 jam.

Jaringan tetap dipindahkan ke sebuah kaset plastik berlabel, kemudian ditempatkan di

wadah stainless steel.

Lalu dikaitkan dengan lengan otomatis pada mesin pemroses jaringan otomatis. Prosesor
jaringan pembawa diturunkan ke dalam bar pertama dari alkohol 70%. Pengatur waktu
mengatur prosesor menampung gelas kimia yang berisi alkohol untuk meningkatkan
konsentrasi sebagai mesin yang melewati siklusnya. Jaringan terdehidrasi secara bertahap
untuk menghindari penyusutan yang berlebihan

Lilin parafin tidak berlipat ganda dalam alcohol, jadi setelah dehidrasi, jaringan tersebut
terkena pelarut itu dapat larut dengan alkohol dan lilin parafin yang dikenal sebagai pelarut
ini dikenal sebagai agen pembersih karena mereka juga membuat jaringan tembus. Dua
yang terakhir di dalam mesin berisi agen pembersih. Yang digunakan laboratorium ini
adalah kristal pelarut organik tidak beracun. Pada akhir siklus spesimen tersebut direndam
selama satu jam atau lebih dalam pot lilin parafin cair. Produk akhirnya adalah jaringan
yang diresapi dengan lilin cair.

Langkah selanjutnya adalah memblokir spesimen dalam pembawa lilin padat. Oleh laboran
dipindahkan ke pemeriksaan jaringan selanjutnya dan tempat kaset-kaset itu direndam
dalam wadah lilin sehingga kehangatan menjaga lilin tetap cair.

Jaringan diambil dan ini berorientasi seperti yang dipersyaratkan dalam cetakan logam yang
telah diisi dengan lilin modern. Dasar kaset spesimen id di sisinya membentuk penutup
untuk cetakan. Cetakan diberi tambahan lilin dan ditempatkan ke piring dingin yang
berdekatan itu lilin mengeras dan blok paraffin dengan spesimen dikeluarkan dari cetakan
logam. Sampel jaringan sekarang siap untuk langkah selanjutnya yaitu pemotongan bagian

Bagian dipotong menggunakan alat putar bernama mikrotom. Blok jaringan dijepit ke dalam
waktu mikrotom. Itu dimasukkan dan dijepit ke dalam pisau pemegang tempat pisau
dimiringkan. Blok saat penyesuaian akhir telah dibuat panggung terkunci di tempatnya dan
dial disetel sesuai kebutuhan ketebalan secara rutin. 7 mikron memutar pegangan blok
tersebut maju 7 mikron dan diturunkan oper pisau untuk menghasilkan bagian bagian lilin
dan jaringan ini membentuk sebuah pita yang kami angkat dari pisau dan diletakkan di strip.

Karena kompresi, bagian jaringan sedikit berkerut, tetapi sebagian besar lipatan dapat
dilepas dengan mengapungkan pita atau bagian individu pada batang air hangat. Potongan
dikumpulkan ke slide mikroskop. Dan dikeringkan dalam oven dengan suhu 40 derajat
semalaman.
Dilanjutkan pada proses Pewarnaan. Lilin di potongan jaringan dilarutkan oleh zat
pembersih. Slide tersebut kemudian direhidrasi karena pelarut tidak larut dengan pewarna.
Tahap ini hanyalah serangkaian pencucian alkohol dengan penurunan kekuatan
menggunakan air suling. Langkah dewaxing dan rehydrating tersebut dimaksudkan untuk
memasukan air ke dalam jaringan.

Jaringan tersebut sekarang siap diwarnai. Hematoxylin dan eosin secara rutin digunakan
untuk mewarnai bagian histologis. Hematoxylyn menodai inti berwarna biru sampai hitam.
Eosin menodai sitoplasma dan komponen antar sel berwarna merah muda. Jaringan
diwarnai berlebih menggunakan larutan hematoxylin dan kemudian ditempatkan dalam
larutan amonium untuk menghasilkan warna biru tua. Hasil pewarnaan hematoxylin di
banyak komponen jaringan diwarnai biru. Pewarna tersebut kemudian dihilangkan secara
selektif sampai inti dapat terlihat dengan jelas. Ini diperiksa dengan mikroskop. Proses ini
dikenal sebagai diferensiasi. Slide kemudian diwarnai dengan eosin.

Untuk membuatnya permanen, lalu didehidrasi dalam alkohol absolut dan kemudian
dibersihkan di agen pembersih yang mengandung P IX. 'Clearing agent' membuat jaringan
tembus cahaya, P IX adalah media bahan sintetik dan berfungsi sebagai bahan perekat
bening yang menempel pada penutup bagian yang sama. Tetesan P IX ditempatkan pada
kaca penutup slide dengan jaringan yang bernoda diturunkan ke atasnya. P IX akan
mengeras setelah slide ditempatkan dalam oven 40 derajat semalaman. Bagian atas P IX
memiliki indeks bias yang sama dengan kaca. Ini berarti bahwa dalam cahaya hitam, sinar
hitam tidak bisa terdistorsi saat melewati bagian tersebut, lalu bagian atas, dan naik melalui
penutup.
Kesimpulan dari processing tissue adalah meliputi langkah langkah dibawah ini:
- Fixation
- Processing
- Section cutting
- Staining
Singkatnya, pemrosesan jaringan melibatkan fiksasi di mana jaringan diawetkan,
pemrosesan di mana air dihilangkan, dan jaringan diresapi dengan pemotongan bagian lilin
di mana bagian tipis dipotong dari jaringan yang tertanam parafin dan akhirnya pewarnaan
dengan hematoksilin dan eosin memberikan warna merah pada jaringan.
 RESUME VIDEO 3
“LECTURE-#17 PROCESSING OF TISSYE IN
HISTOPATHOLOGY LABORATORY”

Sumber : https://www.youtube.com/watch?v=2-gpxjnaonc&feature=youtu.be

PENGOLAHAN JARINGAN
Pengolahan jaringan merupakan topik yang sangat penting di histologi dan
histopatologi. Histologi dan histopatologi merupakan kata yang berbeda. Histologi terdiri
dari dua kata yaitu , histo = jaringan dan logi/logos= ilmu. Sedangkan histopatologi terdiri
dari tiga kata yaitu histo= jaringan , pato= penyakit , dan logis/logos= ilmu.
Disini akan membahas bagimana tissue proseccing atau pengolahan jaringan.
1. Fiksasi
Yaitu proses mencegah pembusukan., dengan menggunakan 10% Buffer Formaline

2. Dehidrasi
Yaitu menghilangkan cairan/ air dari dalam jaringan yang akan diperiksa, dengan
cara merendamnya di dalam alkohol. Bahan yang digunakannya yaitu ethyl alkohol.

3. Clearing (Pembeningan)
Yaitu menghilangkan atau menghapus alkohol dari bahan dehidrasi dan
mempersiapkan jaringan untuk proses berikutnya yaitu impregnation . Bahan yang digunakan
yaitu Xylen

4. Impregnasi (penetrating of wax)

Proses penggantian cairan dengan parafin yang bertujuan agar jaringan tersebut tidak
mengalami  pengerutan sel akibat dari proses clearing,  Mengeluarkan sampel yang telah
direndam didalam larutan Xylene, dan memasukkan sampel kedalam cassette dan dekkel.
Bahan yang digunakan adalah Liquid Paraffin Wax.

5. Menyematkan/embedding (block preparation)

Yaitu proses menyematkan jaringan seperti kedalam yang berbentuk kotak (kaset)
untuk mengahsilkan blok jaringan yang kemudian diisii dengan menggunakan
paraffin wax (lilin parrafin cair).
6. Pembagian / pemotongan

Alat diatas merupakan alat yang bisa digunakan dalam tahap ini . Alat diatas
digunakan untuk pemotongan blok . Membagi blok jaringan menggunakan
mikrotom. Blok jaringan parafin ditempatkan di mikrotom dan lilin dipangkas
sampai jaringan terbuka. Bagian tipis balok kemudian dipotong.
7. Mandi air
Setelah itu ditempatkan di permukaan penangas air dan dipindahkan ke slide.

8. Pewarnaan
Selanjutnya potongan jaringan yang sudah mandi air diberi pewrnaan .Bahan yang
digunakan dalam pewarnaan yaitu hematoksilin dan eosin
9. Pemasangan (Mounting)

Proses berikut adalah perekatan menempelkan potongan jaringan ke objek glass .

Proses mounting dengan bahan yang digunakan adalah DPX dan Canada balsam,
berfungsi sebagai pengawet .

10. Proses terakhir adalah labeling. Selanjutnya sediaan dapat dilihat di mikroskop.
 RESUME VIDEO 4
“HISTOLOGY : EMBEDDING PROCESS”

Sumber : https://www.youtube.com/watch?v=xIyXA3c3oxU&feature=youtu.be

Untuk praktikum ini membutuhkan peralatan dan bahan yaitu: Paraffin, Sarung tangan, berbagai
macamukuran molds (Cetakan), gunting tang,dan kaset.
Langkah kerja:

1. Nyalakan pelat dingin ke “Embedding center”, pada saat ini pastikan suhu parafin
sekitar 61 derajat dan pastikan wadah parafin telah terisi penuh oleh parafin.”
2. Tempatkan kaset kosong pada penampung dengan urutan numerik, buka dengan hati-
hati untuk mempertahankan integritas spesimen
3. Pilih ukuran base mold yang sesuai untuk mengetahui pembatasan ukuran jaringan
4. Tuangkan sedikit parafin pada base mold
5. Orientasikan jaringan dengan tepat pada base mold untuk memastikan semua jaringan
dalam satu bidang sejajar dengan bagian bawah base mold. Misalnya, jaringan tersebut
perlu disimpan di tepi atau mungkin semua jaringan menghadap ke arah yang sama.
Biarakan parafin panas tadi menjadi dingin.
6. Letakan kaset di atas base mold lalu isi penuh dengan parafin
7. Atur gabungan cetakan dan kaset ke pelat dingin dengan rapi dan sesuai urutan.
Pembekuan yang terjadi secara langsung dan cepat pada blok parafin diinginkan agar
memudahkan pemotongan dan mencegah terbentuknya kristal besar dalam lilin.
8. Ketika parafin sudah cukup mengeras, keluarkan blok dari base mold/
9. Bersihkan blok parafin tanpa mengurangi informasi pasien pada blok lalu masukan ke
dalam kotak.
 RESUME VIDEO 5
“TISSUE PROCESSING IN HISTOLOGY/STAR
LABORATORY”

Sumber : https://www.youtube.com/watch?v=GpFhokoAybU&feature=youtu.be

Kita akan membahas tentang pengolahan jaringan ini dengan menggunakan

pengolah jaringan roket dan pipa vakum ini.
Prinsip di balik pemrosesan ini yaitu : "proses yang meliputi pencucian, dehidrasi,
pendengaran, dan wax impregnation disebut pemrosesan jaringan". Definisi itu sendiri
mengatakan tentang empat langkah utama dalam pemrosesan jaringan ini.
Jadi langkah pertama adalah
01. Washing /Pencucian
Pencucian dilakukan dengan aquades ini, bagaimana cara finishingnya? Jaringan
harus dicuci bersih dengan air suling ini untuk menghilangkan semua cairan fiksatif.
02. Degydration /Dehidrasi
Dehidrasi dilakukan dengan serangkaian etil alkohol, jaringan itu sendiri memiliki
air sehingga air ini harus mengalami dehidrasi. Oleh karena itu jaringan harus dikirim dalam
rangkaian accending sehingga kita dapat memulai dari:
* 60% etil alkohol
* 70% etil alkohol
* 80% etil alkohol
* 90% etil alkohol
* Absolute I
* Absolute II
* Absolute III
03. Clearing - Xylene
Jadi xylene juga harus dalam 3 perubahan, xylene 1,2, dan 3. Setelah dehidrasi jaringan kita
harus menghilangkan etil alkohol dari jaringan ini. Jadi kami menggunakan perubahan
xylene 3.
* Xylene I
* Xylene II
* Xylene III
04. Wax Impregnation – Paraffin Wax
Setelah dehidrasi, beberapa ruang vakuola atau rongga dapat muncul di dalam jaringan
karena kita memiliki air untuk membuang air dari jaringan. Jadi wax juga bisa menjadi 3
perubahan yang bisa kita gunakan disini untuk mengisi ulang gigi berlubang tersebut
* Parafin Wax I
* Parafin Wax II
* Parafin Wax III

PERSYARATAN UNTUK PENGOLAHAN TISSUE INI.

HAL PERTAMA YANG PERLU KAMI LAKUKAN OTOMATIS
- TISSUE PROCESSOR
DI SINI KAMI AKAN BERBICARA TENTANG 2 JENIS PENGOLAHAN JARINGAN:
1. The Vacuum Type
2. The Rotary Type Tissue Processor
Maka kita membutuhkan file
-METAL BASKET untuk menampung kaset ini
- Forcep
- Kaset dan fixed tissue

METODE
Pertama, tentang “The Rotary Type Tissue Processor” PRINSIP-PRINSIPNYA SAMA
DENGAN METODE MANUAL DAN METODE OTOMATIS INI.
Jika kita mempertimbangkan metode manual ini, kita menggunakan reagen simultan kita
harus mengganti kaset dari satu stasiun ke stasiun lain, jadi di sini juga hal yang sama kita
akan lakukan ini tetapi satu-satunya hal adalah ada sistem otomatis itu berarti kita dapat
mengatur sistem sesuai dengan operasi, jadi setiap akhir waktu, dua keranjang ini akan
berubah dari satu stasiun ke stasiun lain.
Jadi ini adalah 2 wadah logam yang berisi lilin mulai dari 60% - 90% dan absolut I, II, III.
Kemudian yang kedua adalah AUTOMATED VACUUM TISSUE PROCESSOR, jadi ini
adalah mesin satu-satunya yang digunakan di laboratorium karena dapat memberikan hasil
yang baik.

Ada ruang hampa udara yang dapat dilihat di dalam mesin ini, sehingga gradien akan diisi
di dalam ruang tersebut. Sebelum menggunakan mesin, sangat penting untuk memeriksa
level reagen wadah ini. Seri reagen dan konsentrasinya sama dan akhirnya akan
memberikan empat perubahan ini pada lilin vakum ini, tetapi selain itu ada arang aktif yang
dapat menahan sistem ini, sehingga jarang aktif ini dapat menyerap asap ini dan bahan
biologis lainnya sebagaimana adanya. zat dari ruang vakum ini. Jumlah risiko bahaya dapat
dikurangi di mesin ini dan asap serta sensor biologis lainnya tidak akan menghasilkan .........
PENGOLAHAN JARINGAN DENGAN MENGGUNAKAN PENGOLAH JENIS
CUBE INI
- SAYA TELAH MEMOTONG JARINGAN DAN MEREKA MENEMPATKAN KE
KASET
-JADI SEKARANG MASUKKAN KASET KE KASET LOGAM

-Lalu sekarang mari kita siapkan keranjang ini ke dalam ruang PROSESOR tisu ini

- Setelah itu kita tutup dan kunci

- Kemudian kita tekan tombol start untuk menjalankan processor ini

- Durasi waktu di program otomatis jadi biasanya akan memakan waktu 18 jam untuk
menyelesaikan pemrosesan jaringan
- Setelah 18 jam kita bisa melepas kasetnya kemudian tissue akan dikirim ke laboratorium.