1.

Bahan Baku dan Kimia

Kue Rapeseed Defatted diperoleh dari pakan ternak Sunrise Pvt. Ltd. (Anand, Gujarat, India).
Polivinil alkohol (PVA), gliserol, minyak silikon dibeli dari Sigma (St. Louis, U.S.A).
Natrium hidroksida, asam klorida, albumin serum sapi (BSA) dan kalsium karbonat dibeli
dari HI-media (Mumbai, India).
2. Analisis kue yang dihilangkan lemaknya
Kue rapeseed yang dihilangkan lemaknya dianalisis untuk kadar protein, kadar air, kadar
serat dan kadar minyak dengan metode standar. Protein diperkirakan dalam kue yang
dihilangkan lemaknya dari kandungan nitrogen dengan metode kjeldahl. Hasil analisis
ditabulasikan pada tabel 1 [24].
3. Ekstraksi protein dari Rapeseed Defatted cake (DFC) dan estimasi protein
1. Larutkan Rapeseed DFC dalam larutan natrium hidroksida (0,1M sampai 2M), dengan
perbandingan 1:20 (b / v) (DFC:Natrium hidroksida).
2. Panaskan larutan hingga suhu 50 ° C dalam jangka waktu 1 sampai 5 jam, kecepatan
pengadukan digunakan untuk pelarutan protein dari kue yang dihilangkan lemaknya.
3. Saring larutan ekstrak yang mengandung protein menggunakan kain linen untuk
menghilangkan residu.
4. Setelah itu, lakukan penambahan tetesan asam klorida 0,1N, sampai titik iso-elektrik
tercapai untuk pengendapan protein.
5. Kumpulkan protein yang dihasilkan dengan menggunakan centrifuge dan keringkan
pada suhu 45°C dalam oven udara panas. Bubuk protein kering digunakan untuk
estimasi protein dan persiapan lembaran bioplastik.
Uji protein Folin-Lowry
1. Ambil aliquot yang berbeda dari Albumin Serum Bovine standar (BSA, 200 μg% (w /
v)) dan masukkan dalam tabung reaksi yang berbeda dalam kisaran 0,2 sampai 1,0 ml.
2. Kemudian, tambahkan 5 ml reagen Lowry (tembaga alkali sulfat) ke semua tabung
dan inkubasi selama 10 menit pada suhu kamar.
3. Setelah inkubasi, tambahkan 0,5 ml reagen Folin encer 1: 2 pada setiap tabung reaksi
dan biarkan bereaksi selama 30 menit pada suhu kamar di tempat gelap.
4. Ukur kepadatan optik sampel pada 750 nm menggunakan spektrofotometer. Plot
konsentrasi v / s optical density dibangun dan kandungan protein dari sampel yang
tidak diketahui diukur [26].
4. Formulasi dan fabrikasi lembaran bioplastik
Untuk menyiapkan lembaran bio-plastik Rapeseed protein isolate (RPI), poly vinyl alcohol
(PVA) dan aditif lainnya dicampur secara menyeluruh dalam dua roll mill. Komposisi umum
lembaran bioplastik berbasis protein adalah RPI (41%), PVA (41%), dan gliserol (18%).
1. Tambahkan masing-masing minyak silikon (0,5%) dan kalsium karbonat (CaCO3)
sebagai pelumas dan pengisi.
2. Tambahkan berbagai konsentrasi (40%, 50% dan 60%) dari pengisi CaCO3 dengan
berat total dari masing-masing lembaran dan campur campuran ini menggunakan 2
gilingan gulung. Juga siapkan lembaran bioplastik tanpa CaCO3 yang dianggap
sebagai kontrol.
3. Dalam dua gilingan gulung, campur campuran selama 20 menit pada suhu 100 ° C,
setelah pencampuran selesai lalu dibuat palet.
4. Pelet ini dikompresi dalam cetakan kompresi pada suhu 140°C selama 2 jam tanpa
memberikan tekanan, setelah itu berikan tekanan 40 kg / cm2 selama 10 menit.
5. Kumpulkan lembar bioplastik yang telah disiapkan setelah cetakan didinginkan.
6. Kemudian ukur sifat mekanik, sifat termal dan morfologi permukaan lembaran
bioplastik yang dihasilkan.
5. Sifat mekanik
Sifat mekanik lembaran bio-plastik yang dihasilkan dievaluasi tergantung pada aplikasinya
menggunakan standar ASTM.
5.1 Kekuatan tarik dan% Perpanjangan
Kekuatan tarik lembaran bio-plastik yang dihasilkan ditentukan sesuai dengan ASTM D-638)
menggunakan mesin uji universal (Shimadzu AG-100kN, Jepang) [27]. Spesimen berbentuk
lonceng digunakan untuk kekuatan tarik dan% elongasi. Pemisahan pegangan awal
ditetapkan pada 20 mm; sedangkan kecepatan cross-head ditetapkan pada 50 mm / menit.
Ketebalan dan lebar sampel diukur menggunakan kalipermikrometer. Kekuatan tarik dihitung
dengan membagi beban maksimum yang dikembangkan selama pengujian dengan luas
penampang lembaran awal. % perpanjangan putus dihitung dengan membagi perpanjangan
lembaran pada saat pecah dengan panjang awal lembaran dan mengalikannya dengan 100.
Rumus kekuatan tarik dan% elongasi dijelaskan sebagai berikut:
[Rumus Tensile Strength]
5.2 Kekuatan dampak
Kekuatan benturan adalah metode untuk menentukan ketahanan benturan lembaran. Ini
adalah uji laju regangan tinggi standar yang menentukan jumlah energi yang diserap oleh
material selama fraktur. Kekuatan benturan dari lembaran bio-plastik yang dihasilkan
ditentukan sesuai dengan ASTM D-256 menggunakan penguji dampak (Model DG-UB2,
Toyo seikiseisaku-sho Jepang) [28].
5.3 Kekuatan dan modulus lentur
Kekuatan lentur dan modulus lentur lembaran bioplastik yang dihasilkan diukur dengan
metode tekuk tiga titik. Kekuatan lentur mewakili tekanan tertinggi yang dialami dalam
material pada saat pengangkatannya. Pengujian lembaran bio-plastik yang dihasilkan
dilakukan sesuai dengan ASTM D-790 menggunakan mesin uji universal (Shimadzu AG-
100kN, Jepang) [29]. Spesimen penampang persegi panjang (3,12 mm × 15,6 mm × 105
mm ) yang berperilaku sebagai balok yang diuji pada lentur. Kecepatan cross head adalah 5
mm / menit. Rumus yang digunakan untuk menghitung kuat lentur dan modulus sebagai
berikut:
[Rumus Flexural Strength]
6. Studi degradasi lembaran bio-plastik
Studi biodegradasi dari lembaran bioplastik yang dibuat dilakukan dengan menggunakan
berbagai metode yaitu. kondisi alam, kondisi laboratorium dalam tanah dan media cair.
6.1 Studi degradasi bioplastik dalam kondisi alami
Degradasi lembaran bioplastik berbasis protein dilakukan pada kondisi alami seperti tanah
pertanian, tanah kompos dan tanah berpasir. Lembaran bioplastik (2 g) diinokulasi pada
kedalaman 10 cm di bawah masing-masing tanah. Untuk degradasi tanah kompos, 100 g
kompos (25 cm x 25 cm x 3 cm) dibuang di kedalaman 5 cm tanah lahan pertanian. Rasio
kelembaban tanah dipertahankan kira-kira. 50-60% dan air suling disemprotkan ke tanah.
Biodegradabilitas bioplastik dievaluasi dengan mengukur% berat badan lembaran setelah
inkubasi selama 48 hari. Lembaran bioplastik diekstraksi, dicuci dengan air suling untuk
menghilangkan partikel tanah yang tidak diinginkan dan dikeringkan dalam oven udara panas
pada suhu 50 ° C sampai diperoleh berat konstan dari lembaran bioplastik. % penurunan berat
badan diukur menggunakan rumus berikut:
[Rumus % weight loss]
6.2 Studi degradasi bioplastik dalam kondisi laboratorium di dalam tanah
Tanah lahan pertanian digunakan untuk analisis degradasi lembaran bioplastik dalam kondisi
laboratorium. Itu disterilkan (tekanan 15 lbs) selama 45 menit pada 121 ° C. Analisis tanah
dilakukan untuk mengetahui komposisi unsur hara tanah dari GSFC (Vadodara, Gujarat).
Hasil analisis tanah dari tanah pertanian diberikan sebagai berikut: C: N (0,43%), P (36 kg /
Ac), K 108 kg / Ac, S (22,30 mg / L), Cu (2,32 mg / L), Fe (62,60 mg / L), Mn (28,76 mg /
L), dan Zn (0,7 mg / L). Gelas plastik diambil untuk analisis degradasi. 1 g lembaran
bioplastik disimpan pada kedalaman 5 cm cawan dan kultur bakteri
(ComamonasacidovoransMTCC 3364, Bacillus megaterium dan konsorsium) diinokulasi (10
ml, O.D. 1,00) di sekitar lembaran bioplastik. Rasio kelembaban tanah dipertahankan dengan
menyemprotkan air suling ke tanah (kelembaban 50-60%). % penurunan berat badan diukur
dengan metode yang sama seperti di atas.
6.3 Studi degradasi bioplastik dalam medium cair
Comamonasacidovorans MTCC 3364, Bacillusmegaterium dan konsorsium kedua bakteri
diambil untuk media degradasi cair. Percobaan yang mengandung media garam mineral
(MSM) diautoklaf pada 121 ° C selama 15 menit, diinokulasi dengan kultur bakteri dalam
labu individu dan diinkubasi pada suhu kamar dalam kondisi statis selama 36 hari. Pada
percobaan biodegradasi terdiri dari 12 labu untuk masing-masing mikroorganisme, 6 labu
bersifat biotik (dengan mikroorganisme) dan 6 labu kontrol abiotik (tanpa mikroorganisme).
Sampel individu diekstraksi setelah setiap 6 hari, dan dianalisis secara berkala untuk
penurunan berat badan (%). Satu ml sampel diambil untuk diukur kerapatan optiknya pada
600 nm. Kultur cairan disaring menggunakan kertas saring Whatman; lembaran bioplastik
yang terdegradasi dibuang dan disimpan dalam oven udara panas untuk dikeringkan pada
suhu 50 ° C. Filtrat ini selanjutnya disentrifugasi pada 7500 rpm selama 10 menit. %
penurunan berat badan diukur dengan metode yang sama seperti di atas.
7. Mikroskopi Elektron Pemindaian Pistol Emisi Lapangan
Lembar bioplastik terdegradasi yang dikeringkan dengan udara dipelajari menggunakan
mikroskop elektron pemindai pistol emisi lapangan (FEG Nano Nova SEM 450, FEI Ltd.,
USA) dalam kondisi vakum tinggi pada 5,00 kV dengan perbesaran 2000x untuk mendeteksi
struktur mikro dan morfologi permukaan.