Video Prosedur ColonaCell-HY

The ColonaCell Product line provides on efficient method for selecting and cloning hybridomas after
fusion between immune splenocytes and myeloma cells

Produk ColonaCell menyajikan metode yang efisien untuk memilih dan mengkloning hibridoma setelah
penggabungan/fusi antara sel B dan sel meiloma

The semi-solid media allows single cells to grow into discrate colonies that can bes isolated easly.

The ensures a high probability of monoclonality, there by minimizing the need for subcloning. Due to the
fact that discrate clonal colonies are formed and both slow and fast-growing colonies are isolated, the
probability of obtaining rare, high-quality and high-yielding colonies is also increased. The ClonaCell-HY
Kit includes all components for the development of monoclonal antibodies.

Media semi-padat memungkinkan sel tunggal untuk tumbuh menjadi koloni terpisah yang dapat diisolasi
dengan mudah. Hal ini menjadikan kemungkinan monoklonalitas yang tinggi, dengan meminimalkan
kebutuhan untuk subklon. Koloni klonal terbentuk dan keduanya lambat, koloni yang tumbuh cepat
dapat diisolasi, kemungkinan untuk mendapatkan koloni langka, berkualitas tinggi, dan unggul juga
meningkat. Kit ClonaCell-HY mencakup semua komponen dalam pembentukan antibodi monoklonal.

Bahan yang digunakan:

Media A untuk kultur sebelum fusi

Media B untuk fusi

Media C untuk pemulihan

Media D untuk seleksi dan kloning

Media E untuk setelah seleksi dan pertumbuhan kloning

Polyethylene Glycol (PEG) untuk tahap penggabungan/fusi

Prosedur detail bisa ditemukn di ClonalCell-HY (Kit Kloning Hibridoma teknik manual).

Langkah pertama yang dilakukan dalam video ini adalah persiapan sel mieloma, kedua adalah persiapan
Splenocytes, ketiga adalah fusi, keempat adalah seleksi dan kloning dan kelima adalah harvesting.

1. Sel mieloma
Persiapan sel mieloma (kanker) dengan mencairkan sel mieloma dan kultur di Media A minimal 1
minggu sebelum melakukan penggabungan/fusi. Setidaknya harus ada paling sedikit 20 juta sel mieloma
untuk penggabungan. Memasukka ke dalam tabung 50 ml kemudian melakukan sentrifugasi. Cuci
sekitar 3 menit dengan Media B. Ambil supernatan dan masukkan dalam tabung 25 ml pada Media B.

Melakukan perhitungan, dimana viabilitasnya harus lebih besar dari 95%. Hitunglah volume yang
dibutuhkan untuk 20 juta sel yang terus menerus tumbuh.

2. Sel limpa

Persiapan sel limpa: pisahkan limpa menjadi suspensi sel tunggal. Untuk memisahkan limpa, tempatkan
saringan di atas tabung dengan ukuran 50 ml. Terlebih dahulu, basahi saringan dengan 5 ml media B dan
letakkan limpa pada kasa. Melumatkan limpa menggunakan plunger dari jarum suntik ukuran 3 ml. Bilas
kasa dengan menyiram semua splenosit melalui jaringan dan masukkan ke dalam tabung. Cuci splenosit
sekitar 3 menit dengan Media B. Ambil supernatan menggunakan pipet sambil menuangkannya dan
masukkan dalam tabung 25 ml pada media B.

Melakukan perhitungan, hitung volume yang dibutuhkan untuk 100 juta sel.

Sangatlah penting untuk mencuci sel mieloma dan sel limpa dengan serum Media B. Jika serum tidak
dihilangkan, Polietilena glikol (PEG) tidak akan menyatukan membran sel dan frekuensi fusi akan turun
drastis.

Persiapan mieoloma dan limpa dapat dilakukan dalam waktu yang bersamaan untuk memastikan bahwa
satu jenis sel tidak berada dalam waktu lama.

3. Fusion/penggabungan

PEG pada Media A, B, dan C dibutuhkan untuk penggabungan sel. Panaskan terlebih dahulu pada suhu
37°C. Pastikan water bath dengan suhu 37°C siap untuk tahap penggabungan.

Tambahkan 20 juta sel mieloma dan 100 juta sel limpa ke dalam tabung berukuran 50 ml.

Melakukan sentrifugasi dan keluarkan supernatan, hal tersebut penting untuk menghilangkan
supernatan sepenuhnya untuk menghindari pengenceran PEG yang akan ditambahkan nanti. Ketuk
bagian bawah tabung untuk memecah pelet. Tambahkan 1 ml PEG tetes demi tetes menggunakan 1 ml
pipet serologis. PEG harus ditambahkan selama 1 menit tanpa diaduk. Setelah itu aduk dengan pipet tip
selama 1 menit.

Baruji itu saya ges, itupun ada masih nd bagus katanya keknya