Efek antifolat methotrexate berasal dari struktur yang mirip dengan struktur asam folat yang

memungkinkan penghambatan kompetitif dihydrofolate reductase (DHFR).

Mirip dengan MTX, folat sedang poliglutamat, ketika unit glutamat ditambahkan ke mereka
dimediasi oleh katalisis enzim. MTX poliglutamat memiliki afinitas yang lebih tinggi untuk enzim jalur
folat. Difusi folat melalui membran sel tidak banyak diekspresikan, oleh karena itu mereka
membutuhkan transporter khusus untuk masuk ke dalam sel. Transporter folat tereduksi (RFC1)
tidak hanya terlibat dalam mentransfer folat ke sel, tetapi juga MTX.

DHFR adalah enzim kunci dalam proses sintesis timidilat, DHFR mengkatalisis reduksi folat menjadi
THF melalui

1. Asam folat direduksi menjadi DHF, selanjutnya DHF direduksi menjadi THF
Bentuk folat aktif (5,10,metilen-THF, 10-formil-THF dan 5-metil THF) donor unit monokarbon
seperti metilen, formil dan metil
THF diubah menjadi 5,10-metilen-THF dengan enzim hidroksi metiltransferase (terlibat juga
dalam konversi L-serin menjadi glisin)
5,10-metilen-THF merupakan donor karbon dan koenzim dalam metilasi 2-deoxyuridine-5-
monophosphate (dUMP) menjadi 2-deoxythymidine-5-monophosphate (dTMP) dimediasi
oleh sintesis timidilat. Kurangnya THF secara langsung mempengaruhi sintesis pirimidin de
novo
Sintesis timidilat juga secara langsung dihambat oleh metotreksat , dihidrofolat tidak
dimetabolisme.
5,10-metilen-THF dikoversi melalui dua jalur yaitu 5-metil-THF (dimediasi oleh
metilenatetrahidrofolat reduktase) dan 10-formil-THF (dimediasi oleh 5,10-metenil-THF)
Metionin adalah prekursor S-adenosil metionin, asam amino yang bertindak sebagai substrat
untuk metilasi, termasuk metilasi DNA
5-metil-THF adalah koenzim yang diperlukan sebagai regenerasi dari homosistein menjadi
metionin oleh metil tetrahidrofolat-homosistein metiltransferase (metionin sintase)
10-formil-THF adalah substrat yang diperlukan untuk sintesis purin de novo
Penghambatan sintesis purin de novo diinduksi oleh dihydrofolates konsentrasi tinggi, serta
efek langsung dari metotreksat pada glycinamide ribonucleotide (GAR) transaminase dan 5-
aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside (AICAR) transformylase yang mengubah
AICAR menjadi inosine monophosphate (IMP)
Penurunan sintesis purin dan pirimidin menghambat proliferasi sel, menghambat sintesis de
novo purin dan pirimidin, MTX juga dianggap sebagai obat antineoplastik

DHFR adalah enzim kunci dalam proses sintesis timidilat, mengkatalisis reduksi folat menjadi
tetrahidrofolat (THF) dalam dua langkah: selama langkah pertama folat direduksi menjadi
dihidrofolat (DHF), yang selanjutnya direduksi menjadi THF [28]. Beberapa bentuk folat aktif hadir
dalam organisme, seperti 5,10-metilen-THF, 10-formil-THF dan 5-metil-THF, yang merupakan donor
unit monokarbon seperti metilen, formil dan metil [29]. THF diubah menjadi 5,10-metilen-THF,
dimediasi oleh enzim hidroksi metiltransferase yang juga terlibat dalam konversi L-serin menjadi
glisin. 5,10-metilen-THF adalah donor karbon dan koenzim dalam metilasi 2-deoxyuridine-5-
monophosphate (dUMP) menjadi 2-deoxythymidine-5-monophosphate (dTMP) yang dimediasi oleh
thymidylate synthase. Kurangnya THF secara langsung mempengaruhi sintesis pirimidin de novo
[30]. Sintase timidilat juga secara langsung dihambat oleh MTX, serta dihidrofolat yang tidak
dimetabolisme. 5,10-metilen-THF memiliki dua jalur konversi lebih lanjut, satu menjadi 5-metil-THF,
dimediasi oleh metilenatetrahidrofolat reduktase dan yang lainnya menjadi 10-formil-THF melalui
5,10-metenil-THF [28]. Metionin adalah prekursor S-adenosil metionin, asam amino yang bertindak
sebagai substrat untuk metilasi, termasuk metilasi DNA [29]. 5-metil-THF adalah koenzim yang
diperlukan untuk mendaur ulang homosistein menjadi metionin oleh metil tetrahidrofolat-
homosistein metiltransferase, juga dikenal sebagai metionin sintase. 10-formil-THF adalah substrat
yang diperlukan untuk sintesis purin de novo. Namun, selama penghambatan DHFR, konsentrasi
selulernya berada di kisaran 80% dari konsentrasi biasa. Informasi ini sejalan dengan pengetahuan
bahwa de novo penghambatan sintesis purin diinduksi oleh konsentrasi dihydrofolates yang lebih
tinggi, serta oleh efek langsung MTX pada glycinamide ribonucleotide (GAR) transaminase dan 5-
aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside (AICAR) transformylase yang mengubah AICAR
menjadi inosine monophosphate (IMP).

Penurunan sintesis purin dan pirimidin menghambat proliferasi sel, terutama pada sel seperti
limfosit T, sehingga MTX memiliki efek antiinflamasi. Karena MTX juga menghambat sintesis de novo
purin dan pirimidin, MTX juga dianggap sebagai obat antineoplastik