OBAT BIOLOGI

(BIOLOGIC DRUG)

ANA INDRAYATI
FAKULTAS FARMASI USB
anaindrayati@setiabudi.ac.id
08156266891
MATERI
1. Protein terapeutik
2. DNA/RNA terapeutik
3. CRISPR-Cas 9
4. Bakteriofaga sebagai obat
5. Farmakogenomik
 OBAT BIOLOGI: obat yang berasal dari makhluk
hidup berupa jaringan, sel, DNA, RNA dan protein
▪ Dunia Farmasi: obat kimia (sintetik) dan obat biologi
▪ Obat biologi: biopharmaceuticals (biotechnology-derived pharmaceuticals),
biologic(al) medical product, biologic
▪ Obat biologi non-rekombinan-> diisolasi langsung dari sumber
penghasil
▪Insulin: diekstraksi dari pankreas hewan (sapi dan babi)
▪Artemisinin: diekstraksi langsung dari Artemisia annua
▪ Obat biologi rekombinan-> rekayasa genetika (kloning)
▪Insulin manusia: diproduksi di bakteri Escherichia coli
▪Artemisinin: diproduksi di sel ragi Sacharomyces cerevisiae
Metabolit Sekunder Fakta-fakta dan Permasalahannya
Paclitaxel (kanker Kadar pada kulit batang 0,01-0,02%, 1 g taxol/3 batang
ovarium, payudara, pohon, pengobatan membutuhkan 2 g, dibutuhkan waktu 100
paru-paru, pankreas) tahun untuk mendapatkan pohon dewasa yang cukup besar
untuk dipanen, permintaan pasar 250 kg/tahun. Sintesis kimia
sulit dan sangat kompleks

Vincristine/Vinblastin Kadar 1 mg/kg BK daun, untuk 1 kg vincristine diperkirakan

e (leukemia, limfoma, dibutuhkan 1000 ton daun kering yang ditanam pada lahan
mieloma) 1000 ha, jalur biosintesis belum terelusidasi lengkap. Sintesis
kimia sulit.

Artemisinin Kadar pada daun (normal 0,05-0,2%, tertinggi 1,4%), hanya

(malaria) disimpan di kelenjar sekresi trichome, sulit disintesis secara
kimia (karena terdapat jembatan endoperoxide dan banyak
atom C kiral), herba tahunan.
Taxus sp.

Artemisia annua
• OBAT BIOLOGI/BIOLOGIC
• OBAT INOVATOR/ORIGINATOR/REFERENCE
• BIOSIMILAR/FOLLOW OF BIOLOGIC (US dan Eropa): similar
(keamanan, kemurnian, profil efikasi) dengan originator> diproduksi
setelah masa paten produk innovator berakhir
• BIOBETTER: better (potensi/efikasi, kemurnian protein, waktu paro
lebih panjang, dosis kecil, imunogenesitas dan toksisitas rendah, efek
samping kecil.
▪ Dapat diproduksi tanpa menunggu berakhirnya masa paten
produk innovator
▪ Komponen active biobetter berbeda dengan produk inovator
▪ Targetnya biobetter sama dengan produk innovator
BIOSMILIAR DAN BIOBETTER:
DERIVATIF DARI BIOLOGIC (ORIGINATOR/INNOVATOR/REFERENCE)
 INSULIN NON- INSULIN
REKOMBINAN REKOMBINAN BIOSIMILAR BIOBETTER
(pankreas hewan) (Humulin: innovator)
PERBANDINGAN BIOSIMILAR-BIOBETTER
Biosimilar
Keterbatasan: struktur (komponen aktif
mirip dengan produk innovator)
Similar: keamanan dan profil
efikasi/potensi
Approve: data (comparability data) mirip
dengan produk innovator
Tidak berhak mendapatkan proteksi
paten dan eksklusivitas data
Biobetter
Tidak ada keterbatasan struktur:
modifikasi kimia/molekuler (komponen
aktif berbeda dengan produk innovator)
Improve: keamanan dan profil
efikasi/potensi
New drug: data klinik dan non-klinik
Inovatif: berhak mendapatkan proteksi
paten dan eksklusivitas data
PROTEIN TERAPEUTIK
Insulin manusia rekombinan (rHI):
(Humulin®)
• 1970 diproduksi di E. coli
• 1982 disetujui FDA
 Antibodimonoklonal (monoclonal antibody,
MAB)
HBsAg: Hepatitis B Surface Antigen • Alemtuzumab (Campath): chronic
HPV: Human Papiloma Virus lymphocytic leukemia (CLL)
Protein sebagai vaksin: vaksin 2 • Bevacizumab (Avastin): cervical,
Hbsag, vaksin HPV colorectal, non-small-cell lung, kidney,
and some brain cancers
1 • Rituximab (Rituxan): non-Hodgkin's
lymphoma.

KLASIFIKASI 3
PROTEIN
Protein untuk diagnosis: leptin,
TERAPEUTIK glukagon, N-protein (Covid-19)

Protein sebagai enzim atau

regulator: insulin, laktase,
interferon,eritropoetin, hirudin, 3
streptokinase,
 Bereaksi sangat spesifik
dengan satu target, sehingga
toksisitasnya lebih rendah

Minim efek samping

karena dihasilkan oleh
Potensi KEUNGGULAN tubuh kita sendiri
mengganggu • Insulin: sel beta
PROTEIN
proses normal di pankreas
dalam tubuh kecil
TERAPEUTIK • Antibodi: sel
limfosit B
• Eritropetin: sel
ginjal dan hati
Pengganti protein tubuh yang • Interferon: sel darah
abnormal (gen penyandi protein putih
tersebut termutasi)
 TAHAPAN PRODUKSI
PROTEIN REKOMBINAN

Produksi Ekstraksi,
Kloning
protein Pemurnian,
Protein Formulasi
Skala besar Karakterisasi
rekombinan
(Fermentasi) protein

Memenuhi
persyaratan:
mutu, efikasi,
safety

https://courses.lumenlearning.com/wm-nmbiology1/chapter/reading-
prokaryotic-and-eukaryotic-gene-regulation/
DNA/RNA TERAPEUTIK
 RNA ANTISENSE

RNA ANTISENSE: oligonukleotida (16-21)

Komplemen mRNA
Menghambat translasi
Duplek mRNA-RNA antisense
Degradasi RNAaseH
 MIPOMERSEN
(KYNAMRO)
FAMILIAL HYPERCHOLESTEROLEMIA-> GENETIK-> CHOLESTEROL-REDUCING DRUG
Apo B-100 (disebut juga
Apolipoprotein B/Apo B)
merupakan protein yang
terlibat dalam metabolisme
lipid dan merupakan unsur
protein utama dari
lipoprotein seperti LDL (Very
Low Density Lipoprotein) dan
LDL (Low Density Lipoprotein)
Komponen LDL
Satu molekul LDL
mengandung satu molekul
apo B. Konsentrasi apo B
dalam darah mencerminkan
jumlah partikel LDL yang
dalam darah
 Fomivirsen (Vitravene)
Retinitis: radang pada retina
▪ Infeksi oleh
Cytomegalovirus
▪ Cytomegalovirus resisten
terhadao antiviral
▪ Mutasi UL97: resisten
terhadap ganciclovir dan
valganciclovir
▪ Mutasi UL54: multidrug
resisten
▪ TERAPI ANTISENSE:
Fomivirsen
• Fomivirsen: memblok translasi mRNA virus dengan cara berikatan dengan mRNA
UL123 yang menyandi protein IE2
• Replikasi virus tidak terjadi
RNA ANTISENSE UNTUK PENGOBATAN KANKER

• Genta scientists: mengisolasi

mRNA Bcl-2 (B cell lymphoma-2)
• Protein antiapoptosis (inhibitor
apoptosis), sel immortal, sel
kanker
• DNA antisense: 12-22 nukleotida
• Translasi dihambat, protein Bcl-2
tidak dapat disintesis
TERAPI GEN
 TERAPI GEN
• TEKNIK TERAPI UNTUK
MEMPERBAIKI GEN YANG RUSAK
(ABNORMAL/CACAT) PENYEBAB
PENYAKIT
• MENGGUNAKAN FRAGMEN DNA
UNTUK MEMPERBAIKI GEN YANG
MENGALAMI KERUSAKAN
PEMBAWA (VEKTOR) TERAPI GEN
• TRANSFER GEN KE DALAM SEL MEMBUTUHKAN VEKTOR
• FUNGSI VEKTOR MEMBAWA GEN YANG TELAH DIPERBAIKI KE SEL
TARGET (SEL YANG GENNYA RUSAK)
• VEKTOR YANG BANYAK DIGUNAKAN ADALAH VIRUS YANG SUDAH
DIREKAYASA GENETIK
ADENOVIRUS (MATERI GENETIK DNA)
RETROVIRUS (MATERI GENETI RNA)
ADENO-ASSOCIATED VIRUS
HERPES SIMPLEK VIRUS (HSV)
❖VIRUS MEMBAWA GEN
YANG TELAH DIPERBAIKI
❖GEN MASUK KE DALAM SEL
TARGET
❖GEN TERSEBUT AKAN
DIEKSPRESIKAN (REPLIKASI,
TRANSKRIPSI, TRANSLASI
UNTUK MENGHASILKAN
PROTEIN
❖PROTEIN YANG
DIHASILKAN DIGUNAKAN
SEBAGAI OBAT -> PROTEIN
TERAPEUTIK
BAGAIMANA CARA MEMASUKKAN
GEN TERAPI KE DALAM SEL?

BIOLISTIC GENE GUN

DNA plasmid
dibungkus dengan
partikel berukuran 1–3
mikron (emas atau
tungsten).
• Beberapa terapi gen telah disetujui oleh FDA US, termasuk
Kymriah® untuk leukemia, Luxturna™ untuk penyakit
genetik pada retina, Zolgensma® untuk Spinal Muscular
Atrophy, eteplirsen untuk Duchene Muscular Dystrophy,
Trikafta® untuk cystic fibrosis, dan Zynteglo™ untuk
talasemia yang masih dalam pertimbangan
CRISPR-Cas9
TEKNOLOGI MENGEDIT GEN
• Zinc-finger nucleases (ZFNs)
• Transcription activator-effector nucleases (TALENs)
• Clustered regularly interspaced short palindromic
repeats-Cas 9 (CRISPR-Cas 9)
Paling populer
faster, more precise, more efficient, and more cost-
effective
Teknologi mengedit genom semakin popular
• Berpotensi digunakan untuk mencegah dan
mengobati berbagai penyakit (monogenic:
hemophilia, anemia bulan sabit, dan sistik
fibrosis), (kompleks: kanker, kardiovakskuler, DM,
HIV/AIDS, penyakit saraf dll)
SEJARAH CRISPR-CAS 9
• Clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas 9
• 1987 ditemukan pada bakteri E. coli-> 20 tahun berikutnya (2007)-> CRISPR_Cas 9
sistem imun pada bakteri dan archaebakteri
• Sistem imun: faga (bakteriofaga) dan plasmid
• Infeksi faga-> CRISPR memotong bagian kecil dari DNA faga-> menyimpan
potongan DNA faga-> infeksi faga berikutnya-> mengenali dan melawan faga

• Struktur CRISPR-Cas-> khas (TERDIRI ATAS URUTAN NUKLEOTIDA (SEKUENS)

DENGAN REPETISI PENDEK (MUNCUL BERULANG-ULANG, DIANTARA URUTAN
BERULANG TERSEBUT TERDAPAT DNA SPACER)
 KOMPONEN CRISPR-Cas 9
(gRNA) RNA pemandu:
Cas 9: enzim pemotong
mengarahkan Cas 9 (lokasi dan
(gunting molekuler)
urutan DNA yang harus dipotong)
2011:Charpentier
dan Doudna
mempelajari
fenomena sistem
imun pada bakteri->
Mensintesis Cas9
kombinasi gRNA->
untuk berbagai
tujuan
 The Nobel Prize in Chemistry was jointly awarded on Wednesday to Emmanuelle
Charpentier and Jennifer A. Doudna for their work on the development of Crispr-Cas9, a
method for genome editing.
The French microbiologist Emmanuelle Charpentier will
become Director at the Max Planck Institute for Infection
Biology in Berlin
https://www.civilsdaily.com/news/nobel-prize-in-
chemistry-for-crispr-technology/
▪ Pasangan suami istri Grace
dan Mark (HIV positif)
▪ Bayi tabung fertilisasi in-
vitro (IVF)
▪ Dua anak kembar (Lulu dan
Nana-> nama samaran)
▪ Ilmuwan Cina He Jiankui
dan koleganya (sekitar 2
tahun lalu)
▪ Saat masih embrio (sel
tunggal) He Jianku
mengedit DNA Lulu dan
Nana
▪ Memutasi gen CCR5 (co-
reseptor HIV) dengan
CRISPR-Cas g
▪ Tujuan: Lulu dan Nana
terbebas dari HIV
▪ Proses tidak berhasil
▪ Pertentangan: melanggar
kode etik ilmiah
 PENGEMBANGAN OBAT:
BAKTERIOFAGA UNTUK MENGATASI
RESISTENSI BAKTERI TERHADAP
ANTIBIOTIK
Phage therapy: An alternative to antibiotics in the age of multi-drug resistance

ANA INDRAYATI
FAKULTAS FARMASI USB
anaindrayati@setiabudi.ac.id
 MULTIDRUG-RESISTEN (MDR)
XDR: Extensively Drug Resistant
▪ Metisilin resistant Staphylococcus aureus
XDR TB adalah TB yang
(MRSA)
disebabkan oleh strain yang
▪ Vancomycin-resistant Enterococci (VRE)
▪ Carbapenem-resistant Acinetobacter resistensi terhadap isoniazid dan
baumannii (CRAB) rifampisin, disertai resisten
▪ Multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa terhadap salah satu fluorokuinolon
▪ Enterobacteriaceae that produce extended dan salah satu dari tiga obat
spectrum β-lactamases
injeksi lini kedua (amikasin,
▪ Carbapenemase-producing
kapreomisin atau kanamisin)->
Enterobacteriacea
lebih FATAL dibandingkan MDR
• BAKTERIOFAGA (FAGA) adalah virus yang
menginfeksi bakteri (dan archaebacteria)
• Bakteriofaga ditemukan secara terpisah oleh
Frederick W. Twort (Inggris, 1915) dan Felix
d’Herelle (Prancis, 1917)
• Bacteriophage, meaning “bacteria eater,” :
bakteriosid (membunuh bakteri)
• Bakteriofaga menyebabkan bakteri lisis
(menganggu metabolisme) > bakteri mati
• Non-living biological (tergantung sel inang),
materi genetik DNA atau RNA yang dilindungi
oleh protein kapsid

BIG HERO
 RESEPTOR (‘PINTU MASUK’) FAGA KE DALAM SEL BAKTERI
MEKANISME PERTAHANAN
BAKTERI THD INFEKSI FAGA: RESEPTOR FAGA: SPESIFIK (GAMBAR)
▪ Mengubah struktur reseptor
(tidak dikenali faga)
▪ DNA faga dipotong-potong
dengan gunting molekuler
clustered regularly interspaced
palindromic repeats/CRISPR
associated system
(CRISPR/Cas) system
UPAYA FAGA :
▪ Bermutasi sehingga tetap
dapat masuk melewati
reseptor yang telah berubah
strukturnya
▪ Anti CRISPR/Cas system)
▪ Specificity: Bacteriophages are generally very specific in their host range, which promises less harm to
our microbiota. However, this specificity also means that for most clinically relevant infections, a mixture
of different phage will have to be used to address the polymicrobial nature of the infection

▪ Bactericidal: lytic phages infect their target host bacteria and cause cell death, in comparison to certain
bacteriostatic antibiotics

▪ Active on-site propagation: bacteriophages increase in concentration in situ as they propagate in the
presence of bacterial host (infectious agents). Unlike antibiotics, which often require frequent doses to
kill the bacteria efficiently, only one bacteriophage is theoretically needed to target a single
corresponding host bacterium (single-hit kinetics). It is possible to administer a single low-dose of
phage, which will then propagate itself, given the existing bacterial density as an active therapy,
resulting in continued bacterial adsorption and killing

▪ Low inherent toxicity: bacteriophages are primarily composed of nucleic acid and proteins that have
been studied to be non-toxic with the use of highly purified phage preparations [

▪ Enormous diversity: phage is found in diverse abundances across the biosphere and therefore isolating
and purifying new phages, necessary to target a known pathogenic bacteria, is achievable even when
bacteria evolve resistance
▪ Formulation and application versatility: multiple strains of phages can be added together into a
“phage cocktail” to target multiple bacteria of interest with a broader killing spectrum.

▪ Narrow potential for antibiotic cross-resistance: the mechanism of bacterial resistance to antibiotics
and phage are entirely different. Thus, bacteria that are resistant to antibiotics may be targeted and
treated with the use of phage therapy, and vice-versa, presenting combination therapies as an
attractive strategy .

▪ Biofilm clearance: phages have been demonstrated to lyse and penetrate through some biofilms
that have shown resistance to antibiotics. This is partially attributed to the presence of
depolymerases and lysins that can chew through the biofilm extracellular polymeric matrix.

▪ Low environmental impact: bacteriophages are natural components of the environment that can be
naturally evolved (as opposed to genetic modification), thus easing public acceptance of phage
therapy. Furthermore, because this natural product is composed primarily of proteins and nucleic
acids, unused phage materials can easily be inactivated and discarded

▪ Relatively low discovery and production cost: the costs associated with the discovery, isolation, and
purification of bacteriophages are significantly decreasing with the progression of screening and
sequencing technologies
 TERAPI FAGA PADA PASIEN CF YANG TERINFEKSI BAKTERI
Burkholderia cepacian PENYEBAB PNEUMONIA

Burkholderia cepacia complex (BCC)

▪ Nama awal Pseudomonas cepacian (1977)
▪ Genom 2x Escherichia coli
▪ Fenotip mirip dengan bakteri Gram negatif
▪ Bakteri oportunistik pada pasien CF
▪ Memperparah kondisi pasien CF menyebabkan
“cepacia syndrome,”
▪ Paru-paru kehilangan fungsi
▪ 35 % kematian pasien CF
▪ Resisten antibiotik-> alternatif terapi dengan faga https://www.qlaboratories.com/1118newslette
r-usp60-bcepacia/
 CYSTIC FIBROSIS
cystic fibrosis transmembrane
conductance regulator (CFTR) protein
 BAKTERIOFAGA-ANTIBIOFILM
• BIOFILM: komunitas bakteri
yang kompleks, sesil
(melekat secara permanen)
pada permukaan, tersusun
atas satu jenis, ratusan,
ribuan bakteri
• Bakteri biofilm
menghasilkan EPS
(ekstraseluler polisakarida)
yang melingkup bakteri dan
Electron micrograph of Staphylococcus aureus
berfungsi untuk pelekatan bacteria found on the surface of a patient’s
Scanning electron micrograph of a
(adhesi) biofilm on the bristles of a used catheter. The sticky-looking substance woven
toothbrus between the bacteria is composed of
• Problem: kesehatan dan polysaccharides and is part of the biofilm that
lingkungan protects the bacteria from the penetration of
antibiotics. Magnified 2,363×.
Illustrations showing applications
of bacteriophages to treat
biofilms.
(a) Phages are embedded into a
hydrogel present on a catheter
as a pretreatment before the
catheter is inserted into a patient.
The bacteriophages should be
able to infect and lyse bacterial
cells, preventing the formation of
biofilms on the catheter.
(b) Phages are used to treat an
existing biofilm present on a
catheter, resulting in the
hydrolysis of the extracellular
polysaccharide polymers around
the bacteria within the biofilm,
liberating bacteria from the
catheter, making them more
susceptible to antibiotic and
phage therapy.
 ▪ Hot dogs and luncheon meats, as well as soft cheeses, such as feta,
Brie, and Camembert (creamy milk cheese); blue-veined cheeses; or
Mexican-style cheeses, such as queso blanco, that are not made with
pasteurized milk may contain Listeria monocytogenes. Luncheon meats
are especially prone to contamination with L. monocytogenes during
slicing and packaging at food-processing plants.
▪ L. monocytogenes is a foodborne pathogen that is harmless in most
healthy people but can cause listeriosis in pregnant women, newborns,
and individuals with weakened immune systems.
▪ Listeriosis during pregnancy can cause miscarriage or stillbirth,
premature delivery, or infection of the newborn. Listeriosis has flulike
symptoms, such as nausea and diarrhea. If the bacterial infection
spreads to the nervous system, individuals experience a headache, stiff
neck, confusion, loss of balance, and possibly convulsions. Listeriosis is
30% fatal in high-risk groups.
• In 2006, the FDA recognized the use of a cocktail of six bacteriophages in the form of an application spray
as GRAS (Generally Recognized as Safe). The product is marketed as LISTEX P100 and is produced by the
Phage Technology Center in the Netherlands.

• LISTEX is used in the clean rooms of cheese, meat, and poultry processing plants to inhibit the growth of
Listeria on products such as luncheon meats and hot dogs. The phage preparation is not declared as an
ingredient on the label of a treated product. Additional products are being developed to reduce
Campylobacter on chicken and Salmonella on fish, cheese, and meats.
FARMAKOGENOMIK:
The Right Drug to the Right Person
FAKTOR YANG MEMPENGARUHI RESPON
INDIVIDU TERHADAP OBAT
MULTIFAKTOR
▪ Kepatuhan minum obat
▪ Usia penderita
▪ Tingkat keparahan penyakit
▪ Interaksi antar obat
▪ Interaksi makanan dengan obat
▪ Formulasi obat
▪ Jenis kelamin
▪ Polutan (asap rokok)
▪Kehamilan
▪Rute/cara pemberian obat
▪Gaya hidup
▪Kondisi nutrisi
▪Fungsi ginjal dan hati penderita
▪Penyakit yang menyertai penyakit utama
(komorbiditas)
▪GENETIK-> BERAPA BESAR PENGARUH
FAKTOR GENETIK???
 FARMAKOGENOMIK
▪ Kombinasi ilmu farmakologi dan genomik (mempelajari gen dan
fungsinya)
▪ Farmakogenomik: difokuskan pada pemahaman bagaimana variasi
genetik mempengaruhi respon individu terhadap obat
▪ Obat-obatan dapat dibuat khusus, disesuaikan dengan susunan
genetik setiap individu
▪ Meningkatkan keberhasilan terapi obat
▪ Meminimalkan efek samping atau efek toksiknya
 FARMAKOGENOMIK
▪ Kombinasi ilmu farmakologi dan genomik
(mempelajari gen dan fungsinya)
▪ Farmakogenomik: difokuskan pada pemahaman
bagaimana variasi genetik mempengaruhi respon
individu terhadap obat
▪ Obat-obatan dapat dibuat khusus, disesuaikan
dengan susunan genetik setiap individu
▪ Meningkatkan keberhasilan terapi obat
▪ Meminimalkan efek samping atau efek toksiknya
▪ Apakah 33.000 gen tersebut
mempengaruhi respon individu
terhadap obat?
▪ Gen-gen apa saja?
▪ drug metabolizing enzyme
▪ drug transporting protein
▪ drug receptor protein
DRUG METABOLIZING ENZIM
▪ Approximately 60 cytochrome P450 genes in humans
▪ 70 to 80 percent of enzymes involved in drug metabolism
▪ CYP450: bound to membranes within a cell (cyto) and contain a heme pigment
(chrome and P) that absorbs light at a wavelength of 450 nm when exposed to
carbon monoxide
▪ Primarily found in liver cells (endoplasmic reticulum, mitochondria)
▪ Functions:
▪ Synthesis and breakdown of various molecules and chemicals within
cells
▪ Synthesis of many molecules including steroid hormones, certain fats
(cholesterol and other fatty acids)
▪ Metabolize external substances, such as medications that are ingested,
and internal substances, such as toxins that are formed within cells
▪ Depending on the gene and the polymorphism, drugs can be metabolized quickly
or slowly
 DRUG TRANSPORTER
• Drug transporters primarily control the movement of all drugs and their
active or inactive metabolites into or out of cells.
• Polymorphisms of drug transporter genes can modify the absorption,
distribution, and excretion rates, and ultimately safety and efficacy of the
administered drugs
• The ABC and solute-carrier (SLC) transporters are two super-families of
transport proteins are ubiquitous membrane-bound transport proteins that
are involved in the absorption, distribution, and elimination of drugs
• In ABC transporter superfamily of drug transporters, 49 genes have been
identified, which are divided into seven subfamilies from ABCA to ABCG
DRUG RECEPTOR PROTEIN
TERIMA KASIH