FISIOLOGI PERTUMBUHAN PADA

MIKROORGANISME (2)
Pertumbuhan Mikroorganisme
 Pertumbuhan pada mikroorganisme
uniseluler, sseperti bakteri, khamir atau
protozoa, adalah peningkatan jumlah
populasi.
Hal tersebut menggambarkan
peningkatan biomassa.
Biomassa adalah jumlah total materi
seluler pada suatu sistem.
 Estimasi Jumlah Mikroba
Pengukuran jumlah bakteri (bisa juga
untuk mikroorganisme uniseluler
lainnya), ada dua kategori
Menghitung jumlah total sel
Menghitung sel-sel hidup saja
 Microscopic Counts
Total cell counts
Secara umum dilakukan dengan
pengamatan mikroskopik
Menggunakan kaca mikroskopo
khusus yang menandai suatu area
tertentu.
Sel-sel yang tampak pada area
tersebut menggambarkan jumlah sel
per unit volume.
Metode ini dapat dibuat lebih akurat dengan
menggunakan pewarna fluorescent seperti jeruk
akridin, yang mengikat DNA, dan karenanya
menghindari kebingungan dengan puing-puing
non-seluler.
Namun, metode tersebut tidak bisa
membedakan antara hidup dan non-hidup sel.
kegunaan mereka selanjutnya dibatasi oleh
fakta bahwa bakteri terkecil yang sulit untuk
menyelesaikan sel sebagai individu dengan
mikroskop cahaya.
 Metode lain untuk menghitung sel pada
sampel cair dengan mnggunakan flow
cytometer
Flow cytometer merupakan mesin yang
menngunakan sinar laser dan perangkat alat
eletronik untuk menghitung sel-sel individu.
Flow cytometer banyak digunakan dalam
menghitung dan membedakan sampel darah untuk
sampel klinik.
Dalam ekologi mikrobiologi juga digunakan untuk
membedakan tipe-tipe sel untuk tujuan isolasi.
 Kelemahan:
Tanpapewarnaan, sel-selmatitidakdapat
dibedakandengan selhidup
Sel-selyang kecilsulitdiamatidibawah mikroskop
Ketepatansulit diperoleh
Memerlukanmikroskopfase kontrasjikasampel
tidakdiwarnai
Sel-selyang motil harusdi immobilisasi sebelum
dihitung
Debris pada sampeldapatdisalah artikansebagai
sel-selmikroba
Hitungan yang layak
Jumlah sel yang layak, di sisi lain, adalah
ukuran jumlah sel-sel hidup dalam
sampel, atau lebih khususnya yang mampu
mengalikan dan memproduksi koloni terlihat sel.
Hal ini paling sering diperkirakan dengan
menyebarkan volume diketahui dari suspensi sel
ke sebuah plate agar, dan menghitung jumlah
koloni yang muncul setelah periode inkubasi
Hitungan layak disebut juga plate count
kita menentukan jumlah sel dalam sampel
mampu membentuk koloni pada media agar-
agar.
Asumsi yang dibuat dalam prosedur
penghitungan yang layak adalah bahwa
setiap sel hidup dapat tumbuh dan
membelah untuk menghasilkan satu koloni
Dengan demikian, angka koloni merupakan
cerminan dari jumlah sel
Ada dua cara untuk melakukan plate
count:
- Metode Penyebaran-plate
- Tuang metode plate
Metode spread-plate
Pada spread-plate method, volume
(biasanya 0,1 ml) kultur yang telah
diencerkan disebar di atas
permukaan agar cawan
menggunakan spreader.
Cawan kemudian diinkubasi hingga
terjadi pertumbuhan koloni.
Total koloni yang tumbuh dihitung.
 Pour-plate Method
Sejumlahvolume kultur(0,11 ml)
dipipetke dalamcawanPetri steril.
Medium agar yang masihcairkemudian
dituangkedalam cawantersebut.
Agar dankulturdimixed hinggarata.
Cawankemudian diinkubasi hingga tumbuh
koloni.
Koloniyang tumbuh tidakhanyadiatas
permukaanagar tetapijugabisadidalam agar.
 Pengenceran Suspensi Sel
Dalamviable counts, pengukuranselyang valid
adalahsekitar30300 koloni.
Jikajumlahkoloniterlalukecil, signifikansi
statistiknyaterlalurendah.
Jikajumlahselterlalubanyak, beberapkoloni
bisasajabergabung sehingga terjadi kesalahanpenghitungan.
Untukmenghindari kesalahan-kesalahan tersebut,
sampelsebaiknyadiencerkan.

Kesalahan dalam Plate Counting

Inkonsistensi plating (pemipetan yang tidak akurat)
Kurang teraduk secara rata
 Kesalahan dalam Plate Counting
Inkonsistensi plating (pemipetan
yang tidak akurat)
Kurang teraduk secara rata
Metode turbidimetri
metode turbidimetri mengukur perubahan
densitas optik atau absorbansi medium,
yaitu, berapa banyak sinar cahaya tersebar oleh
partikel tersuspensi.
Mereka dapat dilakukan dengan sangat cepat
dengan menempatkan sampel dalam
spektrofotometer.
Nilai densitas optik dapat langsung berhubungan
dengan nomor bakteri atau massa dengan
mengacu pada kurva kalibrasi standar.
 Dengan demikian, perkiraan angka
bakteri, meskipun satu yang cukup
perkiraan, dapat diperoleh hampir seketika
selama
Prosedur percobaan.
metode tidak langsung lain mengukur
kepadatan sel mencakup estimasi berat
basah dan kering, dan pengukuran
komponen sel seperti nitrogen total, protein
atau asam nukleat.
Kinetika MIKROBA PERTUMBUHAN

organisme uniseluler membagi dengan pembelahan biner;

setiap sel tumbuh untuk ukuran penuh, ulangan nya
materi genetik kemudian membagi menjadi dua sel anak yang
identik.
Dengan cara yang sama, dua sel membelah menjadi empat,
empat menjadi delapan dan sebagainya, yang mengarah ke
peningkatan eksponensial dalam jumlah sel:
Kinetika MIKROBA PERTUMBUHAN

 organisme uniseluler membagi dengan

pembelahan biner;
setiap sel tumbuh untuk ukuran penuh,
ulangan nya
materi genetik kemudian membagi menjadi
dua sel anak yang identik.
Dengan cara yang sama, dua sel
membelah menjadi empat, empat menjadi
delapan dan sebagainya, yang mengarah ke
peningkatan eksponensial dalam jumlah sel:
Jika kita plot jumlah sel dalam populasi
dengan waktu, kita akan mendapatkan
kurva eksponensial
Hal ini lebih nyaman ketika
merencanakan kurva pertumbuhan
untuk plot logaritma dari jumlah sel
terhadap waktu, memberikan kita
garis lurus
 Pertumbuhan eksponensial tersebut
tidak dapat dilanjutkan tanpa batas,
namun, dan pertumbuhan biasanya
melambat karena baik pasokan
nutrisi menjadi habis, atau karena
metabolisme menyebabkan
akumulasi zat limbah berbahaya.
Pertumbuhan uniseluler biasanya
terjadi dalam serangkaian fase yang
berbeda
Sebuah kurva pertumbuhan mikroba. Empat
fase dari kurva pertumbuhan yang khas
yang ditampilkan.
1. Fase lag
Ketika inokulum bakteri adalah pertama
diperkenalkan ke beberapa media pertumbuhan,
itu akan
mungkin memerlukan waktu untuk beradaptasi
dengan lingkungan baru -The kurang akrab ini,
semakin lama periode adaptasi.
Jika, misalnya, sumber karbon dalam medium
adalah asing, sel-sel akan perlu waktu untuk
mensintesis enzim yang diperlukan untuk
metabolisme nya.
Panjang fase lag juga akan tergantung
pada usia dan kesehatan umum dari
sel-sel dalam inokulum.
Selama periode ini, tidak ada
kenaikan bersih dalam jumlah bakteri,
namun sel-sel yang aktif secara
metabolik.
2. Masuk (eksponensial) fase.
Ketika bakteri telah terbiasa untuk mereka
lingkungan baru dan mensintesis
enzim yang dibutuhkan untuk memanfaatkan
substrat yang tersedia, mereka dapat mulai
divisi reguler dengan pembelahan biner.
Hal ini menyebabkan peningkatan
eksponensial dalam jumlah yang disebutkan
di atas.
 Dalam kondisi optimal, populasi sel akan berlipat
ganda dalam panjang konstan dan dapat
diprediksi
waktu, yang dikenal sebagai generasi (dua kali
lipat) waktu.
Nilai untuk laboratorium banyak digunakan
bakteri E. coli adalah 20 menit, dan untuk
sebagian besar
organisme itu adalah kurang dari satu jam.
Ada beberapa bakteri, namun, yang waktunya
generasi adalah berjam-jam.
Dengan demikian, selama pertumbuhan
eksponensial, jumlah sel dapat dinyatakan
sebagai:
3. fase stasioner
Seperti dibahas di atas, fase eksponensial adalah
dibatasi oleh faktor lingkungan, dan sebagai tingkat
pertumbuhan melambat, budaya memasuki fase
berikutnya.
The meratakan keluar dari kurva pertumbuhan tidak
berarti bahwa pembelahan sel telah berhenti sepenuhnya,
melainkan bahwa peningkatan karena sel-sel baru
terbentuk dibatalkan oleh jumlah yang sama dari kematian
sel.
Akhirnya, bagaimanapun, dengan meningkatnya angka
kematian, angka keseluruhan jatuh dan kita memasuki
tahap akhir dari pertumbuhan.
Fase kematian.
Sebagai sel mati dan budaya tidak
dapat
menggantinya, jumlah penduduk yang
layak
sel jatuh.
Ini adalah kematian (atau
penurunan) fase.
BATCH BUDAYA DAN BUDAYA TERUS MENERUS
Fase pertumbuhan yang dijelaskan di atas berlaku
untuk budaya batch. Dalam bentuk budaya,
nutrisi yang tepat dan kondisi lain yang disediakan
untuk pertumbuhan, maka inokulum yang
ditambahkan dan budaya diinkubasi.
Tidak ada nutrisi lanjut ditambahkan dan tidak
ada produk-produk limbah dibuang, sehingga
kondisi budaya yang terus berubah.
Hal ini menyebabkan pertumbuhan makhluk aktif
durasi terbatas untuk alasan yang diuraikan di atas.
 Kadang-kadang hal ini diinginkan untuk
menjaga budaya dalam fase logaritmik,
misalnya jika sel-sel yang digunakan untuk
menghasilkan alkohol atau antibiotik.
Dalam budaya terus menerus, konsentrasi
nutrisi dan kondisi lain tetap konstan, dan sel-
sel yang diadakan dalam keadaan
pertumbuhan eksponensial.
Hal ini dicapai dengan terus menambahkan
medium kultur segar dan menghilangkan
volume yang sama dari yang lama.
 Parameter seperti pH juga dapat
dipantau dan disesuaikan.
Peralatan yang digunakan untuk
melakukan hal ini disebut chemostat a.
Ini menghasilkan budaya mapan
yang ukuran populasi dipertahankan
konstan oleh kontrol hati-hati dari laju
aliran dan konsentrasi nutrisi.
Budaya terus menerus dari mikroorganisme:
chemostat tersebut