Cemaran Mikroba

(TPC E. Coli & Coliform)

RAHMAN ALFARISY, S.KH
MUNASIR M. YUSUF, S.KH
 Uji cemaran mikroba : E.coli, Coliform,
Staphylococcus sp., Camphylobacter sp.,
Salmonella sp.
 Tujuan : untuk melihat seberapa besar cemaran mikroba pada produk pangan asal hewan
dengan standar BMCM (Batas Maksimum Cemaran Mikroba) yang telah ditentukan
 Metode pemeriksaan bakteriologi dilakukan secara:
 Kualitatif:
- presumptive test
- comfirmed test
- completed test
 Kuantitatif:
- Total Plate Count (TPC)
- MPN (Most Probable Number): yaitu perkiraan jumlah kuman yang mendekati per ml /gram

 TPC = merupakan salah satu metode yang dapat digunakan untuk menghitung jumlah
mikroba dalam bahan pangan
 Tahap–tahap utama dalam analisa TPC meliputi pembuatan media, pengenceran
dan penanaman bakteri
 Eschericia coli

 Domain : Bakteri
Phylum : Proteobacteria
Class : Gamma Proteobacteria
Order : Enterobacteriales
Family : Enterobacteriaceae
Genus : Escherichia
Species : Escherichia coli
 batang pendek , motil (flagel diseluruh tubuh),
Gram negatif, anaerobik fakultatif, tidak
membentuk spora, dan dapat memfermentasikan
glukosa (Pelczar dan Chan 2007).
 pertama kali diidentifikasikan oleh dokter hewan Jerman, Theodor Escherich dalam
studinya mengenai sistem pencernaan pada bayi hewan
 Nama “Bacterium Coli” sering digunakan sampai pada tahun 1991
 Bakteri Escherichia coli pada produk hewan sangat penting, karena merupakan flora
normal bagi pencernaan namun bila tingkat infeksi tinggi bisa menyebabkan suatu
penyakit
Coliform

 Bentuk batang pendek, Gram negatif, aerob dan fakultatif

anaerob, tidak membentuk spora dapat menfermentasi laktosa &
menghasilkan gas pada suhu 32 C selama 48 jam.

 Bakteri coliform merupakan golongan mikroorganisme yang lazim

digunakan sebagai indikator, di mana bakteri ini dapat menjadi sinyal
untuk menentukan suatu sumber air telah terkontaminasi oleh patogen
atau tidak
ALAT DAN BAHAN

 Alat  Petridish  Bahan

 Erlenmeyer  Autoclave  Sampel Daging

 Media BPW
 Pipet Skala  Oven
 Media Plate Count Agar (PCA)
 Gunting/Pinse  Laminar Air  Brilliance E. coli/Coliform Selective
t Flow Medium
 Neraca  Bunsen  Aquadest.
Analitik  Incubator
 Plastik Steril,  dan
 Tabung Reaksi Stomacher.
Prosedur Kerja :

1. Menyiapkan alat dan bahan yang akan digunakan dalam
keadaan steril
2. Sterilisasi alat dan bahan (Erlenmeyer,pipet,petridish dan
gunting menggunakan oven suhu 160-180 derajat celcius
selama 2 jam) sedangkan (sterilisasi media BPW,PCA dan
Brilliance menggunakan Autoclave suhu 121 derajat celcius
tekanan 1 atm selama 15 menit)
3. ditimbang (sampel daging) sebanyak 25gr kedalam plastik
steril menggunakan pinset yang telah di desinfeksi
menggunakan alkohol.
4. ditambahkan media pencencer BPW sebanyak 250 mL (100
mL BPW jika menggunakan sampel daging 10 gr) kedalam
plastik berisi sampel
5. setelah itu sample di stomacher agar mendapatkan
pengenceran 10-1
6. di pipet 1 mL sampel kedalam masing-masing tabung reaksi
10-2 , 10-3 , 10-4 , 10-5 , 10-6 dengan cara pengenceran
bertingkat. Setelah itu dengan setiap tabung diambil 1 mL
larutan yang sudah di encerkan petridish yang berisi media
PCA untuk uji TPC , dan 1 mL untuk media Brilliant
7. di tuangkan (platting) media ke masing-masing petridish
yang berisi sampel (15 mL media PCA kedalam petri untuk
pengujian TPC (10-2 , 10-3 , 10-4 , 10-5 , 10-6 ) dan 15 mL media
Brilliance kedalam petri 10-1 , 10-2 dan 10-3 secara duplo
untuk pengujian e.coli/coliform)
8. didiamkan beberapa menit hingga media agar memadat
dan merata
9. kemudian di inkubasi kedalam inkubator masing-masing
(petri untuk pengujian TPC di inkubasi dalam inkubator suhu
37 oC, sedangkan petri berisi sampel untk pengujian
e.coli/coliform kedalam inkubator suhu 35 oC)
10. dan akhirnya menuliskan hasil pembacaan pengujian (TPC
di inkubasi selama 2x24 jam suhu 37derajat celcius dan
E.coli/coliform di inkubasi selama 18-24 jam pada suhu 35
oC)
 Hasil dan pembahasan

 Hasil uji TPC, E. coli, dan Coliform

Hasil uji positif dari TPC

terbentuknya koloni bakteri
berwarna putih

Gambar 1. Hasil uji TPC

Hasil dan pembahasan

 Hasil uji TPC, E. coli, dan Coliform

Hasil positif E. coli berwarna

unggu sedangkan coliform
berwarna merah magenta dan
juga termasuk E.coli yang unggu

Gambar 2 dan 3. Hasil uji E. coli dan Coliform

Hasil Pengujian

 Hasil dari uji TPC, E. coli, dan Coliform

Rumus menghitung TPC, E. coli dan Coliform
N= Σn No No Epid TPC E. coli Coliform
(1xn1 ) +(0,1xn2 ) x d
1 916 8x10-5 - -
Ket : n=Jumlah koloni yang bisa dihitung
N1 = Jumlah pengenceran yang bisa dihitung 2 917 7x10-5 - -
D= pengenceran terkecil yang bisa dihitung
3 927 4,5x10-7 1,1x10- 1 2x10-2

4 928 2,3x10-7 1,9x10-5 2,1x10-5

5 937 1x10-4 1x103 1,5x10-2

keterangan BMCM (Batas Maksimum Cemaran Mikroba) E.

coli = 1x101, TPC=1x106, dan Coliform= 1x102
Pembahasan

 Hasil positif dari uji TPC terbentuknya koloni pada media PCA.
 Hasil positif dari uji E. coli terbentuknya koloni berwarna ungu pada media
Briliant E. coli/coliform selektif agar karena E. coli mampu memecah
kedua kromogen yaitu Rose-Gal dan X-Glu.
 Hasil positif dari uji coliform ditandai dengan terbentuknya koloni
berwarna magenta karena koloni bakteri coliform hanya mampu
memecahan kromogen Rose-Gal.
Kesimpulan

 Nilai pada TPC, E. coli dan Coliform > BMCM menandakan bahwa sanitasi
kurang baik diakibatkan oleh tingginya kontaminasi pada bahan pangan
asal hewan.

Saran
 Perbaikan manajemen produsen, distribusi, dan pengolahan.
Daftar Pustaka

 Anonimous, 2008. Pengujian Mikrobiologi Pangan. Badan POM Republik

Indonesia Vol. 9, No. 2.
 Frampton E. W., Restaino L., Blaszko N. (1988). J. Food Prot. Vol: 51(5),
pp.402-404.
 Kilian M., Bulow P. (1979). Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sect. B 87, pp.
271-276.
 Pelczar, J. 2007. JR., ECS Chan, Noel R. Krieg. Microbiology. New Delhi:
Tata McGraw-Hill Publishing Company Limited.
 Purwoko, T. 2007. Fisiologi Mikroba. PT. Bumi Aksara. Jakarta
T H A N K S_FOR_Y O U R_ ATTENTION