Pembuatan Preparat Permanen

Jaringan Tumbuhan Dengan

Metoda Parafin
ALAT YG DIBUTUHKAN :
1. Kaca objek
2. Kaca tutup
3. Pinset halus utk memegang kaca tutup
4. Pinset besar utk memegang kaca objek
5. Jarum bertangkai 2 buah
6. Kwas halus 1 buah
7. Kwas kurang halus 1 buah
8. Lap bersih (katun yg sdh sering dicuci)
9 Serbet besar dan bersih
10. Silet yang baru
11. Botol vial
12. Balok kayu
BAHAN YG DIBUTUHKAN :
1. Etil Alkohol 70 %, 96/95 % dan 100 %
2. Formalin 36 %/40 %
3. Asam Asetat glasial
4. Air suling
5. Xilol
6. Safranin
8. Fast Green
9 Parafin lunak (480C )
10. Parafin keras (580C)
11. Kanada balsam/kutek
I. PEMATIAN DAN FIKSASI
Pematian : penghentian proses-proses hidup
secara tiba-tiba dan kekal (permanen)

Fiksasi : mengawetkan semua struktur sel,

sehingga berada dalam keadaan sama atau
hampir sama dengan waktu masih hidup

Larutan fiksasi yang sering digunakan :

FAA (Formaldehyde Acetic-Acid Alcohol)
50 % atau 70 % etilalkohol 90 cc
asam asetat glasial 5 cc
formalin 37-40% 5 cc

Fiksasi untuk bahan kecil/lunak min. 12 jam

untuk bahan tebal/besar/keras min. 24 jam
Banyak lar.fiksasi 20 kali bahan
2. PENCUCIAN :

Alkohol 70 % ................... 30 menit

Alkohol 80 %.................... 30 menit
Alkohol 95 %.....................30 menit
Alkohol 100 % I ............... 30 menit
Alkohol 100 % II .............. 30 menit
3. DEHIDRASI :
Alkohol /Xilol 3:1 .................... 30 menit
Alkohol/Xilol 1:1 .................... 30 menit
Alkohol/Xilol 1:3 .....................30 menit
Xilol I ......................... 30 menit
Xilol II ........................ 30 menit

Campuran Xilol /Parafin 1:9 diletakkan dlm

oven 57 derjat Celcius selama 24 jam
4. Infiltrasi
• Dengan parafin murni diletakkan di oven 57
Celcius selama 24 jam
5. Embedding
• Diganti dengan parafin murni biarkan 1 jam dalam
oven 57 derjat Celcius
• Bahan dan parafin dituang ke kotak kertas dibiarkan
mengeras

6. Penyayatan
* Potong balok parafin dan tempelkan pada
balok kayu
* Penyayatan dengan Rotary mikrotom
5. EMBEDDING (Penanaman)
Pada kotak kertas 5 x 2,5 x 2 cm
PENYAYATAN
 7. Penempelan sayatan (Mounting)
• Kaca objek dibersihkan dan direndam dlm larutan
di bawah ini minimal 3 jam kaca objk baru, 24 jam
utk kaca objk bekas :
– Kalium bikormat 20 g
– H2SO4 100 cc
– Air suling 100 cc

• Irisan diletakkan di atas kaca objek yang sudah

diberi gliserin/albumin yang dibubuhi air.
• Kemudian diletakkan di atas Hot Plat dengan
temperatur 45 derajat celcius sampai pita parafin
merenggang.
8. PEWARNAAN
Pewarnaan yang digunakan adalah safranin fast green.
Safranin 1 % dalam alkohol 70 % dan Fast green 1 %
dalam alkohol 95 %.
Berturut-turut objek gelas yang sdh berisi irisan tadi
dimasukkan ke dalam
1. Xilol I ........................................3 menit
2. Xilol II ........................................3 menit
3. Alkohol / Xilol 1:3 ..............................3 menit
4. Alkohol / Xilol 1:1 ..............................3 menit
5. Alkohol / Xilol 3:1 ..............................3 menit
6. Alkohol absolut I ................................3 menit
7. Alkohol absolut II ...............................3 menit
8. Alkohol 95 % ..................................... 3 menit
9. Alkohol 80 % .................................... 3 menit
10. Alkohol 70 % ................................... 3 menit
11. Safranin 1 % dalam alkohol 70 % ..... 1 jam
12. Alkohol 70 % .... ............................... 1 menit
13. Alkohol 80 % ....................................1 menit
14. Alkohol 95 % .................................... 1 menit
15. Fast Green 1 % dlm alkohol 95 % ..... 30 detik
16. Alkohol 95 % .................................... 1 menit
17. Alkohol absolut II ............................. 1 menit
18. Alkohol Absolut I .............................. 1 menit
19. Alkohol / Xilol 3:1 ..............................1 menit
20. Alkohol / Xilol 1:1 ..............................1 menit
21. Alkohol / Xilol 1:3 ..............................1 menit
22. Xilol ................................1 menit
23. Xilol ................................ 1 menit

9. Penutupan.
* Irisan ditutup dengan gelas penutup yang sudah
diberi kanada balsam atau kutek terlebih dahulu
* Preparat dikeringkan di atas hot plate dengan
temperatur 45 derajat Celcius