FERMENTASI
Faculty of Pharmacy and Science – UHAMKA
Etin Diah Permanasari, Ph.D, Apt. 1
Produk Teknologi
Fermentasi
2
Actinomycetes Streptomyces ~ 2,078 antibiotik
Produk Teknologi
Fermentasi
4
Pendahuluan
• Bioteknologi Bioengineering
• Tujuan utama Bioengineering adalah menghasilkan
produk metabolit yang bermanfaat dari material
biologi/mahluk hidup
• 2 Komponen utama dari Bioengineering:
1. Fermentasi, meliputi kultivasi mikroorganisme pada
kondisi optimal untuk menghasilkan metabolit yang
diinginkan
2. Recovery produk (Downstream process), yang
mencakup kegiatan ekstraksi dan purifikasi dari produk
biologi
5
Fermentasi
• FERMENTASI berasal dari kata FEVERE (Latin) = to be
boiling
• Biokimia: Perombakan bahan organik oleh organisme atau sel
untuk menghasilkan energi (ATP) melalui suatu reaksi yang tidak
memerlukan Oksigen sebagai akseptor elektron terakhirnya.
• Bioteknologi: menggambarkan suatu reaksi yang melibatkan
mikroorganisme (tidak harus anaerobik)
6
Fermentasi: Aplikasi tertua penerapan ilmu
Bioteknologi
• TEKNOLOGI FERMENTASI merupakan teknologi yang paling
awal dari Bioteknologi karena sudah dikenal sejak
peradaban manusia 6000 SM dimana orang membuat bir,
anggur dan roti.
2. Metabolit sekunder
• Contoh: antibiotika, hormon giberelin, alkaloid
3. Enzim
• Enzim dikelompokkan dalam senyawa bioaktif
• Contoh: protease, enzim restriksi, dll.
4. Biomassa sel
• Contoh: Dried yeast, ragi tape, mushroom, dll. 8
Fermentasi berdasar State of the Art
Bioteknologi
9
Jenis Fermentasi
1. FERMENTASI PADAT (Solid state Fermentation)
Fermentasi yang berlangsung dalam substrat yang tidak larut air
Solid state fermentation kandungan nutrisi nya jauh lebih pekat sehingga
hasil per volume dapat lebih besar.
Keuntungan:
- Medium yang digunakan sederhana
- Ruang yang diperlukan relatif kecil karena air yang digunakan sedikit
- Inokulum disiapkan secara sederhana
- Kondisi medium tmpt mikroba mendekati habitat aslinya
- Aerasi dihasilkan dengan mudah
- Produk yang dihasilkan dapat dipanen dengan mudah
Contoh:
tempe, oncom, pembuatan kompos, pakan ternak, mushroom dll.
10
Jenis Fermentasi
2. FERMENTASI CAIR (SUB MERGED Fermentation)
Fermentasi yang melibatkan air sebagai fase kontinyu baik dari
pertumbuhan sel yang bersangkutan atau substrat
Fermentasi cair tradisional tidak dilakukan pengadukan (agitasi).
Fermentasi modern melibatkan fermentor dengan: pengadukan agar
medium ttp homogen, aerasi, pengaturan pH, dan pengaturan panas/suhu
Keuntungan:
- Kontak reaktan dan substrat semakin besar
- Hampir di semua bagian tangki terjadi fermentasi
Contoh:
asam asetat, etanol, antibiotik,dll
11
Optimasi Fermentasi
Proses dilakukan untuk mengetahui mendapatkan kondisi
optimal dari faktor-faktor yang mempengaruhi suatu proses
fermentasi:
1. Medium
2. pH
3. Oksigen
4. Suhu
5. Waktu
6. Agitasi
7. Anti-foam
12
Optimasi Fermentasi (2)
1. Medium
• Medium dirancang untuk memenuhi kebutuhan nutrien bagi
mikroba.
• Pemilihan medium menjadi pertimbangan utama dalam
industrialisasi
• Kebutuhan dasar yang utama bagi nutrisi mikroba adalah:
sumber karbon, sumber nitrogen dan garam anorganik,
kadang ditambah faktor pertumbuhan.
• Sumber karbon:
• Bahan dari golongan : karbohidrat, asam organik, garam asam organik,
dan poli alkohol.
• Contoh: glukosa, sukrosa, laktosa, molase, malt ekstrak, starch,
dextrin, selulosa, minyak nabati (plant oil), etanol, metanol, gliserol, 13
alkana.
Optimasi Fermentasi (3)
• Sumber nitrogen:
• Bahan dari golongan: protein, asam amino, senyawa yang mengandung
nitrogen.
• Contoh: protein, pepton, yeast ekstrak, corn steep liquor, garam amonium,
urea, gas amonia, dan soy meal.
• Unsur/Garam anorganik:
• Unsur makro: N, P, C, O, H, S, K, Ca, Mg, Na, Cl.
• Unsur mikro: Fe, Mn, Co, Bo, Zn, Mo, Al.
• Faktor pertumbuhan:
• Vitamin, hormon, asam amino, dan asam lemak. Cont: Vit B12
• Medium memakan 60 – 80 % biaya produksi dan sangat menentukan
keberhasilan fermentasi
• Medium yang menggunakan komposisi berupa bahan kompleks yang meliputi
bahan alam, limbah dan bukan senyawa tunggal, harus memperhatikan C – N
ratio
• Metode sterilisasi medium memegang peranan penting sebelum berjalannya 14
proses fermentasi
Optimasi Fermentasi (4)
2. pH
• Derajad keasaman (pH) medium memegang peranan yang sangat
penting bagi keberhasilan proses fermentasi
• Pertumbuhan sebagian besar organisme sangat peka terhadap
perubahan pH, dan tiap organisme mempunyai kisaran pH
optimal bagi pertumbuhannya
• Pengaruh pH terutama pada fungsi permeabilitas dinding sel,
aktivitas enzim, dan reaksi kimia nutrien dalam medium
• Selama proses fermentasi pH harus terjaga agar pada kondisi
optimal bagi organisme yang ada dalam bioreaktor. pH
dipertahankan (dijaga) dengan menambahkan larutan buffer, atau
dengan memasang sensor / elektroda selektif ion sehingga bila
terjadi kenaikan pH akan dimasukkan ke dalam bioreaktor larutan
asam, serta sebaliknya bila terjadi penurunan pH maka akan
dimasukkan larutan basa. 15
• Komposisi medium (bahan-bahan yang menyusun medium
fermentasi) akan menentukan nilai pH medium
Optimasi Fermentasi (5)
3. Oksigen
• Fermentasi aerobik, merupakan jenis fermentasi yang
membutuhkan suplai oksigen dan organisme yang dikultivasi pun
merupakan organisme aerobik
• Fermentasi anaerobik, merupakan jenis fermentasi yang
mengkultivasi organisme anaerobik, justru didisain agar tidak ada
suplai oksigen ke dalam bioreaktor
• Suplai oksigen ke dalam bioreaktor dapat berupa: gas oksigen
yang dihembuskan ke dalam bioreaktor atau adanya agitasi
• Oksigen yang dimasukkan ke dalam bioreaktor harus disterilisasi
dahulu
• Pengaturan suplai oksigen ke dalam bioreaktor sangat
menentukan keberhasilan proses fermentasi, dengan mengatur
kebutuhan oksigen yang diperlukan pada fase pertumbuhan 16
vegetatif maupun pada saat produksi metabolit
Optimasi Fermentasi (6)
4. Waktu
• Lamanya waktu
inkubasi/fermentasi akan
menjadi patokan ditentukannya
waktu pemanenan
• Waktu inkubasi disesuaikan
dengan tujuan fermentasi:
• Produksi biomassa : dipanen
pada awal fase stationer
• Produksi enzim : dipanen pada
menjelang akhir fase
eksponensial
• Produksi metabolit sekunder :
dipanen pada fase stationer
• Tiap organisme mempunyai Kurva Pertumbuhan Mikroba 17
waktu fermentasi yang spesifik
Optimasi Fermentasi (7)
Kinetika Fermentasi Persamaan Monod
Laju Pertumbuhan Spesifik ()
Fungsi 3 parameter
20
Desain Bioreaktor
21
Bioreaktor
• Bioreaktor atau fermentor: alat/ sistem yg
mampu menyediakan sebuah lingkungan
biologis untuk menunjang terjadinya reaksi
biokimia dari sebuah proses fermentasi.
Impeller
Gas sparger
23
Desain Fermentor (2)
Untuk proses aerobik, desain bioreaktor
harus mencakup:
• Mekanisme sterilisasi
• Mekanisme pendinginan
• Mekanisme inokulasi
• Mekanisme pemasukan udara
• Mekanisme pemasukan nutrien
• Mekanisme pengambilan sampel
• Mekanisme pengisian (inlet)
• Mekanisme pengosongan isi (outlet)
• Mekanisme pengontrolan suhu, pH dll
• Mekanisme pengadukan
• Mekanisme antifoam
24
24
What is a Bioreactor?
• An apparatus for growing organisms (yeast, bacteria, or
animal cells) under controlled conditions.
• Used in industrial processes to produce pharmaceuticals,
vaccines, or antibodies
• Also used to convert raw materials into useful byproducts
such as in the bioconversion of corn into ethanol.
• Bioreactors supply a homogeneous (same throughout)
environment by constantly stirring the contents.
• Bioreactors give the cells a controlled environment by
ensuring the same temperature, pH, and oxygen levels
25
Types of Bioreactors
• Batch: Media and cells are added to the reactor and it is run
until a predetermined set point (i.e. time, concentration). The
bioreactor has a constant volume (the initial volume).
• Fed-Batch: The bioreactor is a batch process in the beginning
and after a certain point a feed input is introduced and the
volume of the vessel increases.
• Continuous: The bioreactor starts with an initial volume and
media is constantly introduced and product is constantly taken
out. The inputs and outputs are at the same rate, so the
volume always remains the same.
26
Desain Fermentor (3)
BATCH FERMENTATION
· Fermentasi sistem tertutup
· Medium steril yang telah
diinokulasi mikroorganisme
dalam fermenter diinkubasi di
bawah kondisi optimal tanpa
adanya penambahan
sesuatupun, kecuali: udara,
antifoam, buffer.
· Komposisi kultur terdiri dari:
medium, biomassa dan
metabolit 27
27
Desain Fermentor (4)
FED BATCH FERMENTATION
· Pengembangan dari fermentasi sistem tertutup
· Contoh: Produksi Penicillin dan asam amino
· Medium ditambahkan pada saat berjalannya
proses fermentasi. Element kritis yang
diperlukan untuk memproduksi suatu metabolit
sekunder ditambahkan dalam jumlah sedikit
pada awal fermentasi, begitu pula pada saat
telah terbentuk produk ditambahkan elemen
kritis tersebut dalam jumlah yang sedikit.
· Umumnya fermentasi fed batch digunakan
untuk memproduksi metabolit sekunder yang
sifatnya catabolite repression oleh tingginya
konsentrasi nutrien (seperti glukosa, karbohidrat
lainnya dan nitrogen) 28
Desain Fermentor (5)
1. Homogenously mixed bioreactor
CONTINOUS FERMENTATION • Fermentasi ini dapat dilakukan dalam
· Fermentasi sistem terbuka chemostat maupun turbidostat.
• Pada chemostat, kondisi steady dari
· Contoh: Produksi penicillin dan pertumbuhan sel dikendalikan
asam amino dengan menyetel konsentrasi sebuah
substrat yang dibutuhkan (misal:
· Medium dimasukkan ke dalam karbohidrat, nitrogen, garam atau
bioreaktor secara terus menerus oksigen)
(kontinu), sementara sejumlah • Pada turbidostat, kondisi steady dari
pertumbuhan sel dikendalikan
hasil fermentasi (terdiri atas berdasarkan turbiditas. Dengan
medium, metabolit dan memonitar tingkat turbiditas,
biomassa mikroba) dikeluarkan dikendalikan laju masukan medium ke
dalam bioreaktor.
dari sistem bioreaktor 2. Plug flow reactor
· Terdapat dua tipe dasar • Pada fermentasi tipe ini, medium
fermentasi sinambung: mengalir melalui sebuah reaktor yang
berbentuk silindris tanpa back mixing.
Komposisi medium, jumlah sel,
transfer masa (suplai oksigen) dan 29
produktivitas akan berbeda-beda
pada lokasi yang berbeda dalam
reaktor.
Desain Fermentor (6)
Produk Produk Produk
Medium Medium
Medium
A B C
30
Kemostat Turbidostat Plug flow reactor
Desain Fermentor (5)
1. Homogenously mixed bioreactor
CONTINOUS FERMENTATION • Fermentasi ini dapat dilakukan dalam
· Fermentasi sistem terbuka chemostat maupun turbidostat.
• Pada chemostat, kondisi steady dari
· Contoh: Produksi penicillin dan pertumbuhan sel dikendalikan
asam amino dengan menyetel konsentrasi sebuah
substrat yang dibutuhkan (misal:
· Medium dimasukkan ke dalam karbohidrat, nitrogen, garam atau
bioreaktor secara terus menerus oksigen)
(kontinu), sementara sejumlah • Pada turbidostat, kondisi steady dari
pertumbuhan sel dikendalikan
hasil fermentasi (terdiri atas berdasarkan turbiditas. Dengan
medium, metabolit dan memonitar tingkat turbiditas,
biomassa mikroba) dikeluarkan dikendalikan laju masukan medium ke
dalam bioreaktor.
dari sistem bioreaktor 2. Plug flow reactor
· Terdapat dua tipe dasar • Pada fermentasi tipe ini, medium
fermentasi sinambung: mengalir melalui sebuah reaktor yang
berbentuk silindris tanpa back mixing.
Komposisi medium, jumlah sel,
transfer masa (suplai oksigen) dan 31
produktivitas akan berbeda-beda
pada lokasi yang berbeda dalam
reaktor.
Fase Kematian
Sel kehabisan energi
Lamanya waktu dari stasioner ke kematian tergantung
mikrob dan prosesnya
Sebelum fase
kematian?
Proses dihentikan????
Setelah fase log?
33
Bioreactor Components
34
Bioreactor - Vessel
Head Plate
Vessel
36
Bioreactor - Agitator
• An agitator is required to mix the contents in the
vessel to ensure a homogeneous environment.
• Agitators consist of a shaft and impellers.
• Mixing of the bioreactor is crucial in order to supply
nutrients and oxygen to the culture and to maintain
a constant pH and temperature.
• Impellers come in many different shapes and sizes
depending on what type of mixing is needed.
37
Bioreactor – Agitators
Agitator Shaft
Impellers
38
Bioreactor - Sparger
• The sparger is an apparatus used to introduce
gasses into the vessel.
• Spargers are located at the bottom of the vessel
and consist of a tube with tiny holes for the gas to
escape through into the culture.
• The gas coming out of the sparger helps to aerate
and mix the contents in the vessel, as well as
supply oxygen to the cells.
39
Bioreactor - Sparger
Ring Sparger
Micro Sparger
40
Bioreactor - Baffles
• Baffles are obstructions on the side of the vessel
that generate turbulence in the flow of the
culture.
• Baffles are made out of stainless steel and are
welded to the inside of the vessel.
• Baffles help to mix the culture by creating a more
turbulent flow.
41
Bioreactor - Baffles
43
Bioreactor - Probes
Probe Belt
44
Probes on head plate
Probes
Bioreactor – Cooling Jacket
• Cells give off heat when growing and dividing.
• To maintain a constant temperature in the
reactor, the vessel is covered by a cooling jacket.
• Coolant (cold water or glycol) flows through the
cooling jacket to regulate the temperature.
• The temperature is controlled by the flow rate of
the coolant.
45
Bioreactor – Cooling Jacket
46
Bioreactor - Ports
• Bioreactors require addition ports, where
material is either introduced or removed from
the vessel.
• Ports are needed to add the media (media port),
cells (inoculation port), and nutrients (feed
ports).
• Ports are also used for the addition of acid and
base for pH control.
• A sample port is also located on each vessel to
remove culture for off-line investigation. 47
Bioreactor - Ports
Ports
48
Bioreactor - Condenser
• A condenser is an apparatus
that captures saturated air
leaving the vessel.
• The condenser is cooler than
the saturated air allowing it to
condense on the surface and
return to the vessel as a liquid.
• Condensers help to minimize
the loss of material out of the
49
reactor due to evaporation.
Bioreactor - Filters
50
Bioreactor - Filters
Filter Housing
Filter
51
Bioreactor – Back Pressure
Valve
• A bioreactor must remain under constant
pressure; Constant pressure helps to ensure
sterility of the reactor by keeping microbes out
(they are less likely to overcome the pressure
gradient)
• Pressure is added to the reactor by the
introduction of air at the top of the reactor (head
space).
• The pressure is regulated using a back pressure
valve. 52
Bioreactor – Back Pressure Valve
53
Bioreactor - Valves
• Valves are used to control the flow of either gas or
liquid
• Bioreactors use many different types of valves.
• Manual Valves – open and close the valves with your hand.
• Pneumatic Valves – automatic valve which opens and closes
with the use of high pressured air (instrument air).
• Steam Lock Valves – (so called “block and bleed valves”) a
two valve assembly so you can allow a fluid to flow through a
portion of the valve and then close and use the other portion
of the valve to sterilize the valve assembly after use to reduce
contamination. These valves can be manual or pneumatic.
54
Bioreactor - Valves
• Valves are used at many different locations on
the bioreactor
• Sample valve – where a sample from the bioreactor
can be obtained.
• Harvest valve – location where the tank can be
drained for harvest.
• Ports – contain an automatic steam lock valve, so
liquid can be added to the vessel (the port can be
sterilized after use to prevent contamination)
55
Bioreactor - Valves
56
57
Bioreactor – Load Cell
Compact
Compression
Load Cells
Spacing of Load 58
Cells
Bioreactor Utilities
• Bioreactors require utilities:
• Gasses
• Air
• Oxygen
• Carbon Dioxide
• Nitrogen
• Clean Steam - for sterilization of the reactor
(condensed clean steam equals WFI (water for
injection) that is clean enough to be injected)
• Coolant (cold water or glycol) – for cooling jacket
• Instrument Air - to operate pneumatic valves
59
Fermentasi Substrat Padat (SSF)
Contoh Substrat Mikroba
padat: 60
60
Application of Solid-state Fermentation
61
Solid-state Fermentation
• Advantage
• Less contamination by low water content
• Oxygen-supply, CO2-removal and temp-control by aeration
• Disadvantage
• Difficulty in Mixing: Low in homogeneousness
• Difficulty in temp-control by low conductivity
• Experience-dependent
62
Design of Solid-state Fermentor
Exhaust Line Door for
& Evaporation Raw Materials-Supply
& Inspection
Liquid-supply
Paddle-type
Mixing Device
Recovery for
Final Products
66