Peningkatan kerentanan HIF-1 heterozigot-null tikus untuk malformasi kardiovaskular

yang terkait dengan ibu diabetes

Pada

Malformasi jantung adalah manifestasi paling umum dari diabetes embryopathy.

Mekanisme molekul yang mendasari efek teratogenik ibu diabetes memiliki tidak
sepenuhnya terungkap. Menggunakan profil ekspresi genom-lebar, kami sebelumnya
menunjukkan bahwa paparan ibu diabetes mengakibatkan dysregulation dari faktor
hipoksia-diinduksi jalur (HIF-1) 1 di embrio yang berkembang. Kita dengan demikian
dianggap kaitan antara jalur HIF-1-diatur dan pengembangan malformasi kongenital. HIF-
1 heterozigot-null (Hif1a / ) dan tipe liar (Wt) littermate embrio yang terpapar
lingkungan intrauterin seorang ibu penderita diabetes untuk menganalisis frekuensi dan
morfologi cacat bawaan, dan menilai perubahan ekspresi gen inWt dan Hif1a / embrio.
Kami mengamati penurunan jumlah embrio per sampah dan peningkatan insiden
malformasi jantung, termasuk Cacat septum atrioventrikular dan mengurangi miokard
massa, dalam Hif1a terkena diabetes / embrio dibandingkan dengan Wt embrio. Kami
juga mendeteksi perbedaan yang signifikan dalam ekspresi faktor-faktor transkripsi
jantung kunci, termasuk Nkx2.5, Tbx5, dan Mef2C, di Hif1a terkena diabetes / embrio
hati dibandingkan toWt littermates. Dengan demikian, parsial global HIF-1 kekurangan
mengubah ekspresi gen di jantung berkembang dan meningkatkan kerentanan terhadap
cacat bawaan dalam model tikus diabetes kehamilan.

Introduction
Diabetes kehamilan dikaitkan dengan peningkatan terjadinya malformasi kongenital
dibandingkan dengan non-diabetic kehamilan [1,2]. Embryopathy diabetes dapat
mempengaruhi setiap sistem organ yang berkembang, meskipun Cacat jantung bawaan
malformasi paling sering pada keturunan perempuan diabetes [1]. Cacat (AVS) septum
atrioventrikular, sindrom hypoplastic kiri jantung, dan terus-menerus truncus arteriosus
adalah malformasi jantung paling sering terdeteksi dalam studi klinis [1,3-5]. Jenis yang
sama malformasi jantung yang terkait dengan kehamilan diabetes pada manusia telah
dilaporkan dalam hewan model [4,6-8]. Studi hewan telah menunjukkan bahwa
hiperglikemia, hipoksia, acidemia janin, dan metabolisme bahan-bakar ibu/janin yang
abnormal yang bertanggung jawab untuk perubahan perkembangan embrio [9-15]. Studi
terbaru menunjukkan bahwa pengaruh teratogenik yang besar dari lingkungan
diabetichyperglycemic dimediasi oleh peningkatan stres oksidatif dan bahwa administrasi
anti-oksidan mengurangi terjadinya cacat perkembangan [13-16]. Namun, mekanisme
molekul hiperglikemia atau stres oksidatif yang menyebabkan ekspresi gen dysregulated
bahwa pada akhirnya hasil malformasi memiliki belum terungkap. Menggunakan profil
ekspresi gen global, kami sebelumnya menunjukkan bahwa ibu diabetes mengubah
ekspresi gen embrio [17,18]. Inparticular, dua puluh gen diatur oleh faktor hipoksia-
diinduksi 1 (HIF-1) dipamerkan peningkatan ekspresi di terkena diabetes embrio di E10.5,
mungkin mencerminkan respon embrio yang adaptif terhadap lingkungan diabetes
peningkatan stres oksidatif dan hipoksia [17]. HIF-1 mengaktifkan lebih dari 800 target
gen yang terlibat dalam proliferasi sel, angiogenesis, eritropoiesis, metabolisme dan
apoptosis [19]. Seperti protein Peraturan penting lain, tingkat ekspresi HIF-1 sangat
dikendalikan melalui kombinasi dari mekanisme transcriptional, post-transcriptional dan
post-translational, dan lebih lanjut dipengaruhi oleh protein stabilitas dan transactivation
proses [19,42]. Oksigen ketegangan memainkan peran kunci dalam peraturan ekspresi
HIF-1, stabilisasi dan aktivasi [19]. Amplitudo dari respon ini juga dimodulasi oleh faktor
pertumbuhan dan jalur signaling bergantung pada sitokin [20,21].
Selain itu, muncul bukti menunjukkan bahwa spesies mitokondria oksigen reaktif (ROS)
diperlukan dan cukup untuk memulai stabilisasi dan aktivasi HIF-1, dan bahwa
pengobatan dengan antioksidan mencegah HIF-1 protein stabilisasi [22]. Peranan penting
dari HIF-1 dalam pengembangan ditunjukkan oleh konsekuensi dari homozygosity untuk
alel null di lokus Hif1a pengkodean subunit HIF-1. Hif1a babak embrio tikus mati di
pertengahan kehamilan karena cacat tabung kardiovaskular dan saraf [23,24]. HIF-1
sangat penting untuk jantung yang tepat perulangan dan modulasi dari neural crest migrasi
sel (NCC) dan kelangsungan hidup [24,25]. Menariknya, paparan embrio tikus
peningkatan konsentrasi O2 ambient sebagian menyelamatkan pengembangan Hif1a
embrio jantung, khusus chamber pembentukan. Namun, hyperoxia gagal untuk
menyelamatkan faring pengembangan yang arch dan NCC migrasi. Selain itu, tikus
dengan global heterozigot penghapusan HIF-1 seiring dengan jantung tertentu
homozygous penghapusan HIF-1 di ventrikel kardiomiosit pameran embrio lethality
karena perkembangan jantung yang abnormal antara E8.5 dan E10.0 [26]. Sifat global
penghapusan HIF-1 dalam studi ini tidak memungkinkan atribusi definitif efek mencatat
jenis sel tunggal. Tidak hanya kehilangan-dari--fungsi HIF-1, tetapi juga aktivitas HIF-1
berlebihan, dapat mengakibatkan cacat lahir.
CITED2 merupakan pengatur negatif kegiatan transcriptional HIF-1 dan Cited2 mouse
embrio memanifestasikan berlebih dari gen target HIF-1, seperti Vegfa, Glut1, dan Pgk1,
serta neural tube dan kardiovaskular Cacat [27]. Cacat jantung sebagian diselamatkan pada
Cited2/; Hif1a / embrio [28]. Lokal adenoviral berlebih dari HIF-1 di jantung cewek
sudah cukup untuk menyebabkan penyakit arteri koroner anomali [29]. Dengan demikian,
peningkatan atau penurunan aktivitas HIF-1 mengakibatkan kerusakan saraf dan
kardiovaskular, yang cacat perkembangan paling sering dikaitkan dengan embryopathy
diabetes. Berdasarkan temuan kami bahwa ekspresi gen target HIF-1 disebabkan oleh Ibu
diabetes [17], dan pengetahuan bahwa Hif1a embrio memiliki cacat besar dalam
pengembangan kardiovaskular [23,24], kami hipotesis bahwa HIF-1 transcriptional
aktivitas mewakili respon pelindung embrio tomaternal diabetes dan bahwa hilangnya
aktivitas HIF-1 meningkatkan kerentanan terhadap cacat jantung yang diamati dalam
diabetes embryopathy. Hif1a / heterozigot-null tikus berkembang secara normal tetapi
menunjukkan tanggapan terganggu ketika ditantang dengan hipoksia setelah kelahiran
[30,31]. Kami hipotesis bahwa membatasi tingkat HIF-1 dapat mengganggu
perkembangan embrio kondisi diperburuk hipoksia, whichmay terjadi dalam konteks
ofmaternal diabetes. Kami menguji hipotesis ini dengan mengekspos Hif1a / embrio
tomaternal diabetes. Kami menganalisis frekuensi dan morfologi Cacat jantung di
diabetesexposed Hif1a / dan liar jenis (Wt) littermate embrio. Hasil kami menunjukkan
peran penting HIF-1 dalam embrio tanggapan ke lingkungan diabetes, termasuk
pengaturan tentang faktor-faktor transkripsi jantung kunci Nkx2.5, Tbx5 dan Mef2C.
2. metode
2.1. Hewan percobaan
studi ini dilaksanakan sesuai dengan panduan untuk perawatan dan penggunaan hewan
laboratorium (NIH publikasi No. 85-23, direvisi 1996). Diabetes disebabkan di perempuan
bawaan FVB mouse ketegangan (ketegangan kode 207, sungai Charles), berusia 7-9
minggu, oleh 2 suntikan intraperitoneal 100 mg/kg berat badan streptozotocin (STZ;
Sigma, St Louis, MO), sebagai dijelaskan [17]. Kadar glukosa darah diukur pada hewan
berpuasa oleh glucometer (COUNTOUR TS, Bayer, Swiss). Kami menganalisis embrio
dari 52 bendungan diabetes yang mempertahankan kadar glukosa darah di atas 13.9
mmol/L (diklasifikasikan sebagai diabetes) dengan kadar glukosa darah (berarti SD) 10.0
1.2; 18.3 4.3; dan 28.7 6.36 mmol/L sebelum STZ perawatan, hari perkawinan, dan
pada panen embrio, masing-masing. Mouse embrio diisolasi dari bendungan diabetes atau
kontrol antara E10.5 dan E18.5. Siang hari yang steker vagina ditemukan ditunjuk E0.5.
Diabetes FVB Wt betina yang ditenagai Hif1a / laki-laki (dengan Hif1atm1jhu Ko alel
[23] di latar belakang FVB) untuk menghasilkan Hif1a / dan Wt (Hif1a / ) littermate
embrio. Hif1a / tikus rusak di induksi HIF-1 protein dalam menanggapi hipoksia atau
iskemia [32,33]. Keturunan Wt Hif1a /-perkawinan yang genotyped oleh PCR [23,34].
Bebas-diabetic embrio yang dihasilkan fromcrosses antara mock-induced Wt perempuan
(yaitu tidak ada pengobatan STZ) untuk Hif1a / laki-laki . Skema peternakan ini
diminimalkan pengaruh potensial genotipe ibu karena alel mutan paternally memberikan
kontribusi. Tahap perkembangan diklasifikasikan untuk setiap embrio oleh kriteria
morfologi, termasuk nomor somite serta sistem saraf pusat, ekstremitas dan pengembangan
mata. Embrio dan jantung morfologi dinilai menggunakan mikroskop pembedahan Nikon
SMZ. Gambar digital seluruh embrio ditangkap dengan kamera Nikon DS-Fi1.
Pengukuran panjang crown-bokong dan relatif jantung daerah diperoleh ex vivo oleh light
Microscope menggunakan program perangkat lunak unsur NIS (Nikon). Kami
menganalisis embrio yang sebanding dalam kemajuan perkembangan mereka.

2.2. morfologi analisis dan immunostaining

Dissected thoraxes dari E14.5 embrio yang tetap dengan 4% paraformaldehyde di PBS
(pH7.4) pada 4 C dalam semalam, dehidrasi, dan tertanam dalam parafin. Kuantifikasi
miokard jaringan area (ventrikel miokardium kompak dan trabeculae) dan daerah lumens
ventrikel dilakukan di Wt dan Hif1a / terkena diabetes dan mengendalikan hati (n = 5
setiap) menggunakan alat threshold program NIH ImageJ
(http://imagej.nih.gov/ij/download.html), sebagai dijelaskan [35]. Kami menganalisis 3
berturut-turut bagian 7-m ketebalan berjalan melalui persimpangan atrioventrikular (AV)
dengan pemandangan empat-chamber. Immunohistochemistrywas performedwith anti-
VEGF-A antibodi di 1:50 pengenceran (#sc-7269, Santa Cruz Biotechnology, CA, USA),
anti--halus otot aktin (-SMA) antibodi pengenceran 1: 500 (#A2547, Sigma Aldrich),
dan H3 anti-phospho-histone (pHH3) antibodi (#06-570; Merck Millipore, Jerman) pada 1:
100 pengenceran; Setiap analisis diulang minimal 3 kali pada rata-rata 3 embrio per
genotipe dan termasuk kontrol yang sesuai. Bagian dianalisis di bawah Nikon Eclipse 50i
mikroskop dengan perbesaran 20 tujuan yang menggunakan program NIS-elemen. -
SMA dan pHH3 immunostaining dianalisis dengan dua-foton microscope (Zeiss MP7).
VEGF-A ekspresi dan ekspresi -SMA yang diukur menggunakan perangkat lunak ImageJ.
Immunopositive pHH3 inti di kompak miokardium dihitung menggunakan Adobe
Photoshop CS5.11.
2.3. TUNEL assay
untuk terkena diabetes dan mengontrol Wt dan Hif1a / embrio, kami menganalisis 3
bagian jantung yang berjalan melalui AV persimpangan dengan empat ruang
viewfrom3embryos dari tandu yang berbeda untuk setiap genotipe. Bagian jaringan (7 m)
membedah E14.5 thoraxes diperlakukan dengan proteinase g/ml 20 K untuk 20 menit
pada suhu kamar. Bagian yang diinkubasi dengan TUNEL pelabelan kit (Roche) untuk 1 h
37 c dan Hoechst 33342 digunakan sebagai counterstain nuklir. Bagian dianalisis di
bawah mikroskop neon Nikon Eclipse E400.

2.4. real-time transkripsi terbalik RNA Total PCR

kuantitatif diasingkan dari hati di E14.5 dari sampel percobaan (EXP; Wt terkena
diabetes, diabetes-terkena Hif1a / , dan non-diabetic Hif1a / ) dan dari non-diabetic Wt
(kontrol). Setelah transkripsi terbalik (RT), real-time PCR kuantitatif (qPCR) dilakukan
dengan aktivasi AmpliTaq awal di 95 C selama 10 menit, diikuti oleh 40 siklus di 95 C
untuk 15 s dan 60 C untuk 60 s, dijelaskan [34]. Gen Hprt1 yang dipilih sebagai gen
referensi terbaik untuk analisis kami dari panel kontrol 12 gen (TATAA Biocenter AB,
Swedia)

2.5. Western blotting

Western blotting dilakukan menurut suatu protokol standar yang menggunakan sebuah
antibodi monoklonal yang secara khusus mengakui HIF-1 [23]. Membedah E10.5 seluruh
embrio tanpa hati dan E10.5 hati yang segaris dan disimpan at80 C sampai analisis.
Protein levelswere diukur menggunakan BCA assay. Protein sampel (25 g per forwhole
jalur embrio; 8 g setiap jalur untuk embrio hati) didenaturasi, ditetapkan menggunakan
8% SDS-halaman, dan dipindahkan ke membran nitrocellulose. Membran diblokir dengan
5% kering susu dan diinkubasi semalam dengan anti-HIF-1 IgG di TBS penyangga di
pengenceran 1:750 (#NB100-105; Novus Biologicals, Cambridge, Inggris). Anti--aktin
IgG (#5125; Sinyal sel) digunakan sebagai kontrol loading. Setelah inkubasi dengan lobak
peroksidase conjugated sekunder IgG (Amersham, IL, USA), bercak dikembangkan
menggunakan SuperSignal * West Dura Chemiluminescent substrat (Thermo Scientific,
MI, AS). Sinyal chemiluminescent ditangkap menggunakan ImageQuant LAS 4000 Imager
(GE Healthcare Bio-ilmu AB, Swedia) dan dianalisis oleh ImageJ software

2.6. Statistik analisis

Fisher tepat tes digunakan untuk membandingkan dengan jumlah embrio dan nomor Cacat
antara dua kelompok independen. Satu arah analisis varians (ANOVA) digunakan untuk
menyelidiki perbedaan signifikan secara statistik antara genotipe dan kondisi
eksperimental. Ketika interaksi yang signifikan terdeteksi, perbedaan antara subkumpulan
lebih lanjut dibandingkan menggunakan posting t-tes (signifikansi ditetapkan pada tingkat
b 0,05 P; Grafik Pad, 2005; Grafik Pad, CA, USA).
Eksternal morfologi perubahan terkena diabetes embrio di E14.5. Luarnya Wt dan Hif1a /
embrio dari non-diabetic (, F) dan diabetes kehamilan dibandingkan di E14.5 (B-E, G-J).
Cacat paling sering dikaitkan dengan diabetes kehamilan adalah anomali kardiovaskular
dan Cacat tabung syaraf. Cacat tabung syaraf dipajang terutama sebagai neural tube
penutupan Cacat (panah di J dan I) dan dalam beberapa kasus sebagai fenotipe zig-zag
penutupan garis neural tube (E). Anomali kardiovaskular yang diwujudkan oleh
perdarahan (B, C, G, saya), edema (C, D, G, kepala panah), dan anemia fenotipe dalam
hidup embrio (H). Skala: 5 mm. (K): insiden cacat bawaan di embrio antara E10.5 dan
E18.5 yang terpengaruh oleh Ibu diabetes. Hif1a / embrio dari diabetes kehamilan (kadar
glukosa darah > 13,9 mmol/L) menunjukkan tingkat peningkatan malformasi kongenital
22% (n = 36 dari 163) dibandingkan dengan 13% dari Wt terkena diabetes (n = 26 dari
195; P = 0.03, Fisher tepat tes) dan 1% dari non-diabetic Hif1a / embrio (n = 1 dari 117;
P = 0,0001, Fisher tepat tes). Tidak ada efek yang signifikan dari genotipe tentang insiden
cacat bawaan terdeteksi pada diabetes kehamilan dengan kadar glukosa > 30 mmol/L
(parah hiperglikemia) dengan frekuensi dari 26% (n = 15 dari 58) dan 28% (n = 18 dari 64;
P = 0.8, Fisher tepat test) untuk Hif1a / dan embrio Wt, masing-masing. Namun,
pengaruh signifikan genotipe pada insiden cacat bawaan ditemukan pada diabetes
kehamilan dengan kadar glukosa darah antara 13.9 mmol/L dan 30 mmol/L (moderat
hiperglikemia), yang 20% dari Hif1a / embrio (n = 21 105) dibandingkan dengan 6% Wt
embrio (n = 8 dari 131, P = 0,002, Fisher tepat tes) menunjukkan cacat bawaan. *, Tes
tepat b P 0.03, Fisher.

3.3. analisis kadar protein HIF-1

untuk memahami dasar untuk eskalasi cacat bawaan di Hif1a / diabetes embrio, kami
menganalisis kadar protein HIF-1. Lisat protein yang dibuat dari Wt dan Hif1a /
seluruh embrio dan hati di E10.5 (gambar 6). Analisis kuantitatif blot Barat menunjukkan
secara signifikan penurunan tingkat HIF-1 di seluruh Hif1a / embrio 1,9 kali lipat
dibandingkan Wt embrio. Sebaliknya, protein HIF-1 level di hati Wt dan Hif1a /
littermates dari non-diabetic kehamilan adalah serupa. Tingkat HIF-1 yang meningkat
2.9-fold di terkena diabetes Wt hati tetapi hanya 1,8 lipat di Hif1a / hati, dibandingkan
dengan non-diabetic Wt hati.

3.4. analisis jantung VEGF-A dan -SMA

ekspresi berikutnya, kami berfokus pada jantung ekspresi VEGF-a, produk gen target
HIF-1 kunci. VEGF-A adalah modulator penting perkembangan kardiovaskular dan
sederhana meningkat atau menurun dalam VEGF-A Level menyebabkan embrio lethality
[37,38]. Kami menganalisis histologis bagian E14.5 hati untuk membangun ekspresi
spasial VEGF-A menggunakan immunohistochemistry. VEGF-A terdeteksi dalam
interventriculare septum, sel-sel miokardium lapisan endocardial bantal aliran saluran dan
saluran keluar, dan ventrikel miokardium (rajah-rajah 7A-F). Diabetes secara signifikan
meningkatkan kadar protein VEGF-A di Wt hati tetapi tidak di Hif1a / hati (gambar 7 g).
Dalam Hif1a terkena diabetes / hati, ekspresi VEGF-a menurun dalam tiga dari empat
dianalisis embrio. Kami juga menggunakan RT-qPCR untuk menganalisis tingkat Vegfa
mRNA di dalam hati embrio di E14.5 (gambar 7 H). Kami mendeteksi ditandai variabilitas
dalam tingkat ekspresi Vegfa mRNA di dalam hati diabetesexposed. Namun, berarti Vegfa
mRNA tingkat dalam hati terkena diabetes Hif1a / embrio sangat berkurang
dibandingkan dengan Wt littermates.

3.5. analisis transkripsi gen jantung

RT-qPCR dilakukan untuk menganalisis ekspresi gen pengkodean molekul penting bagi
myofibrillogenesis, transcriptional peraturan, diferensiasi dan proliferasi, termasuk T-box
5 (Tbx5), NK kelas homeodomain protein (Nkx2.5), Atrium natriuretic peptida (imigran),
gap-persimpangan gen connexin 43 (Cx43), myocyte penambah faktor 2C (Mef2c), rangka
-aktin 1 (Acta1), myosin cahaya jaringan isoform (Mlc2v), dan jantung troponin saya
(Tnni3). Sedangkan ekspresi Tbx5 secara signifikan menurun di non-diabetic Hif1a /
compared hati Wt, tajam meningkat di terkena diabetes Hif1a / hati dibandingkan
dengan non-diabetes dan diabetes Wt hati (gambar 9). Ekspresi faktor kardiogenik ekspresi
Nkx2.5 mRNA juga secara signifikan meningkat di terkena diabetes Hif1a / hati. TBX5
dan NKX2.5 sinergis dapat mengaktifkan promotor gen imigran [40,41]. Tingkat ekspresi
imigran secara signifikan meningkat di terkena diabetes Hif1a / embrio sesuai dengan
ekspresi pola Tbx5 dan Nkx2.5. Selanjutnya, kami menganalisis ekspresi Mef2c, yang
mengkode faktor transkripsi khusus jantung. Mef2c mRNA tingkat juga meningkat di
terkena diabetes Hif1a / hati tetapi tidak di Wt terkena diabetes hati di E14.5.
Sebaliknya, ibu diabetes sederhana meningkat ekspresi penanda diferensiasi sel infark
miokard, Cx43, di Wt dan Hif1a / hati. Ekspresi Acta1 sederhana menurun di Wt
maupun Hif1a / terkena diabetes hati dibandingkan dengan non-diabetic hati. Ekspresi
gen myofilament, Tnni3 dan Mlc2v ventrikel-spesifik, tidak dipengaruhi bermakna oleh
Hif1a genotipe atau lingkungan diabetes. Diambil bersama-sama, data kami konsisten
dengan hipotesis bahwa ekspresi gen dysregulated di dalam hati dari Hif1a / embrio
mengalami diabetes lingkungan mendasari peningkatan kejadian Cacat jantung bawaan di
embrio ini.

4. diskusi
proses teratogenik diabetes kehamilan bisa disebabkan berbagai faktor. Hal ini terkait
dengan sejumlah gangguan pada perkembangan embrio dan pertumbuhan dan fungsi bolus
dikompromikan. Dalam studi ini, kami telah menganalisis dampak global heterozigot
penghapusan Hif1a pada respon embrio ibu diabetes. Penelitian kami menunjukkan bahwa
dibandingkan dengan littermates Wt, embrio tikus heterozigot untuk babak alel di lokus
Hif1a memiliki jumlah embrio per sampah yang menurun dan meningkatnya insiden
malformasi dalam lingkungan teratogenik ibu diabetes. Studi sebelumnya telah
mendokumentasikan bahwa embrio dengan babak global gen Hif1a mati oleh E10.5
menampilkan parah kardiovaskular dan neural tube Cacat [23,24]. Sebaliknya,
penghapusan myocyte khusus jantung Hif1a tidak mematikan dan tidak menyebabkan
peningkatan insiden Cacat jantung perkembangan [42]. Walaupun dalam studi ini, kami
mengamati bahwa kardiovaskular cacat yang paling sering Cacat Hif1a / embrio dari
kehamilan diabetes, kita tidak bisa menentukan jenis sel yang atau kombinasi yang jenis
sel yang berkontribusi untuk peningkatan kerentanan dari Hif1a / tikus untuk diabetes
embryopathy karena sifat global penghapusan Hif1a.

Pada saat yang sama, penghapusan global Hif1a Selain itu dapat mempengaruhi gene
peraturan di kompartemen embrio di pasang diabetes. Itu juga dapat berkontribusi
disfungsi bolus dan respon patologis yang berlebihan dalam kehamilan diabetes. Dalam
penelitian ini, kami telah menunjukkan peningkatan kadar HIF-1 dalam terkena diabetes
hati dibandingkan dengan non-diabetic hati di E10.5. Selain itu, jantung HIF-1 tingkat
berkurang sebesar 40% dalam hati terkena diabetes dari Hif1a / embrio dibandingkan
dengan littermates Wt, mencerminkan Hif1a haploinsufficiency. Perbedaan-perbedaan
dalam jantung tingkat HIF-1 adalah bukti diferensial tanggapan antara Wt dan Hif1a /
terkena diabetes hati. Di bawah kondisi normoglycemic, kompensasi untuk heterozygosity
untuk Hif1a Ko alel terjadi, mungkin oleh perubahan dalam tingkat sintesis atau degradasi
mRNA HIF-1 atau protein. Sebagai hasilnya, kadar protein HIF-1 yang tidak secara
signifikan menurun dalam hati Hif1a / embrio dan pengembangan hasil biasanya.
Namun, di bawah tekanan ibu hiperglikemia, adaptif peningkatan kadar protein HIF-1
diamati di Wt embrio dapat diwujudkan Hif1a / embrio, sehingga meningkatkan risiko
untuk Cacat jantung bawaan.

Kami menggunakan model geneticmouse kekurangan HIF-1 global parsial untuk menguji
hipotesis kami bahwa induksi HIF-1 mewakili salah satu respon adaptif terhadap ibu
diabetes dan bahwa kegagalan untuk secara memadai menginduksi ekspresi HIF-1
meningkatkan kerentanan terhadap diabetes embryopathy. HIF-1 heterozigot-null dan Wt
littermate embrio yang terpapar lingkungan intrauterin seorang ibu penderita diabetes dan
frekuensi dan morfologi Cacat jantung dianalisis. Kami menemukan bahwa pengurangan
global fungsional Hif1a gen dosis menurun jumlah embrio per sampah dan peningkatan
insiden malformasi jantung, terutama AVS cacat dan mengurangi ventrikel massa infark
miokard, dalam Hif1a terkena diabetes / dibandingkan Wt littermates. Kami juga
mendeteksi perubahan signifikan dalam ekspresi dari Vegfa dan faktor-faktor transkripsi
kardiogenik kunci Tbx5, Nkx2.5 dan Mef2c di Hif1a terkena diabetes / dibandingkan Wt
embrio hati. Perubahan ini menyediakan mekanisme molekuler yang kehilangan-dari--
fungsi HIF-1 dapat meningkatkan risiko malformasi kongenital. Diambil bersama-sama,
hasil ini menarik bukti bahwa gangguan HIF-1-dikendalikan hipoksia-respons mungkin
memainkan peran fungsional penyebab dalam diabetes embryopathy.