Study of the distribution of Malassezia species in

patients with pityriasis versicolor and healthy

individuals in Tehran, Iran
Bita Tarazooie, Parivash Kordbacheh, Farideh Zaini, Kamiar
Zomorodian, Farshid Saadat, Hojjat Zeraati, Zahra Hallaji
and Sassan Rezaie

Latar Belakang: versicolor Pityriasis adalah infeksi superfisial dari stratum korneum yang
disebabkan oleh sekelompok ragi sebelumnya bernama pityrosporium. Taksonomi dari ragi
lipofilik baru-baru ini telah dimodifikasi dan termasuk tujuh spesies disebut Malassezia.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk membandingkan distribusi spesies Malassezia
diisolasi dari lesi pitiriasis versikolor dan mereka terisolasi dari kulit yang sehat.

Metode: Diferensiasi dari semua spesies Malassezia dilakukan dengan menggunakan fitur
morfologi dan uji fisiologis termasuk reaksi katalase, uji Tween asimilasi dan pemecahan
esculin.

Hasil: Pada lesi pitiriasis versikolor, spesies yang paling sering terisolasi adalah M. globosa
(53,3%), diikuti oleh M. furfur (25,3%), M. sympodialis (9,3%), M. obtusa (8,1%) dan M.
slooffiae (4,0%). Spesies yang paling sering diisolasi pada kulit orang yang sehat adalah M.
globosa, M. sympodialis, M. furfur, M. sloofiae dan M. restricta yang masing-masing terdiri
41,7%, 25,0%, 23,3%, 6,7% dan 3,3% dari spesies yang terisolasi.

Kesimpulan: Menurut data kami, M. globosa merupakan spesies yang paling umum pada
kulit orang sehat yang pulih hanya dalam bentuk ragi. Namun, bentuk miselium M. globosa
diisolasi sebagai spesies dominan dari lesi pitiriasis versikolor. Oleh karena itu, peran faktor
predisposisi dalam konversi ragi ini untuk miselium dan keterlibatan kembali dalam
patogenisitas pityriasis versicolor harus dipertimbangkan

Background

Ragi dari genus Malassezia diketahui menjadi anggota mikroflora kulit manusia dan lainnya
berdarah panas vertebrata [1,2]. Ini ragi lipofilik berhubungan dengan berbagai penyakit
manusia, terutama pityriasis versicolor (PV), sebuah Dermatomikosis skala kronis dangkal
[3]. Penyakit ini sering terjadi pada remaja akhir dan dewasa muda dari kedua jenis kelamin
dan ditandai dengan baik berbatas tegas patch scaling dengan pigmentasi variabel [4].
Meskipun PV telah dijelaskan pada awal abad ke sembilan belas [5], sampai saat ini
klasifikasi agen etiologi yang adalah masalah utang. Kontroversi ini mungkin disebabkan
oleh fitur morfologi berbagai persyaratan tumbuh rewel dari Malassezia in vitro. Genus
Malassezia telah mengalami revisi taksonomi beberapa [1,6]. Dalam reklasifikasi lalu oleh
Gueho et al, tujuh spesies yang berbeda yang diakui dalam genus ini, yaitu M. furfur, M.
pachydermatis, M. sympodialis, M. globosa, M. obtusa, M. restricta dan M. slooffiae [7].
Selain itu, baru-baru ini tiga spesies baru yang termasuk dalam genus ini yakni, M. dermatis,
M. equi dan M. nana [8,9]. Namun, penerimaan dari spesies baru ini masih dalam
penyelidikan. Hanya ada informasi yang minim tentang epidemiologi dan ekologi dari spesies
Malassezia tersedia dan signifikansi klinis spesies ini tidak sepenuhnya diakui. Oleh karena
itu, tujuan dari penelitian ini adalah untuk menetapkan apakah ada hubungan antara berbagai
jenis lesi Malassezia dan PV serta menentukan mikroflora spesies Malassezia dari individu
sehat.

Metode

subjek

Sembilan puluh empat pasien rawat jalan di rumah sakit dan medis Razi Unit mikologi di
sekolah kesehatan masyarakat dilibatkan dalam penelitian ini. 100 usia dan jenis kelamin-
orang cocok klinis sehat (tanpa dermatosis) juga dilakukan sebagai kontrol. Kuesioner
digunakan untuk mendapatkan data yang informatif tentang sejarah masing-masing orang.

Pengumpulan dan budaya sampel

Pemeriksaan mikologi dilakukan untuk mengkonfirmasi diagnosis versicolor pityriasis.

Spesimen diambil oleh gesekan lesi dengan pisau bedah. Selain itu, dalam mata pelajaran
normal dan dalam kasus-kasus yang tidak ada skala yang cukup, sampel diambil dengan cara
sellotape. Mikroskop langsung dengan KOH 20% dan pewarnaan metilen biru dilakukan
dalam lesi PV serta sampel normal. Semua sampel juga diinokulasi dalam piring berisi
dimodifikasi media Dixon. Lempeng diinkubasi pada 31 C selama dua minggu dan
diperiksa pada interval yang sering untuk koloni berkembang.

Identifikasi

Spesies Malassezia diidentifikasi sesuai dengan fitur morfologi dan sifat fisiologis. Koloni
terisolasi pada agar Dixon dimodifikasi digunakan untuk identifikasi. Di antara spesies
Malassezia, hanya pachydermatitis M. mampu tumbuh pada agar Sabouraud [7]. Namun,
pemeriksaan lebih lanjut sangat penting untuk identifikasi spesies Malassezia lainnya seperti
uji asimilasi Tween, reaksi katalase dan membelah dari esculin [10,11].

Tween asimilasi uji

Menurut metode yang dilaporkan oleh Guillot et al [10], kemampuan untuk memanfaatkan
senyawa Tween yang berbeda sebagai suplemen lipid yang unik dengan spesies Malassezia
dievaluasi. Secara singkat, ragi suspensi (setidaknya 107 cfu / ml) dibuat dalam 2 ml air steril
suling dan dituangkan ke piring berisi dextrose agar Sabouraud pada 45 C. Inokulum
tersebut kemudian menyebar secara merata. Setelah pemadatan setiap lempeng, empat sumur
yang dibuat dan diisi dengan 30 ml senyawa Tween, yaitu Tween 20, 40, 60 dan 80, masing-
masing. Lempeng ini diinkubasi selama seminggu pada 31 C dan pertumbuhan itu dinilai
sekitar sumur individu setelah hari 2, 4 dan 7.
Reaksi katalase

Kehadiran catalse ditentukan dengan menggunakan setetes hidrogen peroksida (larutan 3%)
dan produksi gelembung gas dianggap sebagai reaksi positif. Kurangnya aktivitas katalase
adalah fitur karakteristik M. restricta [10].

Pemisahan esculin

Kegiatan -glucosidase spesies Malassezia yang berbeda diuji dengan menggunakan metode
yang dijelaskan oleh Mayser et al [11]. Singkatnya, sebuah loop ragi segar diinokulasikan
mendalam dalam tabung agar esculin dan diinkubasi selama 5 hari pada 32 C. Pemisahan
esculin diungkapkan oleh gelap medium. Tes ini digunakan untuk membedakan M. furfur, M.
slooffiae dan M. sympodialis dari spesies Malassezia lainnya.

Analisis statistik

Data kuantitatif dianalisis oleh kelompok t-test. Data dari kontrol pasien dan sehat dianalisis
menggunakan chi-square test. Korelasi faktor predisposisi dengan PV serta perbedaan antara
isolat dari pasien dan orang normal dievaluasi dengan uji Fisher yang tepat. Spesifisitas dan
sensitivitas pemeriksaan langsung terhadap kultur dihitung. Selain itu, efek dari faktor
predisposisi hasil budaya di kedua kelompok dihilangkan oleh Mantel-Haenszel tes. Sebuah
P-nilai <0,05 dianggap signifikan.

Hasil

Dari 94 pasien dengan PV, 52,1% kasus adalah perempuan. Usia rata-rata dan median pasien
adalah 29,19 11.14 dan 27 tahun, masing-masing. Prevalensi tertinggi panu terlihat pada
pasien dengan 20-30 tahun. Perbedaan yang signifikan dalam distribusi faktor predisposisi
(yaitu alergi, hyperhydrosis, diabetes) yang diamati antara kelompok pasien (58,5%) dan
kontrol sehat (30%) (P <0,001). Pemeriksaan langsung dari spesimen yang positif 98,9% dari
lesi PV, di mana hifa yang terlihat pada 89,4% kasus positif bersama dengan ragi pemula.
Namun, hanya 79,8% dari spesimen menghasilkan Malassezia dalam budaya. Selain itu,
budaya kasus positif lebih tinggi pada pasien daripada kontrol sehat dan perbedaan-perbedaan
itu signifikan secara statistik (P <0,05). Spesifisitas dan sensitivitas pemeriksaan langsung
dibandingkan dengan budaya ditentukan 62,8% dan 99,4%, masing-masing. Data aktual yang
terkait pada faktor-faktor predisposisi dan hasil kultur disajikan dalam tabel 1, 2 dan 3.
Analisis statistik menunjukkan bahwa pada kedua kelompok dengan dan tanpa faktor
predisposisi (alergi, hyperhydrosis dan diabetes), tingkat kasus kultur positif lebih tinggi pada
pasien dibandingkan kontrol. Mengenai penghapusan efek faktor predisposisi oleh Mantel-
Haenszel, hanya hyperhydrosis dapat menyebabkan perbedaan dalam budaya sampel pada
pasien dibandingkan dengan pada orang sehat. Dalam lesi pitiriasis versikolor, spesies yang
paling sering terisolasi adalah M. globosa (53,3%), diikuti oleh M. furfur frekuensi (25,3%),
M. sympodialis (9,3%), M. obtusa (8,1%) dan M. slooffiae (4,0%). Namun, spesies yang
paling sering terdeteksi pada orang sehat adalah M. globosa, M. sympodialis, M. furfur, M.
slooffiae dan M. restricta yang masing-masing terdiri 41,7%, 25,0%, 23,3%, 6,7% dan 3,3%
dari terisolasi Flora Malassezia. Tabel 4 dan 5, menunjukkan distribusi spesies Malassezia,
berdasarkan situs koleksi sampel. Secara keseluruhan, tidak ada perbedaan dalam distribusi
Malassezia yang tercatat antara kelompok pasien dan kontrol yang sehat (P = 0,1).

Diskusi

Meskipun pityriasis versicolor memiliki kejadian di seluruh dunia, frekuensi adalah variabel
dan tergantung pada berbagai iklim, kondisi kerja dan sosio-ekonomi [12,13]. Penyakit ini
lazim di Iran, di mana hampir 6% dari semua dermatosis dan sekitar 30% dari
dermatomycoses adalah karena ini ragi lipofilik [14,15]. Serupa dengan investigasi lain
[1,3,16,17], prevalensi tertinggi PV dalam penelitian ini diamati pada 20-30 tahun kelompok,
menunjukkan bahwa puncak infeksi bertepatan dengan usia ketika produksi sebum dalam
tingkat tertinggi. Meskipun 60% dari pasien dalam rentang usia 10-20 tahun adalah
perempuan, proporsi ini terbalik dalam kelompok usia 20-30. Lebih rendah jatuh tempo usia
pada wanita dibandingkan dengan laki-laki dapat dianggap sebagai alasan yang mungkin dari
perbedaan ini. Pityriasis versicolor jarang pada anak-anak [3]. Kami hanya menemukan satu
kasus PV pada anak dengan usia kurang dari 10 tahun. Selain itu jarang ditemukan pada
orang tua [1], karena kami hanya memiliki dua kasus PV di atas 50 tahun. Peran seks dalam
kecenderungan untuk pengembangan PV masih belum jelas. Beberapa studi menemukan
bahwa PV lebih sering terjadi pada pria daripada wanita [18,19]. Sementara yang lain
menunjukkan bahwa kejadian infeksi ini lebih tinggi pada wanita [20-22], yang mungkin
karena perhatian ekstra dari perempuan untuk kecantikan dan kebersihan kulit. Namun, mirip
dengan banyak laporan [3,4,17], kami tidak menemukan perbedaan dalam pengembangan PV
di antara kedua jenis kelamin. Meskipun spesies Malassezia dianggap sebagai mikroflora
normal kulit manusia, ragi lipofilik berhubungan dengan gangguan kulit banyak di PV
khususnya, dalam beberapa keadaan [1,23]. Hal ini secara luas diyakini bahwa faktor
endogen seperti administrasi kortikosteroid, malnutrisi dan tingkat plasma kortisol meningkat
menengahi pengembangan PV [3,12,16,24]. Selain itu, peran suhu tinggi dan kelembaban
dalam kondisi ini mapan [1,25]. Dalam hal ini, tidak ada perbedaan yang signifikan yang
diamati pada hasil kultur pasien dibandingkan dengan kontrol setelah eliminasi efek dari
faktor endogen seperti hyperhydrosis oleh uji statistik. Serupa dengan investigasi lain [3,26],
hasil kami sangat mendukung bahwa hyperhydrosis dapat dianggap sebagai faktor endogen
dalam mediasi perkembangan infeksi ini. Dalam survei ini, daerah yang paling terkena
dampak adalah batang dan leher, yang sesuai dengan sebagian besar penelitian di seluruh
dunia [3,21,27]. Distribusi spesies Malassezia di punggung dan dada sejajar dengan
kepadatan dan aktivitas kelenjar pilocebaceous di daerah-daerah. Namun, ada beberapa
laporan menunjukkan bahwa PV lesi dapat terjadi di lokasi yang tidak biasa seperti puting,
daerah kelamin dan selangkangan [28-30]. Serupa dengan penelitian sebelumnya [27], kami
menemukan tidak ada perbedaan statistik dalam distribusi spesies Malassezia di situs
berbagai tubuh. Diagnosis PV umumnya sederhana dan terletak pada manifestasi klinis dan
pemeriksaan mikroskopis dari lesi [13,23]. Dalam pemeriksaan langsung 98% dari sampel
PV menghasilkan hasil positif yang sama dengan hasil yang dilaporkan oleh Erchiga et al
[31]. Dua pasien dengan hasil negatif dalam penelitian ini juga telah menerima pengobatan
topikal antimycotic. Pada 89,4% kasus positif PV, fitur klasik disebut "spaghetti dan bakso"
terlihat. Hasil kami konsisten dengan yang diumumkan sebelumnya dan mengkonfirmasi
pentingnya konversi ragi-miselium dalam patogenesis infeksi ini [23,31]. Mengenai
sensitivitas tinggi dan spesifisitas diterima ujian langsung, diagnosis PV didasarkan pada
pengamatan hifa pendek dan ragi dalam timbangan. Namun, dalam kasus yang hifa hanya
disajikan dalam skala, pemeriksaan langsung dari sampel dengan KOH terutama oleh teknisi
terampil, mungkin gagal untuk mengungkapkan infeksi. Oleh karena itu, kami sarankan
pewarnaan timbangan sebelum melakukan pemeriksaan mikroskopis cahaya untuk
menghindari hasil negatif palsu. Budaya adalah perlu untuk membedakan spesies Malassezia
dengan metode morfologi dan fisiologis. Dalam penelitian ini, tingkat pemulihan spesies
Malassezia dari lesi PV adalah 87%, yang paling sebanding dengan penelitian terbaru oleh
Nakabayashi et al [19]. Tapi, hasil yang kita peroleh lebih tinggi dari beberapa penelitian
sebelumnya [27,32-34]. Perbedaannya mungkin karena ini fakta bahwa margin lesi PV dapat
digunakan untuk mengumpulkan spesimen. Namun seperti ditunjukkan oleh Erchiga et al
[23], tidak seperti Dermatomikosis lainnya, pusat lesi PV menghasilkan bahan yang lebih
layak untuk budaya. Oleh karena itu kami tergores pusat lesi bukan perbatasan untuk
meningkatkan tingkat pemulihan dan menghindari isolasi sekitarnya spesies komensal. Selain
itu, lebih recovery tingkat yang dilaporkan oleh Gupta et al [21] mungkin mencerminkan
perbedaan dalam media kultur dan metode sampling. Meskipun Leeming & agar Notman
yang digunakan oleh mereka meningkatkan pemulihan Malassezia spp., Dimodifikasi agar
Dixon menyediakan fitur koloni [1,33]. Berdasarkan banyak penelitian, lebih dari satu spesies
bisa pulih dari setiap sampel [21]. Di sisi lain, menyediakan kultur murni dan membedakan
spesies dari sampel campuran terlalu sulit. Hal ini mungkin disebabkan karena titik ini bahwa
spesies cepat tumbuh biasanya mencakup spesies lain dalam budaya. Selain itu, karena
karakteristik hidrofobik ragi Malassezia, mempersiapkan suspensi homogen sangat sulit
untuk memisahkan mereka dengan budaya [1]. Selain itu, beberapa spesies Malassezia
mungkin kehilangan kelangsungan hidup mereka setelah subkultur beberapa [7]. Itulah
mengapa kami memilih koloni terpisah tunggal pada setiap spesies untuk menganalisis.
Seperti yang telah disebutkan di atas, spesies Malassezia adalah anggota dari flora kulit
normal dan dapat pulih dari situs yang berbeda dari tubuh terutama sebaceous-daerah yang
kaya. Pada kulit yang sehat, kami menemukan spesies Malassezia dengan pemeriksaan
langsung dan budaya dengan frekuensi 62% dan 60%, masing-masing. Angka ini hasil positif
dalam studi kami adalah lebih rendah dibandingkan dari penelitian terbaru dari Gupta et al
[21] dan mungkin menyarankan perbedaan dalam metode sampling dan medium kultur. Mirip
dengan sebagian besar investigasi lainnya [19,34,35], kami menemukan M. globosa sebagai
spesies yang paling sering pada kulit yang sehat. Sebaliknya, M. sympodialis adalah spesies
terisolasi utama dalam beberapa penyelidikan lainnya [17,22,36,37]. Dalam survei ini,
spesies terisolasi paling umum pada lesi PV adalah M. globosa, yang sesuai dengan sebagian
besar penelitian di seluruh dunia [19,31,32,38]. Ini bertentangan dengan pengamatan
Makimura et al, yang terisolasi M. furfur dan M. sympodialis sebagai spesies dominan pada
lesi PV [37]. Meskipun Gupta et al, juga ditemukan M. sympodialis sebagai agen utama dari
PV di iklim, mereka melaporkan M. globosa sebagai agen utama di daerah tropis [27]. Selain
itu, M. furfur adalah spesies yang paling sering kedua diisolasi dari lesi PV dalam penelitian
ini yang mirip dengan laporan Dutta [32]. Namun mereka gagal untuk mengisolasi M.
slooffiae dari lesi PV.

Kesimpulan

Secara kolektif, M. globosa juga spesies yang paling umum pada orang sehat dan sembuh
dari kulit yang sehat hanya dalam bentuk ragi. Selain itu, hasil kami menunjukkan bahwa M.
globosa terutama dalam bentuk miselia, adalah agen utama dari PV dan M. furfur adalah agen
kedua pentingnya. Hipotesis ini menguat karena dari fakta bahwa M. globosa adalah spesies
dengan tingkat tinggi dan enzim lipase esterase dengan pentingnya kemungkinan dalam
patogenisitas [38]. Ini tetap menjadi pertanyaan terbuka, apakah ada perbedaan dalam
komponen enzim fase miselium dengan bentuk ragi