TEKNIK STERILISASI

Putri Kholifah Novitasari1, Anjar Pribadi2, Aziza Solikhah2, Gusti Nur Aida Fasha2, Nadiya Dwi
Rahayu2, M. Adrian Rifaldi2 dan Hasrul Satria Nur2,3

1. Program studi D3 Analisis Farmasi dan Makanan, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A.
Yani Km 36, Banjarbaru, 70713, Indonesia (10 pt)
2. Program Studi Biologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yan Km 36, Banjarbaru,
70713 (10 pt)
3. Laboratorium Mikrobiologi, FMIPA, Universitas Lambung Mangkurat, Jalan Jend A. Yani Km 35,8
Banjabaru, 70713, Indonesia (10 pt)
(kosong satu spasi tunggal, 12 pt)

E-mail: putrikholifahnovitasari@gmail.com

Abstrak

Sterilisasi adalah suatu proses untuk membunuh suatu proses untuk membunuh atau memusnahkan semua
mikroorganisme atau jasad renik yang ada sehingga jika ditumbuhkan di dalam suatu medium tidak ada lagi
mikroorganisme atau jasad renik yang dapat berkembang biak. Teknik sterilsasi dapat dilakukan dengan tiga metode
yaitu metode panas kering yang dilakukan dengan menggunakan peralatan yaitu oven yang diatur pada kisaran suhu
160℃ hingga 180℃ pada selama 1.5 hingga 3,0 jam, panas basah yang dilakukan dengan menggunakan peralatan yaitu
autoklaf baik autoklaf yang bersifat otomatis atau semi aoutomatis, dan filtrasi membran yang dilakukan dengan
menggunakan peralatan yaitu membran filter umumnya ukuran diameter pori membran adalah 0,2 µm.

Keyword: dry hot air, moist wet heat, filtrasi, Sterilisasi, aseptic, Drying oven

1. Pendahuluan pemindahan biakan bakteri secara aseptic,

Mikrobilogi adalah ilmu yang mempelajari
pengetahuan tentang kehidupan makhluk-makhluk
kecil yang hanya dapat dilihat dengan menggunakan
mikroskop dalam bahasa Yunani : mikros = kecil, bios
= hidup, logos = kata atau ilmu. Makhluk-makhluk
kecil itu disebut mikroorganisme, mikroba, Protista,
atau jasad renik [1]. Salah satu hal yang menunjang
dalam pembelajaran mikrobiologi adalah laboratorium
digunakan untuk melakukan percobaan-percobaan yang
dilakukan untuk memahami lebih dalam tentang hal-
hal yang berkaitan dengan jasad renik. Bekerja di
laboratorium selalu memungkinkan terjadinya suatu
kecelakaan. Satu-satunya jalan untuk menghindari
kecelakaan tersebut adalah dengan bekerja secara
cermat dan hati-hati. Peralatan merupakan suatu bagian
yang mendasari dalam pembentukan laboratorium.
Baik itu laboratorium yang sederhana (praktikum)
maupun untuk tujuan penelitian (laboratotium
penelitian) [2]. Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah
suatu proses untuk mematikan semua
organisme yang terdapat pada atau di dalam suatu
benda. Ketika untuk pertama kalinya melakukan
sesungguhnya hal itu telah menggunakan salah satu
cara sterilisasi, yaitu pembakaran. Namun, kebanyakan
peralatan dan media yang umum dipakai di dalam
pekerjaan mikrobiologi akan menjadi rusak bila
dibakar. Cara-cara sterilisasi dan desinfeksi yaitu,
pembersihan, sinar matahari, sinar ultraviolet, sinar-x,
dan sinar-gamma, pendinginan, dan pemanasan.
Macam-macam cara sterilisasi dengan pemanasan
yaitu, pemanasan dalam nyala api, pemanasan
dengan udara panas (dry heat oven), merendam
dalam air mendidih (menggodok), pemansan dengan
uap air yang mengalir, dengan uap air yang
ditekan, dan cara sterilisasi benda-benda yang tidak
tahan suhu tinggi, misalnya pasteurisasi, tyndalisasi,
dengan pengeringan, dengan penyaringan (filtrasi),
dan dengan menggunakan zat kimia [3].
2. Metode Praktikum
Dalam praktikum ini di laksanakan pada hari Senin, 12
Maret 2018. Alat dan bahan yang digunakan dalam
praktikum kalini ini adalah autoklaf, cawan petri,
membrane filter, lampu sritus, oven, tabung reaksi,
pipet volumetrik, kapas, kertas, dan air.
Teknik sterilisasi secara mikrobioligis menggunakan
metode panas kering (dry hot air), metode panas basah
(moist wet heat) dan filtrasi membran. Alat-alat yang
disertilisasi merupakan alat-alat yang terbuat dari gelas
seperti cawan petri, pipet ukur, Erlenmeyer dan tabung
reaksi. Sebelum disterilisasi alat-alat tersebut
dibungkus dengan kertas dan untuk pipet volumetric
dan tabung reaksi terlebih dahulu disumbat dengan
kapas pada bagian mulut-mulut tabung, barulah
dibungkus menggunakan kertas selanjutnya, alat-alat
tersebut disterilisasi.
Metode Panas Basah (moist wet heat). menggunakan
autoklaf. Jika air kurang dari batas maka ditambahkan
air sampai tanda batas menggunakan air hasil destilat.
Masukan dan susun rapi alat yang akan disterilisasi.
Selanjutnya tutup autoklaf pastikan selang uap berada
pada tempatnya, tutup autoklaf dengan rapat lalu
kencangkan klep secara bersamaan sisi bersebrangan
untuk pengaman agar tidak ada uap air yang keluar dari
bibir autoklaf. Dicek juga posisi klap suhu agar terbuka
untuk mengetahui apakah air nya sudah mendidih
biasanya ditandai dengan keluarnya uap. Nyalakan
autoklaf, diatur timer dengan waktu minimal 15 menit
pada suhu 121℃, tunggu sampai airnya mendidih
sehingga upaya memenuhi kompartemen autoklaf.
Perhitungkan sampai 15 menit dimulai sejak tekanan
mencapai 2 atm. Jika alaram tanda selesai berbunyi,
maka tunggu tekanan dalam kompartemen turun
hingga sama dengan tekanan udara dilingkungan.
Kemudian klep-klep pengaman dan dikeluarkan isi
autoklaf dengan hati-hati setelah alat-alat dikeluarkan
dari autoklaf.
Metode Panas Kering (dry hot air) yaitu
menggunakan oven. Pertama, hubungkan drying oven
dengan sumber listrik. Kemudian masukan alat yang
ingin disterilisasi dan disusun dengan rapi, tutup pintu
oven dengan rapat. Hidupkan drying oven dengan
menekan tombol ON, selanjutnya atur suhu dan waktu
yang diinginkan pada drying oven. Bila waktu yang
diatur telah selesai, waktu secara otomatis kembali ke
nol. Setelah selesai biarkan alat-alat mendingin di
dalam oven, setelah mendingin keluarkan peralatan
dari oven dan di susun dengan rapi. Kemudian jangan
lupa mencabut kabel oven dari sumber listrik.
Metode Filtrasi. merupakan sterilisasi khusus yang
dilakukan dngan menggunakan membrane filter.
Membrane filter yang digunakan secara umum terbuat
dari selulosa asetat, selulosa nitrat, atau bahan sintetik
lainnya. Dalam penggunaannya larutan atau senyawa
aktif dialirkan melalui serangkaian selang penyaring
yang digerakkan oleh pompa peristaltic sehingga
mengalir melalui membrane filter.
3. Hasil dan Pembahasan
Dalam praktikum mikrobiologi kali ini berjudul
“Teknik Steriliasi” yang mana bertujuan agar
mahasiswa(i) dapat mengenal prinsif dasar sterilisasi
dan bahan di laboratorium mkrobiologi dan
mahasiswa(i) dapat melakukan sterilisasi dengan
metode kering (dry hot air), metode panas basah (moist
wet heat) dan filtrasi membran.
Proses Sterilisasi. Dalam proses sterilisasi ini
dilakukan dengan menggunakan alat–alat seperti
autoklaf, oven dan yang lainnya. Autoklaf menjadikan
alat-alat sterilisasi sedikit beruap sehingga perlu
disterilkan kembali menggunakan oven sehingga alat-
alat menjadi kering. Sterilisasi. Adalah suatu proses
untuk membunuh suatuproses untuk membunuh atau
memusnahkan seua mikroorganisme atau jasad renik
yang ada sehingga jika ditumbuhkan di dalam suatu
medium tidak ada lagi mikroorganisme atau jasad renik
yang dapat berkembang biak [4].
Teknik sterilisasi dengan metode panas (heat
sterilization), dapat dilakukan dengan dua cara yaitu
metode panas kering (dry hot air), yang mana metode
ini dilakukan dengan menggunakan peralatan
Oven. Oven atau drying oven merupakan alat yang
digunakan untuk sterilisasi atau pembersihan dengan
menggunakan udara kering. Alat sterilisasi ini dipakai
untuk mensterilkan alat-alat gelas seperti Erlenmeyer,
Petridish (cawan petri), tabung reaksi dan gelas
lainnya. Bahan-bahan seperti kapas, kain dan kertas
juga dapat disterilkan dalam oven tetapi dalam
temperatur tertentu, pada umumnya temperatur yang
digunakan pada sterilisasi cara kering adalah sekitar
140-1700C selama paling sedikit 2 jam. Perlu
diperhatikan bahwa lamanya sterilisasi tergantung pada
jumlah alat disterilkan dan ketahanan alat terhadap
panas.
Cara Penggunaan:
(a). Hubungkan drying oven dengan sumber
listrik
(b). Masukkan peralatan laboratorium yang
ingin disterilisasi kemudian atur dengan rapi
dan tutup pintu oven dengan rapat.
(c). Hidupkan Drying Oven dengan menekan
tombol ON, kemudian lampu di drying oven
akan berkedip.
(d). Atur suhu dan waktu yang diinginkan pada
drying oven. Jika peralatan terbuat dari
plastic, dan bahan yang mudah berubah
volume seperti pipet ukur dan labu ukur
sebaiknya suhu tidak melebihi 100°C.
- Bila suhu 1700C, atur waktu 1 jam
- Bila suhu 1600C, atur waktu 2 jam
- Bila suhu 1500C, atur waktu 2,5 jam
 - Bila suhu 1400C, atur waktu 3 jam
(e). Bila waktu yang diatur telah selesai,
pengatur waktu secara otomatis kemali ke
nol.
(f). Setelah selesai biarkan terlebih dahulu
peralatan laboratorium mendingin didalam
oven, setelah mendingin keluarkan
peralatan laboratorium dan tata kembali
peralatan laboratorium dengan rapi.
(g). Jangan lupa mencabut kabel oven dari
sumber listrik agar tidak terjadi hal yang
tidak diinginkan.
Berdasarkan hasil pengamatan saat melaksanakan
praktikum di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas
Matematika Dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas
Lambung Mangkurat Banjarbaru oven yang digunakan
dalam mensterilkan suatu alat-alat terbagi manjadi
yaitu oven yang bersuhu sedang dan oven yang
bersugu tinggi.
tersebut. Endospora dapat dibunuh pada suhu 100 °C,
yang merupakan titik didih air pada tekanan atmosfer
normal. Pada suhu 121 °C, endospora dapat dibunuh
dalam waktu 4-5 menit, dimana sel vegetatif bakteri
dapat dibunuh hanya dalam waktu 6-30 detik pada
suhu 65 °C. Perhitungan waktu sterilisasi autoklaf
dimulai ketika suhu di dalam autoklaf mencapai
121 °C. Jika objek yang disterilisasi cukup tebal atau
banyak, transfer panas pada bagian dalam autoklaf
akan melambat, sehingga terjadi perpanjangan waktu
pemanasan total untuk memastikan bahwa semua objek
bersuhu 121 °C untuk waktu 10-15 menit. Medium
yang akan disterilkan ditempatkan di dalam autoclave
selama 15-20 menit, hal ini bergantung pada banyak
sedikitnya barang yang perlu disterilkan. Medium yang
akan disterilkan ditempatkan dalam beberapa botol
yang agak kecil daripada dikumpul dalam satu botol
yang besar. Setelah pintu autoclave ditutup rapat,
barulah kran pada pipa uap dibuka dan temperatur akan
terus-menerus naik sampai 121oC.

Gambar 1.1 Oven suhu Gambar 1.2 Oven suhu

sedang tinggi

Teknik sterilisasi dengan metode panas basah (moist

wet heat) yang mana metode ini dilakukan dengan
menggunakan peralatan
Autoklaf. Autoklaf adalah alat pemanas
tertutup yang digunakan untuk mensterilisasi suatu
benda menggunakan uap bersuhu dan bertekanan tinggi
(1210C, 15 lbs). Jadi tekanan yang bekerja ke seluruh Gambar 1.3 Teknik Sterilisasi menggunakan
permukaan benda adalah 15 pon tiap inchi2 (15 Psi = autoklaf
15 pounds per square inch). selama kurang lebih 15
menit Penurunan tekanan pada autoklaf tidak
dimaksudkan untuk membunuh mikroorganisme,
melainkan meningkatkan suhu dalam autoklaf. Suhu
yang tinggi inilah yang akan membunuh
microorganisme. Autoklaf terutama ditujukan untuk
membunuh endospora, yaitu selresisten yang
diproduksi oleh bakteri, sel ini tahan terhadap
pemanasan, kekeringan, dan antibiotik. Pada spesies
yang sama, endospora dapat bertahan pada kondisi
lingkungan yang dapat membunuh sel vegetatif bakteri
Tabel 1. Alat yang digunakan pada saat praktikum

Alat Fungsi
Autoklaf Untuk tempat
sterilisasi dengan
uap air
Cawan Petri Untuk
tempatprmbiakan Gambar 1.8 Oven Suhu Gambar 1.9 Oven Suhu
Tinggi
murni Sedang
Erlenmayer Untuk tempat steril

Membrane Filter Untuk sterilisasi dan

penyaringan
Oven Untuk tempat
sterilisasi dengan uap
kering
Pembakar spiritus Untuk pemanasan
sterilisasi
Untuk membuat Gambar 1.10 Spiritus Gambar 1.11 Pipet
Tabung Reaksi Volumetrik
kultur mikroba
4. Kesimpulan

Kesimpulan dari praktikum mikrobiologi ini adalah

teknik sterilisasi pada percobaan mikrobiologi dapat
dilakukan dengan tiga metode yang telah diajarkan
yaitu, metode panas basah (moist wet heat)
menggunakan autoklaf, metode panas kering (dry hot
air) yaitu menggunakan oven, dan metode
filtrasi.merupakan sterilisasi khusus yang dilakukan
dngan menggunakan membrane filter. Alat – alat yang
disterilkan akan mengalami perubahan visual karena
alat akan terlihat lebih bersih dan bening dan juga
terhindar dari bakteri-bakteri yang ada karena telah
disterilkan menggunakan metode-metode yang ada.

Gambar 1.5 Cawan Petri Daftar Acuan

Gambar 1.4 Autoklaf
[1] Surdianto. 1998. Mikrobiologi Dasar.
Gramedia, Jakarta.
[2] Suharto. 1995. Bioteknologi Dalam
Dunia Industri. Andi Offset, Yogyakarta.
[3] Hadada, A. W. Instruction to Authors, Elsevier
Publishing,
https://dokumen.tips/documents/sterilisasi-
lengkappdf.html.
[4] Pelzar, M. J & E. C. S. Chan. 2007. Dasar-
Gambar 1.6 Erlenmeyer Gambar 1.7 Membran Dasar Mikrobiologi. Universitas Indonesia,
Filter Jakarta.