PEMISAHAN KOMPONEN RIMPANG TEMU KUNCI SECARA KROMATOGRAFI KOLOM
Eni Hayani1
T anaman temu kunci (Kaempheria pandurata Ridl)
termasuk famili Zingiberaceae, banyak tumbuh di hutan
jati, tinggi tanaman dapat mencapai 80 cm, warna kulit
rimpang coklat dan warna daging rimpang putih. Selain
digunakan sebagai bumbu masak, rimpang temu kunci juga
memiliki khasiat sebagai obat.
Rimpang temu kunci memiliki khasiat memperkuat
lambung. Apabila dikunyah dengan pinang dapat digunakan
sebagai obat batuk kering dan peringitis, obat sakit perut
serta obat suka kencing pada anak-anak. Pada wanita,
rimpang temu kunci dapat digunakan sebagai obat pem-
bengkakan kandungan serta obat infeksi alat reproduksi
(Heyne 1987). Menurut Nugraheni (2001), temu kunci dapat
digunakan untuk obat diare, disentri, batu, pelangsing, dan
obat keputihan. Pengujian secara in vitro menunjukkan temu
kunci dapat meningkatkan jumlah limfosit, antibodi spesifik,
dan dapat membunuh sel kanker (Hartono 1999). Berbagai
hasil pengkajian menunjukkan bahwa tanaman daerah tropis
mempunyai potensi yang cukup besar untuk dikembangkan
sebagai obat (Sukara 2002).
Rimpang temu kunci mengandung minyak atsiri yaitu
metilsinamat, kamper, sineol, dan terpena. Di samping minyak
atsiri, temu kunci mengandung saponin dan flavonoid
(Sjamsudin dan Hutapea dalam Chairul et al. 1996). Senyawa-
senyawa yang mempunyai prospek cukup baik biasanya
berasal dari golongan flavonoid, kurkumin, limonoid, vitamin
C, vitamin E (tokoferol), dan katekin yang bisa digunakan
sebagai obat antikanker. Senyawa-senyawa tersebut biasa-
nya bermanfaat pula sebagai antioksidan (Aldi et al. 1996).
Pemisahan komponen secara kromatografi kolom di-
lakukan dalam suatu kolom yang diisi dengan fase stasioner
dan cairan (pereaksi) sebagai fase mobil untuk mengetahui
banyaknya komponen contoh yang keluar melalui kolom
(Adnan 1997). Pengisian kolom dilakukan dengan memasuk-
kan adsorben dalam bentuk larutan (slurry), dan partikelnya
dibiarkan mengendap. Pemisahan komponen rimpang temu
kunci secara kromatografi kolom bertujuan untuk mengetahui
1
Teknisi Litkayasa Penyelia pada Balai Penelitian Tanaman Obat dan
Aromatik, Jalan Tentara Pelajar No 3, Bogor 16111, Telp. (0251)
321879, Faks. (0251) 327010
Buletin Teknik Pertanian Vol. 12 No. 1, 2007
komponen-komponen senyawa kimia yang dapat terpisah
dan kandungan senyawa aktifnya.
BAHAN DAN METODE
Percobaan dilaksanakan di laboratorium pengujian Balai Pe-
nelitian Tanaman Rempah dan Obat di Bogor pada tahun
2004. Bahan yang digunakan adalah simplisia (bahan kering)
temu kunci serta bahan kimia yaitu toluen, alkohol, asam
khlorida, metanol, etil asetat, heksan, butanol, dikhlorometan,
khloroform, asam format, vanilin, asam sulfat, asam asetat,
silica gel GF 254, dan silica gel for coluom 70-230 mesh.
Peralatan laboratorium yang digunakan adalah neraca, oven,
muffel furnace, hot plate, rotary evaporator, chamber,
tabung coloum, dan tabung reaksi ukuran 5 ml.
Pengujian mutu bahan seperti kadar air dilakukan
dengan metode aufhauser. Contoh yang telah dihaluskan 10
g dituangkan ke dalam erlenmeyer, kemudian ditambahkan
300 ml toluen dan didestilasi. Air yang keluar dari bahan
dapat dibaca pada skala aufhauser. Kadar minyak atsiri
diukur dengan metode penyulingan uap dan air. Contoh
yang telah dihaluskan 2 kg dimasukkan ke dalam tangki
penyulingan yang telah diisi air, lalu dipanaskan. Uap akan
mengalir melalui kondensor dan tetesan minyak ditampung
dan diukur pada skala. Kadar sari yang terlarut dalam air dan
alkohol, kadar abu dan abu tak larut dalam asam diukur
dengan metode grafimetri. Untuk pemisahan komponen
secara kromatografi lapis tipis (KLT), digunakan ekstrak
kental heksan, etil asetat, dan butanol.
Untuk pembuatan ekstrak, simplisia temu kunci digiling
kemudian dimasukkan ke dalam wadah piala dan ditambahkan
metanol dengan perbandingan 1:5, lalu dikocok dengan
pengaduk listrik selama 2 jam. Campuran didiamkan 24 jam,
kemudian disaring. Filtratnya dievaporasi (diuapkan dengan
rotavapor) hingga diperoleh ekstrak kental metanol. Ekstrak
kental metanol diekstrak kembali berturut-turut dengan
menggunakan pereaksi heksan, etil asetat dan butanol se-
hingga diperoleh tiga macam ekstrak yang akan digunakan
dalam pemisahan secara KLT. Pereaksi (eluen) yang diguna-
kan untuk pemisahan komponen pada ekstrak rimpang temu
kunci adalah (1) dikhlorometan : khloroform : etil asetat = 1
: 1 : 1, (2) toluen : etil asetat : etanol + asam format 3 tetes =
35
0,5 : 4 : 1, (3) dikhlorometan : etil asetat : khloroform + asam
format 3 tetes = 1 : 4 : 1, (4) khloroform : etanol : asam asetat
= 4 : 0,5 : 1,5, dan (5) heksan : etil asetat = 8,5 : 1,5. Bila telah
diperoleh ekstrak dan pereaksi yang memberikan jumlah
komponen terbanyak dan pemisahan yang jelas, maka ekstrak
dan pereaksi tersebut digunakan untuk kromatografi kolom.
Untuk pengisian kolom, sebagai bahan pengisi bagian
bawah kolom dimasukkan sedikit kapas, wol kaca dan pasir
laut kemudian dimasukkan bubur silica gel 70-230 mesh
sambil diaduk agar tidak terdapat rongga udara di tengah-
tengah kolom. Timbunan bubur silica gel dalam kolom men-
capai tiga perempat tinggi kolom. Gambar 1 memperlihatkan
kromatografi kolom untuk pemisahan komponen rimpang
temu kunci.
Untuk pemisahan komponen dengan menggunakan
kromatografi kolom, mula-mula ke dalam kromatografi kolom
dialirkan ekstrak rimpang temu kunci, kemudian kran
kromatografi kolom dibuka. Ekstrak akan meresap ke silica
gel dalam kolom sampai batas atas silica gel. Setelah itu
dimasukkan pereaksi terus-menerus sambil kran kolom
dibuka. Fraksi yang terpisah ditampung dalam tabung reaksi
sebanyak 3 ml sampai seluruh ekstrak terpisahkan. Setiap
fraksi dianalisis dengan KLT. Fraksi yang memiliki spot yang
sama disatukan dan dianalisis kembali dengan KLT.
HASIL DAN PEMBAHASAN
Dari hasil analisis mutu simplisia temu kunci diperoleh kadar
sari yang terlarut dalam air 4,35%, lebih besar dibanding kadar
sari yang terlarut dalam alkohol (2,24%). Hal ini menunjukkan
simplisia temu kunci mudah larut dalam air. Kadar abu sangat
kecil yaitu 0,41%, yang menunjukkan bahwa simplisia temu
kunci sangat sedikit tercemar bahan asing seperti pasir
(Tabel 1).
Hasil pemisahan komponen dari ekstrak rimpang temu
kunci yaitu dari ekstrak heksan, etil asetat, dan butanol
secara KLT dengan menggunakan lima macam perbandingan
pereaksi disajikan pada Tabel 2. Hasil pengamatan dengan
menggunakan lima macam eluen pada ekstrak rimpang temu
kunci menunjukkan ekstrak etil asetat dengan eluen heksan
: etil asetat 8,5 : 1,5 menghasilkan komponen paling banyak
yaitu 10 buah. Dengan demikian ekstrak etil asetat digunakan
untuk pemisahan komponen secara kromatografi kolom
dengan pereaksi campuran heksan dan etil asetat dengan
perbandingan 8,5 dan 1,5.
Pemisahan ekstrak rimpang temu kunci yang dimasuk-
kan ke dalam kromatografi kolom menggunakan bahan dari
ekstrak etil asetat 12,50 g. Dari proses pemisahan diperoleh

Tabel 1. Hasil analisis mutu simplisia temu kunci, laboratorium

Balittro, Bogor, 2004
Parameter pengujian Kadar (%)
Cadangan zat pelarut Kadar air 11,11
Kadar minyak atsiri 1,00
Kadar sari larut dalam air 4,35
Kadar sari larut dalam alkohol 2,24
Kadar abu 5,08
Kadar abu tak larut asam 0,41
Pelarut (fase mobil)

Tabel 2. Perbandingan lima macam eluen pemisahan komponen

Isian kolom ekstrak rimpang temu kunci secara kromatografi lapis tipis,
(fase stasioner) laboratorium Balittro, Bogor, 2004
Jumlah komponen dari ekstrak
Eluen
Heksan Etil asetat Butanol
Dikhlorometan : khloroform :
etil asetat = 1 : 1 : 1 1 1 1
Pasir laut Toluen : etil asetat :
Wol kaca etanol + asam format 3 tetes
Kapas
= 0,5 : 4 : 1 3 3 2
Dikhlorometan : etil asetat :
khloroform + asam format
Penampang
3 tetes = 1 : 4 : 1 3 3 5
Eluat
Khloroform : etanol : asam
asetat = 4 : 0,5 : 1,5 5 1 1
Gambar 1. Kromatografi kolom untuk pemisahan komponen rim-
pang temu kunci, laboratorium Balittro, Bogor, 2004 Heksan : etil asetat = 8,5 : 1,5 8 10 -

36 Buletin Teknik Pertanian Vol. 12 No. 1, 2007

430 fraksi yang masing-masing ditampung dalam tabung KESIMPULAN DAN SARAN
reaksi 5 ml. Pembacaan komponen setiap fraksi dilakukan
secara KLT. Setiap fraksi yang mempunyai jumlah komponen Pemisahan komponen ekstrak etil asetat rimpang temu kunci
dan tinggi spot yang sama digabung sehingga diperoleh 10 secara kromatografi kolom menggunakan larutan pereaksi
fraksi hasil pemisahan secara kromatografi kolom (Tabel 3). heksan dan etil asetat dengan perbandingan 8,5 : 1,5 mem-
Dari 10 fraksi hasil pemisahan dengan kromatografi kolom, peroleh 10 fraksi yang mempunyai komponen terbanyak dan
fraksi nomor 3 memberikan komponen terbanyak dengan tinggi spot yang sama. Komponen terbanyak dan pemisahan
pemisahan yang jelas (Gambar 2). komponen yang jelas diperoleh pada fraksi nomor 3. Untuk
mengetahui komponen aktif dari setiap fraksi percobaan dapat
dilanjutkan dengan menggunakan alat gas chromatography
Tabel 3. Jumlah komponen dari setiap fraksi hasil pemisahan secara
mass spectrophotometer.
kromatografi kolom, laboratorium Balittro, Bogor, 2004
Banyaknya
Fraksi Warna larutan
komponen
DAFTAR PUSTAKA
Fraksi 1 2 Kuning kecoklatan
Fraksi 2 4 Kuning kemerahan
Fraksi 3 5 Kuning tua
Adnan, M. 1997. Teknik Kromatografi untuk Analisis Bahan
Makanan. Andi, Yogyakarta. hlm. 27-58.
Fraksi 4 4 Kuning coklat
Fraksi 5 3 Kuning coklat Aldi, Y., N.C. Sugiarto, S. Andreanus A., dan A.S. Ranti. 1996. Uji efek
Fraksi 6 4 Kuning kecoklatan antihis tonninergik dari tanaman Andrographis paniculata
Fraksi 7 4 Kuning coklat Ness. Warta Tanaman Obat Indonesia 3(1): 17-19.
Fraksi 8 4 Kuning tua
Fraksi 9 3 Kuning
Chairul, M. Harapini, dan Shinta. 1996. Analisis komponen kimia
Fraksi 10 3 Kuning muda
dari temu putri dan temu kunci. Prosiding Simposium
Penelitian Bahan Obat Alami. VIII. Perhimpunan Penelitian
Bahan Obat Alami, Bogor. hlm. 628-634.
Hartono, A. 1999. Terapi nutrisi dan herbal untuk kanker. Intisari
435 (36): 44-53.
Heyne, K.1987. Tumbuhan Berguna Indonesia. Vol I. Badan
Pengembangan Kehutanan, Departemen Kehutanan, Yayasan
Sarana Wanajaya, Jakarta. hlm. 593-594.
Nugraheni, W.P. 2001. Kunci Pepet. Sidowayah 34(9): 15-18.
Sukara, E. 2002. Sumber daya alam hayati dan pencarian bahan baku
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 obat (Bioprospekting). Prosiding Simposium Nasional II
Gambar 2. Jumlah komponen setiap fraksi hasil pemisahan kromato- Tumbuhan Obat dan Aromatik. Pusat Penelitian dan Pe-
grafi kolom, laboratorium Balittro, Bogor, 2004 ngembangan Biologi LIPI, Bogor. hlm. 31-37.

Buletin Teknik Pertanian Vol. 12 No. 1, 2007 37