Pirogen

Kata pirogen, yang dapat ditelusuri ke piro Yunani, yang berarti terbakar atau terbakar dan gennaó,
yang berarti membuat atau membuat, sekarang digunakan sebagai deskripsi yang tepat untuk zat
yang menghasilkan suhu tubuh yang tinggi. Pirogen biasanya merupakan produk bakteri dan sisa
atau produk peluruhan dinding sel bakteri. Bahkan dalam dosis minimum, zat-zat ini menginduksi
peningkatan suhu tubuh ketika disuntikkan ke manusia dan hewan. Pirogen biasanya merupakan
substansi berbobot molekul tinggi dari sifat polimer, seperti lipopolisakarida. Pirogen bisa berupa
mikroba atau non-mikroba.

Endotoksin

Endotoksin adalah kompleks berbobot molekul tinggi yang terkait dengan membran luar bakteri
gram negatif (GNB). Mereka adalah penyebab paling umum dari peningkatan suhu tubuh, yang
disebabkan oleh produk obat yang terkontaminasi. Aktivitas pirogeniknya lebih tinggi dari pada zat
pirogenik lainnya. Dapat dikatakan bahwa tidak adanya bakteri endotoksin dalam suatu obat
menyiratkan tidak adanya komponen pirogenik pada obat yang diperiksa secara umum. Endotoksin
mirip dengan lipopolysacharids, mereka stabil panas dan dapat bertahan hidup proses sterilisasi.

Endotoksin GNB mengkatalisis aktivasi proenzim di LA lisat. Tingkat aktivasi awal ditentukan oleh
konsentrasi endotoksin saat ini. Enzim yang diaktifkan [koagulase] menghidrolisis ikatan spesifik
dalam protein pembekuan [koagulogen] juga ada dalam LAL. Curah hujan kekeruhan dan bentuk gel
dapat terjadi setelah pencampuran bakteri endotoksin dengan LA lisat, namun, hanya pembentukan
gel yang dianggap sebagai titik akhir (Young et al.1993). Test kit komersial digunakan untuk analisis:
Pyrogent Plus 64 test kit dan Pyrogent plus 200 test kit yang diproduksi oleh perusahaan
BioWhittaker, AS dengan sensitivitas LA lysate 0,125 EU per ml. Kit ini berisi 10 ng kontrol standar
endotoksin (CSE) E. coli 055: B5 dan LA lisat dengan sensitivitas berlabel. Kedua produk
didistribusikan dalam bentuk terliofilisasi. Baik CSE dan LAL direkonstitusi dengan LAL Reagent Water
(mengandung endotoksin <0,005 IU / ml) atau air steril untuk injeksi segera sebelum digunakan
dalam pengujian.

Endotoksin yang terkandung dalam GNB adalah penyebab paling umum untuk aktivitas toksik, yang
disebabkan oleh kontaminasi produk obat oleh zat pirogenik. Aktivitas pirogenik dari endotoksin
lebih tinggi daripada zat pirogenik lainnya. Deteksi tidak adanya endotoksin penting dalam obat
parenteral dan untuk

perlindungan pengguna juga. Dalam beberapa tahun terakhir, penggunaan tes LAL dalam
pengawasan proses produksi obat meningkat, di mana tes LAL digunakan dalam deteksi dan
pengurangan kontaminasi yang disebabkan oleh endotoksin. Tes LAL juga digunakan dalam
pengawasan produk akhir yang mendukung uji pirogen kelinci. Hasil uji pada zat pirogenik yang
dilakukan pada kelinci tergantung pada jumlah pirogen dalam dosis yang digunakan. Hasil tes pada
endotoksin bakteri sebanding dengan konsentrasi endotoksin dalam zat yang diperiksa. Tes LAL
dapat dilakukan pada dosis yang lebih kecil dari bahan yang diperiksa daripada uji pirogen kelinci
dan sensitif terhadap kadar endotoksin daripada yang diperlukan untuk menginduksi reaksi
pirogenik pada kelinci. Penggantian uji pirogen kelinci dengan uji LAL adalah metode alternatif dan
sebagai seperti itu, memerlukan validasi. Penggantian ini dimungkinkan ketika kondisi berikut
dipenuhi:

1. Batas endotoksin ditentukan untuk bahan yang dipertimbangkan.

2. Tingkat konsentrasi endotoksin maksimal yang ditetapkan dalam bahan tersebut dapat diterima.

3. Prosedur uji standar dan validasinya ditentukan.