HG dilakukan dari 0,75 M Tris (hidroksimetil) - aminometana hidroklorida

buffer(TRIZMA hidroklorida, Sigma-Aldrich; Tris) disesuaikan dengan pH 6 oleh

KOH. Reduktorsolusi adalah 1% NaBH 4 (Fluka) dalam 0,1% KOH dan 0,1%

Antifoam B (Sigma-Aldrich).Antifoam B dan Triton X-100 (Sigma-Aldrich, Triton)

juga ditambahkan ke plasma dansampel darah. Untuk preduksi spesies arsenik

pentavalen, L-sistein hidrokloridamonohydrate (untuk tingkat biokimia, Merck; L -

cys) digunakan di seluruh. 16–2.

Sodium heparin menstabilkan seluruh darah manusia (dikumpulkan)

dariBioreclamationIVT (Westbury, NY) dan dikirim di atas es. Sampel disimpan

pada suhu 8 ° C dandianalisis dalam 1 minggu dari pengiriman. Plasma darah

diperoleh dengan sentrifugasi inidarah selama 10 menit pada 800 rpm dan 4 °

C.Sampel plasma manusia dengan kadar arsenik tinggi dikumpulkan awalnya untuk

klinismempelajari "Studi Farmakologis dari Trioksida Arsenik pada Pasien Kanker"

yang dipimpin oleh Dr. CristinaGhiuzeli, Rumah Sakit Universitas North Shore, dan

Dr. Miroslav Stýblo, University of NorthCarolina di Chapel Hill. Tujuan dari

penelitian ini adalah untuk mengkarakterisasi metabolisme arseniktrioksida (ATO)

dan kinetika ATO dan metabolitnya dalam plasma leukemia promyelocyticpasien

yang diobati dengan ATO. Secara umum, sampel dikumpulkan sebelum dan mulai 1

jamsetelah infus ATO dan kemudian setiap hari selama beberapa hari. Sampel plasma

aktual yang digunakan dalamStudi yang dipresentasikan dipilih dari set ini untuk

mengandung jumlah semua arsenik yang sesuaispesies menurut analisis sebelumnya.

Mereka dikumpulkan pada hari ke 9 dari terapi ATO dandisimpan pada suhu −80 ° C

selama kurang lebih 6 bulan.Sampel darah lengkap Murine dengan kadar arsenik
tinggi berasal dari studi pendahuluan itumembandingkan metabolisme iAs III pada

tikus tipe liar dan tikus dengan genotipe nol untuk GST-P. GST-M, dan GST-T,

ketiga isoform dari glutathione S-transferase. Strain mouse ini adalahdiciptakan oleh

Dr. Beverly Koller di UNC Chapel Hill. 23 Tikus-tikus itu meminum air deionisasi

dandiberi makan diet laboratorium biasa (berbasis biji-bijian) di mana tingkat IAS

ditemukan berkisardari 89 hingga 139 μg kg −1 . 24 Tikus jantan digunakan dan tidak

berpuasa sebelum pengumpulan darah.Darah dikumpulkan dalam kapiler heparin dari

perdarahan submandibular. Untuk memberikan cukupvolume sampel, darah

dikumpulkan dari 4 tikus ke dalam tabung yang mengandung natrium fluorida

dandisodium EDTA (BD 365992) dan disimpan pada suhu 4 ° C sampai analisis.

Sampel dianalisisdalam waktu 2 hari dari pengumpulan. Semua prosedur yang

melibatkan tikus telah disetujui olehKomite Perawatan dan Penggunaan Hewan

Institusional North Carolina (UNC).Untuk analisis langsung, 160 μL whole blood

atau plasma dicampur dengan 40 μL 10%Antifoam B dan 80 μL larutan Triton 10%,

penambahan standar jika berlaku, dan diencerkanoleh DIW ke total volume 720 μL.

Setidaknya 1 jam sebelum analisis, 80 μL 20% L -cyslarutan ditambahkan ke

campuran sampel. Standar untuk kalibrasi disiapkan olehprosedur yang sama dengan

penambahan Antifoam B dan Triton dan diprioritaskan oleh L - cys. Sampeldisiapkan

dalam 2 paralel dan 3 ulangan dari setiap sampel diukur. 250 μL daricampuran

sampel menjadi HG-CT, diikuti oleh dua bilasan DIL 300 μL. Penjabaran

dariprosedur untuk pencernaan ringan dalam asam fosfat ultra murni 19 untuk analisis

komparatif adalahdisediakan dalam Informasi Pendukung. Secara umum, dalam

darah, spesies arsenik dianggap terikat dengan protein. Karena itu, spikingsampel
dengan standar sederhana dari spesies ini mungkin tidak cukup untuk metode yang

tepatvalidasi. Untuk memverifikasi keakuratan analisis spesiasi HG-CT-AAS

langsung dalam darahplasma, analisis dua sampel plasma pasien leukemia dilakukan.

Sampeldipilih untuk validasi yang mengandung 12−35 μg L- 1 dari masing-masing

spesies arsenik, mungkin dalambentuk metabolit yang terjadi secara alami.

Konsentrasi ini cukup tinggi untuk memungkinkanAnalisis HG-CT-AAS setelah

pencernaan asam fosfat yang menjaga informasi tentangstatus metilasi spesies

arsenik. 19 Metode LOD setelah pencernaan dengan mempertimbangkan aFaktor

dilusi 14 ditampilkan pada Tabel 1. Semakin tinggi LOD untuk iA disebabkan

olehpeningkatan nilai kosong (sekitar 0,11 μg L- 1 IAs) dari asam fosfat, meskipun

apereaksi kemurnian sangat tinggi digunakan. Perbandingan nilai yang ditemukan

adalah pada Tabel 2. HasilHG-CT-AAS langsung sesuai dengan analisis setelah

pencernaan ringan; itupemulihan spesies arsenik individu antara 89% dan 114%.

Analisis TAkonten untuk keperluan validasi tidak dilakukan, karena sampel darah

dan plasmadapat mengandung sebagian besar AsB , 9,11,12 yang tidak hidrida aktif,

danoleh karena itu, jumlah spesies tidak akan lengkap. Selanjutnya, AsB

dipertimbangkantidak berbahaya tanpa signifikansi dari sudut pandang toksikologi

dibandingkan denganspesies arsenik diselidiki