ABSTRAK

Analisis farmasi terdiri dari prosedur yang diperlukan untuk menentukan "identitas, kekuatan, kualitas
dan kemurnian" senyawa tersebut. Ini juga mencakup analisis bahan baku dan zat antara selama proses
pembuatan obat. Spektrofotometri umumnya lebih disukai terutama oleh industri skala kecil karena
biaya peralatan lebih sedikit dan masalah perawatannya minimal. Metode analisis didasarkan pada
pengukuran penyerapan cahaya monokromatik oleh senyawa tidak berwarna di jalur spektrum
ultraviolet dekat (200-380nm). Metode analisis fotometrik didasarkan pada hukum Bouger-Lamber
-Beer, yang menetapkan bahwa absorbansi suatu larutan berbanding lurus dengan konsentrasi analit.
Prinsip dasar pengoperasian spektrofotometer yang meliputi wilayah UV terdiri dari cahaya interval
panjang gelombang tertentu yang melewati sel dengan pelarut dan jatuh ke sel fotoelektrik yang
mengubah energi radiasi menjadi energi listrik yang diukur dengan galvanometer. Spektroskopi
ultraviolet-terlihat digunakan untuk memperoleh spektrum absorbansi suatu senyawa dalam larutan
atau sebagai padatan.

Spektroskopi Ultra Violet

Spektroskopi ultraviolet (UV) adalah teknik fisik spektroskopi optik yang menggunakan cahaya dalam
rentang sinar tampak, ultraviolet, dan inframerah dekat. Hukum Beer Lambert menyatakan bahwa
absorbansi larutan berbanding lurus dengan konsentrasi spesies penyerap dalam larutan dan panjang
jalur. Dengan demikian, untuk panjang jalur yang tetap, spektroskopi UV / VIS dapat digunakan untuk
menentukan konsentrasi penyerap dalam suatu larutan. Perlu untuk mengetahui seberapa cepat
perubahan absorbansi dengan konsentrasi.

Kimia Analisis

Kimia analitik adalah ilmu yang mencari cara yang lebih baik untuk mengukur komposisi kimia bahan
alami dan buatan. Komposisi kimia adalah seluruh gambar (komposisi) bahan pada skala kimia dan
mencakup fitur geometris seperti morfologi molekuler dan distribusi spesies dalam sampel serta fitur
dimensi tunggal seperti komposisi persen dan identitas spesies [1-3]. Agar efektif dan efisien,
menganalisis sampel memerlukan keahlian dalam:

1. Kimia yang dapat terjadi dalam sampel.

2. Analisis dan metode penanganan sampel untuk berbagai masalah (alat-alat-perdagangan).

3. Ketepatan dan ketepatan metode.

4. Analisis data dan pencatatan yang tepat.

Tahapan utama dari proses analitik dijelaskan sebagai berikut (Gambar 1) Analisis farmasi terdiri dari
prosedur yang diperlukan untuk menentukan "identitas, kekuatan, kualitas dan kemurnian" senyawa
tersebut. Ini juga mencakup analisis bahan baku dan zat antara selama proses pembuatan obat.

Analisis kualitatif

 Analisis anorganik kualitatif berupaya menetapkan keberadaan unsur atau senyawa anorganik
tertentu dalam sampel.

Organic Analisis organik kualitatif berupaya menetapkan keberadaan gugus fungsi atau senyawa organik
yang diberikan dalam sampel.

Analisis kuantitatif

 Analisis kuantitatif berupaya menentukan jumlah elemen (atau) senyawa yang diberikan dalam
sampel.

Metode mendeteksi analit

1. Fisik

 Massa

 Warna

 Indeks Bias

 Konduktivitas Termal

2. Menggunakan Radiasi Elektromagnetik (Spektroskopi)

 Penyerapan

 Emisi

 Hamburan

3. Menggunakan Muatan Listrik

 Elektrokimia

 Spektrometri Massa

Spektrofotometri Penyerapan Ultraviolet

Spektrofotometri umumnya lebih disukai terutama oleh industri skala kecil karena biaya peralatan lebih
sedikit dan masalah perawatannya minimal. Metode analisis didasarkan pada pengukuran penyerapan
cahaya monokromatik oleh senyawa tidak berwarna di jalur spektrum ultraviolet dekat (200-380nm).
Metode analisis fotometrik didasarkan pada hukum Bouger-Lambert-Beer, yang menetapkan bahwa
absorbansi suatu larutan berbanding lurus dengan konsentrasi analit. Prinsip dasar pengoperasian
spektrofotometer yang meliputi wilayah UV terdiri dari cahaya interval panjang gelombang tertentu
yang melewati sel dengan pelarut dan jatuh ke sel fotoelektrik yang mengubah energi radiasi menjadi
energi listrik yang diukur dengan galvanometer. Spektroskopi ultraviolet-terlihat digunakan untuk
memperoleh spektrum absorbansi suatu senyawa dalam larutan atau sebagai padatan. Apa yang
sebenarnya diamati secara spektroskopi adalah absorbansi energi cahaya atau radiasi elektromagnetik,
yang menggairahkan elektron dari keadaan dasar ke keadaan tereksitasi singlet pertama dari senyawa
atau bahan. Wilayah energi UV-terlihat untuk spektrum elektromagnetik mencakup 1,5 - 6,2 eV yang
berhubungan dengan kisaran panjang gelombang 800 - 200 nm [4,5].

Hukum Beer-Lambert (Persamaan1) adalah prinsip di balik spektroskopi absorbansi. Untuk panjang
gelombang tunggal, A adalah absorbansi (satuan kurang, biasanya dilihat sebagai satuan arb. Atau
satuan acak), adalah absorptivitas molar dari senyawa atau molekul dalam larutan (M-1cm-1), b adalah
panjang jalur kuvet atau pemegang sampel (biasanya 1 cm), dan c adalah konsentrasi larutan (M)

Semua instrumen ini memiliki sumber cahaya (biasanya lampu deuterium atau tungsten), pemegang
sampel dan detektor, tetapi beberapa memiliki filter untuk memilih satu panjang gelombang pada suatu
waktu. Instrumen balok tunggal (Gambar 2) memiliki filter atau monokromator antara sumber dan
sampel untuk menganalisis satu panjang gelombang pada suatu waktu. Instrumen balok ganda (Gambar
3) memiliki sumber tunggal dan monokromator dan kemudian ada pembagi dan serangkaian cermin
untuk mendapatkan balok ke sampel referensi dan sampel yang akan dianalisis, ini memungkinkan
monokromator yang lebih akurat antara sampel dan sumbernya, sebaliknya, ia memiliki detektor dioda
array yang memungkinkan instrumen untuk secara bersamaan mendeteksi absorbansi pada semua
panjang gelombang. Instrumen simultan biasanya jauh lebih cepat dan lebih efisien, tetapi semua jenis
spektrometer ini bekerja dengan baik (Gambar 4)

Spektra UV-Visible
 Data spektroskopi UV-Visible dapat memberikan informasi kualitatif dan kuantitatif dari senyawa atau
molekul tertentu. Terlepas dari apakah informasi kuantitatif atau kualitatif diperlukan, penting untuk
menggunakan sel referensi ke nol instrumen untuk pelarut senyawa masuk. Untuk informasi kuantitatif
pada senyawa, kalibrasi instrumen menggunakan konsentrasi senyawa yang diketahui yang
bersangkutan dalam larutan. dengan pelarut yang sama dengan sampel yang tidak diketahui akan
diperlukan. Jika informasi yang diperlukan hanyalah bukti bahwa suatu senyawa ada dalam sampel yang
dianalisis, kurva kalibrasi tidak akan diperlukan; Namun, jika studi degradasi atau reaksi sedang
dilakukan, dan konsentrasi senyawa dalam larutan diperlukan, maka kurva kalibrasi diperlukan. Untuk
membuat kurva kalibrasi, setidaknya tiga konsentrasi senyawa akan diperlukan, tetapi lima konsentrasi
akan diperlukan. paling ideal untuk kurva yang lebih akurat. Konsentrasi harus dimulai tepat di atas
perkiraan konsentrasi sampel yang tidak diketahui dan harus turun menjadi sekitar urutan besarnya
lebih rendah dari konsentrasi tertinggi. Solusi kalibrasi harus diberi jarak yang relatif sama, dan harus
dibuat seakurat mungkin dengan menggunakan pipet digital dan labu volumetrik alih-alih silinder dan
gelas kimia bertingkat [6,7].

Kalibrasi dan referensi

  referensi Kosong akan diperlukan di awal analisis pelarut yang akan digunakan (air, heksana, dll), dan
jika analisis konsentrasi perlu dilakukan, solusi kalibrasi perlu dibuat secara akurat. Jika solusi tidak
dibuat cukup akurat, konsentrasi sebenarnya dari sampel yang bersangkutan tidak akan ditentukan
secara akurat.

Pilihan pelarut atau wadah

Setiap pelarut memiliki panjang gelombang cutoff absorbansi UV-terlihat. Cutoff pelarut adalah
panjang gelombang di bawah mana pelarut itu sendiri menyerap semua cahaya. Jadi ketika memilih
pelarut menyadari absorbansi terputus dan di mana senyawa yang diteliti dianggap menyerap. Jika
sudah dekat, pilih pelarut yang berbeda. Tabel 1 memberikan contoh cut off solvent [8,9].

Konsentrasi solusi
 Untuk mendapatkan data yang andal, puncak absorbansi senyawa yang diberikan harus setidaknya tiga
kali lebih tinggi intensitasnya daripada kebisingan latar belakang instrumen. Jelas menggunakan
konsentrasi senyawa yang lebih tinggi dalam larutan dapat mengatasi hal ini. Juga, jika sampel sangat
kecil dan pengenceran tidak akan memberikan sinyal yang dapat diterima, ada kuvet yang memiliki
ukuran sampel lebih kecil dari 2,5 mL kuvet standar. Beberapa kuvet dibuat untuk menampung hanya
100 μl, yang memungkinkan sampel kecil dianalisis tanpa harus mengencerkannya ke volume yang lebih
besar, sehingga menurunkan rasio sinyal terhadap noise.

AREA DI BAWAH STUDI KURVA

Prinsip untuk Area di bawah metode kurva adalah "daerah di bawah dua titik pada spektrum campuran
berbanding lurus dengan konsentrasi senyawa yang menarik" .AUC sangat cocok untuk senyawa di mana
tidak ada puncak tajam atau spektrum luas diperoleh, yang ditunjukkan pada gambar 5.AUC metode
melibatkan perhitungan nilai absorbansi terintegrasi sehubungan dengan panjang gelombang antara
dua panjang gelombang yang dipilih ƛ1 dan ƛ2. Item pemrosesan perhitungan kalibrasi area yang terikat
oleh kurva dan sumbu horizontal. Sumbu horizontal dipilih dengan memasukkan rentang panjang
gelombang di mana area harus dihitung. Kisaran panjang gelombang dipilih berdasarkan pengamatan
berulang sehingga untuk mendapatkan linearitas antara area di bawah kurva dan konsentrasi.

PARAMETER ANALITIS

Validasi dapat didefinisikan sebagai proses yang melibatkan konfirmasi atau penetapan oleh studi
laboratorium bahwa metode / sistem / analis memberikan hasil yang akurat dan dapat direproduksi
untuk aplikasi analitik yang dimaksudkan dalam rentang yang terbukti dan ditetapkan.

Validasi Metode

Validasi metode diselesaikan untuk memastikan bahwa metodologi analitis akurat, spesifik, dapat
direproduksi dan kasar pada rentang yang ditentukan sehingga analit akan dianalisis. Validasi metode
memberikan jaminan keandalan selama penggunaan normal, dan kadang-kadang disebut sebagai
"proses memberikan bukti yang terdokumentasi bahwa mereka melakukan apa yang seharusnya
dilakukan" dan parameter ditunjukkan pada Gambar 5.

Presisi

Presisi adalah ukuran tingkat pengulangan metode analitik dalam operasi normal dan biasanya
dinyatakan sebagai persentase standar deviasi relatif untuk jumlah sampel yang signifikan secara
statistik. Menurut ICH, presisi harus dilakukan pada tiga tingkatan berbeda: pengulangan, presisi
menengah, dan reproduktifitas. Repeatability adalah hasil dari metode yang beroperasi selama interval
waktu yang singkat di bawah kondisi yang sama (presisi antar-pengujian). Ini harus ditentukan dari
minimum sembilan penentuan yang mencakup rentang prosedur yang ditentukan (misalnya, tiga level,
tiga pengulangan masing-masing) atau dari minimum enam penentuan pada 100% dari tes atau
konsentrasi target. Presisi menengah adalah hasil dari variasi lab karena peristiwa acak seperti hari yang
berbeda, analis, peralatan, dll.

  Dalam menentukan presisi menengah, desain eksperimental harus digunakan sehingga efek (jika ada)
dari masing-masing variabel dapat dipantau. Reproducibilitas mengacu pada hasil studi kolaboratif
antar laboratorium. Dokumentasi dalam mendukung studio presisi harus mencakup deviasi standar,
deviasi standar relatif, koefisien variasi, dan interval kepercayaan [10].

Ketepatan

Akurasi adalah ukuran ketepatan metode analitik, atau kedekatan kesepakatan antara nilai yang
diterima baik sebagai konvensional, nilai sebenarnya atau nilai referensi yang diterima dan nilai yang
ditemukan. Ini diukur sebagai persentase analit yang diperoleh dengan uji, dengan spiking sampel
dalam studi buta. Untuk pengujian zat obat, pengukuran akurasi diperoleh dengan membandingkan
hasil dengan analisis bahan referensi standar, atau dengan membandingkannya dengan metode kedua
yang dikarakterisasi dengan baik. Untuk pengujian produk obat, akurasi dievaluasi dengan menganalisis
campuran sintetis yang dibubuhi jumlah komponen yang diketahui. Untuk kuantisasi pengotor, akurasi
ditentukan dengan menganalisis sampel (zat obat atau produk obat) yang dibubuhi jumlah pengotor
yang diketahui. (Jika kotoran tidak tersedia, lihat spesifisitas.)

Kekhususan

Spesifisitas adalah kemampuan untuk mengukur secara akurat dan spesifik analit yang diminati dengan
adanya komponen lain yang mungkin diharapkan ada dalam matriks sampel. Ini adalah ukuran tingkat
gangguan dari hal-hal seperti bahan aktif lain, eksipien, pengotor, dan produk degradasi, memastikan
bahwa respons puncak hanya disebabkan oleh satu komponen saja. Bahwa tidak ada coelution.
Spesifisitas diukur dan didokumentasikan dalam pemisahan oleh resolusi, pelat-plat (efisiensi), dan
faktor tailing. Spesifisitas juga dapat dievaluasi dengan detektor array fotodioda modern yang
membandingkan spektra yang dikumpulkan melintasi puncak secara matematis sebagai indikasi
homogenitas puncak. ICH juga menggunakan istilah spesifisitas, dan membaginya menjadi dua kategori
terpisah: tes identifikasi, dan pengujian pengotor.

Batas Deteksi

Batas deteksi (LOD) didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat
dideteksi, bukan dikuantifikasi. Ini adalah tes batas yang menentukan apakah analit di atas atau di
bawah nilai tertentu. Ini dinyatakan sebagai konsentrasi pada rasio sinyal-ke-noise yang ditentukan,
biasanya dua atau tiga-ke-satu. ICH telah mengakui konvensi rasio signal-to-noise, tetapi juga
mencantumkan dua opsi lain untuk menentukan LOD:

Linearitas dan Rentang

Linearitas adalah kemampuan metode untuk memperoleh hasil tes yang berbanding lurus dengan
konsentrasi analit dalam rentang tertentu yang dilaporkan sebagai varian. Metode non-instrumental
Visual dapat mencakup LOD yang ditentukan oleh teknik seperti kromatografi lapis tipis (KLT) atau
titrasi. LOD juga dapat dihitung berdasarkan standar deviasi dari respons (SD) dan kemiringan kurva
kalibrasi (S) pada tingkat yang mendekati LOD sesuai dengan rumus:

LOD = 3.3 (SD / S)

Simpangan baku dari respons dapat ditentukan berdasarkan simpangan baku blanko, simpangan baku
residual dari garis regresi, atau simpangan baku-simpangan garis regresi. Metode yang digunakan untuk
menentukan LOD harus didokumentasikan dan didukung, dan jumlah sampel yang tepat harus dianalisis
pada batas untuk memvalidasi level. Nilai LOD selalu spesifik untuk serangkaian kondisi eksperimental
tertentu. Apa pun yang mengubah sensitivitas suatu metode, termasuk instrumen, persiapan sampel,
dll. Akan mengubah batas deteksi.

Batas Kuantifikasi

Limit of Quantificaion (LOQ) didefinisikan sebagai konsentrasi analit terendah dalam sampel yang dapat
ditentukan dengan presisi dan akurasi yang dapat diterima di bawah kondisi operasional metode yang
dinyatakan. Seperti LOD, LOQ dinyatakan sebagai konsentrasi, dengan presisi dan akurasi pengukuran
juga dilaporkan. Kadang-kadang rasio signal-to-noise dari sepuluh ke satu digunakan untuk menentukan
LOQ. Rasio signal-to-noise ini adalah aturan praktis yang baik, tetapi harus diingat bahwa penentuan
LOQ adalah kompromi antara konsentrasi dan presisi serta akurasi yang diperlukan. Yaitu, ketika tingkat
konsentrasi LOQ menurun, presisi meningkat. Jika presisi yang lebih baik diperlukan, konsentrasi yang
lebih tinggi harus dilaporkan untuk LOQ. Kompromi ini ditentukan oleh metode analitik dan tujuan
penggunaannya. ICH telah mengakui rasio sinyal-ke-kebisingan sepuluh-ke-satu sebagai khas, dan juga,
seperti LOD, mencantumkan dua opsi tambahan yang sama yang dapat digunakan untuk menentukan
LOQ, metode visual non-instrumental dan cara menghitung LOQ. Metode perhitungan sekali lagi
didasarkan pada standar deviasi respon (SD) dan kemiringan kurva kalibrasi (S) sesuai dengan rumus:

LOQ = 10 (SD / S)

Kekasaran

Kekasaran, menurut USP, adalah tingkat reproduktifitas hasil yang diperoleh dalam berbagai kondisi,
dinyatakan sebagai% RSD. Kondisi-kondisi ini meliputi berbagai laboratorium, analis, instrumen, reagen,
hari, dll. Dalam pedoman definisi dan terminologi, ICH tidak membahas kekasaran secara khusus.
Kelalaian nyata ini sebenarnya adalah masalah semantik, karena ICH memilih untuk membahas topik
kasar sebagai bagian dari ketepatan, seperti dibahas sebelumnya.

Kekokohan

Robustness adalah kapasitas suatu metode untuk tetap tidak terpengaruh oleh variasi parameter
parameter yang disengaja. Ketangguhan suatu metode dievaluasi dengan memvariasikan parameter
metode seperti persen organik, pH, kekuatan ionik, suhu, dll., Dan menentukan efeknya (jika ada) pada
hasil metode. Seperti yang didokumentasikan dalam pedoman ICH, ketahanan harus dipertimbangkan
sejak awal dalam pengembangan suatu metode. Selain itu, jika hasil suatu metode atau pengukuran lain
rentan terhadap variasi dalam parameter metode, parameter ini harus dikontrol secara memadai dan
pernyataan kehati-hatian disertakan dalam dokumentasi metode.

Studi pemulihan

Studi pemulihan dilakukan dengan menggunakan metode spiking. Dalam metode ini sampel uji
memiliki konsentrasi 10 μg / ml. Untuk obat standar ini dibubuhi dengan menambahkan ke dalam
larutan uji. Konsentrasi 8, 10 dan 12µg / ml ditambahkan ke dalam larutan sampel dan absorbansi dari
tiga konsentrasi berduri diambil. Dari absorbansi ini kita dapat menentukan jumlah obat yang dapat
diperoleh dengan metode yang diusulkan [9-13].