LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM

BIOKIMIA DAN BIOLOGI MOLEKULAR

ANALISIS KUALITATIF DAN KUANTITATIF PROTEIN

KELOMPOK :6
ANGGOTA :

Natasya Parameswari 260110200036 Prosedur - Perhitungan

Alya Puteri A. P. 260110200040 Pendahuluan - Alat &
Bahan
Husna Muharram A. 260110200042 Pembahasan - Simpulan

LABORATORIUM ANALISIS FARMASI

FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS PADJADJARAN
JATINANGOR
2020
 ANALISIS KUALITATIF DAN KUANTITATIF PROTEIN

Natasya Parameswari036, Alya Puteri 040, Husna Muharram042

Jurusan Farmasi, Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran, Jatinangor, Sumedang

Abstrak
Protein merupakan bioplymer polipeptida yang tersusun dari sejumlah asam amino yang dihubungkan
oleh ikatan peptida. Analisis kualitatif pada protein ini dilakukan untuk mengetahui adanya gugus
benzena (cincin fenil), sedangkan dalam analisis kuantitatif pada protein dilakukan untuk mengetahui
kadar protein total. Dalam analisis kualitatif dan kuantitatif protein ini dilakukan dengan metode uji
xantoprotein dan uji biuret terhadap sampel. Hasil yang didapatkan dari analisis ini adalah adanya
gugus benzena yang terdapat dalam sampel dan kadar yang terdapat dalam sampel.
Kata Kunci: kualitatif, kuantitatif, protein, uji biuret, uji xantoprotein

Abstract
Proteins are polypeptide bioplymers composed of a number of amino acids connected by peptide
bonds. Qualitative analysis of this protein is done to determine the formation of benzene groups
(phenyl rings), while in quantitative analysis of proteins is carried out to find out the total protein
levels. In qualitative and quantitative analysis of this protein is carried out by xantoprotein test
method and biuretic test against the sample. The results obtained from this analysis are the absence
of benzene clusters found in the sample and the levels contained in the sample.
Keywords: biuret test, protein, qualitative, quantitative xanthoprotein test

PENDAHULUAN biologisnya, berdasarkan sifat kelarutannya

dan gugus prostetiknya (Katili, 2009).
Protein merupakan bioplymer polipeptida yang
tersusun dari sejumlah asam amino yang Dalam percobaan analisis kualitatif dan
dihubungkan oleh ikatan peptida. Ikatan kuantitatif dalam protein ini memiliki tujuan
peptida terbentuk ketika atom karbon pada untuk menganalisis protein secara kualitatif
gugus karboksil suatu molekul berbagi dan menganalisis kadar protein total. Prinsip
elektron dengan atom nitrogen pada gugus yang digunakan dalam analisis ini adalah
amina molekul lainnya (Nugroho, 2016). xantoprotein dan biuret.

Pembagian tingkat organisasi struktur protein Uji xantoprotein digunakan untuk menunjukan
ada empat kelas yakni struktur primer, struktur keberadaan gugus benzena pada protein.
sekunder, dan struktur tersier. Sedangkan Metode analisis protein ini menggunakan
klasifikasi protein dibagi berdasarkan sifat larutan asam nitrat pekat. Hasil positif pada
xantoprotein adalah munculnya gumpalan atau
cincin warna kuning (Sumardjo, 2006).
Metode biuret adalah mengukur absorbansi
cahaya kompleks berwarna ungu dari protein
yang bereaksi dengan reagen biuret. Protein
dengan ion Cu2+ yang terdapat dalam reagen
biuret membentuk kompleks dalam suasana
basa. Semakin tinggin intensitas cahaya yang
diserap oleh larutan maka semakin tinggi pula
kandungan protein yang terdapat dalam
sampel tersebut (Herdyastuti, 2006).
Reaksi uji xantoprotein menggunakan asam
amino tirosin, triptofan, dan fenilalanin. Di
asam amino tirosin dan triptofan menunjukkan
hasil positif dengan berubahnya warna larutan
menjadi kuning, sedangkan dalam fenilalanin
tidak terjadi reaksi. Ketika dipanaskan dengan
asam nitrat pekat, larutan berubah menjadi
kuning. Larutan mengalami alkalinisasi
dengan ditambahkannya NaOH dan berubah
menjadi warna jingga (Sumardjo, 2006).
Protein didalam tubuh berguna sebagai zat
pembangun atau pertumbuhan karena protein
merupakan pembentuk jaringan baru dalam
tubuh. Protein juga berfungsi sebagai pengatur
dalam metabolism tubuh. Selain itu juga
protein merupakan komponen pembentuk
antibodi untuk pertahanan daya tahan tubuh.
Karena fungsi protein bagi tubuh sangat
penting, maka perlu adanya uji secara
kuantitatif. Salah satunya dengan metode
biuret. Dalam metode biuret disiapkan masing
– masing larutan sampel 2 % dalam air diambil
1 ml sampel ditambahkan 1 ml NaOH 10 %,
kemudian ditambahkan beberapa tetes larutan
CuSO4 0.1 % dikotak. Reaksi positif
ditunjukkan dengan terbentuknya warna ungu
(Andayani, 2011).
Uji Xantoprotein merupakan uji kualitatif
protein yang positif untuk protein yang
mengandung asam amino dengan inti benzen,
yaitu tirosin, triptofan, dan fenilalanin. Pada
uji Xantoprotein ini, larutan asam nitrat pekat
digunakan sebagai pereaksi. Reaksi yang
terjadi ialah nitrasi atau reaksi substitusi atom
H pada benzena yang terdapat pada molekul
protein oleh gugus nitro. Proses nitrasi adalah
masuknya gugus nitro ke dalam zat-zat
organik atau kimia lainnya dengan
menggunakan asam nitrat dan asam sulfat
sebagai katalisator (Purnawan, 2010).
Uji xantoprotein akan menghasilkan warna
orange pada reaksi yang menghasilkan turunan
benzena dengan penambahan basa. Uji
xantoprotein digunakan untuk asam amino
yang mengandung inti benzene. Reaksi ini
positif untuk triptofan, fenilalanin, dan tirosin.
Warna hasil reaksi dengan asam nitrat pekat
adalah kuning tua, sedangkan warna orange
muncul ketika reaksi ditambahkan dengan
NaOH sebagai basa. Orange pekat pada fenol
menunjukkan adanya inti benzene pada gugus
fenol. Hal itu memang sangatlah tepat karena
fenol memang memiliki gugus benzene
(Harper, 1980).
Reaksi xantoprotein terjadi pada saat larutan
asam nitrat pekat ditambahkan dengan hati-
hati ke dalam larutan protein. Setelah
dicampur terjadi endapan putih yang dapat
berubah menjadi kuning apabila dipanaskan.
Reaksi yang terjadi adalah nitrasi pada inti
benzena yang terdapat pada molekul protein.
Jadi reaksi ini positif untuk protein yang
mengandung tirosin, fenilalanin dan triptofan.
Kulit kita bila kena asam sitrat berwarna
kuning, itu juga karena reaksi xantoprotein ini
(Poedjiadi, 2005).
Dalam uji biuret ini, sampel harus dalam
suasana basa agar polipeptida sampel dapat
bereaksi dengan Cu2+ dari biuret. Uji ini
sendiri didasarkan pada reaksi pembentukan
kompleks Cu2+ yang dihasilkan oleh CuSO4,
dengan gugus –CO dan –NH pada ikatan
peptida dalam larutan bersuasana basa dan
menghasilkan senyawa kompleks berwarna
biru keunguan (Azhar, 2010).
Alat
Alat yang digunakan dalam analisis kualitatif
dan kuantitatif protein ini, yaitu beaker glass,
bulb, bunsen, gelas ukur, kertas saring, labu
ukur, mortar dan pestle, neraca analaitik,
penangas air, penjepit kayu, pipet tetes, pipet
ukur, rak tabung reaksi, tabung reaksi,
sentrifugasi, dan spektrofotometer.
Bahan
Bahan yang digunakan dalam analisis
kualitatif dan kuantitatif protein ini, yaitu apel,
aquades, buncis, CuSO4.5H2O, kasein, kubis
KI, N-Ka Tartrat, larutan 10% NaOH, larutan
HNO3 pekat, larutan NH4OH pekat, dan
wortel.
Prosedur Pengujian Xanthoprotein
Pertama-tama masukkan 1 mL larutan sampel
ke dalam tabung reaksi. Tambahkan 3 tetes
larutan HNO3 pekat. Panaskan campuran
hinga warna kuning muncul. Dinginkan
campuran di atas dan tambahkan 10 tetes
larutan NH4OH pekat dan kemudian amati
perubahan warnanya.
Prosedur Pengujian Biuret
Timbang 50 mg kasein, masukkan dalam labu
takar 50 mL, larutkan dengan aquades
(konsentrasi 1 mg/mL). Buat larutan kasein
konsentrasi 50, 100, 200, 400, 800 μg/mL. Ke
dalam 0,5 mL sampel dan 0,5 mL kasein,
tambahkan masing-masing 2,5 mL pereaksi
Biuret. Inkubasi selama 30 menit pada suhu
ruang. Sampel dan standar harus dibuat dalam
waktu yang bersamaaan. Ukurlah absorbansi
standar dan sampel pada 550 nm. Blanko
adalah 0,5 mL air ditambah 2,5 mL pereaksi
Biuret. Tentukan konsetrasi protein dengan
menggunakan kurva standar
HASIL
Hasil pembacaan sebagai berikut:
Pada uji xanthoprotein, larutan di teteskan
HNO3 kemudian dipanaskan diatas bunsen.
Ternyata larutan berubah menjadi kuning.
Kemudian larutan pun didinginkan dan
diteteskan NH4OH, larutan pun berubah
menjadi oranye pada untuk kubis, wortel,
apel, buncis, jeruk. Hal ini menunjukkan
bahwa kubis, wortel, apel dan buncis memiliki
gugus benzena
Kemudian untuk uji biuret. Setelah larutan uji
telah ditetesi biuret dan diinkubasi selama 30 No. Sampel Absorbansi Konsentrasi
menit, akan terbentuk larutan berwarna ungu. sampel protein total
Untuk mengukur kadar protein, terlebih dahulu
ukur kadar larutan standar yaitu kasein dengan 1. Apel 0,467 367.9

menggunakan spektrofotometer dan

2. Alpukat 0,845 745.9
didapatkan hasil absorbansi sebagai berikut

3. Jeruk 0,371 271.9

No. Konsentrasi Absorbansi
kasein (µg/mL) 4. Buncis 0,736 636.9

1. 50 0,0881 5. Wortel 0,523 423.9

2. 100 0,1793
PERHITUNGAN

3. 200 0,3777 1. Volume Larutan Kasein

Kasein dengan konsentrasi 1 mg/mL yang
4. 400 0,5421 dibutuhkan untuk pengenceran menjadi larutan
dengan konsentrasi 50, 100, 200, 400, 800
5. 800 0,8772
μg/mL.
1. Larutan stok
Data tersebut kemudian diplot ke dalam suatu 1 mg/mL= 1000 μg/mL
kurva baku dengan absis berupa konsentrasi 2. Pengenceran pertama menjadi 50
baku dan ordinat berupa nilai intensitas. Kurva μg/mL
baku yang didapatkan adalah sebagai berikut: M1. V1 = M2. V2
1000 μg/mL. V1 = 50 μg/mL. 10 mL
V1= 0,5 mL
3. Pengenceran kedua menjadi 100
μg/mL
M1. V1= M2. V2
1000 μg/mL. V1 = 100 μg/mL. 10 mL
V1= 1 mL

Sementara itu, pengukuran absorbansi pada 4. Pengenceran ketiga menjadi 200

sampel didapatkan data sebagai berikut μg/mL

M1. V1= M2. V2
1000 μg/mL. V1 = 200 μg/mL. 10 mL
 V1= 2 mL x = (y- 0.0991) / 0.001
5. Pengenceran keempat menjadi 400 x= ( 0.371- 0.0991)/ : 0.001
μg/mL x = 271.9
M1. V1= M2. V2
1000 μg/mL. V1 = 400 μg/mL. 10 mL 4. Kadar Protein Buncis

V1= 4 mL y= 0,001x + 0.0991

6. Pengenceran keempat menjadi 400 x = (y- 0.0991) / 0.001

μg/mL x= ( 0.736- 0.0991)/ : 0.001

M1. V1= M2. V2 x = 636.9

1000 μg/mL. V1 = 400 μg/mL. 10 mL

5. Kadar Protein Wortel
V1= 4 mL
y= 0,001x + 0.0991
7. Pengenceran keempat menjadi 400
x = (y- 0.0991) / 0.001
μg/mL
x= ( 0.523- 0.0991)/ : 0.001
M1. V1= M2. V2
x = 423.9
1000 μg/mL. V1 = 800 μg/mL. 10 mL
V1= 8 mL

2. Kadar Protein
Kadar protein dari sampel di hitung dengan
memasukkan nilai absorbansi dari sampel ke
persamaan regresi linear kurva standar yang
telah didapat
1. Kadar Protein Apel
y= 0,001x + 0.0991
x = (y- 0.0991) / 0.001
x= ( 0.467- 0.0991)/ : 0.001
x = 367.9
2. Kadar Protein Alpukat
y= 0,001x + 0.0991
x = (y- 0.0991) / 0.001
x= ( 0.845- 0.0991)/ : 0.001
x = 745.9
3. Kadar Protein Jeruk
y= 0,001x + 0.0991
PEMBAHASAN
Protein merupakan zat yang sangat penting
dibutuhkan oleh manusia karena protein bukan
hanya sekedar bahan struktural, seperti lemak
dan karbohidrat. Protein merupakan kelompok
dari makromolekul organik kompleks yang
diantaranya terkandung hidrogen, okisgen,
nitrogen, karbon, fosfor dan sulfur serta terdiri
dari satu atau beberapa rantai dari asam amino.
Protein berperan penting dalam pembentukan
struktur, fungsi, regulasi sel-sel makhluk hidup
dan virus. Protein juga bekerja sebagai
neurotransmiter dan pembawa oksigen dalam
darah (hemoglobin). Protein juga berguna
sebagai sumber energi tubuh. Protein juga
dapat digunakan sebagai bahan bakar apabila
keperluan energi tubuh tidak dapat terpenuhi
oleh karbohidrat dan lemak. Saat
mengkonsumsi makanan berprotein, maka
perut akan mengeluarkan asam pencernaan
yang membantu proses pemecahan struktur
kimia. Selanjutnya pencernaan berlangsung
di usus kecil dimana sebagian
pemecahan unsur senyawa protein terjadi di
sini. Pada akhirnya, protein dikembalikan lagi
ke struktur asam amino dasar sehingga bisa
diserap oleh tubuh melalui usus dan diserap
lewat aliran darah. Dari usus dan darah, asam
amino mengalir ke hati yang mengatur
penggunaan asam amino. Selain itu, asam
amino kadang-kadang juga digunakan untuk
mensintesis protein dalam hati dan kadang
dikirim ke bagian tubuh lain untuk digunakan.
Pada praktikum kali ini dilakukan uji kualitatif
dan uji kuantitatif protein. Praktikum uji
kualitatif protein ini dimaksudkan untuk
mengetahui adanya keberadaan kandungan
protein dalam sampel serta membuktikan
terdapatnya asam amino yang memiliki cincin
benzena dengan melakukan uji xantoprotein.
Prinsip ini menggunakan prinsip nitrasi inti
benzena oleh asam nitrat pekat, sehingga
larutan nantinya dapat berwarna. Fungsi dari
uji xantoprotein ini adalah untuk menguji
keberadaan asam amino yang mengandung inti
benzena pada gugus sampingnya, seperti:
tirosin, triptofan dan fenilalanin.
xantoprotein ini dapat di gunakan dalam
menguji kandungan asam amino tirosin,
triptofan dan fenilalanin atau asam amino yang
mengandung inti benzena pada
sampingnya dalam suatu protein. Apabila
kita protein yang mengandung cincin benzena
dipanaskan dengan HNO3 pekat, maka larutan
akan berwarna kuning yang kemudian menjadi
warna jingga ketika suasana dibuat basa. Uji
xantoprotein menekankan pada pembuktian
besar adanya gugus asam amino dan cincin fenil
benzena dalam sampel yang diuji.
Dalam praktikum ini, terbukti bahwa pepaya
mengandung protein berupa asam amino
aromatik, dengan kata lain asam amino yang
mengandung gugus benzena karena ditandai
dengan adanya endapan putih yang terbentuk
ketika ditambahkan HNO3 pekat, penambahan
HNO3 pekat ini bermaksud untuk memecah
protein menjadi gugus benzena, kemudian
mengalami perubahan warna menjadi kuning
tua setelah dipanaskan selama beberapa menit.
Reaksi perubahan yang terjadi tersebut
dinamakan reaksi nitrasi yaitu reaksi yang
Reaksi nitrasi adalah reaksi substitusi atom H
pada inti benzena yang terdapat pada molekul
protein oleh gugus nitro.
Senyawa menjadi warna jingga terbentuk
karena asam amino yang direaksikan dengan
HNO3 teroksidasi sehingga membentuk
endapan kuning yang merupakan endapan
protein dari sampel tersebut, kemudian
endapan tersebut direaksikan lagi dengan
NaOH sehingga terbentuklah senyawa yang
Uji berwarna jingga yang menunjukkan adanya
asam amino aromatik pada sampel yang diuji.
Hakikatnya protein ialah amfoter, yaitu dapat
bereaksi dengan asam atau basa, namun pada
gugus uji xantoprotein hanya akan terjadi ketika
berada dalam suasana basa sehingga dilakukan
penambahan NaOH. Adapun alasan NaOH
ditambahkan setelah pemanasan adalah agar
bereaksi sempurna, karena
penambahan dilakukan di awal, maka tidak
akan terionisasi.
Pada praktikum kali ini dilakukan juga analisis
kuantitatif protein terhadap
menggunakan spektofotometer UV-Vis single
beam dengan metode uji
Spektrofotometer itu sendiri merupakan teknik
analisis yang bertujuan untuk mengetahui
jumlah (konsentrasi) zat dalam suatu bahan
berdasarkan spektroskopi khusus
panjang gelomabang UV-Visible. Uji biuret
digunakan untuk mengetahui absorbansi
cahaya kompleks berwarna ungu pada protein
apabila direaksikan dengan reagen biuret yaitu
dari CuSO4.
Uji biuret digunakan untuk menunjukkan
adanya ikatan peptida dalam suatu zat yang
diuji. Adanya ikatan peptida mengindikasikan
adanya protein, karena asam amino berikatan
dengan asam amino yang lain melalui ikatan
peptida membentuk protein. Ikatan peptida
merupakan ikatan yang terbentuk ketika atom
karbon dari gugus karboksil suatu molekul
berikatan dengan atom nitrogen dari gugus
amina molekul lain. Reaksi tersebut
melepaskan molekul air sehingga disebut
reaksi kondensasi. Dua molekul asam amino
yang berikatan dengan ikatan peptida dan
membentuk molekul protein. Ikatan peptida
tersebut yang akan bereaksi dengan reagen
biuret menghasilkan perubahan warna. Reaksi
positif uji biuret ditunjukkan
munculnya warna ungu atau merah muda
akibat adanya persenyawaan antara Cu++ dari
reagen biuret dengan NH dari ikatan peptida
apabila dan O dari air. Semakin panjang ikatan peptida
(banyak asam amino yang berikatan) akan
memunculkan warna ungu, semakin pendek
ikatan peptida (sedikit asam
amino yang berikatan) akan memunculkan
sampel warna merah muda. Uji biuret biasa digunakan
untuk uji protein secara umum. Uji biuret akan
biuret. menunjukkan hasil negatif pada asam amino
bebas karena tidak memiliki ikatan peptida.
Pada tes biuret ini penambahan NaOH 10%
untuk pada protein menyebabkan terjadinya hidroisis
ikatan peptida dari polimer protein. Hidrolisis
ini menghasilkan monomer-monomer asam
amino dan ada sebagian gugus asam amino
yang berubah menjadi amonia. Akibatnya
hidrolisis itu jumlah gugus asam amino
berkurang dan pengukuran serapan cahaya
oleh ikatan kompleks yang berwarna ungu
dapat terjadi oleh sebab itu protein bereaksi
dengan tembaga dalam ingkungan alkali.
SIMPULAN
Berdasarkan data hasil pengamatan dapat
disimpulkan bahwa:
1. Protein dapat dianalisis secara
kualitatif menggunakan metode
xantoprotein dan sampel positif
mengandung protein.
2. Kadar protein total pada sampel dapat
ditentukan dengan menggunakan
dengan metode biuret.
DAFTAR PUSTAKA

Andayani, R. 2011. Pengaruh Lama

Penyimpanan pada Suhu Kamar dan Lemari
Pendingin terhadap Kandungan Protein pad
Dadih Kerbau dengan Metode Kjedahl.
Scientia. Vol. 1 (1).

Azhar, A. 2010. Dasar-Dasar Biokimia.

Banda Aceh: Ar-Raniry Press.

Harper, et al. 1980. Biokimia (Review of

Physiological Chemistry) Edisi 17. Jakarta:
EGC.

Herdyatuti, N. 2013. Isolasi dan Karakterisasi

Ekstrak Kasar Enzim Bromelin dari Batang
Nanas (Ananas comusus L. merr). Jurnal
Berkala Penelitian Hayati. Vol. 12 (1).

Kataliti, A.S. 2009. Struktur dan Fungsi

Protein Kolagen. Jurnal Penelitian. Vol. 2 (5):
19 - 29.

Nugroho, R. 2016. Ikatan Peptida. Tersedia

online di http://websains.com/ikatan-peptida
[Diakses Pada 30 September 2020]

Poedjiadji, A. 2005. Dasar-Dasar Biokimia.

Jakarta: Universitas Indonesia.

Purnawan. 2010. Optimasi Proses Nitrasi pada

Pembuatan Nitro Selulosa Serat Limbah
Industri Sagu. Jurnal Rekayasa Proses. Vol. 4
(2).

Sumardjo, D. 2006. Pengantar Kimia: Buku

Panduan Kuliah Mahasiswa Kedokteran dan
Program Strata I Fakultas Bioeksakta. Jakarta:
EGC.