Martínez et al.

, J Microb Biochem Technol 2015,

icr

Mf
obial & Biochemical T

Journal of 7: 5
e

DOI: 10.4172 / 1948-5948.1000228

c

oJ
mikroba & Biokimia Teknologi h

n
un
r al
o

l g
o y

ISSN: 1948-5948

Penelitian Pasal Open Access Riset Pasal Buka Akses

Kinetika Sukrosa Hidrolisis oleh Imobilisasi Recombinant Pichia

pastoris Sel dalam reaktor Batch
Duniesky Martínez1,Carmen Menendez2, Félix M Echemendia1, Lázaro Hernández2, Alina Sobrino1, Luis E Trujillo3*, Ivan Rodríguez4
dan Enrique R Pérez 1
Laboratorium Fermentasi, Pusat Rekayasa Genetik dan Bioteknologi Sancti Spíritus (CIGBSS), Kuba
1

2
Laboratorium Interaksi Tanaman-Mikroba, Pusat Rekayasa Genetika dan Bioteknologi (CIGB), Cuba
3
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE, Departemen Ilmu Hayati dan Pertanian, Industri Kelompok Penelitian Bioteknologi dan Bioproduk, Quito, Ekuador
4
Departemen Teknik Kimia, Fakultas Kimia dan Farmasi, Universitas Pusat “Marta Abreu” di Las Villas, Villa Clara, Kuba

Abstrak
Hidrolisis sukrosa dilakukan dalam reaktor batch volume konstan, menggunakan rekombinan Selpastoris
utuh PichiaBfrA4X mengekspresikan Thermotoga maritima invertase, terperangkap dalam manik-manik kalsium
alginat. Kinetika hidrolisis enzimatis sukrosa oleh biokatalis diperiksa pada konsentrasi substrat berkisar antara
0,03 M dan 2,04 M. Laju reaksi meningkat hingga 0,31 M setelah itu kecepatan reaksi konstan hingga 1,16 M, di
atas konsentrasi ini laju reaksi menurun dengan peningkatan konsentrasi sukrosa. Data percobaan yang
diperoleh dengan dua bobot biokatalis dimasukkan ke dalam dua model kinetik untuk memprediksi waktu reaksi
yang dibutuhkan untuk hidrolisis sukrosa. Satu model diterapkan untuk konsentrasi sukrosa di bawah 1,16 M
sedangkan yang kedua dapat digunakan pada kisaran penghambatan antara 1,46 dan 2,04 M dengan k
nilaisebagai fungsi dari konsentrasi sukrosa awal dan bobot biokatalis.

Kata kunci: Kinetika; Invertase; Hidrolisis sukrosa; Pichia Strain dan kondisi kultur
pastoris; Reaktor batch; Imobilisasi sel
Pichia pastoris GS115 strain BfrA4X diperoleh darikultur
Pendahuluan koleksiCenter for Genetic Engineering and Biotechnology,
Havana, Cuba [10].
Hidrolisis sukrosa yang dikatalisis oleh invertase (EC
3.2.1.26) menghasilkan campuran ekuimolar glukosa dan Fermentasi fed-batch dilakukan dalam fermentor 7,5 L
fruktosa bernama gula invert, yang memiliki daya pemanis (INFORS) yang mengandung 3 L media pertumbuhan [1% (b /
lebih tinggi. Campuran ini sebagian besar digunakan sebagai v) gula tebu, 0,5% (b / v) ekstrak ragi, 2,2% (b / v) ( NH 4)2SO4,
pemanis dalam industri makanan dan farmasi karena memiliki 1,82% (w / v) K 2HPO4, 0,75% (w / v) MgSO 4 7H2O, dan 0,05%
sifat fungsional yang lebih diinginkan daripada yang (w / v) CaCl2 2H2O, dengan vitamin dan jejak yang disiapkan
ditampilkan oleh sirup sukrosa seperti masalah kristalisasi seperti yang direkomendasikan oleh Cregg [11], dan
diinokulasi dengan 0,2 L dari kultur batch pengocok ke
rendah dalam produk makanan, tekanan osmotik tinggi,
konsentrasi sel awal 3 g L-1 (biomassa basah). Kondisi operasi
kelarutan tinggi, dll. Juga, sirup invert memiliki aplikasi yang
selama fase batch dan batch yang diumpankan secara
berguna sebagai sumber energi instan dan sebagai agen
eksponensial seperti yang dijelaskan oleh [12].
plasticizing dalam kosmetik, obat-obatan dan industri kertas [1-
3]. Industri makanan dan bioteknologi semakin sering Kaldu kultur disentrifugasi; 15 gram pelet disuspensi ulang
menggunakan enzim yang tidak dapat bergerak untuk hingga 30 mL dalam air deionisasi dan sel ragi diinaktivasi
berbagai proses. Keuntungan utama dari teknologi enzim panas pada 70 ° C selama 30 menit. Sel jamur yang mati
imobilisasi adalah: biaya produksi yang lebih rendah dan panas kemudian dibuat pellet dengan sentrifugasi dan
peningkatan kapasitas produksi karena kemampuan untuk digunakan untuk imobilisasi sel utuh atau sebagai sumber sel
memulihkan dan menggunakan kembali katalis biologis yang bebas. Sel-sel yang terbunuh panas dalam jumlah 15 g (berat
juga lebih stabil daripada enzim bebas [4]. basah) disuspensi kembali dalam air suling (50 mL) untuk
mencapai konsentrasi biomassa akhir 300 g L-1.
Pemrosesan batch berulang adalah metode yang terkenal
untuk menghasilkan gula invert dari hidrolisis sukrosa Persiapan manik-manik kalsium alginat
menggunakan invertase bebas sel yang tidak bergerak [5-8].
Reaktor batch volume konstan memungkinkan operasi Larutan natrium alginat disiapkan dengan penambahan
konversi katalitik yang mudah, pemisahan produk dan bertahap 1 g bubuk alginat ke 15 g biomassa basah yang
perolehan kembali biokatalis. Reaktor batch sederhana, tersuspensi dalam 50 mL air deionisasi dan diaduk secara
membutuhkan sedikit peralatan pendukung, dan oleh karena menyeluruh untuk memastikan distribusi sel yang homogen
itu ideal untuk studi eksperimental skala kecil model kinetik dalam larutan alginat. campuran selesai
untuk menggambarkan hidrolisis enzimatik sukrosa [9].
Tujuan dari pekerjaan ini adalah untuk mengevaluasi
* Penulis yang sesuai: Luis E Trujillo, Universidad de las Fuerzas Armadas
model kinetik untuk memprediksi waktu reaksi yang diperlukan ESPE, Departemen Ilmu Hayati dan Pertanian, Kelompok Riset Bioteknologi
untuk hidrolisis sukrosa oleh rekombinanrekombinan kalsium dan Bioproduk Industri, Quito, Ekuador, Telp: +593 2-398-9400; E-mail:
alginat yang diimobilisasi Pichia pastoris BfrA4X , luis211063@gmail.com
mengekspresikan periplasmik Thermotoga maritima invertase, Diterima 20 Agustus 2015; Diterima 22 September 2015; Dipublikasikan 29
dalam reaktor batch volume konstan. Menurut data September 2015
eksperimen yang dikumpulkan, pertama kali diamati,
Kutipan: Martínez D, Menéndez C, Echemendia FM, Hernández L, Sobrino A, et
bagaimana dua model kinetik memprediksi waktu reaksi al. (2015) Kinetika Hidrolisis Sukrosa olehRekombinan Pichia
masing-masing pada konsentrasi sukrosa rendah dan tinggi. pastorisTerimobilisasi Seldalam reaktor Batch. J Microb Biochem Technol 7:
294-298. doi:10.4172 / 1948-5948.1000228
Bahan dan Metode Hak Cipta: © 2015 Martínez D, dkk. Ini adalah artikel akses terbuka yang
 didistribusikan di bawah persyaratan Lisensi Atribusi Creative Commons, yang apa pun, dengan mencantumkan nama penulis dan sumber aslinya.
mengizinkan penggunaan, distribusi, dan reproduksi tidak terbatas dalam media

Volume 7 (5): 294-298 (2015) - 294 J Microb Biochem Technol ISSN: 1948-5948 JMBT, jurnal akses terbuka
Kutipan: Martínez D, Menéndez C, Echemendia FM, Hernández L, Sobrino A, et al. (2015) Kinetika Hidrolisis Sukrosa olehRekombinan Pichia
pastorisTerimobilisasi Seldalam reaktor Batch. J Microb Biochem Technol 7: 294-298. doi:10.4172 / 1948-5948.1000228

sampai 50 mL dengan air deionisasi sebelum ekstrusi dalam
CaCl2 larutan. Alginat / suspensi sel ditambahkan tetes demi
tetes melalui tabung silikon (menggunakan pompa peristaltik
dengan laju alir 20 mL menit-1 dan jarum halus) sampai 500 mL
CaCl2 (0,55% w / v) larutan. CaCl2 larutan diaduk dengan
kecepatan konstan (100 rpm) menggunakan baling-baling laut
tipe impeller untuk menghindari agregasi tetesan. Waktu gelasi
dibatasi untuk satu jam setelah ituCaCl2 solusi dibuang.
Selanjutnya manik-manik dicuci tiga kali dan disimpan dalam
larutan sukrosa 1,46 M pada suhu 4 ° C.
Uji aktivitas inversi Uji
aktivitas dilakukan dalam reaktor batch, 25 manik atau 25
mg sel bebas dicampur dalam 10 mL larutan sukrosa.
Pengujian dilakukan 15 menit pada 60 ° C, dalam 50 mM
dapar natrium asetat, pH 5,5 menggunakan larutan sukrosa
antara 0,03 dan 2,04 M. Pencampuran dilakukan dengan
memutar batang pengaduk (4 mm Ø x 17 mm) secara
magnetis pada kira-kira 100 rpm. Campuran glukosa dan
fruktosa ekuimolar digunakan sebagai standar. Hidrolisis
sukrosa ditentukan dengan mengukur pelepasan gula
pereduksi menggunakan asam 3'5-dinitrosalisilat (DNS) seperti
yang dijelaskan oleh Miller [13].
Proses batch
Sacharomyces cerevisiae invertase yang diimobilisasi dalam
kalsium alginat juga mencapai aktivitas maksimum pada
konsentrasi sukrosa yang sama yaitu 0,27 M [16]. Bowski [17]
dan Combes and Monsan [18], juga menemukan pergeseran
aktivitas puncak pada konsentrasi sukrosa 0,29 M akan tetapi,
mereka mengamati penurunan yang cepat pada aktivitas
invertase bebas, tetapi dalam percobaan kami, dataran tinggi
antara 0,31 dan 1,16 M diperoleh. Beberapa alasan dapat
menjelaskan penurunan laju reaksi dengan peningkatan
konsentrasi sukrosa, efek penghambatan substrat,
pengurangan air bebas, dan sintesis oligosakarida [19].
Karakterisasi biokimia dari reaksi hidrolisis sukrosa
dalam biokatalis
Laju reaksi hidrolisis sukrosa batch dengan Pichia pastoris
BfrA4X terimobilisasi ditentukan pada suhu 60 ° C dan pH 5,5,
dengan dua berat biokatalis 100 dan 200 g L-1 masing-masing,
dalam larutan sukrosa yang diaduk pada berbagai konsentrasi,
antara 0,29 M dan 2,04 M. Korelasi antara persentase
hidrolisis dan waktu reaksi ditunjukkan pada Gambar 2. Ketika
waktu reaksi diperpanjang hingga 10 jam, hidrolisis sukrosa
lengkap diperoleh sampai konsentrasi sukrosa mencapai 1,16
M dan 1,46 M untuk berat biokatalis100 dan 200 g L-1masing-
masing.

Biokatalis sel amobil diuji dalam reaktor batch volume konstan
500 mL. Manik-manik kalsium alginat sel amobil pada
konsentrasi 100 g L-1 dan 200 g L-1 diinkubasi 10 jam ke dalam
konsentrasi sukrosa yang berbeda (0,29, 0,87, 1,16, 1,46, 1,75
dan 2,04 M) pada 60 ° C dengan pengadukan konstan (100
rpm). Sampel diambil secara berkala untuk mengukur gula
pereduksi seperti dijelaskan di atas.
Analisis statistik
Untuk menghubungkan data eksperimen untuk reaksi
sukrosa-invertase dengan model kinetik yang memprediksi
waktu reaksi yang diperlukan untuk hidrolisis sukrosa, kami
menguji persamaan kinetik untuk reaktor batch volume
konstan, menurut Levenspiel [9].
Persamaan 1 adalah ekspresi untuk sistem batch volume
konstan.
AS

t V dS
Setiap titik data mewakili mean dari tiga assay independen.
Signifikansi statistik dari beberapa perbandingan slop = (1)
SWr -∫
dilakukan dengan menggunakan uji t-Student menggunakan SEBUAH

program perangkat lunak komputer pribadi Microsoft Excel AO A

0
[14].
Menurut Michaelis-Menten ekspresi rate dapat ditulis
Hasil dan Pembahasan VS r max
sebagai += (2)
Pengaruh konsentrasi sukrosa terhadap laju reaksi A
A
Data yang ditunjukkan pada gambar 1 menunjukkan bahwa KS
MA
untuk bebas dan kalsium alginat amobil Pichia pastoris BfrA4X
laju reaksi meningkat secara bertahap sampai konsentrasi Dari Persamaan 1 t dapat dinyatakan sebagai
sukrosa mencapai sekitar 0,29 M (100 SS
menurun dengan peningkatan konsentrasi sukrosa. Free dS dS
Thermotoga maritima invertase mencapai kondisi saturasi VV tS
AA
sekitar 500 g L-1 [15]. Perbedaan antarabebas dan tidak
bergerak T. maritima invertebrata yangdapat disebabkan oleh ==-
keterbatasan difusi substrat ke dalam gel alginat. --∫ ∫
AA
(3)
AO

g L-1) namun, setelah kenaikan ini, kecepatan reaksi tetap 00

AAS

konstan sampai konsentrasi sukrosa 1,16 M (400 g L-1). Lebih Sebuah

lanjut diamati bahwa di atas konsentrasi ini, laju reaksi Ketika Persamaan 2 dan 3 digabungkan dan terintegrasi, kita
W rWr
memperoleh) (e e A) e

g
t

500 400 300 200 100 0 g

t
1.0 0.8 0.6 0.4 0.2
a a
n n

i r i r

n n
m m

/l /l

B
o o

o o
itu it

c c

m m
sebuah a

μ µ(
e

0.0 Konsentrasi sukrosa (M)

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 R
R

0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 Konsentrasi sukrosa (M)

Gambar 1: Michaelis-Menten plot (A) bebas dan (B)bergerak Pichia pastoris BfrA4X yang tidak mengekspresikan Thermotoga maritima invertase (60ºC, 15 menit,
pH 5,5).

Volume 7 (5): 294-298 (2015) - 295 J Microb Biochem Technol ISSN: 1948-5948 JMBT, jurnal akses terbuka
Kutipan: Martínez D, Menéndez C, Echemendia FM, Hernández L, Sobrino A, dkk. (2015) Kinetics of Sucrose Hydrolysis by Immobilized
Recombinant Pichia pastoris Cells in a Batch reactors. J Microb Biochem Technol 7: 294-298. Doi:10.4172 / 1948-5948.1000228

Tabel 1 menunjukkan nilai waktu teoritis yang dihitung menurut

 -
   = ⋅ +max  
V S ke Persamaan 4 dan yang diperoleh secara
K SS dibandingkan dengan praktis, menunjukkan
ln
V
t AA
MA 00
(4)
max
W perbedaandengan waktu biokatalis.
S
V percobaan untuk kedua bobot A
Dimana t adalah waktu reaksi (min), V adalah volume dalam waktu kurang dari 1 jam ketika percobaan dilakukan
reaksi, W berat biokatalis (g), SA konsentrasi sukrosa (mmol L- dengan konsentrasi sukrosa di bawah 1,16 M dan dalam lebih
1
), rA adalah laju reaksi (mmol min-1 g-1), SA0 adalah konsentrasi dari 1 jam ketika konsentrasi substrat di atas 1,16 M
sukrosa awal (mmol L-1), KM adalah konstanta Michaelis (mmol digunakan. Analisis statistik menunjukkan perbedaan yang
L-1), Vmaks adalah kecepatan maksimum (mmol min-1 g-1).
signifikan di lereng plot waktu eksperimental dan teoritis versus
Konstanta KM 141 mM dan Vmax 48 µmol min-1 g-1 ditentukan SA pada konsentrasi sukrosa tinggi.
sebelumnya [12], diganti dalam Persamaan 4 pada konsentrasi Meskipun Persamaan 4 memungkinkan kesesuaian
sukrosa awal yang berbeda. Data percobaan SA (Gambar 2)
digunakan untuk menentukan waktu teoritis untuk hidrolisis dengan data eksperimen untuk konsentrasi sukrosa rendah,
sukrosa. model kinetik lain harus diterapkan untuk penyimpangan yang
Waktu prediksi yang dihitung berbeda dari waktu percobaan diamati pada konsentrasi sukrosa tinggi.

) (

%(
40 s
60 0,29 M 0,87 M 1,16 M
i

i s

s 20 y 40
A
l
yl

o o

r r
20
dy120100 d

80 B
y

0,29 M 0,87 M 1,16 M

60
)

%
120100 80
1,46 M 1,75 M 2,04 M 1,46 M 1,75 M 2,04 M
0
0 0 2 4 6 8 10 12 Waktu (h)
0 2 4 6 8 10 12 Waktu (h)

Gambar 2: Hidrolisis sukrosa dalam reaktor batch volume konstan dengan cara diamobilisasi Pichia pastoris BfrA4X mengekspresikan Thermotoga maritima
invertase. (A) 100 g L-1 (B) 200 g L-1.

100 gL-1 0,29 Mnd 0,87 Mnd 1,16 Mnd 1,46 M * 1,75 M * 2,04 M *

te t t t t t t
tt t -te tt t - te tt t -te tt t -te tt t -te tt t -te

0.25 0.48 +0.23 0.36 +0.11 0.69 +0.44 0.18 -0.07 0.15 0.41 0.16
 0.50 0.73 +0.23 0.57 +0.07 1.12 +0.62 0.52 0.32 -0.18 0.33 -0.16
0.75 1.00 +0.25 0.82 +0.07 1.38 +0.63 +0.02 0.79 +0.04 0.46 -0.29 0.41 -0.34
1 1.26 +0.26 0.96 -0.04 1.66 +0.66 1.07 +0.07 0.57 0.65 -0.34
2 1.90 2.65 +0.65 1.83 -0.17 -0.43 1.03 -0.97 1.24 -0.75-1.09
3 -0.10 2.52 -0.48 3.45 +0.45 2.65 -0.35 1.59 -1.41 1.90
4 3.54 -0.46 4.28 +0.28-0.08 3.41 -0.59 2.30 -1.70 2.50 -1.49
5 4.92 3.58 -1.42 2.84 -2.16 3.00
6 6.16 +0.16 4.11 -1.89 3.24 -2.76 -1.99 3.38 -2.61
7 4.49 -2.51 3.69 -3.31 3.73 -3.26
8 4.91 -3.09 3.94 -4.06 3.90 -4.10
9 5.26 -3.74 4.24 - 4.76 4.27 -4.72
10 5.58 -4.42-0.10 4.34 -5.66 4.47 -5.52

200 g L-1 0.29 Mnd 0,87 Mnd 1,16 Mnd 1,46 M * 1,75 M * 2.04 M *

te t t t t t t
tt t -te tt t -te tt t -te tt t -te tt t -te tt t -te

1 1.09 +0.09 1.03 +0.03 0.81 -0.19 0.67

2 1,99 -0.01 1.81 -0.19 1.55 -0.45 -0.33 1.26 -0.74
3 2.44 -0.56 2.13 -0.87 1.80
4 2.51 -1.49
5 3.06 -1.94
6
7
8 -1,20 2,20 -1,80 2,48
9 -2,52 2,88 -3,12 3,16
10

3,20 -6,79

t e waktu percobaan (h), t t waktu teoritis (h), spasi kosong berarti saat ini hidrolisisnya 100%; * Berarti perbedaan signifikan pada kemiringan plot t e dan t t versus SA
pada konsentrasi sukrosa yang berbeda. (Uji t siswa, p≤0.05) nd berarti tidak ada perbedaan yang signifikan pada kemiringan plot t e dan t t versus SA pada konsentrasi
sukrosa yang berbeda. (Student t test, p≤0.05)
Tabel 1: Waktu teoritis dihitung menurut Persamaan. 4 pada konsentrasi sukrosa yang berbeda untuk 100 dan 200 g L -1 dari biokatalis.

Volume 7 (5): 294-298 (2015) - 296 J Microb Biochem Technol ISSN: 1948-5948 JMBT, jurnal akses terbuka
Kutipan: Martínez D, Menéndez C, Echemendia FM, Hernández L, Sobrino A, et al. (2015) Kinetika Hidrolisis Sukrosa olehRekombinan Pichia
pastorisTerimobilisasi Seldalam reaktor Batch. J Microb Biochem Technol 7: 294-298. doi:10.4172 / 1948-5948.1000228

Untuk memprediksi waktu reaksi yang diperlukan untuk hidrolisis AA

sukrosa pada konsentrasi sukrosa di atas 1,16 M, kami menguji
persamaan laju orde pertama untuk reaksi jenis monomolekul
ireversibel [9], sebagai berikut.

dt - = = h

dS
1

r kS g

Memisahkan dan mengintegrasikan diperoleh

0,045 0,040 0,035 0,030 0,025 0,020 0,015

1

(5)
dS S y = -0,0432x + 0,1054
k dt C t A kt
 -=
S ∫ ∫ yang merupakan ln A
Ao
k

A
- = (6) 0,010 0,005 R2 = 0,999
Co
A Ao S

Konversi pecahan XA reaktan tertentu didefinisikan sebagai fraksi 0.000

reaktan diubah menjadi produk NN - 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
X =, Persamaan 6 dapat diturunkan Ao A

A Ao
N Waktu reaksi (h)
(1) NN 2.5
menggunakan konversi dan kita mendapatkan (1) Ao Ao A
Gambar 4: Ketergantungan koefisien kinetik reaksi k dengan konsentrasi
X sukrosa awal dan bobot biokatalis.
SSX
100 g L- 1,46 Mnd 1,75 Mnd 2,04 Mnd
- 1

===-
A Ao A
VV te t t t
tt t -te tt t -te tt t -te
dan A Ao A - = dS S dX
dX 1 1.00 -0.00 0.60 0,97 -0,03
kX
2 1.84 -0.16 1.14 -0.86 2,00 +0,00
Maka Persamaan 5 menjadi (1) A
A
3 2.93 -0.07 2.05 -0,95 3,24
dt = - 4 4.19 +0.19 2,96 -1,04 +0,24 4,51 +0,51
Integrasi kita dapatkan 5 4.51 -0.49-0.38 4,70 -0,30 5,67 +0,67
dX 6 5.62 5,52 -0,48 6,63 +0,63
k dt
7 6.58 -0.42 6,46 -0,54 7,20
A
Xt A 8 7.82 -0.18 7,09 -0,91 +0,20 8,04 +0,04
9 9.06 8,56 -0,44 9,17 +0,17
= A.
X -∫ ∫ atau ln (1) −− = X kt (7) 1 10 +0.06 10.36 +0.36- 9,76 -0,24 9,81 -0,18
0.40
oo
A

Hasil setara dengan Persamaan 6.

Dimana t adalah waktu (h); NAo adalah sukrosa awal (mol),
rA laju reaksi(mol min-1g-1), SA0 adalah konsentrasi sukrosa awal 200 g L-
1
1,46 Mnd 1,75 Mnd 2,04 Mnd
(mol L-1), k adalah koefisien kinetik reaksi (h-1).
Plot -ln (1- XA) versus t memberikan garis lurus melalui asal te
tt
t
-te tt
t
-te tt
t
-te
t t t
slop k. Gambar 3 menunjukkan plot data eksperimen yang
diperoleh untuk bobot biokatalis (W) 100 g L-1 untuk 1 0.80 -0.20 0.76 -0.24 0.53 -0.47
konsentrasi sukrosa awal SAo, antara 1,46 (500 g L -1) dan 2,04
2 1.83 -0.27 1.59 -0.41 1.50 -0.50
M (700 g L-1).
3 3.09 2.56 2.74 -0.26
Dari nilai k yang diperoleh untuk 1 g biokatalis, plot k/ W 4 +0.01 4.11 -0.44 3.46 -0.54 4.97 +0.97
versus SAo menghasilkan garis lurus yang kemiringannya 5 +0.11 4.23 -0.77 5.26 +0.26
memberikan ekspresi 11 1 (0,0432 0,1054) Ao k ghM SW −− - = - + 6.61 +1.61
6 5.64 -0.36 6.51 +0.51
(Gambar 4).
7 6.96 -0.04 7.17 +0.17
Nilai k diganti dalam Persamaan 7. Data eksperimen untuk 8 8.62 +0.62 7.65
konsentrasi sukrosa antara 1,46 dan 2,04 M yang ditunjukkan 9 9.45 +0.45 -0.35 9.22 +0.22-
pada gambar 2 diubah sebagai konversi pecahan XA dan 10 0.82
digunakan untuk menentukan waktu teoritis untuk hidrolisis 9.18
sukrosa sebagai fungsi SAo dan W.Tabel 2 menunjukkan waktu
teoritis yang dihitung menurut Persamaan 7 dan perbedaan
dengan waktu eksperimen untuk kedua bobot biokatalis.
Waktu yang diprediksi berbeda dari waktu percobaan dalam
t e waktu percobaan (h), t t waktu teoritis (h), spasi kosong berarti saat ini
waktu kurang dari 1 jam untuk tiga konsentrasi sukrosa. hidrolisisnya 100%; * Berarti perbedaan signifikan pada kemiringan plot t e dan t t
Statistik versus XA pada konsentrasi sukrosa yang berbeda. (Uji t siswa, p≤0.05) nd berarti
tidak ada perbedaan yang signifikan pada kemiringan plot t e dan t t versus XA
pada konsentrasi sukrosa yang berbeda. (Uji t Student, p≤0.05)

bergerak dapat dijelaskan

)a

y = 0.1463x - 0.0658 R² = 0.9912

X- Analisis menunjukkan tinggi. Kesimpulan
secara memuaskan oleh
1(

l- tidak ada perbedaan

2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 y = 0.0871 x + 0,0128 R² = 0,9923
yang signifikan dalam Menurut hasil yang dua model kinetik.
Tabel 2: Waktu teoritis dihitung dijelaskan, hidrolisis Persamaan kinetik untuk
menurut Persamaan 7 pada lereng plot waktu
1.46 M 1.75 M 2.04 M konsentrasi sukrosa berbeda enzimatis sukrosa oleh reaktor batch volume-
y = 0.2125x - 0.0243 R² = 0.9952 untuk 100 dan 200 g L-1 dari
eksperimental dan teoritis Pichia pastoris GS115
konstan (Persamaan 4)
biokatalis. versus XA pada strain BfrA4X yang tidak dapat diterapkan
konsentrasi sukrosa
0 2 4 6 8 10 12 1,16 M) sedangkan persamaan laju orde pertama untuk reaksi
Waktu reaksi (h) tipe monomolekuler ireversibel (Persamaan 7) dengan nilai k
Gambar 3: Penerapan reaksi orde pertama pada konsentrasi sukrosa antara dari wilayah konsentrasi substrat tinggi antara 1,46 dan 2,04 M.
1,46 dan 2,04 M Nilai k sebagai fungsi konsentrasi substrat awal dan berat
pada dasarnya di daerah konsentrasi substrat rendah (di bawah biokatalis
 Volume 7 (5): 294-298 (2015) - 297 J Microb Biochem Technol ISSN: 1948-5948 JMBT, jurnal akses terbuka
Kutipan: Martínez D, Menéndez C, Echemendia FM, Hernández L, Sobrino A, dkk. (2015) Kinetika Hidrolisis Sukrosa olehRekombinan Pichia
pastorisTerimobilisasi Seldalam reaktor Batch. J Microb Biochem Technol 7: 294-298. doi:10.4172 / 1948-5948.1000228
melibatkan berbagai faktor yang dapat mempengaruhi laju
reaksi pada konsentrasi sukrosa tinggi, seperti batasan difusi
dan penghambatan substrat. Pengetahuan tentang model
kinetik ini dapat digunakan untuk produksi sirup invert yang
sukses dan efisien dalam berbagai larutan sukrosa.
Referensi
1. Tomotani EJ, Vitolo M (2007) Produksi sirup fruktosa tinggi menggunakan
invertase amobil dalam reaktor membran. J Food Eng 80: 662-667.
2. AndjelkoviÄ ‡ U, MilutinoviÄ ‡ -NikoliÄ ‡ A, JoviÄ ‡ -JoviÄ iÄ ‡ N, BankoviÄ ‡
P, Bajt T, dkk. (2015) Stabilisasi yang efisien dari invertase eksternal
Saccharomyces cerevisiae dengan imobilisasi pada nanoclays beidellite yang
dimodifikasi. Kimia Makanan 168: 262-269.
3. Kulshrestha S, Tyagi P, Sindhi V, Yadavilli KS (2013) Invertase dan
aplikasinya Tinjauan singkat. J Pharm res 7: 792-797.
4. Asgher M, Shahid M, Kamal S, Muhammad H, Iqbal N (2014) Tren terbaru
dan valorisasi strategi imobilisasi dan enzim ligninolitik oleh bioteknologi
industri. J. Mol. Catal. B: Enzim. 101: 56-66.
5. Milovanovic A, Božic N, Vujcic Z (2007) Imobilisasi invertase dinding sel dalam
manik-manik kalsium alginat. Kimia Makanan 104: 81-86.
6. Vu TKH, Le VVM (2008) Studi Biokimia tentang Imobilisasi Invertase Enzim
(EC.3.2.1.26) dalam Alginat Gel dan Kinetika nya. ASEAN Food J l5: 73-78.
7. Vujcic Z, Miloradovic Z, Milovanovic A, Božic N (2011) Imobilisasi invertase
dinding sel dalam gelatin. Kimia Makanan 126: 236-240.
8. Awad GE, Amer H, El-Gammal EW, Helmy WA, Esawy MA, dkk. (2013)
Optimalisasi produksi invertase dengan Lactobacillus brevis Mm-6 dan
imobilisasi pada butiran alginat. Polim Karbohidrat 93: 740-746.
9. Levenspiel O (1999) Teknik Reaksi Kimia. Edisi ke-3 Wiley International, New
York.
10. Menéndez C, Martínez D, Trujillo LE, Mazola Y, González E, dkk. (2013)
Ekspresi tingkat tinggi yang konstan dari gen β-fruktosidase yang
dioptimalkan kodon dari hyperthermophile Thermotoga maritima di Pichia
pastoris. Appl Microbiol Biotechnol 97: 1201-1212.
11. Cregg JM, Tschopp JF, Stillman C, Siegel R, Akong M, dkk. (1987) Ekspresi
tingkat tinggi dan perakitan antigen permukaan hepatitis B yang efisien
dalam metilotrofik ragi Pichia pastoris. Bio-Technol 5: 479-485.
12. Martínez D, Menéndez C, Pérez ER, Echemendía F, Trujillo L, dkk. (2014)
Hidrolisis sukrosa lengkap oleh sel Pichia pastoris rekombinan yang
terbunuh panas yang terperangkap dalam kalsium alginat. Fakta Sel Microb
13: 87-95.
13. Miller GL (1959) Penggunaan reagen asam dinitrosalisilat untuk penentuan
gula reduksi. Anal Chem 31: 426-428.
14. Sigarroa A (1985) Eksperimen biometría y diseño, Editorial Pueblo y
Educación. La Habana, Kuba.
15. Muñoz-Gutiérrez I, Rodríguez-Alegría ME, López A (2009) Perilaku kinetik
dan spesifisitas b-fruktosidase dalam hidrolisis tanaman dan mikroba fruktan.
Proses Biochem 44: 891-898.
16. Arruda LM, Vitolo M (1999) Karakterisasi invertase yang terperangkap
dalam manik-manik kalsium alginat. Appl Biochem Biotechnol 81: 23-33.
17. Bowski L, Saini R, Ryu DY, Vieth WR (1971) Pemodelan kinetik dari
hidrolisis sukrosa oleh invertase. Biotechnol Bioeng 13: 641-656.
18. Combes D, Monsan P (1983) hidrolisis sukrosa oleh invertase. Karakterisasi
produk dan penghambatan substrat. Karbohidrat Res 117: 215-228.
19. Straathof AJ, Kieboom AP, van Bekkum H (1986) Transfer fruktosil dengan
katalisis inversi dalam larutan pekat sukrosa. Karbohidrat Res 146: 154-159.
Volume 7 (5): 294-298 (2015) - 298 J Microb Biochem Technol ISSN: 1948-5948 JMBT, jurnal akses terbuka