Pengaruh Nauclea subdita (Korth.) Steud.

ekstrak daun kemangi terhadap perubahan

hematologi dan histopatologi pada hati dan ginjal ikan patin yang terinfeksi Aeromonas
hydrophila

Tujuan:
Penelitian ini dilakukan untuk mengetahui khasiat Bangkal (dosis berbeda terhadapNauclea
subdita ekstrak daun)perubahan hematologi dan histologi pada ginjal dan hati ikan lele
(Pangasius hypophthalmus) yang terinfeksi Aeromonas hydrophila.

Bahan dan Metode:

Lele yang eksperimental terinfeksi A. hydrophila pada dosis 108 sel / mL melalui injeksi
intraperitoneal, dan hematologi dan histologi perubahan dalam ginjal dan hati ikan patin terhadap
patogen yang diamati.

Hasil:
Tidak semua konsentrasi N. subdita menimbulkan efek toksik pada ikan lele belang. Gejala
klinis ikan lele pasca infeksi A. hydrophila dan perlakuan N. subdita ekstrak daunmeliputi
perubahan morfologi dan perilaku. N. subdita Ekstrak daunmenurunkan angka kematian yang
disebabkan oleh A. hydrophila. Perlakuan dengan N. subdita ekstrak daunefektif menurunkan
inflamasi dengan menurunkan aktivitas neutrofil, monosit, dan limfosit. The Hb dan Ht tingkat
lele menurun secara signifikan setelah terpapar 108 sel / mL A. hydrophila dan meningkat secara
signifikan setelah N.subdita. pengobatan  Persentase nekrosis di ginjal dan hati juga menurun
setelah N. subdita pengobatan.

Kesimpulan:
Hasil penelitian menunjukkan bahwa N. subdita ekstrak daunmerangsang kekebalan dan
meningkatkan daya tahan ikan lele terhadap A. hydrophila.N. subdita Ekstrak daundapat
digunakan sebagai sumber potensial untuk pengembangan obat dan aplikasi makanan di masa
depan.
Kata kunci: Aeromonas hydrophila, hematologi, histopatologi, Nauclea subdita
 
Pendahuluan
Budidaya ikan di Indonesia khususnya di Kalimantan Selatan berkembang pesat sebagai
akibat dari meningkatnya kebutuhan ikan. Ikan lele (Pangasius hypophthalmus) merupakan ikan
air tawar yang populer dan mudah dibudidayakan dalam kondisi marginal. Budidaya intensif
dengan kapasitas penebaran tinggi dapat menyebabkan penurunan kualitas lingkungan, sehingga
ikan rentan terhadap penyakit [1]. Ikan yang mengalami penyakit dan stres akibat degradasi
lingkungan cepat mati karena kekurangan oksigen. Degradasi lingkungan juga memungkinkan
perkembangan dan pertumbuhan organisme pathogen. Penyakit infeksi yang disebabkan oleh
bakteri merupakan masalah serius dalam budidaya ikan. Motile Aeromonas septicemia (MAS)
atau penyakit bercak merah merupakan penyakit menular yang disebabkan oleh Aeromonas
hydrophila dan sering terjadi pada ikan mas, lele, dan nila. Serangan MAS pada stok ikan
seringkali menjadi bencana karena dapat membunuh benih ikan dengan tingkat kematian
mencapai 80-100% dalam waktu 1-2 minggu. Patogen juga menyebar dengan cepat pada padat
tebar tinggi. Wabah penyakit yang disebabkan oleh A. hydrophila sering terjadi pada masa
peralihan dari musim kemarau ke musim hujan.
Perawatan khas untuk mengendalikan MAS adalah penggunaan bahan kimia atau
antibiotik, tetapi ini menciptakan resistensi bakteri terhadap antibiotik jika digunakan terus
menerus. Dampak negatif lainnya adalah akumulasi antibiotik tersebut di jaringan, terutama
jaringan tulang, yang menimbulkan risiko kesehatan bagi konsumen. Residu obat dan antibiotik
sintetik terakumulasi dalam daging ikan, membunuh organisme non-target, mengakibatkan
resistensi obat antibiotik, mempengaruhi pertumbuhan dan kemampuan reproduksi ikan, serta
menyebabkan pencemaran lingkungan. Oleh karena itu, diperlukan suatu alternatif berupa
senyawa bioaktif dari tumbuhan yang memiliki sifat antibakteri alami untuk mengendalikan
penyakit tersebut secara aman dan ramah lingkungan.
Nauclea subdita (Korth.) Steud. adalah tumbuhan semiakuatik yang tumbuh di lahan
basah, Kalimantan, Indonesia. Senyawa aktif seperti fenolat, saponin, tanin, dan alkaloid dalam
tanaman berpotensi menghilangkan bakteri pathogen. Zona hambat yang dibuat oleh kulit dan
daun lebih besar daripada bagian lain dari tanaman. Namun, penelitian ini terbatas pada ekstraksi
sederhana, sehingga hasil yang diperoleh tidak memberikan kontribusi yang signifikan baik bagi
pengetahuan maupun masyarakat.
 Penelitian ini bertujuan untuk menganalisis efektivitas senyawa bioaktif Bangkal (N.
subdita) (Korth.) Steud. sebagai bakterisida alami untuk mengendalikan A. hydrophila pada
budidaya ikan lele.

Bahan dan Metode

Persetujuan etis
Penelitian ini telah disetujui oleh Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan, Universitas
Brawijaya, Malang, Indonesia (persetujuan no. 940-KEP-UB).

Desain penelitian
Sebanyak 15 ekor ikan lele dewasa (P. hypophthalmus) digunakan dalam penelitian ini.
Bibit lele sehat (panjang 10-12 cm) diperoleh dari Balai Benih Ikan Mojokerto. Sebelum
pengujian eksperimental, ikan diaklimatisasi selama 7-10 hari dalam media pemeliharaan
(kapasitas 15 L) di bawah kondisi laboratorium. Rancangan acak lengkap dengan lima kelompok
perlakuan digunakan dalam penelitian ini, dan setiap perlakuan diulang 3 kali:
K=Ikan sehat tanpa A. hydrophila infeksi
A=Ikan dengan A. hydrophila infeksitanpa perlakuan
B=Ikan dengan A. hydrophila infeksidan sebuah N.subdita ekstrak daundosis 50 mg / L
C = Ikan dengan A. hydrophila infeksidan N. subdita ekstrak daun dosis 100 mg / L
D = Ikan dengan A. hydrophila infeksidan N. subdita ekstrak daun dosis 150 mg/L.

Studi Toksisitas N. subdita Ekstrak Daun

Lima benih ikan ditempatkan ke dalam lima wadah penelitian dengan 10 L air. Kemudian
N. subdita ekstrak daunditambahkan ke dalam masing-masing wadah dengan konsentrasi sebagai
berikut: 62,5 mg/L, 125 mg/L, 250 mg/L, 500 mg/L, dan 1000 mg/L. Untuk setiap konsentrasi,
tiga ulangan dipertahankan. Mortalitas ikan diamati setiap 12 jam selama 96 jam, dan
konsentrasi yang menghasilkan 50% kematian ditentukan sebagai dosis mematikan (LD50).
Studi patogenisitas A. hydrophila
Untuk uji patogenisitas, lima lele diperkenalkan ke lima kontainer penelitian dengan 10
air L, dan A. hydrophila ditambahkan ke dalam wadah masing-masing dengan kepadatan berikut:
106 sel / mL, 107 sel / mL, 108 sel / mL, 109 sel / mL, dan 1010 sel / mL. Tingkat kelangsungan
hidup ikan dicatat setelah 24 jam, dan LD50 ditentukan.

Uji Toksisitas Letal danN. subdita Perlakuan

Sepuluh ikan ditempatkan ke dalam 10 wadah penelitian, dan suspensi A. hydrophila
ditambahkan ke lima wadah percobaan. Gejala infeksi diamati, dan setelah 24-36 jam, N. subdita
ekstrak daunditambahkan dalam dosis perlakuan yang berbeda 50 mg/L, 100 mg/L, dan 150
mg/L [10]. Pengamatan dan pengukuran dilakukan setiap 24 jam. Tingkat kematian ikan
ditentukan pada akhir penelitian. Parameter kualitas air meliputi suhu, pH, dan oksigen terlarut
dicatat pada awal dan akhir penelitian.

Pengumpulan sampel
Darah dikumpulkan dari kelompok kontrol dan perlakuan menggunakan
mikrohematokrit. Darah yang terkumpul dimasukkan ke dalam tabung 1 mL yang sudah berisi
antikoagulan, dan diukur Hb, sel darah merah, dan sel darah putih. Sampel darah yang tersisa
disentrifugasi pada 12.000 rpm selama 5 menit.

Analisis hematologi
RBC dan WBC dihitung dengan hemositometer. Konsentrasi Hb diukur dengan metode
Bijanti (Bijanti, 2005). Eritrosit dihitung menurut rumus standar:

Diferensiasi leukosit Diferensiasi

leukosit dianalisis pada apusan darah yang diwarnai dengan Giemsa 10% dan diamati di
bawah mikroskop dengan 100x. Jenis leukosit ditentukan dan dihitung sampai total 100 sel
dihitung.

Analisis histopatologi
Pada akhir percobaan, tiga ikan dari masing-masing kelompok diambil sampelnya setelah
96 jam pemaparan untuk analisis histologis. Ikan yang dirawat dibunuh dan dibedah untuk
diambil ginjal dan hatinya. Organ difiksasi dalam formalin 10% dan disiapkan untuk pewarnaan
Hematoxylin-Eosin (H&E). Preparat yang diwarnai diamati di bawah mikroskop cahaya pada
400x.

Analisis statistik
Data dianalisis secara statistik pada p<0,05 dan signifikansi dihitung dengan analisis uji
varians menggunakan SPSS for Windows.

HASILPEMBAHASAN

Uji Toksisitas N. subdita Ekstrak Daun

Dan Uji toksisitas N. subdita terhadap P. hypophthalmus tidak mengakibatkan ikan mati
pada salah satu kelompok eksperimen. Tingkat kelangsungan hidup ikan lebih tinggi dari 92% di
bawah pemberian N. subdita pada dosis apapun. Disimpulkan bahwa N. subdita tidak memiliki
efek toksik pada ikan lele belang pada konsentrasi dosis apapun.
 
Uji patogenisitas A. hydrophila
The patogenisitas A. hydrophila untuk lele ditentukan dengan angka kematian 100% pada
dosis 1 × 1010 sel / mL setelah 48 jam dan 1 × 10 9 sel / mL setelah 96 h. Disimpulkan bahwa lele
rentan terhadap A. hydrophila pada dosis 1 × 109 sel / mL dan 1 × 1010 sel / mL, mengakibatkan
kemerahan gerakan kulit dan lambat(Tabel-1).

Tanda-tanda klinis setelah N.subdita pengobatan

A dosis 1 × 108 sel / mL A. hydrophila digunakan untuk uji hidup untuk menginfeksi lele
bergaris untuk 96 h. Setelah 24 jam pengobatan dengan N. subdita, tanda-tanda klinis muncul
pada ikan yang dirawat. Hasilnya konsisten dengan hasil Abdelhamed et al., di mana tanda-tanda
klinis hadir 24 jam setelah A. hydrophila infeksisampai beberapa hari setelah infeksi, tergantung
pada ukuran dan kekebalan ikan. Dalam penelitian lain, tanda-tanda klinis muncul 6 jam setelah
infeksi A. hydrophila.
 Gejala klinis setelah infeksi meliputi usus kosong, perubahan warna tubuh, perilaku
berenang yang salah, ekor berwarna kemerahan, dan sirip ekor bergerigi. Lele menunjukkan
perubahan morfologi dan perilaku setelah infeksi A. hydrophila dan perlakuan N. subdita ekstrak
daun. Gejala muncul 24 jam setelah infeksi A. hydrophila dengan metode perendaman.
Hasil penelitian menunjukkan bahwa N. subdita ekstrak daundapat menurunkan angka kematian
akibat A. hydrophilapenyakit MAS yang diinduksi. Senyawa aktif dalam N. subdita daunadalah
flavonoid, saponin, tanin, dan triterpenoid berdasarkan uji fitokimia. Menurut penelitian
sebelumnya, senyawa ini memiliki sifat antibakteri yang menghambat pertumbuhan bakteri.
Tidak ada ikan mati yang ditemukan dalam penelitian ini setelah N. subdita perlakuan ekstrak
daun, yang mungkin disebabkan oleh senyawa fenolik dan flavonoid yang berperan sebagai
antioksidan. Senyawa fenolik berkontribusi pada mekanisme oksidatif dengan mendegradasi
spesies oksigen reaktif. Antioksidan menurunkan stres oksidatif dan dapat digunakan sebagai
suplemen untuk mencegah penyakit.

Diferensiasi leukosit
Hasil penelitian menunjukkan bahwa tingkat neutrofil meningkat secara signifikan
(2,42%) setelah A. hydrophila infeksidibandingkan dengan ikan sehat (0,38%). Setelah perlakuan
dengan N. subdita ekstrak daun, tingkat neutrofil menurun secara signifikan pada semua
konsentrasi dosis. Namun kadar neutrofil terendah ditemukan setelah N. subdita
perlakuan(1,388%) dengan dosis 100 mg/L diikuti dengan perlakuan dengan dosis 50 mg/L
(1,47%) dan 150 mg/L (2,08%). ). Peningkatan neutrofil berkontribusi pada aktivitas
antimikroba. Neutrofil dalam darah meningkat setelah infeksi dan bertindak sebagai pertahanan
pertama dalam tubuh. Menurut Sahan dkk., neutrofil berperan dalam pertahanan melawan infeksi
bakteri dan bermigrasi ke pembuluh darah dengan adanya stimulasi inflamasi.
 
Kadar monosit setelah N. subdita perlakuanjuga mengalami penurunan yang signifikan
pada semua konsentrasi dosis (18,38%, 18,37%, dan 17,15%) (p<0,05) dibandingkan dengan
ikan yang terinfeksi (22,44%). Kadar monosit terendah ditemukan pada dosis 100 mg/L. Monosit
adalah prekursor makrofag, yang terlibat dalam pertahanan melawan infeksi bakteri melalui
mekanisme fagositosis. Tingkat limfosit menurun secara signifikan (75,14%) setelah infeksi A.
hidrofil dibandingkan dengan ikan sehat (90,30%) dengan berubah menjadi sel-B dan
memproduksi antibodi untuk menghilangkan bakteri.
Pemberian N. subdita ekstrak daunpada ikan yang terinfeksi menyebabkan peningkatan
persentase limfosit pada semua konsentrasi dosis (80,17%, 80,24%, dan 80,78%). Peningkatan
jumlah leukosit disebabkan oleh aktivasi neutrofil, monosit, dan limfosit untuk mengeliminasi
bakteri melalui beberapa mekanisme. Penelitian ini menunjukkan bahwa pengobatan dengan N.
subdita ekstrak daunefektif dalam mengurangi peradangan dengan menurunkan aktivasi
neutrofil, monosit, dan limfosit.

Parameter hematologi
Hb dan Ht ikan lele menurun secara signifikan setelah terpapar konsentrasi subletal A.
hydrophila (108 sel/mL) (7,63 mg/dl) dibandingkan dengan ikan sehat (9,40 mg/dl). Rata-rata
kadar Hb pada ikan percobaan berkisar antara 9,30 – 10,33 mg/dl, sedangkan rata-rata kadar Hb
pada ikan lele berkisar 9,40 mg/dl. Nilai Hb meningkat secara signifikan (p<0,05) setelah N.
subdita perlakuan ekstrak daundibandingkan dengan A. hydrophilaikan yang terinfeksi.
Peningkatan Hb ditemukan untuk semua konsentrasi dosis pada N. subdita perlakuan, dan kadar
Hb tertinggi ditemukan pada dosis 100 mg/L N. subdita.

Terjadi penurunan hemoglobin pada ikan yang diberi perlakuan karena persaingan
oksigen antara ikan dan patogen: Tingkat hemoglobin pada ikan bervariasi menurut spesies ikan,
pH darah, kondisi lingkungan , dan tekanan parsial oksigen. Hb terlibat dalam proses
katabolisme untuk menghasilkan energi dengan mengikat oksigen. Kemampuan darah mengikat
oksigen tergantung pada kadar hemoglobin yang terkandung dalam eritrosit. Hidayat dkk.
melaporkan bahwa kadar Hb yang rendah menyebabkan penurunan laju metabolisme dan
produksi energi. Oleh karena itu, kadar Hb yang rendah membuat beberapa ikan bergerak lambat
dan tidak memiliki respon makan. Tanda klinis ini dapat diamati 12 jam setelah infeksi A.
hydrophila pada ikan lele.

Hasil penelitian menunjukkan bahwa setelah A. hydrophila infeksi, kadar Ht menurun

secara signifikan dibandingkan dengan ikan sehat (26,67% vs 21,33%). Dosis 100 mg/mL N.
subdita menghasilkan kadar Ht tertinggi (26,33%) dibandingkan dengan konsentrasi dosis
lainnya (50 mg/mL = 24,33%; 150 mg/mL = 25%). Kadar hematokrit bervariasi menurut faktor
nutrisi, umur, jenis kelamin, ukuran tubuh, dan masa pemijahan. Hematokrit dapat digunakan
sebagai parameter untuk mengetahui status kesehatan dan kelainan ikan. Menurut Shen dkk.,
tingkat Ht pada Teleostei ikanberkisar antara 20 hingga 40%. Kadar hematokrit <22% akan
menyebabkan anemia pada ikan. Anemia memiliki dampak pada metabolisme ikan dan
pertumbuhan sebagai rendahnya jumlah hasil eritrosit di berkurangnya pasokan nutrisi ke sel-sel,
jaringan, dan organ. Peningkatan Ht setelah N. subdita perlakuanmenunjukkan bahwa status
kesehatan ikan yang terinfeksi juga meningkat.
Berdasarkan, plasma darah ikan yang sehat biasanya berwarna putih bening atau bening
kekuningan. Plasma darah pada ikan yang dirawat berwarna bening kemerahan, yang
menunjukkan adanya hemolisis yang disebabkan oleh A. hydrophila infeksi, seperti yang
ditunjukkan oleh Mastan

Bening Perubahan histopatologis pada hati dan ginjal

Hasil penelitian menunjukkan bahwa A. hydrophila infeksimeningkatkan nekrosis hati
secara signifikan (p<0,05) pada ikan lele yang terinfeksi dibandingkan dengan ikan yang sehat.
N. subdita Perlakuan ekstrak daunmenurunkan nekrosis hati secara nyata (p<0,05) dibandingkan
dengan ikan yang terinfeksi

Jaringan hati yang terinfeksi A. hydrophila menunjukkan nekrosis dan pembengkakan sel
hati yang ditandai dengan adanya vakuola. Pembengkakan sel terjadi karena ketidakseimbangan
elektrolit antara sel dalam dan sel luar. Sel-sel yang memompa cairan ke luar menyebabkan
pergerakan cairan ekstraseluler ke dalam; sementara itu, sel-sel kehilangan kemampuannya
untuk memompa ion natrium. Akibatnya, sel akan kehilangan integritasnya, menyebabkan
kematian sel (nekrosis). Pembengkakan sel akan berkurang jika infeksi bakteri menghilang.
Namun, sel tidak dapat mentolerir kerusakan yang disebabkan oleh infeksi yang berkepanjangan
dan akan mengalami nekrosis.

A. hydrophila Infeksimeningkatkan nekrosis ginjal secara signifikan (p<0,05) pada Pangasius

ikandibandingkan dengan ikan sehat. N. subdita Perlakuan ekstrak daunmenurunkan nekrosis
ginjal secara nyata (p<0,05) dibandingkan dengan ikan yang terinfeksi
 Nekrosis ginjal disebabkan oleh pembengkakan sel epitel di tubulus ginjal, memicu
proliferasi glomerulus diikuti oleh lisis di kapsul Bowman. Ginjal adalah organ ekskresi dan
karenanya rentan terhadap patogen. Ginjal memiliki dua fungsi utama: Mengekskresikan
sebagian besar produk metabolisme akhir dan mengatur konsentrasi cairan tubuh.
N. subdita mengandung metabolit sekunder seperti tanin, alkaloid, dan senyawa fenolik,
yang berperan sebagai bakterisida alam. Daun, kulit kayu, dan akar Nauclea latifolia, N. subdita,
dan Nauclea officinalis juga diketahui mengandung alkaloid, flavonoid, dan tanin. Beberapa
fitokimia seperti tanin, alkaloid, dan flavonoid yang terbukti memiliki sifat antibakteri pada ikan.
Ekstrak metanol dari kulit kayu dan daun Nauclea obversifolia menunjukkan efek antibakteri
yang lebih tinggi, menunjukkan bahwa fraksinasi meningkatkan aktivitas antibakteri kulit kayu
dan akar kulit. Fraksi etil asetat paling efektif dalam menghambat pertumbuhan bakteri. Ekstrak
N. latifolia akarlebih efektif daripada ekstrak kulit kayu dan daun. Ekstrak tumbuhan
mengandung senyawa aktif yang meniru obat sintetis dalamin vitro studi. Tanin berfungsi
sebagai bakteriostatik dan bakterisida terhadap bakteri patogen, termasuk A. hydrophila,
Escherichia coli, Listeria, Pseudomonas, Salmonella, Staphylococcus, dan Streptococcus
Fitokimia seperti polifenol juga diharapkan memiliki efek penghambatan pada bakteri.
Tanin memiliki toksisitas dan menghambat beberapa enzim dalam mikroorganisme . The
latifolia N. ekstrak mengandung polifenol, antioksidan dan antibakteri senyawa pertempuran
patogen, seperti Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, E.coli,dan Candida .

Kesimpulan
Penelitian ini menunjukkan bahwa N. subdita ekstrak dauntidak memiliki efek toksik
pada ikan lele kupas pada konsentrasi dosis 50 mg/L, 100 mg/L, dan 150 mg/L. Selanjutnya, N.
subdita ekstrakmengurangi kematian dan peradangan, meningkatkan nilai hemoglobin dan
hematokrit, dan memperbaiki nekrosis ginjal dan hati setelah infeksi A. hydrophila.

Kontribusi Penulis
 SA berkontribusi pada konsepsi, desain penelitian, dan manuskrip yang dirancang. AP
melakukan akuisisi data. MM melakukan analisis dan/atau interpretasi data. AY memperbaiki
naskah. Semua penulis membaca dan menyetujui naskah akhir.

Analisis komputasi ekstrak etil asetat Nauclea subdita (Korth.) Steud. daun sebagai
penghambat glikosiltransferase peptidoglikan pada Aeromonas hydrophila 

Untuk mengutip artikel ini: S Aisiah et al 2020 IOP Conf. Ser.: Lingkungan Bumi. Sci. 584
012022 Lihat artikel online untuk pembaruan dan penyempurnaan. Konten ini diunduh dari
alamat IP 140.213.67.65 pada 15/09/2021 di 08:08 Konten dari karya ini dapat digunakan di
bawah persyaratan lisensi Creative Commons Attribution 3.0. Distribusi lebih lanjut dari karya
ini harus mempertahankan atribusi kepada penulis dan judul karya, kutipan jurnal dan DOI.
Diterbitkan di bawah lisensi oleh IOP Publishing Ltd International Conference on Fisheries and
Marine IOP Conf. Seri: Ilmu Bumi dan Lingkungan 584 (2020) 012022 Penerbitan TIO
doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022 1 Analisis komputasi ekstrak etil asetat Nauclea subdita
(Korth.) Steud. daun sebagai penghambat peptidoglikan glikosiltransferase pada Aeromonas
hydrophila S Aisiah1 , Olga1 , WA Tanod2 , Y Salosso3 , Bambang4 , dan PH Riyadi5 1
Program Studi Perikanan Budidaya, Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas Lambung
Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan 70714, Indonesia 2 Institut Perikanan dan Kelautan
(Sekolah Tinggi Perikanan dan Kelautan), Palu 94118, Sulawesi Tengah, Indonesia 3 Program
Studi Perikanan Budidaya, Fakultas Ilmu Kelautan dan Perikanan, Universitas Nusa Cendana,
Kupang, Nusa Tenggara Timur, Indonesia 4 Instruktur Perikanan Kabupaten Banjar Satminkal
BPPP Banyuwangi, Kalimantan Selatan, Indonesia 5 Jurusan Teknologi Hasil Ikan, Fakultas
Perikanan dan Ilmu Kelautan, Universitas Diponegoro, Semarang, Jawa Tengah 50275,
Indonesia E-mail: sitiaisiah@ulm.ac.id 

Abstrak.

Aeromonas hydrophila merupakan penyebab penyakit Motile Aeromonad Septicemia (MAS)

pada ikan air tawar yang sering endemik dan menimbulkan kerugian yang cukup besar dalam
usaha budidaya ikan air tawar. Aeromonas hydrophila termasuk dalam kelompok bakteri gram
negatif dan memiliki dinding sel yang kompleks yang terdiri dari tiga lapisan, yaitu lapisan luar
berupa lipoprotein, lapisan tengah berupa lipopolisakarida dan lapisan dalam berupa
peptidoglikan. Analisis GC-MS ekstrak etil asetat daun Nauclea subdita diuji secara in silico.
Tujuh senyawa hasil analisis GC-MS berpotensi sebagai inhibitor glikosiltransferase
peptidoglikan dengan probabilitas aktif tertinggi. Peptidoglikan glycosyltransferases berperan
dalam siklus sel, bentuk sel, dan dinding sel. Dalam penelitian ini, kami melakukan docking
molekuler tujuh senyawa untuk peptidoglikan glikosiltransferase. Energi Afinitas Ikatan
(Kkal/mol) tujuh senyawa lebih baik dibandingkan beta-laktam sebagai kontrol pembanding.
Tujuh dari empat belas senyawa yang ditemukan juga mematuhi aturan Lipinski pada lima
kriteria untuk menunjukkan bahwa senyawa ini aman digunakan sebagai obat oral. 

1. Pendahuluan 

Motile aeromonad septicemia (MAS) merupakan penyakit yang sering menyerang unit budidaya
ikan. Penyakit MAS disebabkan oleh infeksi Aeromonas hydrophila yang menyerang ikan air
tawar di Kalimantan Selatan, Indonesia. A. hydrophila merupakan salah satu bakteri yang paling
umum menginfeksi ikan air tawar secara global [1]. Karakteristik A. hydrophila yang bersifat
metropolitan di lingkungan perairan memungkinkan kontak dengan ikan dan amfibi. Kontak ini
dapat menyebabkan infeksi tergantung pada spesies dan tingkat virulensinya [2]. A. hydrophila
dapat menyebabkan tingkat kematian hingga 100% dari populasi budidaya ikan. Konferensi
Internasional Nasional Perikanan dan Kelautan IOP Conf. Seri: Ilmu Bumi dan Lingkungan 584
(2020) 012022 TIO Publishing doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022 2 Komisi Kesehatan Ikan
dan Lingkungan telah menetapkan penyakit ini sebagai salah satu penyakit ikan utama di
Indonesia [3]. A. hydrophila merupakan bakteri gram negatif yang memiliki lapisan
lipopolisakarida dan peptidoglikan pada dinding selnya. Peptidoglikan merupakan makromolekul
seperti jaring yang menyelubungi bakteri Gram-negatif, berperan dalam memberikan bentuk
bakteri, dan melindungi bakteri dari tekanan osmotik yang tinggi [4]. Glycosyltransferases
terkait dengan bagian sitoplasma dari membran [5]. Dengan menghambat pembentukan
peptidoglikan glikosiltransferase, aktivitas antibakteri memastikan bahwa bakteri tidak dapat
mempertahankan bentuknya dan mempertahankan diri terhadap regangan osmotik. Tumbuhan
Bangkal tergolong dalam genus Nauclea, salah satu tumbuhan rawa di Kalimantan, Indonesia.
Daun Bangkal dapat berfungsi sebagai antibakteri alami untuk pengobatan infeksi A. hydrophila
pada budidaya ikan air tawar. Studi literatur menunjukkan bahwa tanaman Bangkal
menghasilkan bioaktif dari kelompok tanin, alkaloid, terpenoid, saponin, dan fenolik. Ekstrak
daun N. latifolia dilaporkan menghasilkan alkaloid bioaktif, flavonoid, dan saponin [6]. Daun,
kulit kayu, dan akar N. latifolia, N. subdita, dan N. officianalis dilaporkan mengandung alkaloid,
tanin, dan fenolat, terpenoid, dan saponin [7, 8, 9, 10]. Zat bioaktif seperti tanin, alkaloid, dan
flavonoid telah menunjukkan aktivitas antibakteri pada ikan [11]. Mekanisme kerja antibakteri
masing-masing metabolit memiliki karakter spesifik untuk menghambat pertumbuhan bakteri.
Berbagai aktivitas yang berkembang karena senyawa bioaktif memiliki berbagai efek sinergis
berdasarkan karakteristik dan morfologi bakteri [12]. Idealnya, suatu zat antimikroba, termasuk
zat antibakteri, akan memiliki toksisitas selektif, artinya zat antimikroba merugikan patogen
tertentu tetapi tidak membahayakan inangnya. Mekanisme kerja sebagian besar zat antimikroba
dibagi menjadi 1) penghambatan sintesis dinding sel, 2) penghambatan fungsi membran sel, 3)
penghambatan sintesis protein, dan 4) penghambatan sintesis asam nukleat. 5) mengganggu
struktur membran sel [13]. Penggunaan antibiotik dan bahan kimia sintetik untuk mengobati ikan
yang terinfeksi kini mulai ditinggalkan. Penggunaan bahan alam yang menggunakan ekstrak
tumbuhan digunakan untuk mengendalikan infeksi A. hydrophila. Penelitian sebelumnya telah
menganalisis ekstrak etil asetat dari daun Nauclea subdita dengan GCMS dan menemukan bahwa
14 senyawa dan 12 di antaranya adalah terpenoid [14]. Senyawa terpenoid memainkan berbagai
peran dalam susu, obat-obatan, kosmetik, hormon, dan vitamin [15]. Senyawa terpenoid bereaksi
dengan sisi aktif membran, melepaskan konstituen lipid, dan meningkatkan permeabilitas [16].
Sebagai obat senyawa terpenoid bekerja sebagai antibakteri dengan cara merusak membran sel
bakteri. Dalam penelitian ini, analisis komputasi senyawa GC-MS dilakukan dengan mengamati
docking molekuler dan mekanisme antimikroba ekstrak etil asetat Nauclea subdita (Korth.)
Steud. sebagai penghambat pembentukan peptidoglikan pada dinding sel A. hydrophila.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui potensi dan mekanisme kerja senyawa yang
terkandung dalam ekstrak etil asetat daun N. subdita (analisis GC-MS) menggunakan studi
komputasi sebagai inhibitor peptidoglikan glikosiltransferase. Pada penelitian ini
divisualisasikan docking molekuler antara senyawa (ligan) dengan protein reseptor peptidoglikan
glikosiltransferase. Posisi adhesi reseptor protein, jenis ikatan antara ligan-reseptor, dan jalur
senyawa sebagai penghambat glikosiltransferase peptidoglikan telah diketahui.

2. Bahan dan Metode

Analisis komputasi (in silico) adalah metode yang digunakan untuk merancang obat dengan
komputerisasi dengan memilih protein target, memvisualisasikan struktur protein target, dan
mengembangkan molekul obat atau senyawa kimia berdasarkan protein target. Analisis
dilakukan terhadap 14 senyawa hasil analisis Gas Chromatografi Mass Spectrometry (GC-MS)
ekstrak daun Bangkal. Langkah-langkah yang dilakukan dalam penelitian ini: · Menganalisis
prediksi aktivitas senyawa potensial dalam ekstrak etil asetat daun Bangkal menggunakan
prediksi WAY2DRUG PASS [17]. Cari nilai kemungkinan aktif (Pa) untuk prediksi aktivitas
terkait antibakteri. Nilai Pa adalah nilai yang menggambarkan aktivitas potensial suatu senyawa.
Jika nilai Pa lebih dari 0,7, ini menunjukkan bahwa senyawa tersebut memprediksi Konferensi
Internasional Perikanan dan Kelautan IOP Conf. Seri: Ilmu Bumi dan Lingkungan 584 (2020)
012022 Penerbitan TIO doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022 3 memiliki potensi aktivitas tinggi
sebagai uji komputasi atau laboratorium. Jika nilai Pa lebih dari 0,3 tetapi kurang dari 0,7,
senyawa tersebut memiliki kemampuan komputasi sebagai antibakteri, tetapi belum terbukti
dalam uji laboratorium. · Urutan protein glikosiltransferase peptidoglikan yang digunakan dalam
penelitian ini diunduh dari Uniprot (https://www.uniprot.org/) dengan nomor entri
A0A081UYK9. Protein peptidoglikan glikosiltransferase dipilih berdasarkan analisis potensi
aktivitas ekstrak etil asetat daun Bangkal. · Urutan protein dimodelkan menggunakan metode
pemodelan homologi menggunakan server web (https://swissmodel.expasy.org/). · Senyawa
(analisis GC-MS) disimulasikan molecular docking menggunakan software PyRx 0.8 untuk
mengetahui energi afinitas ikatan dan kemampuan senyawa berikatan dengan protein
peptidoglikan glikosiltransferase [18]. · Interaksi ikatan divisualisasikan menggunakan perangkat
lunak Discovery Studio Visualizer. · Senyawa (analisis GC-MS) dianalisis sebagai obat-mirip
menurut aturan Lipinski dengan Perangkat Lunak SwissAdme [19]. · Senyawa dianalisis untuk
prediksi Toksisitas dengan software Protox II [20]. 

3. Hasil dan Pembahasan

3.1 Hasil

Profil bioaktif ekstrak etil asetat daun N. subdita menggunakan GC-MS ditemukan empat belas
senyawa. Hasil analisis GC-MS dapat dilihat pada Tabel 1. Tabel 1. Profil bioaktif ekstrak etil
asetat daun N. subdita berdasarkan analisis GC-MS No Compounds Formula PubChem (CID)
Metabolites Golongan 1 Beta-caryophyllene C15H24 5281515 Terpenoid 2 Alfa guaiena
C15H24 5317844 Terpenoid 3 Seychellene C15H24 519743 Terpenoid 4 Selina -3,7(11)-diena
C15H24 522296 Terpenoid 5 Methandrostenolon C20H28O2 6300 Steroid 6 Alpha panasinsen
C15H24 571015- Terpenoid terpenoid 7 (Terpenoid 9 (+)-aromadendrene C15H24 11095734
Terpenoid 10 Allo-aromadendrene C15H24 42608158 Terpenoid 11 Longifolen C15H24
1796220 Terpenoid 12 Alpha-Bulnesene C15H24 94275 Terpenoid 13 Asam Phthalic C8H6aktif
pada Senyawa Terpenoid 14 1017 Terpenoid Terpenoid .subdita) diprediksi berpotensi sebagai
antibakteri menggunakan prediksi WAY2DRUG PASS, dibandingkan dengan kontrol
komparatif beta -laktam. Nilai Pa (Probability to active) adalah nilai yang menggambarkan
potensi suatu senyawa. Senyawa bioaktif dalam ekstrak etil asetat daun Bangkal (N. subdita)
yang memiliki nilai Pa berbeda disajikan pada Gambar 1. Gambar 1 menunjukkan hanya tujuh
dari empat belas senyawa yang memiliki nilai Pa di atas 0,5. Kemudian ketujuh senyawa tersebut
dihitung secara molecular docking menggunakan software PyRx 0.8 untuk mengetahui energi
afinitas ikat dan kemampuan senyawa tersebut dalam mengikat protein reseptor peptidoglikan
glikosiltransferase. Energi afinitas ikat senyawa dalam ekstrak etil asetat daun Bangkal dapat
dilihat pada Gambar 2. International Conference on Fisheries and Marine IOP Conf. Series: Ilmu
Bumi dan Lingkungan 584 (2020) 012022 TIO Publishing doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022
4 Gambar 1. Potensi ekstrak daun bangkal dengan WAY2DRUG PASS sebagai penghambat
peptidoglikan glikosiltransferase Konferensi Internasional Perikanan dan Kelautan TIO Conf .
Seri: Ilmu Bumi dan Lingkungan 584 (2020) 012022 TIO Publishing doi:10.1088/1755-
1315/584/1/012022 5 Gambar 2. Energi afinitas pengikatan (Kkal/mol) dari tujuh senyawa
dengan protein reseptor peptidoglikan glikosiltransferase Selanjutnya, simulasi molekuler
docking antara tujuh senyawa dengan protein reseptor peptidoglikan glikosiltransferase yang
divisualisasikan dengan software Discover Studio Visualizer. Visualisasi molecular docking
dapat dilihat pada Gambar 3. Gambar 3 menunjukkan tujuh senyawa (analisis GCMS) dari
ekstrak etil asetat daun Bangkal (N. subdita), yang dapat berikatan dengan sisi aktif protein
reseptor peptidoglikan glikosiltransferase. Kemudian posisi pengikatan divisualisasikan dalam 2
dimensi sehingga posisi ikatan protein reseptor asam amino dengan ligan (senyawa) dapat
diketahui. Visualisasi 2 dimensi dapat dilihat pada Gambar 4. Gambar 4 menunjukkan tujuh
senyawa (analisis GC-MS), terdapat interaksi ikatan hidrofobik dan ikatan hidrogen dengan
protein reseptor. Interaksi ikatan hidrofobik terjadi antara Seychellene dan Longifolen yang
mengikat protein reseptor di Lysine (A:350) dengan jarak 4,10 dan 3,79 (masing-masing).
Selina-3,7 (11) -diena berinteraksi dengan protein reseptor dengan ikatan hidrofobik, pada Prolin
(A:272) dengan jarak 4,06 . Methandrostenolone berinteraksi dengan ikatan hidrofobik di Leusin
(A:216) pada jarak 4,34 . Alpha panasinsen berinteraksi dengan protein reseptor dengan ikatan
hidrofobik, dalam Tirosin (A:24) dengan jarak 3,48 . Ikatan hidrogen terjadi antara asam ftalat
yang berinteraksi dengan protein reseptor pada Prolin (A:176) dengan jarak 2,14 . Nilam alkohol
berinteraksi dengan protein reseptor melalui ikatan hidrogen, dalam serin (A:76) pada jarak
2,09 . Dalam kontrol perbandingan, beta-laktam berinteraksi dengan protein reseptor melalui
ikatan hidrogen di Glutamin (A:127) pada jarak 2,40 . Selanjutnya, tujuh senyawa dari ekstrak
etil asetat daun N. subdita dianalisis jalurnya sebagai inhibitor peptidoglikan glikosiltransferase.
Analisis jalur dilakukan dengan software STITCH. Dari database STITCH, hanya diperoleh
empat senyawa yang dapat digambarkan sebagai jalur, yaitu logifolene, phthalic acid, patchouli
alcohol, dan seychellene. Analisis jalur dapat dilihat pada Gambar 5. Tujuh senyawa kemudian
dianalisis dengan software SwissAdme. Analisis bertujuan untuk mengetahui kemiripan senyawa
tersebut sebagai senyawa obat. Analisis kemiripan obat dengan SwissAdme disajikan pada Tabel
2. Konferensi Internasional Perikanan dan Kelautan IOP Conf. Seri: Ilmu Bumi dan Lingkungan
584 (2020) 012022 TIO Publishing doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022 6 Gambar 3.
Visualisasi molekuler docking tujuh senyawa dengan protein reseptor peptidoglikan
glycosyltransferase Patchouli alcohol Asam ftalat Longifolen Alpha panasinsen
Methandrostenolon Selina -3,7(11)-diene Seychellene Beta Lactam Konferensi Internasional
Perikanan dan Kelautan Konferensi IOP. Seri: Ilmu Bumi dan Lingkungan 584 (2020) 012022
Penerbitan TIO doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022 7 Gambar 4. Visualisasi 2 dimensi tujuh
senyawa dengan protein reseptor peptidoglikan glikosiltransferase Patchouli alcohol Asam ftalat
Longifolen Alpha panasinsen Methandrostenolon Selina -3,7(11)-diene Seychellene Beta Lactam
Konferensi Internasional Perikanan dan Kelautan Konferensi IOP. Seri: Ilmu Bumi dan
Lingkungan 584 (2020) 012022 TIO Publishing doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022 8 Gambar
5. Mekanisme jalur sebagai penghambat peptidoglikan glikosiltransferase Kemudian ketujuh
senyawa dianalisis untuk memprediksi toksisitasnya dengan Pro-Tox Software II untuk
menentukan prediksi LD50. Toksisitas dinilai dalam LD50 dalam satuan mg/kg berat badan.
LD50 adalah dosis mematikan rata-rata, di mana 50% subjek uji mati setelah terpapar suatu
senyawa. Kelas toksisitas ditentukan menurut sistem klasifikasi pelabelan kimia yang
diselaraskan secara global (GHS). Sistem kelas LD50, yaitu Kelas I: fatal (LD50 5); Kelas II:
sangat beracun (5 5000). Hasil analisis LD50 dari 7 senyawa aktif analisis GC-MS dengan Pro-
Tox II disajikan pada Tabel 3. Longifolene Phthalic Acid Patchouli Alcohol Seychellene
International Conference on Fisheries and Marine TIO Conf. Seri: Ilmu Bumi dan Lingkungan
584 (2020) 012022 Penerbitan TIO doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022 9 Tabel 2. Analisis
kemiripan obat Senyawa Berat Molekul < 500 Dalton (g/mol) Lipofilisitas Tinggi (dinyatakan
sebagai Log P < 5) Donor Ikatan Hidrogen < 5 Akseptor Ikatan Hidrogen < 10 Refraksi Molar
40-130 Alpha panasinsen 204,35 5,65 0 0 66,62 Methandrostenolon 300,44 3,73 1 2 89,73 Selina
-3, 7(11)-diena 204,35 4,63 0 0 68,78 Longifolen 204,35 5,65 0 0 66,88 Asam ftalat 166,13 1,20
2 4 40,36 Nilam alkohol 222,37 3,81 1 1 68,56 Seychellene 204,35 5,65 0 0 66,88 Beta-Lactam
188,18 -3,28 4 5 46,24 Tabel 3. Prediksi LD50 dengan Senyawa Pro-Tox II Prediksi LD50
(mg/kg) Kelas Seychellene 5000 V Selina -3,7(11)-diene 4400 V Methandrostenolon 1000 IV
Alpha panasinsen 3700 V Longifolen 5000 V Phthalic acid 2530 V Patchouli alcohol 940 IV
Beta-Lactam 5000 V 

3.2Pembahasan 

Peptidoglikan glycosyltransferase merupakan enzim yang berperan dalam biosintesis

peptidoglikan Saya n pembentukan dinding sel bakteri [21]. Dengan menghambat kerja enzim
peptidoglikan glikosiltransferase, bakteri tidak dapat mensintesis peptidoglikan, sehingga bakteri
tidak dapat mempertahankan bentuknya dan melindungi diri terhadap tekanan osmotik.
Penelitian sebelumnya melaporkan bahwa setelah inkubasi, 12 jam perlakuan ekstrak etil asetat
daun Bangkal terlihat dinding sel A. hydrophila terganggu. Setelah inkubasi 24 jam terlihat
kerusakan pada dinding sel A. hydrophila [22]. Pada penelitian ini diduga turunan terpenoid dari
ekstrak etil asetat daun Bangkal berperan dalam kerusakan dinding sel. Penelitian ini mendukung
hasil penelitian sebelumnya yang melaporkan senyawa minyak atsiri dari golongan terpenoid
dapat mengganggu dinding sel bakteri [23]. Senyawa terpenoid eucalyptol dilaporkan
menyebabkan kerusakan sel bakteri gram negatif dengan membuat dinding sel bakteri bocor
[24]. Demikian juga dilaporkan bahwa senyawa minyak atsiri dari terpenoid dapat menyebabkan
pelepasan konstituen sel bakteri gram negatif [25]. Senyawa terpenoid dapat mempengaruhi
permeabilitas membran luar sel bakteri. Senyawa terpenoid diketahui berinteraksi dengan
membran fosfolipid penyusun sel bakteri, dalam hal efek fulidasi dan pengenalan molekul
lipofilik yang berperan sebagai penyusup dalam struktur struktur membran bilayer lipid bakteri.
Senyawa antibakteri dapat bereaksi dengan komponen fosfolipid dan menyebabkan lisis sel [28].
Sel yang mengalami lisis akan menyebabkan terlepasnya dinding sel pada bakteri gram negatif
yang disebut spheroplasts. Senyawa golongan terpenoid dapat menghambat membran
sitoplasma, sintesis asam nukleat, merusak dinding sel. Mereka juga dapat menghambat
konsumsi oksigen dengan mengganggu kinerja rantai elektron pada bakteri patogen. Kandungan
senyawa dalam ekstrak etil asetat daun Bangkal, umumnya tergolong terpenoid. Oleh karena itu,
ekstrak etil asetat daun Bangkal dapat mengganggu dinding sel A. hydrophila dengan cara
menghambat kerja enzim peptidoglikan glikosiltransferase yang berperan dalam biosintesis
peptidoglikan. Konferensi Internasional Perikanan dan Kelautan Konferensi IOP. Seri: Ilmu
Bumi dan Lingkungan 584 (2020) 012022 TIO Publishing doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022
10 Prinsip kerja senyawa dalam ekstrak etil asetat daun Bangkal mirip dengan Beta-laktam.
Beta-laktam bekerja untuk membunuh bakteri dengan menghambat sintesis dinding sel. Pada
proses pembentukan dinding sel, terjadi reaksi transpeptidasi yang dikatalisis oleh enzim
transpeptidase, dan menghasilkan ikatan silang antara dua rantai peptidoglikan. Enzim
transpeptidase yang terletak pada membran sitoplasma bakteri dapat mengikat beta-laktam
sehingga enzim ini tidak mampu mengkatalisis reaksi transpeptidasi meskipun dinding sel terus
terbentuk. Dinding sel yang terbentuk tidak memiliki ikatan silang, dan peptidoglikan yang
terbentuk tidak sempurna, sehingga lebih lemah dan mudah terdegradasi. Dalam kondisi normal,
perbedaan tekanan osmotik pada sel bakteri gram negatif dapat menyebabkan lisis sel. Selain itu,
kompleks protein transpeptidase dan antibiotik beta-laktam merangsang senyawa autolisin, yang
dapat mendigitalkan dinding sel bakteri. Dengan demikian, dinding sel bakteri mengalami lisis
dan akhirnya mati. Gambar 2 menunjukkan senyawa hasil analisis GC-MS memiliki energi
afinitas ikat yang lebih rendah dibandingkan beta-laktam. Hal ini menunjukkan bahwa tujuh
senyawa (analisis GC-MS) dapat berikatan dengan protein reseptor peptidoglikan
glikosiltransferase. Pernyataan ini, diperkuat oleh visualisasi pada Gambar 3, menunjukkan
kemampuan senyawa untuk mengikat dengan baik ke situs aktif protein reseptor. Jenis ikatan
antara tujuh senyawa dengan protein reseptor, yaitu alkil hidrofobik dan hidrogen, menunjukkan
kemampuan tujuh senyawa sebagai inhibitor. Zat yang berperan sebagai inhibitor memiliki
banyak ikatan hidrofobik dan hidrogen [30]. Dalam interaksi senyawa (ligan) dengan protein
(reseptor), ada tiga jenis utama ikatan kimia: ikatan kovalen, ikatan elektrostatik, dan ikatan
hidrofobik. Ikatan kovalen adalah ikatan yang kuat dan tidak reversibel dalam kondisi biologis.
Ikatan elektrostatik lebih umum daripada ikatan kovalen dalam interaksi reseptor dan ligan,
termasuk ikatan hidrogen dan van der Wals. Ikatan hidrofobik merupakan ikatan yang relatif
lemah tetapi sangat penting dalam interaksi reseptor dan ligan yang sangat larut dalam lemak
dengan lemak dari membran sel, termasuk ikatan alkil. Analisis jalur dengan STITCH pada
Gambar 5 menunjukkan mekanisme longifolene sebagai inhibitor peptidoglikan
glikosiltransferase, melalui protein gpp (guanosin). Protein gpp mengkatalisis konversi pppGpp
(guanosin pentaphosphatase) menjadi ppGpp (guanosine phosphatase). Protein pppGpp adalah
molekul sinyal sitoplasma yang berperan dalam mengatur kebutuhan asam amino bakteri.
Longifolene menghambat respon rangsangan ekstraseluler pada membran sel bakteri dengan
menghambat kebutuhan asam amino dalam membentuk membran peptidoglikan [31, 32, 33].
Peptidoglikan merupakan polimer yang terdiri dari gula dan asam amino yang membentuk
lapisan di luar membran plasma pada sebagian besar bakteri dan berperan dalam pembentukan
dinding sel. Dengan menghambat kebutuhan asam amino bakteri, membran peptidoglikan tidak
dapat dibentuk. Gambar 5 juga menunjukkan bahwa longifolene juga bisa bertindak sebagai
inhibitor peptidoglikan melalui dinBàdnaEàdnaNàPola jalur. Rantai ini merupakan protein yang
berperan dalam menghambat metabolisme pirimidin. Dalam sintesis peptidoglikan, tahap
pertama glutamin menyumbangkan gugus amino ke gula, fruktosa 6-fosfat. Ini mengubah
fruktosa 6-fosfat menjadi glukosamin-6-fosfat. Pada langkah kedua, gugus asetil dipindahkan
dari asetil KoA ke gugus amino dalam glukosamin-6-fosfat, yang menghasilkan N-asetil-
glukosamin-6-fosfat. Pada tahap ketiga dari proses sintesis, N-asetil-glukosamin-6-fosfat
diisomerisasi, yang akan mengubah N-asetilglukosamin-6-fosfat menjadi N-asetil-glukosamin-1-
fosfat [35]. N-asetil-glukosamin-1-fosfat, yang sekarang menjadi monofosfat pada tahap
keempat, menggunakan UTP (Uridine triphosphate). UTP merupakan nukleotida pirimidin, dapat
berperan sebagai sumber energi. Dalam reaksi khusus ini, setelah monofosfat menggunakan
UTP, pirofosfat anorganik dilepaskan dan digantikan oleh monofosfat, membentuk UDP-N-
asetilglukosamin (Ketika UDP digunakan sebagai sumber energi, ia melepaskan fosfat
anorganik) [36]. Tahap awal ini digunakan untuk membuat prekursor NAG (N-asetil-
glukosamin) dalam peptidoglikan [34]. Oleh karena itu, dengan menghambat metabolisme
pirimidin, bakteri tidak mendapatkan energi untuk mensintesis peptidoglikan. Gambar 5 juga
menunjukkan peptidoglikan mekanisme inhibitor jalur oleh asam ftalat melalui nadCà
nTambahkanàNADBàNada jalur. Rantai protein ini merupakan protein yang berperan dalam
proses biosintesis nukleotida pirimidin. Nukleotida pirimidin dapat bertindak sebagai sumber
energi [36]. Konferensi Internasional Perikanan dan Kelautan Konferensi IOP. Seri: Ilmu Bumi
dan Lingkungan 584 (2020) 012022 TIO Publishing doi:10.1088/1755-1315/584/1/012022 11
Kemampuan asam ftalat menghambat biosintesis nukleotida pirimidin sehingga bakteri tidak
mendapatkan energi dalam mensintesis peptidoglikan. Gambar 5 menunjukkan mekanisme
penghambat peptidoglikan oleh patchouli alkohol melalui jalur farnesyl pyrophosphate (FPP)
sebagai katalis untuk longifolene synthase (LgfS). LgfS mengkatalisis biosintesis longifolene
menggunakan FPP sebagai substrat langsung melalui reaksi polisiklisasi. Bakteri gram negatif
menggunakan sebagian FPP untuk sintesis oktaprenil pirofosfat (OPP) dan undekaprenil
pirofosfat (UPP) sebagai bagian dari metabolisme primernya [37]. OPP bertanggung jawab untuk
mensintesis rantai samping kuinon isoprenoid, ubiquinone-8, dan demethylmenaquinone-8, yang
penting untuk rantai pernapasan [38]. UPP merupakan komponen penting yang terlibat dalam
konstruksi dinding sel peptidoglikan [39]. Gambar 5 juga menunjukkan mekanisme jalur
penghambat peptidoglikan oleh seychellene melalui jalur farnesyl pyrophosphate (FPP). Namun,
berbeda dengan jalur patchouli alcohol. Seychellene, bersama dengan alpha-guaiene, alpha-
bulnesene, alpha-patchoulene, dan alkohol nilam, merangsang farnesyl pyrophosphate (FPP).
FPP berperan dalam sintesis undecaprenyl pyrophosphate (UPP) yang terlibat dalam membangun
dinding sel peptidoglikan [39]. Analisis druglikeness, menurut aturan Lipinski, menunjukkan
bahwa tujuh senyawa yang berpotensi sebagai penghambat glikosiltransferase peptidoglikan
dapat berfungsi sebagai obat karena memenuhi standar Five Lipinski Rules. Comprehensive
Medicinal Chemistry (CMC), Derwent World Drug Index (WDI) dan Modern Drug Data Report
(MDDR) mengumpulkan database senyawa yang memiliki kemiripan dengan obat secara oral,
yang dikenal dengan Rules of Five (RO5), yaitu berat molekul (

< 500 Hari); Lipofilisitas tinggi (dinyatakan sebagai LogP ><5); kurang dari lima donor ikatan
hidrogen; kurang dari sepuluh akseptor ikatan hidrogen; dan refraksi molar antara 40-130 [19].
Selain itu, prediksi toksisitas dari tujuh senyawa yang termasuk dalam kelas V yaitu golongan
dengan LD50 yang aman digunakan. Oleh karena itu, secara komputasi ekstrak etil asetat N.
subdita (Korth.) Steud. daun, berpotensi sebagai antibakteri yang aman dengan mekanisme kerja
sebagai inhibitor peptidoglikan glikosiltransferase pada bakteri gram negatif seperti A.
hydrophila. 
4. Kesimpulan

Simulasi komputasi dan docking molekuler tujuh dari empat belas senyawa (GC-MS) memiliki
potensi terkuat sebagai inhibitor peptidoglikan glikosiltransferase, yaitu logifolena, asam ftalat,
patchouli alkohol, selina-3,7(11)-diena, methandrostenolon, alfa panasinsen, dan seychellene.
Ketujuh senyawa tersebut berinteraksi dengan protein reseptor melalui ikatan hidrofobik dan
hidrogen. Tujuh senyawa bertindak sebagai inhibitor peptidoglikan glikosiltransferase dengan
menghambat kebutuhan A. hydrophila dalam memperoleh asam amino dan energi. >

The potential of bangkal leaf (Nauclea subdita [Korth.] Steud.) extract as antibacterial in
catfish Pangasius hypophthalmus culture

Potensi ekstrak daun bangkal (Nauclea subdita [Korth.] Steud.) sebagai antibakteri pada
budidaya ikan lele Pangasius hypophthalmus

 1,2Siti Aisiah, 1Arief Prajitno, 1Maftuch, 1Ating Yuniarti 1 Fakultas Perikanan dan Ilmu
Kelautan, Program Pascasarjana, Universitas Brawijaya, Jl . Veteran, Malang, Jawa Timur
65165, Indonesia; 2 Jurusan Budidaya Perairan, Fakultas Perikanan dan Kelautan, Universitas
Lambung Mangkurat, Banjarbaru, Kalimantan Selatan 70714, Indonesia. Penulis korespondensi:
S. Aisiah, sitiaisiah@ulm.ac.id Abstrak. Penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi
kemampuan ekstrak daun bangkal (Nauclea subdita [Korth.] Steud) sebagai antibakteri terhadap
Aeromonas hydrophila pada Pangasius hypophthalmus (in vitro dan in vivo). Daun Bangkal
diekstraksi dalam pelarut metanol, etil asetat, dan n-heksana. Ekstrak diuji untuk kokultur
dengan A. hydrophila. Fraksi terbaik dari uji kokultur dievaluasi untuk konsentrasi hambat
minimum (MIC), konsentrasi bakterisida minimum (MBC), dan Scanning Electron Microscope
(SEM). Uji in vivo mengevaluasi tingkat kelangsungan hidup ikan yang terinfeksi setelah
pemberian ekstrak dan koloni A. hydrophila ke dalam darah ikan. Uji kokultur menunjukkan
bahwa fraksi etil asetat memiliki kemampuan terbaik untuk membunuh A. hydrophila. Uji KHM
fraksi etil asetat dapat menghambat pada dosis minimal 25 mg L -1 . Uji MBC menunjukkan
bahwa A. hydrophila tidak dapat tumbuh pada 50 mg L -1 (2xMIC). Selain itu, analisis SEM
menunjukkan kerusakan sel bakteri A. hydrophila setelah pemberian fraksi etil asetat N. subdita
500 mg L -1. Tingkat kelangsungan hidup muncul pada dosis 100 mg L -1 , di mana kematian
ikan lele tidak terjadi. Pengamatan koloni bakteri pada darah ikan lele tidak menunjukkan adanya
pertumbuhan bakteri pada perlakuan ekstrak 100 dan 150 mg L -1 . Oleh karena itu, fraksi etil
asetat 100 mg L -1 direkomendasikan untuk mengatasi infeksi yang disebabkan oleh A.
hydrophila. Kata Kunci: bakteri, uji kokultur, MIC, MBC, SEM. Pengantar. Motile Aeromonad
Septicemia (MAS), yang disebabkan oleh Aeromonas hydrophilla, telah menjadi masalah serius
dalam budidaya air tawar. Beberapa penelitian melaporkan adanya wabah MAS pada beberapa
spesies ikan air tawar, antara lain Anguilla anguilla (Esteve et al 1993), Clarias gariepinus
(Angka et al 1995), Oreochromis niloticus (Yambot 1998), Carrasius auratus (Maji et al 2006),
Pangasius hypophthalmus (Olga et al 2006) dan udang air tawar Macrobrachium rosenbergii
(Abdolnabi et al 2015). Tingkat kematian larva ikan yang terinfeksi A. hydrophilla dilaporkan
mencapai 80-100% dalam waktu 1-2 minggu (Cipriano 2001). Secara umum, antibiotik telah
diterapkan untuk mengendalikan penyakit, tetapi penggunaan antibiotik yang tidak tepat dalam
jangka panjang menyebabkan terjadinya bakteri multiresistensi. Studi yang dilakukan oleh
Vivekanandhan et al (2002) menemukan bahwa A. hydrophila resisten terhadap 15 antibiotik
termasuk methicillin dan rifampicin (100%), bacitracin dan novobiocin (99%), dan
chloramphenicol (3%). Resistensi terhadap antibiotik -laktam juga terdeteksi pada A. hydrophilla
di peternakan ikan Portugal Utara (Saavedra et al 2004). Selanjutnya, diseminasi spesies resisten
antibiotik diamati sebagai hasil transfer gen resistensi horisontal (Schmidt et al 2001). Oleh
karena itu, perlu dicari pengobatan alternatif lain untuk mengendalikan penyakit MAS ini.
Pengendalian hayati menggunakan tanaman obat merupakan metode yang menjanjikan untuk
mengendalikan bakteri patogen. Beberapa tanaman obat telah dievaluasi kemampuannya sebagai
antibakteri terhadap A. hydrophila, seperti Avicennia sp. ekstrak (Mulyani et al 2013), Euphorbia
hirta (Salosso & Jasmanindar 2014), Rhizophora mucronata (Pradana et al 2014), Impatiens
balsamica L. (Kusuma et al 2014), Plumeria alba (Ikrom et al 2014), Andrographis paniculata
(Sinaga dkk 2016). AACL Bioflux, 2019, Volume 12, Issue 6. http://www.bioflux.com.ro/aacl
2094 Nauclea subdita ([Korth.] Steud.), Rubiaceae, merupakan tanaman tropis yang tumbuh di
beberapa tempat, seperti seperti dataran rendah, rawa, sungai, sungai dan hutan. Di Indonesia,
spesies ini dikenal sebagai tanaman obat tradisional untuk mengobati demam, nyeri, karies gigi,
septik oral, malaria, disentri, diare, dan penyakit terkait sistem saraf pusat, seperti epilepsi
(Abbah et al 2010). Umumnya, Nauclea sp. menghasilkan metabolit sekunder, seperti tanin,
fenolat, steroid dan alkaloid (Amos et al 2005; Ettebong et al 2014; Liew et al 2015). Beberapa
penelitian menunjukkan bahwa Nauclea sp. merupakan antimikroba potensial terhadap beberapa
bakteri. Batang dan kulit N. subdita efektif terhadap patogen air laut Vibrio parahaemoliticus dan
V. alginolyticus (Jamaluddin et al 2015). Meskipun daun N. subdita tersedia melimpah, masih
belum ada penelitian untuk mengevaluasi potensinya sebagai antibakteri. Oleh karena itu,
penelitian ini bertujuan untuk mengevaluasi kemampuan ekstrak daun N. subdita dalam berbagai
pelarut sebagai antimikroba terhadap A. hydrophila secara in vitro dan in vivo pada Pangasius
hypophthalmus. Bahan dan Metode. Penelitian ini dilaksanakan selama 5 bulan, Januari hingga
Mei 2019. Daun Bangkal (N. subdita) dikumpulkan dari bantaran sungai Desa Bangkal,
Kecamatan Cempaka, Banjabaru, Kalimantan Selatan, dan dibawa ke Laboratorium Kimia
Organik Fakultas Ilmu Dasar, Universitas Islam Negeri, Malang, Jawa Timur. Kultur bakteri dan
uji antibakteri dilakukan di Laboratorium Penyakit dan Kesehatan Ikan Fakultas Perikanan dan
Ilmu Kelautan Universitas Brawijaya. Ekstraksi daun N. subdita. Daun N. subdita dibersihkan,
dipotong kecil-kecil dan dikeringkan pada suhu 60ºC semalaman. Daun kering diblender hingga
halus dan diekstraksi menggunakan metode modifikasi berdasarkan Fatin et al (2012). Seratus g
serbuk N. subdita direndam dalam 400 mL metanol, etil asetat dan n-heksana berturut-turut
selama 72 jam. Campuran tersebut kemudian dipisahkan menggunakan kertas saring Whatman
42. Ekstrak yang diperoleh diuapkan dengan menggunakan vacum rotary evaporator pada suhu
40ºC. Produk penguapan kemudian digunakan untuk pengujian antimikroba. Uji antimikroba.
Penelitian ini menggunakan bakteri Aeromonas hydrophila (ATCC 35654). Isolat ini merupakan
koleksi Stasiun Karantina Ikan Kupang, Indonesia. Uji antimikroba dilakukan dengan
menggunakan uji kokultur berdasarkan Fukuda et al (2008) dan Moutinho et al (2017). Lima mL
media Tryptic Soy Broth (TSB) diinokulasi dengan 100 L kultur stok semalam, kemudian
ditambahkan 500 L ekstrak N. subdita masing-masing nheksana, etil asetat dan metanol. Kultur
bakteri tanpa ekstrak digunakan sebagai kontrol. Proses inkubasi dilakukan pada suhu 30°C
selama 24 jam. Hasil co-culture assay kemudian dilakukan pada media plat glutamate starch
phenol (GSP) menggunakan metode total plate count (TPC). Semua perlakuan memiliki 3
ulangan. Ekstrak kemampuan tertinggi untuk menghambat A. hydrophila kemudian digunakan
untuk pengujian berikutnya. Konsentrasi hambat minimum (MIC) dan konsentrasi bakterisida
minimum (MBC). Uji konsentrasi hambat minimum (KHM) dilakukan dengan metode difusi
cakram lapis ganda (Duan et al 2006) untuk mengetahui daya hambat dan dosis bahan aktif yang
menghasilkan zona hambat terbesar. Uji KHM menggunakan metode modifikasi Akhter et al
(2008). Kultur semalaman A. hydrophila (1 x 1010 cfu mL -1 ) dimasukkan ke dalam medium
Tryptic Soy Agar (TSA) semi padat pada suhu ±40oC selama 24 jam, kemudian dituang ke
dalam medium bacto agar. Kertas cakram dengan 30 L ekstrak (konsentrasi antara 12,5 mg L -1
sampai 1.000 mg L -1 ), kontrol positif (Gentamycin 120 mcg) dan kontrol negatif (cakram
kosong) diterapkan pada media dan diinkubasi pada suhu 30oC selama 24 jam. Konsentrasi
bakteri minimum (KBM) dilakukan dengan mencampurkan kultur semalam A. hydrophila (1x
1010 cfu mL-1 ) dengan ekstrak N. subdita pada konsentrasi 0,5-16 kali KHM selama 24 jam.
Sebanyak 100 L ekstrak campuran dikultur ke dalam Pseudomonas Aeromonas Selective Agar
(GSP) pada suhu ±37oC selama 24 jam untuk mendapatkan jumlah bakteri total. Pemindaian
mikroskop elektron (SEM) bakteri. Vizualisasi dengan SEM (FEI inscpect 550) dilakukan untuk
mengamati A. hydrophila setelah perlakuan dengan N. subdita AACL Bioflux, 2019, Volume 12,
Issue 6. http://www.bioflux.com.ro/aacl 2095 ekstrak. Pengamatan dilakukan setelah inkubasi 12
dan 24 jam kemudian dibandingkan dengan A. hydrophila tanpa ekstrak. Analisis in vivo.
Analisis in vivo potensi N. subdita dilakukan pada ikan lele Pangasius sp. berat rata-rata
21,22±0,2 g. Uji tantang dengan A. hydrophilla (1,108 CFU mL -1 ) dilakukan melalui
perendaman selama 24 jam. Tanda-tanda klinis infeksi A. hydrophilla diamati setelah 24 jam.
Setelah itu, perlakuan dengan ekstrak etil asetat N. subdita diterapkan pada berbagai konsentrasi
(50-150 mg L -1 ) dengan perendaman selama 60 menit. Perlakuan tanpa ekstrak N. subdita juga
diambil sebagai kontrol. Ikan kemudian disimpan di tangki budidaya (10# per akuarium 15 L).
Tingkat kelangsungan hidup ikan dan jumlah A. hydrophila dalam darah ikan dihitung setelah 7
hari infeksi. Penghitungan bakteri dalam darah ikan didasarkan pada metode Karam El-Din et al
(2010). Analisis statistik. Untuk membandingkan antara perlakuan dan kontrol, analisis varians
satu arah (ANOVA) diterapkan pada tingkat signifikansi p <0,05 menggunakan SPSS versi 13.0.
Perbedaan yang signifikan antara perlakuan terungkap dengan Uji Jarak Berganda Duncan.

 HASIL DAN PEMBAHASAN Uji antimikroba. Dalam penelitian ini, N. subdita diekstraksi
menggunakan tiga pelarut yang berbeda, yaitu metanol, etil asetat dan n-heksana. Untuk
mengungkapkan pengaruh ekstrak N. subdita pada pertumbuhan A. hydropila, uji kultur bersama
dilakukan selama 96 jam (Tabel 1). Tabel 1 Jumlah bakteri total A. hydrophila yang dikultur
dengan ekstrak N. subdita dengan pelarut yang berbeda Jumlah bakteri total (CFU mL -1 ) (jam)
Tidak Pelarut 24 h 48 h 72 h 96 h 1 Metanol 0,00 0,00 194x104±0,08 155x10 4± 0,10 2 Etil
asetat 0,00 0,00 0,00 0,00 3 n-heksana 0,00 29,5x106±0,75 20,02x1010±0,27 >200x1010±0,00 4
Kontrol 20,3x109±0,7 23.1x1010±0,51 >200x1010±0,00 >200x1010±0,00 Catatan: terlalu
banyak untuk dihitung ( tntc) = > 200 koloni per filter yang akan diberi skor (Haas & Heller
1988). Tabel 1 menunjukkan bahwa setelah inkubasi 24 jam, semua A. hydrophila yang dikultur
dengan penambahan N. subdita yang diekstraksi dalam berbagai pelarut tidak menunjukkan
pertumbuhan. Sebaliknya, kultur bakteri tanpa ekstrak (perlakuan kontrol) menunjukkan
pertumbuhan yang signifikan hingga 2,03 x10 10 CFU mL -1 . Dalam 24 jam berikutnya, labu
bakteri dengan penambahan N. subdita terekstraksi n-heksan menunjukkan pertumbuhan yang
signifikan (2,95 x107 CFU mL -1 ) dan terus meningkat hingga terlalu banyak untuk dihitung
pada 96 jam. Situasi serupa juga diamati pada kultur A. hydrophilla dengan penambahan N.
subdita yang diekstraksi metanol setelah 72 jam. Tidak ada pertumbuhan yang hanya terdeteksi
pada bakteri yang dikultur dengan penambahan ekstrak etil asetat N. subdita bahkan setelah 96
jam kultur (Tabel 1). Aktivitas antibakteri menunjukkan bahwa N. subdita yang diekstraksi etil
asetat mengandung fitokimia aktif yang bertanggung jawab untuk eliminasi bakteri. Aktivitas
antibakteri telah didokumentasikan dalam genus Nuclea seperti N. latifolia (Okwori et al 2008;
Okechukwu et al 2015), N. pobeguinii (Seukep et al 2016) dan N. obversiffolia (Khan et al
2001). MIC dan MBC. MIC adalah konsentrasi senyawa antimikroba terendah untuk mencegah
pertumbuhan bakteri. Hasil uji KHM disajikan pada Tabel 2. Sebagai pelengkap KHM, KBM
ditentukan dengan menggunakan uji in vivo. Uji MBC menunjukkan adanya pertumbuhan
bakteri pada konsentrasi 0,5 KHM atau 12,5 mg L-1 (Tabel 3). Temuan yang sama seperti MIC
juga dikonfirmasi di MBC bahwa konsentrasi minimum untuk menghambat A. hydrophila adalah
25 mg L -1 setelah 24 jam. Selain itu, populasi A. hydrophyla terdeteksi setelah 48 jam. Tidak
ada pertumbuhan A. hydrophilla yang diamati setelah 24 dan 48 jam dengan penambahan ekstrak
N. subdita minimal AACL Bioflux, 2019, Volume 12, Issue 6. http://www.bioflux.com.ro/aacl
2096 konsentrasi 50 mg L -1 (2 x MIC). Oleh karena itu, nilai MBC adalah 50 mg L -1 dan dapat
digunakan untuk nilai minimum pengobatan untuk studi in vivo. Tabel 2 Pengujian konsentrasi
hambat minimum (KHM) Diameter zona hambat (mm) Ekstrak etil asetat N. subdita (mg L -1 )
24 jam 48 jam 12,5 0,00±0,00 0,00±0,00 25 3,66±0,57 1,66±0,57 50 5,33± 0.57 4.00±0.00 100
8.66±0.57 8.66±0.57 200 9.66±0.57 9.66±0.57 300 10.00±0.00 10.00±0.00 400 14.00±0.00
14.00±0.00 500 14.66±0.57 14.66±0.57 600 15.00±0.00 15.00±0.00 700 15.33±0.57 15.33±0.57
800 15.66±0.57 15.66±0.57 900 16.00±0.00 16.00±0.00 1000 17.66±0.57 17.66±0.57 Tabel 3
Hasil uji MBC pada agar GSP Hitung Bakteri (CFU mL -1 ) Konsentrasi Konsentrasi (mg L -1 )
24 jam 48 jam Kontrol 0.0 tntc tntc 0.5 MIC 12.5 tntc tntc 1 MIC 25.0 0.0 3.7x102±0.15 2 MIC
50.0 0.0 0.0 4 MIC 100.0 0.0 0.0 8 MIC 200.0 0.0 0.0 16 MIC 400.0 0.0 0.0 tntc = terlalu banyak
untuk dihitung. Beberapa senyawa aktif dari tumbuhan yang dapat merusak dinding sel bakteri
adalah fenol, flavonoid, saponin, alkaloid, terpenoid dan tanin (Fatin et al 2012; Jamaluddin et al
2015; Li et al 2017). Setiap kelompok senyawa memiliki kemampuan yang berbeda dalam
menghambat pertumbuhan bakteri. Hal ini dapat disebabkan oleh kandungan zat bioaktif yang
berbeda yang memiliki efek sinergis yang berbeda pula, tergantung pada karakteristik dan
morfologi bakteri tersebut. Senyawa fenolik diklasifikasikan menjadi empat kelompok utama,
yaitu flavonoid, asam fenolat, lignan, dan polimer tanin (Nohynek et al 2006). Senyawa polifenol
dan flavonoid termasuk dalam golongan fenol (Kaur & Arora 2009). Mekanisme antibakteri
flavonoid adalah menghambat sintesis asam nukleat, fungsi membran sitoplasma, energi untuk
metabolisme, perlekatan dan pembentukan biofilm, porin sebagai penyusun membran sel,
mengubah permeabilitas membran, dan melemahkan patogenisitas (Xie et al 2015). Flavonoid
dapat menghambat pertumbuhan bakteri dengan cara merusak dinding sel, menonaktifkan enzim,
mengikat adhesin, dan merusak membran sel (Cowan 1999). Menurut Sabbineni (2016), bahan
non-polar bekerja pada membran luar dinding sel bakteri. Bagian super molekul dapat masuk dan
mengganggu struktur membran. Dinding sel bakteri mempengaruhi permeabilitas dan variasi
respon terhadap senyawa antibakteri hidrofilik. Pada membran sitoplasma, molekul fenol aktif
dapat menembus membran dan berikatan dengan protein membran. Molekul fenol aktif bekerja
pada sitoplasma dan inti spora bakteri. Selain itu, molekul fenol aktif berperan sebagai
desinfektan dan oksidator aktif. Hal ini menyebabkan kerusakan pada struktur inti dalam spora.
Liew et al (2014) melaporkan sembilan alkaloid indol monoterpenoid di N. subdita. Antibakteri
alkaloid dengan enzim yang dimurnikan menunjukkan bahwa alkaloid indolizidine dapat
menghambat dihydrofolate reductase dihydrofolate reductase. Alkaloid isoquinoline juga
menghambat topoisomerase tipe I (Cushnie et al 2014). Efek alkaloid pada sistem regulasi gen
virulensi seperti quorum sensing dan faktor virulensi, seperti sortase, adhesin, dan sistem sekresi.
Alkaloid dari C. citrinus menunjukkan aktivitas antibakteri dan menghambat pengangkutan
senyawa yang bergantung pada ATP melintasi membran sel (Mabhiza et al 2016). Senyawa
terpenoid bekerja dengan cara merusak membran sel bakteri (Cowan 1999). Senyawa terpenoid
bereaksi dengan sisi aktif membran, melarutkan konstituen lipid, dan meningkatkan
permeabilitasnya. Terpenoid phytadiene dan 1,2-seco-cladiellan dari herba meniran (Phyllanthus
niruri) dilaporkan aktif terhadap Staphylococcus aureus dan Escherichia coli (Gunawan et al
2018). Menurut Daisy et al (2008), senyawa terpenoid 6-[1- (1,13-dimetil-
4,5,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17 dodekahidro-1H- syclopenta [alpa] phenan tren-17-il)] - 3-metil-
3,6-dihydro-2Hpiranon yang diisolasi dari Elephantopus scaber dapat menghambat aktivitas
enzim autolisin pada S. aureus dengan interaksi yang kuat pada sisi aktif enzim residu. Beberapa
komponen terpenoid (eucalyptol, -terpineol dan linalool) dari minyak atsiri menyebabkan
perubahan membran luar, perubahan fungsi membran sel dan kebocoran bahan intraseluler
(Zengin & Baysal 2014). Lv et al (2011) juga melaporkan bahwa terpenoid dari minyak atsiri
komersial dapat mempengaruhi interitas membran sel. Beberapa temuan menunjukkan bahwa
monoterpen yang berasal dari obat menyebabkan permeabilitas membran dan perubahan
kebocoran bahan intraseluler (Trombetta et al 2005). Akiyama et al (2001) menjelaskan
mekanisme antimikroba tanin yang dapat menginduksi kompleksasi dengan enzim atau substrat
dan menonaktifkan adhesin sel mikroba. Asam tanat dapat bekerja seperti siderofor untuk
mengkelat besi dari medium, sehingga besi tidak tersedia untuk mikroorganisme. Payne et al
(2013) melaporkan bahwa asam tanat menghambat pembentukan biofilm S. aureus melalui
mekanisme yang mengandalkan diduga transglikosilase IsaA. Ekspresi berlebih dari IsaA tipe
liar menghambat pembentukan biofilm, sedangkan ekspresi berlebih IsaA yang mati secara
katalitik tidak mempengaruhi. Saponin memiliki sifat seperti deterjen dan dapat meningkatkan
permeabilitas membran sel bakteri tanpa merusaknya. Saponin bila digunakan dengan antibiotik
dapat mempermudah masuknya antibiotik melalui membran dinding sel bakteri (Arabski et al
2012). Saponin terkonsentrasi di bagian halus dan penting dari membran sel. Saponin adalah
senyawa penurun tegangan permukaan yang kuat dan bekerja sebagai antimikroba. Saponin
dapat mengganggu kestabilan membran sel bakteri yang menyebabkan sel bakteri mengalami
lisis. Saponin juga dikenal sebagai antibakteri alami dan penambah energi serta bermanfaat
dalam mengurangi peradangan pada sistem pernapasan bagian atas (Ogbuagu 2008). Morfologi
A. hydrophila setelah penambahan ekstrak N. subdita. Pengamatan morfologi A. hydrophila
setelah penambahan ekstrak N. subdita dilakukan dengan menggunakan scanning electron
microscopy (SEM). Perubahan morfologi A. hydrophilla diamati setelah 12 dan 24 jam
penambahan ekstrak N. subdita seperti yang digambarkan pada Gambar 1. Gambar 1. Analisis
SEM (50.000x). (a) A. hydrophila tanpa ekstrak N. subdita, (b) A. hydrophila dengan
penambahan ekstrak etil asetat N. subdita setelah 12 jam, dan (c) A. hydrophila dengan
penambahan ekstrak etil asetat N. subdita setelah 12 jam. abc AACL Bioflux, 2019, Volume 12,
Issue 6. http://www.bioflux.com.ro/aacl 2098 Analisis SEM A. hydrophila tanpa ekstrak N.
subdita (Gambar 1a) menunjukkan bahwa sel bakteri dalam keadaan normal kondisi tanpa
kerusakan. Setelah penambahan ekstrak N. subdita selama 12 jam, kerusakan dinding sel diamati
(Gambar 1b). Selama 24 jam berikutnya, terjadi kerusakan sel yang parah dan membentuk
beberapa puing (Gambar 1c). Meng et al (2016) juga menemukan kelainan bentuk Klebsiella
pneumoniae yang tidak teratur setelah perlakuan 4, 8 dan 24 jam dengan minyak atsiri dari daun
Juniperus rigida. Senyawa bioaktif dalam ekstrak N. subdita bereaksi dengan membran sel A.
hydrophila dan menyebabkan disintegritas membran sel (Gambar 1b dan 1c). Peran senyawa
antimikroba adalah menghambat sintesis dinding sel dan fungsinya serta mengganggu integritas
membran sel. Membran sel bertindak sebagai penghalang dengan permiabilitas selektif, fungsi
transpor aktif dan pengaturan pengaturan dalam sel (Nguyen et al 2011). Jika keutuhan membran
sel terganggu, maka makromolekul dan ion akan terlepas dari sel dan akan terjadi kerusakan atau
kematian sel. Studi in vivo. Studi in vivo dilakukan di Pangsius sp. untuk mengungkap potensi
N. subdita sebagai antibakteri. Setelah terinfeksi A. hydrophila pada konsentrasi yang mematikan
(108 sel mL -1 ), Pangasius sp. diperlakukan dengan ekstrak N. subdita dengan metode
perendaman pada berbagai konsentrasi. Setelah 7 hari, tingkat kelangsungan hidup Pangasius sp.
diamati seperti yang disajikan pada Gambar 2. Gambar 2. Tingkat kelangsungan hidup Pangasius
hypophthalmus yang diobati dengan ekstrak etil asetat N. subdita. Analisis statistik
menggunakan ANOVA menunjukkan bahwa perlakuan dengan ekstrak N. subdita memberikan
pengaruh yang signifikan terhadap tingkat kelangsungan hidup (SR) P. hypophthalmus. (p <
0,05). SR tertinggi diamati pada perlakuan ekstrak N. subdita pada konsentrasi 100 mg L -1.
Perlakuan ini meningkatkan SR ikan hingga lebih dari dua kali lipat dibandingkan tanpa ekstrak
N. subdita (Gambar 2). Peningkatan konsentrasi N. subdita di atas 100 mg mL -1 memberikan
efek yang sama pada SR P. hypophthalmus. Peningkatan ini bisa jadi karena kandungan bahan
aktif dalam ekstrak N. subdita. Jumlah A. hydrophila pada Pangasius sp. darah. Penggunaan
ekstrak N. subdita sebagai antibakteri dapat dibuktikan melalui kemampuannya dalam
menghambat proliferasi A. hydrophila dalam darah Pangasius. Jumlah A. hydrophila dalam
darah Pangasius setelah infeksi dan pengobatan disajikan pada Tabel 4. Tabel 4 menunjukkan
tidak ada A. hydrophila yang terdeteksi dalam darah Pangasius pada awal penelitian. Uji tantang
melalui metode perendaman dalam 1 x 108 cfu mL-1 A. hydrophilla menghasilkan keberadaan
bakteri tersebut dalam darah pada berbagai konsentrasi dari 2,7x106 hingga 5,4x106 . Tujuh (7)
hari setelah perendaman dalam ekstrak N. subdita, diamati penurunan bakteri pada semua
perlakuan. Penurunan populasi A. hydrophila pada perlakuan tanpa ekstrak N. subdita
menyiratkan adanya AACL Bioflux, 2019, Volume 12, Issue 6. http://www.bioflux.com.ro/aacl
2099 respon imun pada Pangasius sp. Perlakuan dengan 50 mg L -1 ekstrak N. subdita
menunjukkan bahwa penurunan A. hydrophilla dalam darah Pangasius signifikan hingga 99%.
Dengan konsentrasi ekstrak N. subdita yang lebih tinggi, tidak ada lagi populasi A. hydrophilla
dalam darah Pangasius. Penurunan signifikan populasi A. hydrophilla dalam darah Pangasius
menunjukkan bahwa senyawa aktif dalam ekstrak N. subdita berpotensi sebagai agen
antimikroba. Tabel 4 Jumlah Bakteri Total A. hydrophila pada Pangasius sp. darah selama
penelitian

 Kesimpulan. N. subdita yang diekstraksi etil asetat ditemukan sebagai agen antimikroba
potensial terhadap A. hydrophilla in vitro dengan nilai MBC 50 mg L -1 . Penelitian in vivo
menunjukkan bahwa perendaman dalam ekstrak etil asetat N. subdita menurunkan
populasi A. hydrophilla dalam darah ikan hingga 100% dan meningkatkan tingkat
kelangsungan hidup Pangasius sp. Aplikasi 100 mg L -1 ekstrak etil asetat N.

Nutrient Content, Active Compound, and Antibacterial Activity of Padina australis against
Aeromonas hydropilla
HASIL DAN PEMBAHASAN Komposisi Gizi P. australis Kandungan Gizi P. australis yang
dikumpulkan dari pantai Kelapa Lima, Teluk Kupang disajikan pada Gambar 1. P. australis
mengandung protein 13,89%, lemak 2,66% lemak, karbohidrat 38,15%, air 11,21%, dan abu
34,58% (Gambar 1)
Kandungan asam amino dan mineral P. australis P. australis mengandung 15 asam amino dengan
konsentrasi yang berbeda (Tabel 1). Kandungan tertinggi adalah asam aspartat (1,16% b/b) dan
asam glutamat (1,32 %b/b) dan kandungan terendah adalah histidin (0,12% b/b) dan metionin
(0,2 % b/b). Kandungan mineral P. australis adalah 10,22% b/b kalsium, 1,48% b/b kalium, dan
0,125% b/b besi (Gambar 2). Senyawa aktif P. australis Uji kualitatif senyawa aktif
menunjukkan bahwa P. australis mengandung alkaloid, saponin, flavonoid, tanin steroid, dan
terpenoid. Aktivitas antibakteri P. australis Analisis antibakteri menunjukkan bahwa air dan
ekstrak metanol P. australis dapat menghambat pertumbuhan A. hydropilla. Hal ini ditunjukkan
dengan adanya zona hambat sebesar 10,5 mm untuk ekstrak air dan 10 mm untuk ekstrak
metanol P. australis (Tabel 3). Penelitian ini memberikan informasi tentang kandungan nutrisi P.
australis, seperti protein, lemak, karbohidrat, air, dan abu. Kandungan protein dan lemak P.
australis yang ditemukan di pantai Kelapa Lima, Teluk Kupang, lebih tinggi dibandingkan di
perairan Tidung, Kepulauan Seribu, hanya 1,05% protein dan 0,58% lemak.7 Dibandingkan
dengan spesies makroalga lainnya, P. minor ditemukan 
di Pahuwato perairan, Gorontalo, hanya memiliki 4,78% protein dan 0,52%
fat5, 
P. gymnosprora di India hanya mengandung 5,704% protein dan 0,02% FAT16, 
dan P. tetrastomatica mengandung 10,5% protein dan 1,14% fat.17ini 
perbedaandapat mengakibatkan dari ketidaksamaan dalam umur panen dancuaca 
kondisipada masa pemeliharaan.7
Selanjutnya, kandungan karbohidrat di P. australis lebih tinggi daripada di 
pulau Tidung, Teluk Kupang, hanya 8,78%7
 dan di Pantai Tenggara 
India, 14,73%18, tetapi lebih rendah dari kandungan karbohidrat di P. gymnospora
dari Sabah Malaysia, 84,54%19 dan dari Tamilnadu, India, 118,14%16, 
dan dibandingkan dengan P. minor yang ditemukan di perairan Pahuwato, Gorontalo, 41,88 
%.5
 Perbedaan interspesifik kandungan karbohidrat mencerminkan bahwa 
nutrisi makroalga dapat dipengaruhi oleh spesifikasi es dan habitat.
Kadar air P. australis dari perairan pesisir Kelapa Lima, 
Teluk Kupang, sebesar 11,21%, berbeda dengan yang dilaporkan oleh 
Fitrya20 yang hanya 6,4%, dan Maharany et al.
7
, 87,25%. Perbedaan ini 
dapat dipengaruhi oleh intensitas cahaya dan suhu padapengeringan 
proses. Metode pengeringan mempengaruhi kandungan proksimat Sargassum 
polycystum (makroalga coklat), termasuk kandungan air. Kadar abu 
P. australis tergolong tinggi (34,58%), jika dibandingkan dengan P. australis yang dikumpulkan 
di Pulau Tedung, Kepulauan Seribu, hanya 2,3%.7
 Juga berbeda 
dengan spesies lain, seperti P. minor, 30,53%5
, dan P. tetrastomatica, 27%.17
Kandungan abu yang lebih tinggi ditemukan pada P. gymnospora, 45,04%.19 Kandungan abu 
dalam suatu bahan dapat dikaitkan dengan jumlah komponen
mineral.21 Kandungan mineral makroalga dapat dipengaruhi olehpengolahan 
metodeseperti well.22 Selanjutnya, kadar masing-masing komponen mineral 
ditentukan oleh spesies, faktor fisiologis, kondisi geografis,gelombang 
frekuensi, dan metode yang digunakan dalam mineralisasi.23
P. australis yang dikumpulkan di perairan Teluk Kupang mengandung 15 asam amino 
dengan kandungan tertinggi dalam asam aspartat, 1,16%, dan asam glutamat, 
1,32%, dan terendah pada histidin, 0,12, dan metionin, 0,20%.ini 
Hasiltidak berbeda dari orang-orang di P. gymnospora dari Tamildanu, 
India, dengan tertinggi di asam aspartat, 12,7%, dan asam glutamat, 
13,9%, dan terendah di histidin, 2,7% dan metionin, 1,5%, meskipun 
jumlah acuh tak acuh . Namun, Shanmuganathan dan Devi16 menemukan bahwa 
P. gymnospora di India memiliki kandungan asam amino yang berbeda dengan kandungan asam
amino 
tertinggi pada glisin (0,605) dan tirosin (0,504) dan terendah pada arginin 
(0,103). Variasi kandungan protein pada makroalga dapat mempengaruhi 
kandungan asam amino.
Kandungan mineral tertinggi P. australis adalah kalsium (10,22% b/b), 
diikuti oleh kalium (1,48% b/b) dan terendah adalah besi (0,125% 
b/b). Hasil serupa juga dilaporkan oleh Manteu et al.
5
, dimana 
kandungan mineral P. minor tertinggi adalah kalsium (32,91 mg/g), 
kalium (26,9 mg/g), dan terendah adalah besi (1,00 mg/g). Selain itu, 
Shanmuganathan dan Devi16 menemukan bahwa P. gymnospora memilikitertinggi 
kandungan mineralpada kalsium, 156,2 mg 100 g DM-1, kemudian kalium, 122,3 
mg 100 g DM-1, dan terendah pada zat besi, 6,78 mg 100 g DM-1. . Meskipun 
kandungan mineral tertinggi terdapat pada mineral yang sama untuk ketiga 
spesies Padina dari lokasi yang berbeda, namun konsentrasinya berbeda. 
Artinya kandungan mineral Padina sp. dipengaruhi oleh spesies 
dan habitat. 
Analisis fitokimia menunjukkan bahwa P. australis mengandung beberapa senyawa seperti
alkaloid, saponin, flavanoid, tanin, steroid, dan terpenoid. Temuan kali ini sedikit berbeda
dengan penelitian sebelumnya19 yang hanya menemukan steroid, terpenoid, polifenol, dan
saponin. P. tetrastromatica dilaporkan mengandung alkaloid, terpenoid, steroid, fenol, dan
flavonoid, tetapi tidak mengandung saponin.24 P. australis mengandung flavanoid, tanin, dan
saponin2 , tetapi Maharany7 menemukan flavonoid, fenol hidrokuinon, triterpenoid, tanin, dan
saponin di dalamnya. spesies yang sama. Meskipun senyawa bioaktif memiliki kandungan yang
berbeda, semua senyawa aktif Padina sp. dapat digunakan untuk sifat farmasi seperti
menghambat pertumbuhan mikroorganisme patogen. Aktivitas antibakteri P. australis terbukti
mampu menghambat pertumbuhan A. hydropilla baik pada ekstrak metanol dengan zona hambat
10 mm maupun ekstrak air dengan zona hambat 10,5 mm (Tabel 3). Kemampuan aktivitas
antibakteri P. australis terhadap Vibrio harveyii pada ikan juga dilaporkan oleh Gazali dan
Saputra2 dengan zona hambat 12,55 mm pada konsentrasi 60%. Saloso dkk. 9 juga menunjukkan
bahwa aktivitas antibakteri P. australis terhadap V. alginoliticus serta zona hambat 22 mm pada
ekstrak aseton. Aktivitas antibakteri Padina spp terhadap bakteri patogen pada manusia juga
telah dibuktikan oleh beberapa peneliti sebelumnya. Al-Enazi dkk. 25 mengungkapkan bahwa
aktivitas antibakteri P. pavonica terhadap Actinobacter baumannii, Escherichia coli, Klepsiealla
pneumonia, Proteus mirabilis, Pseudomonas aururinosa, Basilus suptilis, Staphylococus aureus,
S. epidermis, dan Streptococus phygenes. Haryani dkk. 26 juga menunjukkan aktivitas
antibakteri P. australis terhadap Vibrio colera dan Salmonella thypii. Studi antibakteri lainnya
juga dilaporkan oleh Kemer et al. 3 pada P. australis dari pulau Nain, Sulawesi Utara, terhadap
Yersinia enterocolitica dan Proteus stuarti, Nuzul et al. 10 pada Padina sp, dari pantai Sorido,
Biak, terhadap Staphylococcus aureus dan Shigella dysentriae, dan Maheswari et al. 24 pada P.
tetrastomatica dari Tamil Nadu, India, terhadap Salmonella typhi, Vibrio cholera, Shigella
flexnery, dan Proteus mirablis.
KESIMPULAN Penelitian ini mengungkapkan bahwa P. australis menghasilkan efek
antibakteri terhadap A. hydropilla yang berpotensi untuk dikembangkan lebih lanjut.