MENENTUKAN PEWARNA MAKANAN

SINTESIS DALAM PRODUK IKAN DENGAN

METODE HPLC-DAD
Disusun oleh: GENESIS TRIA (A1F013063)
Dosen Pengampu: I NYOMAN CHANDRA M.Sc

Latar Belakang
Warna yang ditambahkan pada makanan
yaitu untuk meningkatkan daya tarik visual pada
ratusan tahun tahun yang lalu. Namun
masalahnya pada toksisitas dan zat aditif ini
yang menyebabkan pengembangan masalah
yang mengatur jenis dan jumlah pewarna sintetis
yang digunakan dalam produk makanan yang
berbeda. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk
mengembangkan dan mengoptimalkan petunjuk
percobaan yang efisien berdasarkan pada fase
terbalik teknik kromatografi cair kinerja tinggi
(HPLC) untuk menentukan simultan tujuh
pewarna sintetis yang larut dalam air (E 110, E
122, E 123, E 124, E 127 , E 128 dan E 129),
dalam kandungan makanan protein tinggi atau
kadar lemak yang tinggi.

Batasan Masalah
Produk

ikan yang dianalisis adalah krustasea ,

kepiting dan ikan roe.
Metode ekstraksi yang digunakan adalah typical
protocol, alternative protocol dan new protocol.
Analisis yang digunakan adalah analisis recovery,
repeatibility, reproducibility, critical value dan
mdv.
Pewarna sintesis yang digunakan yaitu E 110
(sunset yellow), E122 (Azorubine), E123
(Amaranth), E 124 (Ponceau 4R),E 127
(Erythrosine), E 129 (Allura Red AC) E 128 (READ
2G).

Rumusan Masalah
Bagaimanakah

efektifitas dari analisis

pewarna makananan dengan metode HPLCDAD ?
Bagaimanakah sensitivitas penggunaan
metode HPLC-DAD untuk mengukur kadar
pewarna makanan dalam sampel krustasea ?
Bagaimanakah presisi dan akurasi petunjuk
baru yag digunakan dalam percobaan ini ?

Tujuan
Untuk

mengetahui efektifitas dari analisis

pewarna makananan dengan metode HPLCDAD.
Untuk mengetahui sensitivitas penggunaan
metode HPLC-DAD untuk mengukur kadar
pewarna makanan dalam sampel krustasea.
Untuk mengetahui presisi dan akurasi
petunjuk baru yag digunakan dalam
percobaan ini.

Manfaat
Untuk

mengetahui kandungan
pewarna makanan sintesis dalam
produk ikan krustasea.
Untuk mengetahui metode yang
tepat untuk menganalisis
kandungan pewarna makanan
sintesis.

TINJAUAN PUSTAKA
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Produk ikan (krustasea)

Kromatografi Cair Kinerja Tinggi
(KCKT/HPLC)
Ekstraksi
Pewarna Sintesis
Sonikasi
Sentrifugasi

Metode Penelitian
Alat
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.

Seperangkat alat KCKT/HPLC

Mikroprosesor pH meter (HACH, HQ 40d multifinance)
spektrofotometer UV-Visible (UV-1700 Pharma Spec)
Omnilab D-78224 thermostatic ultrasonik bath
ALC PK 131R (alat sentrifugasi)
Disperser laboratorium IKA Ultra-Turrax
Penangas air
Vakum evaporator

Bahan
larutan Amonia (25% w / v)
2. larutan amonium asetat P97% P.A. ACS
3. petroleum eter (40-60 C)
4. n-heksana (>99%)
5. metanol
6. asetonitril (ACN)
7. Pewarna E 110 (sunset yellow),
8. Pewarna E122 (Azorubine)
9. Pewarna E123 (Amaranth),
10. Pewarna E 124 (Ponceau 4R),
11. Pewarna E 127 (Erythrosine),
12. Pewarna E 129 (Allura Red AC)
13. Pewarna E 128 (READ 2G)
14. ultra pure water (aquabides)
15. kertas saring ((Macherey-Nagel GF)
16. poliamida
1.

Langkah Kerja
Kondisi Kromatografi

Detektor Diode-Array diprogram untuk melihat tujuh pewarna pada kisaran

300-750 nm. Deteksi dan kuantifiikasi masing-masing analit dilakukan pada
panjang gelombang maksimum dan Karakteristik Kromatogram Larutan
Standar

Persiapan Larutan Stock Standar

Pewarna Makanan dan Sampel

Pewarna Sintesis

1.
2.

3.

Dilarutkan 25 ml
Diencerkan dan dihomogenkan dengan
menambahkan sampel dengan buffer amonium
asetat
Diekstrasksi Disonikasi disentrifugasi
divakum dianalisis dengan HPLC-DAD

Larutan Standar

Percobaan dengan 3 metode

ekstraksi yang berbeda

Typical protocol : ekstraksi dengan 3 tahap

disentrifugasi 3000 rpm dimasukkan dalam
penangas air (90C ) penambahan asam
(pH 4-5)
Alternative protocol : ekstraksi dengan 4
tahap disonikasi (suhu ruang)
disentrifugasi 3000 rpm diinkubasi ( hingga
pH netral)
New protocol: ekstraksi dengan 4 tahap
disonikasi (30C) disentrifugasi 5000 rpm
diinkubasi (hingga pH netral)

HASIL DAN PEMBAHASAN

Pengoptimalan metode percobaan

Hasil analisis menggunakan

metode New Protocol

Kondisi Suhu dengan

menggunakan vakum evaporator
dan penangas air

Masalah kandungan protein

tinggi

Kesimpulan
Dengan metode HPLC-DAD ini analisis dari ketujuh pewarna
makanan sintesis sesuai untuk pelarut yang larut dalam air.
Metode ini tidak diperoleh analisis yang akurat dan dapat diulang
pada makanan yang kompleks pada kandungan protein tinggi
seperti produk ikan dan daging. Pada penelitian ini yaitu dengan
mengembangkan dan mengoptimalkan cara baru (new protocol)
yang didedikasikan pada kandungan makanan dengan protein
tinggi atau kadar lemak tinggi. Metode ini divalidasi menggunakan
produk krustasea sehingga diperoleh nilai yang baik dan efisisen
terhadap perolehan dan RSD % . Selain itu, untuk menentukan
pewarna makanan sintesis yang dapat larut dalam air (E 110. E
122, E 123, E 124, E 127, E 128 dan E 129) pada konsentrasi yang
sangat rendah ( < 1 ppm). Secara Keseluruhan cara yang
dilakukan pada metode ini sangat sederhana dan relatif cepat
untuk menentukan makanan dengan adanya analisis yang
menantang, Cara deteksi ini menunjukkan presisi dan akurasi yang
tinggi dan dapat memberikan dasar bagi pembangunan masa
depan dengan metode yang serupa pada produk makanan yang
kompleks lainnnya seperti produk daging.

TERIMA KASIH
^_^