Ekstraksi dan Uji Aktivitas

Enzim Amilasi
KELOMPOK A2
FA U Z U L A D Z I M / 1 6 5 1 0 0 1 0 1 1 1 1 0
R A H M AW AT I L U T F I YA / 1 6 5 1 0 0 1 0 1 1 1 1 0 4 3
K I K I P U S PA R . / 1 6 5 1 0 0 1 0 1 1 1 1 0 5 5
ZULFIA PUTRI / 1651001011110
AUDY SHAUMA S. R. / 165100101111065
I R E N D I G E O FA N I / 1 6 5 1 0 0 1 0 0 1 1 1 0 4 0
 Mengukur aktivitas amilase
menggunakan substrat berupa
pati yang akan dipecah
PRINSIP membentuk maltosa yang akan
direaksikan DNS (3,5-dinitro
salisilic acid)yang menyebabkan
terjadi reaksi redoks dan
menghasilkan senyawa merah
bata
 ANALISA PROSEDUR
1. Ekstraksi Enzim Amilase
a. Persiapan
Biji Kacang Hijau Kering

Ditimbang sebanyak 50 gram

Disiapkan dengan 5 perlakuan berbeda

10 g biji kacang 10 g biji kacang 10 g biji kacang hijau 10 g biji kacang

10 g biji hijau
kacang hijau hijau direndam dikecambahkan hijau
semalam 12 jam dikecambahkan 12 24 jam
kering jam dikecambahkan 48
jam

Hasil
 ANALISA PROSEDUR
b. Ekstraksi Enzim Amilase Sampel

Dihancurkan

Ditimbang sebanyak 5 gram

50 ml buffer asetat (0,1-0,5 M) pH 5,5
Dibiarkan + 30 menit sambil sesekali diaduk

Disaring dengan kertas saring

Diambil filtratnya (larutan enzim kasar)

Dimasukkan ke dalam tube hingga berat 8,5 gram

Disentrifugasi 1500 rpm 30 menit

Diambil supernatan

Dimasukkan dalam tabung reaksi

Ditutup aluminium foil

Disimpan ke dalam lemari pendingin

Hasil
 ANALISA PROSEDUR
2. Uji Kuantitatif
a. Persiapan Substrat Pati
0,2 gram soluable starch

Dilarutkan ke dalam 20 ml akuades

Dipanaskan sampai jernih dan homogen dan sesekali diaduk

Hasil
 ANALISA PROSEDUR
b. Pengukuran Aktivitas Enzim Amilase Hasil Ekstraksi
1 ml enzim amilase hasil ekstraksi

Ditambah 1 ml larutan substrat pati

Diinkubasi selama 10 menit suhu 30°C

Diambil 1 ml ke labu ukur dan diencerkan dengan labu ukur 10 ml

Aquades hingga tanda batas labu uk

Dihomogenkan 12 kali

Diambil 2 ml dari labu ukur ke tabung reaksi

2 ml DNS

Dipanaskan sampai mendidih (warna berubah menjadi merah bata)

Didinginkan cepat pada air mengalir

ANALISA PROSEDUR

Serapan diukur dengan spektrometer dengan λ = 540 nm

Dihitung kadar maltosa dari platting regresi linear standar maltosa

Hasil
 ANALISA PROSEDUR
c. Pembuatan Larutan Standar Maltosa
50 mg maltosa

Dilarutkan dalam 50 ml buffer asetat

Diencerkan sampai diperoleh stok standar 1000 ppm

Dilakukan seri pengenceran

(o ppm, 100 ppm, 200 ppm, 300 ppm, 400 ppm, 500 ppm, 600 ppm, 700 ppm dan 800 ppm)

Hasil
 ANALISA PROSEDUR
d. Pembuatan Kurva Standar
1 ml larutan stok standar (maltosa)

2 ml DNS dan 1 ml akuades

Dimasukkan ke dalam tabung reaksi

Diinkubasi pada waterbath dengan suhu 40°C selama 15

menit

Didinginkan di air mengalir

Diukur absorbansi dengan λ 550 nm

Hasil
 ANALISA HASIL

Sampel Konsentrasi Absorbansi

Biji kering 0,381 354,11
Biji direndam -44,78 0,022
Kecambah umur 12 jam 8,56 0,070
Kecambah umur 24 jam 135,22 0,184
Kecambah umur 48 jam 503 0,515
 Kurva Standar
0.8
ANALISA HASIL 0.7 f(x) = 0 x + 0.06
0.6 R² = 0.97
0.5

Absorbansi
0.4
Linear ()
Kurva Sampel
0.3
0.2
0.6 0.1
0
0.5 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
f(x) = 0 x + 0.06
R² = 1 Konsentrasi
0.4
Absorbansi

0.3
Tingkat keselarasan suatu model ditentukan
0.2 dengan nilai R2 yang apabila nilai
0.1 mendekati 1 maka model semakin baik.
0 Apabila nilai R2 = 1 maka model tersebut
-100 0 100 200 300 400 500 600 memiliki kesesuaian yang sempurna
Konsentrasi (Sarwono, 2013)
 ANALISA HASIL

Aktivitas enzim α-amilase = C x x FP x 1 unit /mikromol

Persamaan linear : y = 0,0009x + 0,0623
T = 10 menit ; FP = 10

Konsentrasi Aktivitas Amilase

Sampel Absorbansi
(ppm) (unit/mikromol)
Biji kering 0,381 354,11 354,11
Biji direndam 0,022 -44,78 -44,78
Kecambah umur 12 jam 0,070 8,56 8,56
Kecambah umur 24 jam 0,184 135,22 135,22
Kecambah umur 48 jam 0,515 503 503
 Aktivitas enzim memiliki
tingkat yang lebih besar
apabila direndam dalam air
Hasil Praktikum:
Pada kecambah 24 jam sebesar 135,22 dan mengimbibisi sehingga air
unit/mikromol
Literatur dari 3 varietas (Suarni, 2008): akan masuk dalam bahan dan
Kenari: 1,92 unit/mL
Bhakti: 3,09 unit/mL menghidrolisis pati (Suarni,
Parkit: 1,96 unit/ mL
2008).
Hasil Praktikum:
Pada kecambah 48 jam sebesar 503
unit/mikromol
Literatur dari 3 varietas (Suarni, 2008):
Kenari: 1,81 unit/mL
Bhakti: 2,99 unit/mL
Parkit: 1,66 unit/ mL
 FAKTOR YANG
MEMPENGARUHI AKTIVITAS
ENZIM AMILASE

Konsentrasi Konsentrasi
pH Suhu
Enzim Substrat

Aktivator dan
Inhibitor
THANKS!

Any questions?