NIM : 16510010111035
Kelas :A
Kelompok : A2
Konsentrasi Absorbansi
Absorbansi
0.8
0.7 f(x) = 0 x + 0.06
0.6 R² = 0.97
0.5
Absorbansi
Absorbansi
0.4
Linear (Absorbansi)
0.3
0.2
0.1
0
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900
Konsentrasi
Perhitungan:
Untuk menghitung sampel Perendaman 12 jam, Kecambah 12 Jam, Kecambah
24 jam, kecambah umur 48, dan kacang hijau kering dalam praktikum dapat
dihitung melalui persamaan kurva standar yakni y = 0,0009x + 0,00623.
Sehingga didapatkan perhitungan sebagai berikut,
Kecambah 12 jam
0,0070 = 0,0009x + 0,0623
x = 8,56 ppm
Perendaman 12 jam
-0,015 = 0,0009x + 0, 0623
x = -44,78 ppm
Kecambah 24 jam
0,184 = 0,0009x + 0,0623
x = 135,22 ppm
Kecambah 48 jam
0,515 = 0,0009x + 0,0623
x = 503 ppm
Kacang Hijau Kering
0,381 = 0,0009x + 0,0623
x = 354,11 ppm
KURVA SAMPEL
0.6
0.5
0.4f(x) = 0 x + 0.05
ABSORBANSI
R² = 0.82
0.3
Linear ()
0.2
0.1
0
-100 0 100 200 300 400 500 600
KONSENTRASI
Konsentrasi AktivitasEnzim
Perlakuan Absorbansi
(ppm) (Unit/mikromol)
1
Aktivitas enzim α-amilase = C x x FP x 1 unit /mikromol
T
Persamaan linear : y = 0,0009x + 0,0623
T = 10 menit ; FP = 10
Kecambah 12 jam
1
Aktivitas enzim α-amilase = 8,56 x x 10 = 8,56 unit/mikromol
10
Perendaman 12 jam
1
Aktivitas enzim α-amilase = -44,78 x x 10 = -44,78 unit/mikromol
10
Kecambah 24 jam
1
Aktivitas enzim α-amilase = 135,22 x x 10 = 135,22 unit/mikromol
10
Kecambah 48 jam
1
Aktivitas enzim α-amilase = 503 x x 10 = 503 unit/mikromol
10
Kacang Hijau Kering
1
Aktivitas enzim α-amilase = 354,11 x x 10 = 354,11 unit/mikromolc.
10
semakin tinggi sehingga nilai absorbansi menjadi tinggi. Semakin tinggi nilai
absorbansi, maka semakin tinggi konsentrasi yang didapatkan dan semakin
tinggi pula nilai aktivitas enzim amilase yang didapatkan.
Semakin besar nilai R, maka nilai akurasinya akan semakin bagus.
Berdasarkan literatur, kurva standar diperoleh dengan mengukur absorban dari
sederetan konsentrasi larutan standar. Nilai R yang tidak berbeda jauh antara
dua data menyatakan bahwa konsentrasi pembuatan pengeceran larutan hampir
akurat (Kodri, 2013).
E. Analisa Prosedur
Pada pengujian enzim amilase langkah pertama yang dilakukan adalah menyiapkan
alat dan bahan. Alat yang digunakan ada praktikum kali ini adalah satu buah pipet ukur
ukuran 5 ml, satu buah pipet ukur ukuran 10 ml, bulb, tabung reaksi, satu buah rak tabung
reaksi, erlenmeyer, mortar, beaker glass dua buah, dan pipet tetes. Bahan yang
digunakan adalah kacang hijau, dan direndam, DNS, aquades dan larutan maltosa.
Setelah menyiapkan alat dan bahan langkah selanjutnya adalah menyiapkan sampel yaitu
kacang hijau yang kemudian ditimbang sebanyak 50 gr menggunakan timbangan analitik
kemudian dibagi sampel menjadi 5 perlakuan yaitu 10 gr biji kacang hijau kering, 10 gr
kacang hijau yang direndam selama 12 jam, 10 gr biji kacang hijau yang dikecambahkan
12 jam, 10 gr kacang hijau yang dikecambahkan 24 jam dan 10 gr kacang hijau yang
dikecambahkan 48 jam. Kemudian sampel ditumbuk dan ditimbang sebanyak 5 gr
menggunakan mortar hingga halus. Fungsi penumbukan menggunakan mortar adalah
untuk mengeluarkan enzim α-amilase yang terdapat di dalam sel, dan memperkecil
ukuran sehingga luas permukaan semakin besar yang dapat mempercepat jalannya
reaksi. Setelah itu sampel yang sudah ditumbuk dan ditimbang sebanyak 5 gr
dimasukkan kedalam erlenmeyer kemudian ditambahkan 50 ml larutan buffer asetat (0,1
– 0,5 M) dengan pH 5.5 yang berfungsi untuk mempertahankan pH lingkungan sehingga
membuat kinerja enzim optimum karena range pH aktif enzim amilase adalah 4,5 – 8.
Kemudian didiamkan selama 30 menit sambil diaduk sesekali agar homogen. Fungsi
pendiaman larutan buffer asetat dan sampel adalah untuk membiarkan enzim bekerja
dengan baik. Setelah itu disaring menggunakan kertas saring Whatman dengan
erlenmeyer dibawahnya. Fungsi penyaringan adalah untuk mendapatkan filtrat yang
berupa enzim amilase. Setelah dilakukan penyaringan maka beaker glass yang berisi
sampel ditimbang pada timbangan analitik kemudian dikonversi dan dimasukkan valkon.
Setelah dilakukan penimbangan kemudian masing-masing sampel diambil 10 ml
dengan menggunakan pipet ukur ukuran 10 ml dan dimasukkan ke dalam valkon hingga
berat masing-masing sampel mencapi 12 gram setelah itu dilakukan sentrifugasi, pada
berat masing-masing sampel harus memiliki berat yang sama agar pada proses
sentrifugasi dapat seimbang sehingga diperoleh hasil yang sesuai. Setelah itu sampel
disentrifugasi dengan kecepatan 1500 rpm selama 30 menit. Fungsi sentrifugasiadalah
untuk memisahkan supernatan dan natan dan memisahkan padatan dengan ekstrak.
Setelah dilakukan sentrifugasi masing-masing sampel diambil 1 ml supernatannya dan
dimasukkan ke dalam tabung reaksi kemudian ditutup menggunakan aluminium foil pada
bagian mulut tabung reaksi.
Setelah itu masing-masing pada sampel dilakukan tahap pengujian aktivitas enzim
amilase. Masing-masing tabung reaksi yang berisi supernatan ditambahkan 1 ml larutan
substrat pati menggunakan pipet ukur ukuran 5 ml yang dibuat dengan cara melarutkan
Nama : Fauzul Adzim
NIM : 16510010111035
Kelas :A
Kelompok : A2
0,2 gram soluble starch dengan ditambahkan 20 ml aquades, kemudian dipanaskan dan
diaduk hingga jernih dan homogen. Penambahan larutan substrat pati berfungsi sebagai
bahan atau substrat yang akan dihidrolisis oleh enzim. Setelah penambahan substrat pati
kemudian tabung reaksi ditutup dengan alumunium foil pada mulutnya. Setelah itu
diinkubasi selama 10 menit. Setelah diinkubasi, ditambahkan 2 ml larutan DNS yang
berfungsi sebagai untuk mengukur aktivitas enzim, yang akan berikatan dengan gula
pereduksi yang dihasilkan dari pemcahan sehingga menghasilkan warna merah jingga.
Setelah itu, mulut tabung reaksi ditutup menggunakan aluminium foil dan dipanaskan
menggunakan beaker glass yang sudah diisi air diatas kompor listrik hingga mendidih.
Fungsi pemanasan adalah untuk mempercepat reagen DNS bereaksi dan menginaktifasi
enzim, penginaktifasian enzim ini agar enzim tidak bekerja sehingga dapat diukur dengan
stabil nantinya. Kemudian tabung reaksi didinginkan menggunakan aquades mengalir
yang bertujuan untuk mendinginkan bahan sehingga tidak terjadi kerusakan pada alat
spektrofotometer ketika pengukuran absorbansi larutan.
Setelah pendinginan, langkah selanjutnya adalah pengukuran absorbansi larutan
dengan menggunakan alat spektrofotometer. Langkah pertama adalah pengkalibrasian
alat dengan larutan blanko yaitu aquades. Kuvet dibersihkan terlebih dahulu
menggunakan aquades pada bagian terang dan buram secara merata kemudian di lap
menggunakan tisu dengan satu arah setelah itu diisi larutan aquades lalu alat
spektrofotometer dengan menekan tombol hijau dan diatur panjang gelombangnya 540
nm setelah itu dikeluarkan larutan blanko kemudian dimasukkan kuvet yang berisi
masing-masing sampel kemudian diukur nilai absorbansinya pada pergantian antar
sampel yang selanjutnya spektofotometer harus di kalibrasi agar hasilnya tidak minus.
Dan lakukan hal tersebut hingga semua sampel telah diukur. Setelah mendapatkan
seluruh pengukuran absorbansi pada sampel maka didapatkan hasil pembuatan kurva
percobaan.
adalah 8,56 per mikromol dengan nilai absorbansinya adalah 0,070. Pada kacang hijau
yang dikecambahkan selama 24 diperoleh hasil aktivitas enzim amilasae adalah 135,22
unit per mikromol dengan nilai absorbansinya 0,184 dan pada kacang hijau yang
dikecambahkan selama 48 jam diperoleh aktivitas enzim amilase sebesar 503 dengan
nilai absorbansinya adalah 0,515. Dari data tersebut diperoleh bahwa aktivitas enzim
amilase tertinggi adalah pada kacang hijau yang dikecambahkan selama 48 jam dengan
nilai 503 unit per mikromol dan nilai absorbansinya adalah 0,515. Hasil dari praktikum
tersebut sesuai dengan literatur. Menurut literatur pada permulaan masa perkecambahan
yaitu setelah 6 jam giberelic acid membentuk enzim amilase. Lalu dalam 12-18 jam
perkecambahan, enzim amilase akan mencerna amilosa dan amilopektin pada pati
kecambah (Reed, 2012). Sehingga yang memiliki nilai aktivitas enzim paling besar adalah
kacang hijau yang dikecambahkan pada waktu 48 jam. Sampel yang digunakan pada uji
aktivitas enzim amilase terdiri dari biji kacang hijau kering, biji kacang hijau yang
direndam 12 jam, kacang hijau dikecambahkan 12 jam, kacang hijau dikecambahkan 24
jam, dan kacang hijau dikecambahkan 48 jam. Percobaan yang dilakukan menghasilkan
data berupa absorbansi, konsentrasi, dan aktivitas enzim amilase pada masing-masing
sampel. Pada sampel biji kacang hijau kering didapatkan nilai absorbansi sebesar 0,181
dengan konsentrasi 354,11 ppm dan aktivitas enzim α-amilase 354,11 unit per mikromol.
Pada sampel biji kacang hijau yang direndam selama 12 jam dihasilkan nilai absorbansi
sebesar 0,022 dengan konsentrasi --44,78 ppm dan aktivitas enzim α-amilase -44,78 unit
per mikromol. Pada sampel kacang hijau yang dikecambahkan selama 12 jam didapatkan
nilai absorbansi sebesar 0,070 dengan konsentrasi 8,56 ppm dan aktivitas enzim α-
amilase -8,56 unit per mikromol. Pada sampel kacang hijau yang dikecambahkan selama
24 jam dihasilkan nilai absorbansi sebesar 0,184 dengan konsentrasi 135,22 ppm dan
aktivitas enzim α-amilase 135,22 unit per mikromol. Pada sampel kacang hijau yang
dikecambahkan selama 48 jam dihasilkan nilai absorbansi sebesar 0,515 dengan
konsentrasi 503 ppm dan aktivitas enzim α-amilase 503 unit per mikromol.
Dari seluruh data di atas, dapat disimpulkan bahwa aktivitas enzim α-amilase
tertinggi terdapat pada sampel kacang hijau yang dikecambahkan selama 48 jam.
Semakin lama proses perkecambahan maka semakin tinggi pula aktivitas enzimnya
karena kacang hijau membutuhkan nutrisi yang lebih banyak untuk proses
perkecambahan sehingga aktivitas enzim amilase pada kacang hijau kering yang paling
tinggi (Kodri, 2013.
enzim akan terdenaturasi dan tidak dapat bekerja secara maksimal. Umumnya pH
optimum untuk kerja enzim yaitu antara 4,5-8 (Reed, 2012).
(3) Konsentrasi enzim
Kecepatan reaksi enzim dalam memecah suatu substrat tergantung pada konsentrasi
enzim tersebut. Pada kondisi dimana suatu konsentrasi substrat tertentu, kecepatan
reaksi bertambah dengan meningkatnya konsentrasi enzim (Basit et al, 2013).
(4) Konsentrasi substrat
Meningkatnya konsesntrasi substrat akan mampu menaikkan kecepatan reaksi.
Tetapi, pada batas tertentu tidak akan terjadi peningkatan kecepatan reaksi walaupun
konsentrasi substratnya diperbesar. Hal ini terjadi karena neraca reaksinya sudah
mencapai titik keseimbangan dimana meskipun substrat yang ada ditambahkan
konsentrasinya, kecepatan reaksinya tidak akan bertambah (Bahri et al, 2012).
(5) Zat inhibitor
Suatu zat inhibitor akan berpengaruh terhadap penggabungan substrat pada sisi aktif
enzim. Inhibitor akan mengisi sisi aktif enzim sehingga substrat tidak akan bisa
mengisi sisi aktif tersebut. Selain itu, inhibitor juga mampu mengisi sisi alosterik dari
enzim. Ketika sisi aktif akan dimasuki oleh substrat, sisi aktif tersebut tidak cocok
sehingga enzim dan substrat tidak dapat bergabung (Susanti, 2010).
(6) Waktu Inkubasi
Waktu inkubasi digunakan enzim untuk menghidrolisis pati. Semakin lama waktu
inkubasi maka semakin banyak pula pati yang terhidrolisis. Beberapa enzim juga
membutuhkan waktu inkubasi yang berbeda-beda. Ada beberapa enzim
membutuhkan waktu inkubasi yang lama untuk bereaksi dengan substrat (Susanti,
2010).
Nama : Fauzul Adzim
NIM : 16510010111035
Kelas :A
Kelompok : A2
Kesimpulan
Prinsip dari ekstraksi dan uji aktivitas enzim amilase adalah menguji aktivitas enzim
amilase dari kecambah biji-bijian dimana aktivitas enzim amilase ditunjukan dan diukur dari
banyaknya maltosa yang terbentuk ditandai dengan perubahan warna dari kuning menjadi
merah-jingga setelah direaksikan dengan reagen DNS. Dimana pada uji ini dalam mengukur
aktivitas enzim amilase menggunakan substrat berupa pati yang kemudian akan dipecah
oleh enzim membentuk maltosa.
Tujuan dari praktium kali ini adalah untuk mengetahui kadar aktivitas enzim amilase
yang diekstrak dari beberapa sampel dengan perlakuan yang berbeda serta agar mampu
melakukan ekstraksi enzim amiasi dari baan pangan. Faktor yang mempengaruhi adalah
suhu, pH, konsentrasi enzim, konsentrasi substrat dan inhibitor. Hasil kurva sampel yang
diperoleh melalaui perhitungan adalah linear atau sesuai dengan kurva standar yang ada.
Semakin tinggi nilai absorbansi maka semakin banyak konsentrasi serta semakin besar
aktivitas enzim amilase.
Dari data hasil praktikum didapatkan hasil bahwa yang memiliki aktivitas enzim
amilase paling tinggi adalah kacang hijau yang dikecambahkan selama 48 jam dengan nilai
503 unit per mikromol dengan nilai absorbansinya 0,515 dan konsentrasi 503 ppm.
Nama : Fauzul Adzim
NIM : 16510010111035
Kelas :A
Kelompok : A2
Bahri, Syaiful, Moh. Mirzan, dan Moh. Hasan. 2012. Karakterisasi Enzim Amilase Dari
Kecambah Biji Jagung Ketan (Zea mays ceratina L.). Jurnal Natural Science Vol. 1.(1)
132-143. Palu: Universitas Tadulako
Basit, Wajih Abdul, et al. 2013. Kinetika Reaksi Enzimatis. Bogor: Institut Pertanian Bogor
Joanda, Alif, et al. 2013. Enzim Amilase pada Kacang Hijau. Jakarta: ISTN
Kodri,et al. 2013. Utilization Enzymes Cellulase from Trichodermareesei and Aspergillusniger
For Enzymatic Hydrolysis of Rice Straw Catalyst with Microwave Pretreatment. Jurnal
Bioproses Komoditas Tropis Vol. 1 No. 1.
Rahmawati, I. 2013. Ekstraksi dan Pengujian Aktivitas Enzim Amilase. Bogor: Institut
Pertanian Bogor
Reed, Gerald. 2012. Enzymes in Food Processing. New York: Academic Press
Susanti, Devi. 2010. Amobilisasi Enzim Α-Amilase Dari Bacillus subtilis ITBCCB 148 Dengan
Menggunakan Karboksil Metil Selulosa (CMC). Lampung: Universitas Lampung
Nama : Fauzul Adzim
NIM : 16510010111035
Kelas :A
Kelompok : A2
BUKTI LITERATUR
(Susanti, 2010)
(Reed, 2012)