BAB III

METODOLOGI PRAKTIKUM
3.1. Alat dan Bahan
A. Alat
 Gelas kimia
 Kuvet
 Labu ukur 5 ml
 Labu ukur 50 ml
 Pipet tetes
 Spektrofotometer UV-Vis
B. Bahan
 Parasetamol
 Kafein
 Obat oskadon
 NaOH 0,1 N
 Aquadest
3.2. Prosedur Kerja
Pembuatan larutan baku paracetamol
1. Sebanyak 100 mg paracetamol ditimbang lebih kurang seksama
2. Dilarutkan dalam NaOH 0,1 N dalam labu takar sampai 500 ml
100 mg 100000ug
= = 200 ppm
500 ml 500 ml
Pembuatan larutan baku kafein
1. Sebanyak 50 mg kafein ditimbang lebih kurang seksama
2. Dilarutkan dalam NaOH 0,1 N dalam labu takar sampai 500 ml
50 mg 50000ug
= = 100 ppm
500 ml 500 ml
Pembuatan kurva standar paracetamol
- Konsentrasi 4 ppm
C1V1 = C2V2
200 ppm x V1 = 4 ppm x 10 ml
V1 = 0,2 ml
- Konsentrasi 6 ppm
C1V1 = C2V2
200 ppm x V1 = 6 ppm x 10 ml
V1 = 0,3 ml
- Konsentrasi 8 ppm
C1V1 = C2V2
200 ppm x V1 = 8 ppm x 10 ml
V1 = 0,4 ml
- Konsentrasi 10 ppm
 C1V1 = C2V2
200 ppm x V1 = 10 ppm x 10 ml
V1 = 0,5 ml
Pembuatan kurva standar kafein
- Konsentrasi 4 ppm
C1V1 = C2V2
100 ppm x V1 = 4 ppm x 10 ml
V1 = 0,4 ml
- Konsentrasi 6 ppm
C1V1 = C2V2
100 ppm x V1 = 6 ppm x 10 ml
V1 = 0,6 ml
- Konsentrasi 8 ppm
C1V1 = C2V2
100 ppm x V1 = 8 ppm x 10 ml
V1 = 0,8 ml
- Konsentrasi 10 ppm
C1V1 = C2V2
100 ppm x V1 = 10 ppm x 10 ml
V1 = 1 ml

Penentuan spektrum absorpsi

3. Buat masing-masing larutan standar 10 ppm
Diambil 1ml larutan dan diencerkan dengan aquadest hingga 10,0 mL
C1V1 = C2V2
1000 ppm x 1ml = C2 x 10 ml
C2 = 100 ppm
C1V1 = C2V2
100 ppm x 1ml = C2 x 10 ml
C2 = 10 ppm
Masukkan kedalam kuvet (sel sampel) dan kuvet yang lain berisi pelarut tanpa
bahan obat (sel blanko). Selanjutnya diukur absorbansi masing-masing sampel
(paracetamol dan kafein) relative terhadap sel blanko menggunakan
spektrofotometer di daerah radiasi UV dengan rentang 220 nm – 350 nm

Penentuan absorptivitas jenis (a) dari larutan standar

1. Dibuat konsentrasi 8 ppm dari larutan stok kafein
C1V1 = C2V2
100 ppm x V1 = 8 ppm x 5 ml
V1 = 0,4 ml
2. Kemudian dipipet sebanyak 0,4 ml dengan menggunakan mikropipet
3. Dimasukkan kedalam labu ukur 5 ml dan dicukupkan volumenya dengan
menggunakan NaOH 0,1 N
 4. Diukur absorbansi pada λ maks1 dan λ maks2
Penentuan kadar paracetamol dan kafein dalam sediaan
4. Ditimbang 0,01971 gram sampel obat oskadon, dihitung rerata tiap tablet
5. Digerus dan ditimbang 15 mg serbuk tablet yang telah dikeringkan pada suhu
105oC selama 1 jam
6. Dimasukkan kedalam labu ukur, dicukupkan volumenya dengan NaOH 0,1N
hingga 50 ml
15 mg 15000ug
= = 300 ppm
50 ml 50 ml
7. Lalu di pipet 1,25 mL, dimasukkan kedalam labu ukur dan dicukupkan dengan
NaOH 0,1 N hingga 25 mL
C1V1 = C2V2
300 ppm x 1,25ml = C2 x 25 ml
C2 = 15 ppm
8. Diukur absorbansi dengan menggunakan spektrofotometer pada λ maks1 dan
λ maks2
9. Ditentukan penetapan kadar kaffein dan parasetamol pada sampel obat oskadon
 BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1. Hasil Pengamatan

1. Tabel Absorbansi Parasetamol dan Kafein

Parasetamol Kafein
Konsentrasi (c)
Standar (ppm) A1 A2 A1 A2
(260 nm) (270 nm) (260 nm) (270 nm)

4 0,455 0,395 0,11 0,105

6 0,680 0,566 0,155 0,138

8 0,847 0,733 0,188 0,174

10 1,062 0,908 0,226 0,205

2. Tabel Absorbansi pada Sampel (Oskadon)

Sampel Aλmaks1 Aλmaks2

Oskadon 0,868 0,743

3. Penentuan Absorbtivitas Parasetamol dan Kafein

A=a x × b× c x
A
a x=
b ×c x

Parasetamol Kafein
Konsentrasi (c)
Standar (ppm) aλ1 aλ2 aλ1 aλ2
(260 nm) (270 nm) (260 nm) (270 nm)

4 0,114 0,099 0,027 0,026

6 0,113 0,094 0,026 0,023

 8 0,106 0,092 0,023 0,022

10 0,106 0,090 0,023 0,020

Rata-rata a 0,110 0,094 0,025 0,023

Konsentras absorbansi
i kurva kalibrasi dan regresi linier, serta hitung LOD dan LOQ
4 0,395 untuk data PCT di bawah ini.
6 0,566
8 0,733 kurva standar paracetamol
10 0,908

paracetamol
1
0.9
f(x) = 0.09 x + 0.05
0.8 R² = 1
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
3 4 5 6 7 8 9 10 11

x y y1 y-y1 (y-y1)2 ε ( y− ý )2 Sy =
2
n−2 ε ( y− ý )

4 0,395 0,3946 0,0004 1,6E-07 5,6E-06

√ n−2
0,002366432
6 0,566 0,5652 0,0008 6,4E-07
Lod
8 0,733 0,7358 -0,0028 7,84E-06
1 0,908 0,9064 0,0016 2,56E-06
0
1,12E-05

3 x Sy
¿ =
b
0,083277 ppm
 10 x Sy
Loq ¿ = 0,277425 ppm
b

Kurva standar Kafein

Konsentra Absorban
si si
4 0,105
6 0,138
8 0,174
10 0,205

kafein
0.25

0.2 f(x) = 0.02 x + 0.04

R² = 1

0.15

0.1

0.05

0
3 4 5 6 7 8 9 10 11

x Y y1 y-y1 (y-y1)2 ε ( y− ý )2 ε ( y− ý )
2

4 0,105 0,1051 -0,0001 1E-08

n−2
2,1E-06
√
sy=
n−2
0,001449138
6 0,138 0,1387 -0,0007 4,9E-07
8 0,174 0,1723 0,0017 2,89E-06
10 0,205 0,2059 -0,0009 8,1E-07
4,2E-06
3 x Sy
Lod = = 0,258775 ppm
b
 10 x Sy
Loq = = 0,862582 ppm
b

 Perhitungan konsentrasi dan % kadar parasetamol dan kafein dengan Hk. Lambert Beer pada
Senyawa Campuran
Pada λ=260 nm
A sampel = 0,868
Aλmaks 1 = ax1bCx + ay1bCy
0,868 = (ax1×b×cx1) + (ay1×b×cy1)
0,868= (0,110×1×cx1) + (0,025×1×cy1)
0,868= 0,110cx + 0,025cy ............................................ Pers. 1

Pada λ=270 nm
A sampel = 0,743

Aλmaks 2 = ax2bCx + ay2bCy

0,743 = (ax2×b×cx2) + (ay2×b×cy2)

0,743= (0,094×1×cx2) + (0,023×1×c2)

0,743= 0,094cx + 0,023cy ............................................ Pers. 2

Aλ1 = Ax1 + Ay1

Aλ2 = Ax2 + Ay2

0,868= 0,110cx + 0,025cy ...................................... Pers. 1 ×0,023

0,743= 0,094cx + 0,023cy ...................................... Pers. 2 ×0,025

0,019964 =0,00253cx + 0,000575cy

0,018575 =0,00235cx +0,000575cy −

0,001389 = 0,00018cx + 0

0,001389
cx = = 7,716 ppm
0,00018

Aλmaks 1 = (ax1×b×cx1) + (ay1×b×cy1)

 0,868 = 0,110.1.(7,716) + 0,025.1.Cy
0,868 = 0,8487 + 0,025Cy

0,025 cy = 0,868-0,8487
cy = 0,0193/0,025
= 0,772 ppm
Jadi, konsentrasi parasetamol adalah 7,716 ppm, dan konsentrasi kafein adalah 0,772 ppm

berat setara x berat rata−rata

Byd =
berat etiket

15 mg x 702 mg
=
535 mg
= 19,682 mg

berat sampel x berat rata−rata

Byd PCT =
berat etiket

berat sampel x 702 mg

= = 14,018 mg
500 mg

berat setara x berat rata−rata

Byd Kafein =
berat etiket

berat sampel x 702 mg

= 0,981 mg
35 mg

Cx x Volume awal
% PCT = x fp x 100 %
berat sampel

7,716 x 0,05 ml
= x 20 x 100 % = 55,043 %
14,018 mg
 Cy x Volume awal
% Kafein = x fp x 100 %
berat sampel

0,772 x 0,05 ml
= x 20 x 100 % = 78,695 %
0,981 mg