TEKNOLOGI SEDIAAN FARMASI III

Prinsip, Metode dan Validasi Proses Sterilisasi

Dosen Pengampu :

Apt. Ofa Suzanti Betha, M.Si

Disusun oleh

ANISA FITRIA

11181020000035

PROGRAM STUDI

FAKULTAS ILMU KESEHATAN

UNIVERSITAS ISLAM NEGERI SYARIF HIDAYATULLAH

JAKARTA

MARET/2021
A. Prinsip Sterilisasi
Dengan definisi hakiki sterilitas dapat diartikan bahwa sesuatu hanya dapat
diartikan steril jika sesuatu tersebut seutuhnya bebas dari mikroba viable pada benda
tersebut. Definisi tersebut tidak dapat secara umum diterapkan pada seluruh bets bahan
kompedia akhir, karena terdapat keterbatasan pengujian. Sterilitas mutlak tidak dapat
ditunjukkan tanpa merusak tiap bahan akhir. Sterilisitas suatu bets yang dianggap steril
diartikan sebagai suatu kemungkinan, sehingga masih terdapat kemungkinan adanya
pencemaran namun dapat kita kesampingkan. Keadaan jaminan sterlitas tersebut hanya
dapat dicapai dengan melakukan siklus sterilisasi yang memadai dan diikuti oleh proses
aseptik jika ada, mengikuti cara produksi yang baik yang berlaku, dan tidak hanya
mengandalkan uji sterilisitas. Prinsip dasar untuk validasi dan sertifikasi proses
sterilisasi berdasarkan FI edisi VI adalah sebagai berikut:
1. Pastikan bahwa peralatan yang digunakan mampu berfungsi dan memenuhi
parameter yang dipersyaratkan.
2. Peralatan pengendali kritis dan instrumentasi mampu berfungsi sesuai dengan
parameter yang seharusnya bagi peralatan bersangkutan.
3. Lakukan siklus replikasi yang mewakili rentang operasional yang dipersyaratkan
bagi peralatan bersangkutan dan gunakan produk sebenarnya atau simulasi. Pastikan
bahwa proses telah dilaksanakan sesuai batasan protokol yang ditetapkan, dan akhirnya
kemungkinan mikroba yang masih hidup pada proses replikasi yang telah selesai tidak
lebih besar dari batasan yang ditetapkan.
4. Pantau proses yang divalidasi selama pekerjaan berjalan. Jika perlu, secara periodik
peralatan dikalibrasi dan dan disertifikasi ulang
5. Pastikan protokol lengkap, dan dokumentasikan langkah diatas mulai nomor 1
hingga nomor 4.
B. Metode Sterilisasi
Proses sterilisasi diperlukan untuk destruksi atau menghilangkan kontaminan
mikroorganisme (bakteri, virus, fungi dan protozoa sampai bentuk spora) pada bahan
baku dan sediaan farmasi.
1. Saturated steam under pressure (uap air bertekanan)
2. Hot air (udara panas)
Sterilisasi diperlukan untuk pemusnahan total atau pemusnahan semua
mikroorganisme (termasuk bakteri pembentuk spora dan non-pembentuk spora, virus,
jamur, dan protozoa) yang dapat mencemari obat-obatan atau bahan lain dan dengan
demikian membahayakan kesehatan. Teknik sterilisasi klasik menggunakan uap jenuh
di bawah tekanan atau udara panas adalah yang paling andal dan harus digunakan jika
memungkinkan. Metode sterilisasi lainnya termasuk filtrasi, radiasi pengion (radiasi
sinar gamma dan elektron), dan gas (etilen oksida, formaldehida).
Untuk produk yang tidak dapat disterilkan dalam wadah akhir, diperlukan
pemrosesan aseptik. Bahan dan produk yang telah disterilkan dengan salah satu proses
di atas dipindahkan ke wadah presterilisasi dan disegel, kedua operasi tersebut
dilakukan dalam kondisi aseptik yang terkendali.
Apapun metode sterilisasi yang dipilih, prosedur harus divalidasi untuk setiap
jenis produk atau bahan, baik yang berkaitan dengan jaminan sterilitas dan untuk
memastikan bahwa tidak ada perubahan yang merugikan terjadi di dalam produk.
Kegagalan untuk mengikuti secara tepat proses yang telah ditentukan dan divalidasi
dapat menghasilkan produk yang tidak steril atau rusak. Program validasi khusus untuk
sterilisasi uap atau panas kering memerlukan korelasi pengukuran suhu, yang dibuat
dengan perangkat sensorik untuk mendemonstrasikan penetrasi panas dan distribusi
panas, dengan penghancuran indikator biologis, yaitu sediaan mikroorganisme spesifik
yang diketahui memiliki ketahanan tinggi terhadap bahan tertentu. proses sterilisasi.
Indikator biologis juga digunakan untuk memvalidasi metode sterilisasi lainnya (lihat
metode khusus), dan terkadang untuk kontrol rutin siklus individu. Direkomendasikan
untuk melakukan validasi ulang secara berkala.

Pemanasan dalam autoclave (sterilisasi uap)

Pemaparan mikroorganisme pada uap jenuh di bawah tekanan dalam autoklaf
mencapai kehancurannya dengan denaturasi enzim dan protein struktural yang tidak
dapat diubah. Suhu di mana terjadi denaturasi bervariasi berbanding terbalik dengan
jumlah air yang ada. Sterilisasi dalam steam jenuh memerlukan kontrol waktu, suhu,
dan tekanan yang tepat. Karena perpindahan udara dengan steam tidak mungkin dapat
segera dicapai, udara harus dievakuasi dari autoclave sebelum steam masuk. Metode
ini harus digunakan bila memungkinkan untuk sediaan encer dan untuk pembalut bedah
dan perangkat medis.
Rekomendasi untuk sterilisasi dalam autoklaf adalah 15 menit pada 121-124 °
C (200 kPa) .1 Suhu harus digunakan untuk mengontrol dan memantau proses; tekanan
terutama digunakan untuk mendapatkan suhu uap yang dibutuhkan. Kondisi alternatif,
dengan kombinasi waktu dan suhu yang berbeda, diberikan di bawah ini.
1
1 atm = 101 325 Pa

Temperature Approximate Minimum sterilization time

(°C) corresponding pressure(min)
(kPa)
126-129 250 (~2.5 atm) 10
134-138 300 (~3.0 atm) 5

Waktu sterilisasi minimum harus diukur dari saat semua bahan yang akan
disterilkan telah mencapai suhu yang disyaratkan seluruhnya. Pemantauan kondisi fisik
dalam autoklaf selama sterilisasi sangat penting. Untuk memberikan informasi yang
diperlukan, probe pemantau suhu harus dimasukkan ke dalam wadah yang representatif,
dengan probe tambahan ditempatkan pada beban di bagian yang berpotensi paling
dingin dari ruang yang dimuat (sebagaimana ditetapkan selama program validasi).
Kondisi harus dalam ± 2 ° C dan ± 10 kPa (± 0,1 atm) dari nilai yang disyaratkan. Setiap
siklus harus dicatat pada grafik suhu waktu atau dengan cara lain yang sesuai.

Larutan encer dalam wadah kaca biasanya mencapai kesetimbangan termal

dalam 10 menit untuk volume hingga 100 mL dan 20 menit untuk volume hingga 1000
mL.

Beban berpori, seperti pembalut bedah dan produk terkait, harus diproses
dalam peralatan yang memastikan penetrasi uap. Kebanyakan dressing cukup
disterilkan dengan menjaganya pada suhu 134 - 138 ° C selama 5 menit.

Dalam kasus tertentu, gelas, porselen, atau barang logam disterilkan pada suhu
121 - 124 ° C selama 20 menit.
 Lemak dan minyak dapat disterilkan pada 121 ° C selama 2 jam, tetapi jika
memungkinkan, harus disterilkan dengan panas kering.

Dalam kasus tertentu (misalnya zat termolabil), sterilisasi dapat dilakukan pada
suhu di bawah 121 ° C, asalkan kombinasi waktu dan suhu yang dipilih telah divalidasi.
Temperatur yang lebih rendah menawarkan tingkat sterilisasi yang berbeda; jika ini
dievaluasi dalam kombinasi dengan beban mikroba bahan yang diketahui sebelum
sterilisasi, suhu yang lebih rendah mungkin memuaskan. Kondisi suhu dan waktu
khusus untuk sediaan tertentu dinyatakan dalam monograf individu.

Strain bioindikator yang diusulkan untuk validasi proses sterilisasi ini adalah:
spora Bacillus stearothermophilus (misalnya ATCC 7953 atau CIP 52.81) dengan nilai
D (yaitu pengurangan 90% populasi mikroba) adalah 1,5-2 menit pada 121 ° C,
menggunakan sekitar 106 spora per indikator.

Sterilisasi dengan panas kering

Dalam proses panas-kering, proses mematikan utama dianggap oksidasi

konstituen sel. Sterilisasi dengan panas kering membutuhkan suhu yang lebih tinggi
daripada panas lembab dan waktu pemaparan yang lebih lama. Oleh karena itu, metode
ini lebih nyaman untuk bahan non-air yang tahan panas dan tidak dapat disterilkan
dengan uap karena efeknya yang merusak atau tidak dapat menembus. Bahan-bahan
tersebut termasuk barang pecah belah, bubuk, minyak, dan beberapa bahan suntik
berbahan dasar minyak.

Sediaan yang akan disterilkan dengan panas kering diisi dalam unit yang disegel
atau ditutup sementara untuk sterilisasi. Seluruh isi setiap wadah disimpan dalam oven
untuk waktu dan suhu yang diberikan pada tabel di bawah ini. Kondisi lain mungkin
diperlukan untuk sediaan yang berbeda untuk memastikan eliminasi yang efektif dari
semua mikroorganisme yang tidak diinginkan.

TemperatureMinimum sterilization time

(°C) (min)
160 180
170 60
180 30
 Kondisi suhu dan waktu khusus untuk sediaan tertentu dinyatakan dalam
monograf individu.

Oven biasanya harus dilengkapi dengan sistem udara paksa untuk memastikan
distribusi panas yang merata ke seluruh bahan yang diproses. Ini harus dikontrol dengan
memantau suhu. Wadah yang telah ditutup sementara selama prosedur sterilisasi
ditutup rapat setelah sterilisasi menggunakan teknik aseptik untuk mencegah
kontaminasi ulang mikroba.

Strain bioindikator yang diusulkan untuk validasi proses sterilisasi adalah: spora
Bacillus subtilis (misalnya var. Niger ATCC 9372 atau CIP 77.18) dengan nilai D 5-10
menit pada suhu 160 ° C menggunakan sekitar 106 spora per indikator.

Penyaringan

Sterilisasi dengan filtrasi digunakan terutama untuk larutan termolabil. Ini dapat
disterilkan dengan melewati filter penahan bakteri yang steril, mis. filter membran
(turunan selulosa, dll.), plastik, keramik berpori, atau filter kaca sinter yang sesuai, atau
kombinasinya. Filter yang mengandung asbes sebaiknya tidak digunakan.

Tindakan yang tepat harus diambil untuk menghindari hilangnya zat terlarut
oleh adsorpsi ke filter dan untuk mencegah pelepasan kontaminan dari filter. Filter yang
sesuai akan mencegah masuknya mikroorganisme, tetapi filtrasi harus diikuti dengan
transfer aseptik dari larutan yang disterilkan ke wadah akhir yang kemudian segera
ditutup dengan sangat hati-hati untuk menghilangkan kontaminasi ulang.

Biasanya, ukuran pori nominal tidak lebih dari 0,22 μm harus digunakan.
Efektivitas metode filtrasi harus divalidasi jika ukuran pori yang digunakan lebih besar.

Untuk memastikan integritas filter, baik sebelum dan sesudah filtrasi, titik
gelembung atau pengujian serupa harus digunakan, sesuai dengan petunjuk produsen
filter. Tes ini menggunakan tekanan yang ditentukan untuk memaksa gelembung udara
melalui membran utuh yang sebelumnya dibasahi dengan produk, dengan air, atau
dengan cairan hidrokarbon.

Semua filter, tabung, dan peralatan yang digunakan "hilir" harus steril. Filter
yang mampu menahan panas dapat disterilkan dalam rakitan sebelum digunakan
dengan autoklaf pada 121 ° C selama 15 - 45 menit tergantung pada ukuran rakitan
 filter. Efektivitas sterilisasi ini harus divalidasi. Untuk penyaringan cairan yang
memungkinkan pertumbuhan mikroba, filter yang sama tidak boleh digunakan untuk
prosedur yang berlangsung lebih dari satu hari kerja.

Paparan radiasi pengion

Sterilisasi bahan aktif tertentu, produk obat, dan peralatan medis dalam wadah
atau kemasan terakhirnya dapat dilakukan dengan paparan radiasi pengion dalam
bentuk radiasi gamma dari sumber radioisotop yang sesuai seperti 60Co (kobalt 60)
atau elektron yang diberi energi oleh a akselerator elektron yang sesuai. Hukum dan
peraturan untuk perlindungan terhadap radiasi harus dihormati.

Radiasi gamma dan berkas elektron digunakan untuk mempengaruhi ionisasi

molekul dalam organisme. Mutasi kemudian terbentuk dalam DNA dan reaksi ini
mengubah replikasi. Proses ini sangat berbahaya dan hanya staf yang terlatih dan
berpengalaman yang harus memutuskan keinginan penggunaannya dan harus
memastikan pemantauan proses. Instalasi dan peralatan yang dirancang khusus dan
dibuat khusus harus digunakan.

Biasanya untuk memilih tingkat radiasi yang diserap 25 kGy1 (2.5 Mrad) 2,
meskipun tingkat lain dapat digunakan asalkan telah divalidasi.

1 kilogram

2 megarad

Dosis radiasi harus dipantau dengan dosimeter khusus selama seluruh proses.
Dosimeter harus dikalibrasi terhadap sumber standar pada saat diterima dari pemasok
dan pada interval yang sesuai setelahnya. Sistem radiasi harus ditinjau dan divalidasi
setiap kali bahan sumber diubah dan, dalam hal apapun, setidaknya setahun sekali.

Strain bioindikator yang diusulkan untuk validasi proses sterilisasi ini adalah:
spora Bacillus pumilus (misal ATCC 27142 atau CIP 77,25) dengan 25 kGy (2,5 Mrad)
dimana nilai D sekitar 3 kGy (0,3 Mrad) menggunakan 107-108 spora per indikator;
untuk dosis yang lebih tinggi, spora Bacillus cereus (misalnya SSI C 1/1) atau Bacillus
sphaericus (misalnya SSl C1A) digunakan.
Sterilisasi gas

Bahan aktif dari proses sterilisasi gas dapat berupa etilen oksida atau zat lain
yang sangat mudah menguap. Sifat bahan yang sangat mudah terbakar dan berpotensi
meledak dari bahan-bahan tersebut adalah suatu kerugian kecuali jika dicampur dengan
gas lembam yang sesuai untuk mengurangi sifat-sifatnya yang sangat toksik dan
kemungkinan residu beracun yang tersisa dalam bahan yang diolah. Keseluruhan proses
sulit untuk dikontrol dan hanya boleh dipertimbangkan jika tidak ada prosedur
sterilisasi lain yang dapat digunakan. Ini hanya boleh dilakukan di bawah pengawasan
staf yang sangat terampil.

Efisiensi sterilisasi etilen oksida bergantung pada konsentrasi gas, kelembapan,

waktu pemaparan, suhu, dan sifat muatan. Secara khusus, perlu dipastikan bahwa sifat
pengemasan sedemikian rupa sehingga pertukaran gas dapat berlangsung. Penting juga
untuk menjaga kelembapan yang cukup selama sterilisasi. Catatan konsentrasi gas serta
suhu dan kelembaban harus dibuat untuk setiap siklus. Kondisi sterilisasi yang sesuai
harus ditentukan secara eksperimental untuk setiap jenis muatan.

Setelah sterilisasi, waktu harus diberikan untuk menghilangkan sisa bahan

sterilisasi dan residu mudah menguap lainnya, yang harus dikonfirmasi dengan
pengujian khusus.

Karena sulitnya mengontrol proses, efisiensi harus dipantau setiap kali

menggunakan strain bioindikator yang diusulkan: spora Bacillus subtilis (misalnya var.
Niger ATCC 9372 atau CIP 77.18) atau Bacillus stearothermophilus, (misalnya ATCC
7953 atau CIP 52.81). Jumlah spora yang sama harus digunakan seperti untuk
"Pemanasan dalam autoclave" dan "Sterilisasi dengan panas kering".
 C. Validasi Proses Sterilisasi

Validasi yang sesuai pada proses sterilasi atau pada proses aseptik memerlukan tingkat
pengetahuan yang tinggi pada bidang teknologi sterilsasi dan ruang bersih. Agar dapat
memenuhi batasan parameter sterilisasi yang berlaku dan dapat diterima serta dapat dicapai,
perlu menggunakan iperalatan dan perlengkapan yang sesuai untuk pengendalian parameter
kritis seperti suhu dan waktu, kelembaban, kadar gas pensteril, atau radiasi yang diserap. Aspek
yang penting dalam program validasi dalam baerbagai prosedur sterilisasi meliputi penggunaan
indikator biologik seperti tertera pada Indikator Biologik untuk Sterilisasi . Proses yang telah
divalidasi dan disertifikasi harus divalidasi ulang secara berkala, tetapi program validasi ulang
tidak perlu seluas program awal.

Program validasi khusus, seperti diuraikan di bawah ini, dirancang untuk otoklaf, tetapi
prinsipnya dapat berlaku untuk prosedur sterilisasi lainnya yang akan dibahas pada bagian
informasi ini. Program meliputi beberapa tahap, yaitu:

Tahapan kualifikasi instalasi Tahap ini ditujukan untuk menjaga agar alat kendali dan alat
lainnya dirancang dan dikalibrasi dengan tepat. Dokumentasi harus didimpan dalam berkas,
yang menunjukkan kualitas peralatan dari hal-hal yang dibutuhkan, seperti uap air, air, dan
udara.

Tahap kualifikasi operasional Tahap ini ditujukan untuk memastikan fungsi bejana kosong
dalam parameter suhu pada semua lokasi ruang utama yang tertera dalam protokol. Biasanya
diperlukan untuk

membuat rekaman tentang profil peningkatan panas, yaitu suhu simultan di dalam ruang
otoklaf ysng dilengkapi dengan sensor suhu ganda. Rentang suhu khas dalam bejana kosong
yang dapat diterima adalah lebih kurang 1o, jika suhu dalam bejana tidak kurang dari 121o.

Tahap konfirmasi Tahap ini dalam program validasi merupakan sterilisasi dari bahan.
Penetapan ini memerlukan penggunaan alat sensor suhu yang dimasukkan ke dalam contoh
bahan, dan juga ke dalam contoh yang sebelumnya sudah dicemari mikroba uji dengan kadar
yang sesuai, atau indikator biologik terpisah dalam konfigurasi otoklaf yang terisi penuh dan
siap operasional. Efektifitas penyebaran atau penetrasi panas ke dalam bahan aktual dan waktu
pemaparan merupakan dua faktor utama yang menentukan daya mematikan dalam proses
sterilisasi.
Tahap akhir Tahap akhir program validasi memerlukan dokumentasi data penunjang yang
dikembangkan untuk pelaksanaan program.

Secara umum dapat diterima bahwa bahan steril yang dapat disuntikkan atau alat tertentu yang
harus steril, jika diproses dalam otoklaf, mencapai suatu probabilitas 10 -6 mikroba yang
bertahan hidup, yaitu suatu jaminan yang menyatakan bahwa terdapat kemungkinan kurang
dari 1 dalam 1 juta mikroba viabel dalam bahan atau sediaan yang telah disterilkan. Terhadap
bahan tahan panas, sering dlakukan sterilisasi melebihi waktu kritis yang diperlukan untuk

mencapai 10-6 mikroba yang bertahan hidup (lewat musnah). Bagaimanapun juga, untuk bahan
yang rusak bila terpapar panas berlebihan, penerapan pendekatan lewat musnah ini tidak tepat.
Untuk hal ini, pengembangan siklus sterilisasi sangat tergantung pada diketahuinya beban
mikroba produk, berdasarkan atas pengujian mencangkup jangka waktu yang sesuai terhadap
sejumlah tertentu bets produk yang sebelum telah disterilkan.

Nilai D adalah adalah waktu (dalam menit) yang diperlukan untuk mengurangi populasi
mikroba sejumlah 90% atau 1 log siklus (1/10 bagian yang hidup) pada suhu tertentu. Jadi bila
nilai D suatu indikator biologik, umpamanya spora Bacillus stearothermophillus adalah 1,5
menit pada parameter proses total, misalnya pada suhu 121°, jika perlakuan dilakukan selama
12 menit pada kondisi yang sama, maka dapat dinyatakan bahwa masukan letal adalah 8D.
Efek penggunaan masukan ini bagi produk tergantung pada bahan mikroba awal. Andaikata
resistensi terhadap sterilisasi setara dengan indikator biologik, jika beban mikroba produk
bersangkutan adalah 102, maka masukan letal seharga 2D akan menghasilkan suatu beban
mikroba sebesar 1 (10° teoritis), dan harga 6 D selanjutnya akan menghasilkan probabilitas 10 -
6 mikroba hidup terhitung. (Pada kondisi yang sama, suatu masukan

letal 12D dapat digunakan pada pendekatan lewat musnah khusus). Pada umumnya probabilitas
mikroba hidup yang dicapai untuk bahan pada siklus sterilisasi yang validasi tidak seluruhnya
berhubungan dengan yang mungkin terjadi pada indikator biologik. Jadi untuk penerapan
validasi adalah penting bahwa resistensi indikator biologik lebih besar daripada beban mikroba
alami yang terdapat di dalam bahan yang disterilkan. Untuk itu perlu dibuat suatu asumsi
keadaan terburuk dan menganggap beban mikroba seakan-akan resistensinya terhadap panas
setara dengan indikator biologik, walaupun sulit diterima bahwa isolat beban mikroba khas
yang paling resisten akan menunjukkan suatu resistensi terhadap panas sebesar yang
ditunjukkan oleh spesies ini, sering kali digunakan sebagai indikator biologik untuk sterilisasi
uap. Pada contoh diatas, suatu siklus 12 menit dapat dianggap cukup untuk sterilisasi jika
produk bersangkutan memiliki beban mikroba 10 2. Walaupun demikian, jika indikator pada
awalnya mengandung 106 mikroba, pada hakekatnya dapat diperkirakan suatu probabilitas 10-
2 mikroba hidup; yaitu 1 dari 100 indikator biologik dapat menghasilkan hasil positif. Situasi
seperti ini dapat dihindari dengan memilih indikator biologik yang sesuai. Sebagai alternatif
dapat digunakan indikator yang mengandung mikroba dalan jumlah yang tinggi, berdasarkan
suatu pengurangan bilangan yang dapat diterima pada penetapan awal.

Nilai D untuk sediaan Bacillus stearothermophilus yang ditetapkan atau diverifikasi untuk
kondisi ini harus ditetapkan ulang jika suatu program validasi tertentu diganti. Penetapan kurva
yang hidup (seperti tertera pada Indikator Biologik untuk Sterilisasi <1321>), ataupun yang
disebut dengan pendekatan siklus berfraksi dapat digunakan untuk menetapkan nilai D
indikator biologik yang diinginkan untuk prosedur sterilisasi tertentu. Pendekatan siklus
berfraksi dapat juga digunakan untuk mengevaluasi resistensi dari beban mikroba. Siklus
berfraksi dapat dikaji baik untuk pengurangan angka mikroba maupun untuk pencapaian fraksi
negatif. Angka ini dapat digunakan untuk menetapkan letalitas proses pada kondisi produksi
yang memenuhi syarat untuk menetapkan siklus sterilisasi yang sesuai. Indikator biologik yang
sesuai seperti sediaan Bacillus stearothermophilus dapat digunakan selama sterilisasi rutin.
Tiap metode beban mikroba untuk jaminan sterilitas memerlukan pengamatan yang cukup
terhadap resistensi mikroba dari bahan untuk menemukan tiap perubahan, sebagai tambahan
pada pengamatan berkala dari ketetapan lainnya.
 DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2020. Farmakope Indonesia, Edisi VI. Departemen Kesehatan Republik Indonesia.
Jakarta.

Ansel, H.C., Popovich, N.G., Allen, L.V., 2011, Pharmaceutical Dosage Form and Drug
delivery System Ninth Edition, London, New York