ANALISA COLIFORM METODE MPN

METODE MPN

 MPN merupakan suatu metode untuk menghitung jumlah mikroba dengan menggunakan media
cair dalam tabung reaksi yang pada umumnya setiap pengenceran menggunakan 3 atau 5 seri
tabung dan perhitungan yang dilakukan merupakan tahap pendekatan secara statistik
 Tahapan penetapan :

- Uji Penduga (presumtive test)

- Uji Penegas
- Uji pelengkap (TPC dengan media selektif dan uji IMVIC)
PROSEDUR KERJA
 PRINSIP ANALISA

 Inkubasi bakteri coliform (kelompok bakteri coli) dilakukan pada suhu 37 oC

sedangkan Eschericia Coli dilakukan pada suhu 44 o C
 Media yang digunakan dalam pengujian :

- lactose broth/LTSB
- BGLB
- Media spesifik atau diferensial : Mac conkey agar, EMBA, CCA, TBX dll
 INTERPRETASI DATA DAN PERHITUNGAN

 Tabung positif ditunjukkan oleh adanya pertumbuhan bakteri dan gas (SNI
2332.9:2001).
 Jumlah positif dibaca pada tabel MPN
 Melakukan perhitungan dengan rumus

jumlah bakteri = angka mpn x 1/pengenceran tengah

CONTOH SOAL PERHITUNGAN MPN

Pada suatu analisa mpn diperoleh data untuk 3 seri tabung seperti pada gambar di atas. Hitungan angka MPN dari bakteri!
Jawab : hasil positif : 3 2 1
angka MPN pada tabel : 150

jumlah bakteri/ml = 150 x 1 /10-2

= 15000 cfu/ml
CONTOH SOAL DAN PEMBAHASAN

Pengenceran 101 100 10-1

Tabung 1 Timbul gas Timbul gas Timbul gas

Berikut ini data yang dihasilkan dari uji bakteri pada air sumur menggunakan
Tabung 2
metode MPN (Most Probable
Timbul gas
Number) dengan
Timbul gas
3 seri tabung :
Tidak ada gas

Hitunglah jumlah bakteri pada sampel tersebut per 100 ml sampel Tabung 3 Timbul gas Timbul gas Tidak ada gas

Jawab :
Pengamatan tabung positif adalah : 3 3 1
Angka MPN : 460
Jumlah bakteri = angka MPN x 1/faktor pengenceran tengah
= 460 x 1
= 460 cfu / ml
= 46.000ml/100ml
TABEL MPN 3 SERI TABUNG
UJI BIOKIMIA (UJI IMVIC-INDOL METIL VOGES-
PROSKAUER CITRATE)

(+) cincin merah

Indol
muda

MR (+) merah

IMVIC (+) warna merah

muda eosin
VP
sampai merah
delima (ruby

citrate Hijau mejadi biru

 UJI INDOL

•Identifikasi mikroba yang menguraikan indol dari tryptofan

•Reagens bereaksi dengan indol dan menghasilkan senyawa yang tidak larut dalam air dan berwarna merah pada permukaan medium
 PROSEDUR ANALISA

1 lop ose biakan

Inkubasi pada
inokulasikan + pereaksi indol
suhu 35oC selama
pada tryptone 2-3 tetes
18-24 jam
broth

Amati
perubahand yang Kocok 10 menit
terjadi
 UJI METIL RED

 membedakan antara organisme yang mampu mengubah glukosa menjadi piruvat.

 Kondisi asam dapat dideteksi dengan indikator MR yang menghasilkan warna merah
 PROSEDUR ANALISA

1 lop ose biakan

Inkubasi pada
inokulasikan pada + pereaksi Metyl
suhu 35oC selama
perbenihan MR- Red 5 ml
48 jam
VP

Amati perubahan Inkubasi lagi 72

yang terjadi jam
 UJI VOGES-PROSKAUER

 mengidentifikasi mikroorganisme yang melakukan fermentasi dengan hasil akhir 2,3 butanadiol
 Keberadaan acetoin dengan KOH dan alpha naphtol akan menghasilkan warna merah muda esoin atau merah delima
 PROSEDUR ANALISA

1 lop ose biakan Pindahkan 1 ml

Inkubasi 48 jam±
inokulasikan pada MR_VP ke tabung
2 jam pada suhu
perbenihan MR- 13 mm x 100 mm
35oC +1oC.
VP steril

+ 0,6 ml larutan
Amati perubahan
Kocok 2-4 jam alpha naphtol dan
yang terjadi
0,2 ml 40 % KOH
 UJI CITRATE

 melihat kemampuan mikroorganisme menggunakan sitrat sebagai satu satunya sumber karbon dan energi
 Penggunaan sitrat akan menghilangkan asam piruvat sehingga pH naik dan mengubah warna media dari tak
berwarna menjadi hijau sampai biru
 PROSEDUR ANALISA

Inokulasikan 1 lop
Inkubasikan pada
biakan murni
suhu 35oC selama
kedalam media
48-96 jam
Simmons Citrate.

Amati perubahan
yang terjadi
SIFAT SIFAT BAKTERI COLIFORM DENGAN UJI IMVIC