BAB III

METODOLOGI PRAKTIKUM
I.
Alat dan Bahan
a. Alat
1. Spektrofotometer UV-Visible dan cuvet
2. Tabung vacutest
3. Jarum suntik
4. Alkohol pads
5. Mikropipet
b. Bahan
1. Plasma darah (hindarkan hemolisis)
2. Reagen 1 (Reagen enzim) :
Tris buffer pH 7,5 100 mmol/L
L-Alanin 500 mmol/L
LDH (laktat dehidrogenase) 1200 U/L
3. Reagen 2 (Reagen pemula) :
2-oxoketoglutarat 15 mmol/L
NADH 0,18 mmol/L
II.
Prosedur Kerja
1. Lakukan pengambilan darah sebanyak 3 mL (hindari hemolisis) dan masukkan ke
dalam tabung vaccuutest kemudian disentrifugasi untuk mendapatkan plasmanya.
2. Campurkan sampel 200 L dengan reagen 1 1000 L lalu diinkubasi pada
temperatur 25/30oC, sampel 100 L dengan reagen 1 1000 L lalu diinkubasi
selama 5 menit pada temperatur 37oC.
3. Tambahkan reagen 2, masing-masing sebanyak 250 L.
4. Campurkan reagen dengan sampel, baca absorbansi pada panjang gelombang
365nm, setelah 1 menit dan pada saat yang sama, hitung waktu dengan stopwatch.
5. Baca lagi absorbansi dengan pasti setelah 1 menit, 2 menit dan 3 menit.
6. Lanjutkan perhitungan : A menit x 1765