Spionase tRNA prekursor: Nuclease dan Ligase yang unik

Reaksi splicing prekursor tRNA telah dilakukan secara rinci pada ragi Saccharomyces cerevisiae.
Keduanya dalam sistem splicing viro dan mekanisme splicing suhu-senstive di S. cerevisiae. Eksisi intron
dari prekursor tRNA ragi terjadi pada dua tahap (Gambar 10.24). Pertama, endonuclease spiral yang
terikat membran nuklir membuat dua luka tepat di ujung intron. Kemudian dalam rangkaian reuni yang
cukup kompleks, ligase splicing menggabungkan dua balok trNA untuk menghasilkan bentuk molekul
RNA yang matang. Sphecitifitas untuk reaksi ini berada pada tiga ciri struktur dimerional yang terbalik
dari prekursor tRNA, tidak dalam urutan nukleatida per se

Pembelahan prekursor tRNA menghasilkan gugus fosfat siklis tipe 5-OH termini dan 2'-3 'pada 3'
termini. Proses ligasi tahap ll benar-benar Melibatkan empat reaksi terpisah. (1) Reaksi pertama adalah
penambahan kelompok phsophate ke ujung 5'-OH; Reaksi ini membutuhkan aktivitas kinase dan fosfat
donor (ATP). (2) Kemudian, gugus fosfat 5 'diaktifkan oleh pengalihan kelompok AMP ke ujungnya dari
perantara AMP-ligase (AMP yang semula diturunkan dari ATP frea juga) (3) The 2'-3 'siklik siklik dibuka
dengan aktivitas fosfodiesterase cyrlic yang menghasilkan 2'fosfat dan a bebaskan 3 'hidroksil. (4) Reaksi
ligasi terakhir mempengaruhi Vii serangan nukleofilik dari 3'-OH bebas pada interior 5 'fosfat dengan
pelepasan AMP. keempat reaksi ini dikatalisis oleh ligase splicing.

Akhirnya kelompok fosfat 2 (tersisa dari fosfat siklik 2'3 'yang dihasilkan oleh rcaction clittage asli)
dikeluarkan oleh kegiatan enzim fosfat ke Modus two-stage keseluruhan dari tRNA intron excision appers
juga terjadi pada organisme lain. Sebenarnya, mekanisme tersebut mungkin melibatkan reaksi yang
sama di tanaman. Namun, pada mamalia, reaksinya tidak sama. Splicing masih terjadi dalam dua tahap,
namun reaksi ligasi tersebut nampak langsung bergabung dengan phth phytate phyph phytate 2'-3 'ke
ujung 5'-OH. Rincian proses penyambungan prekursor tRNA ini pada sel mamalia belum begitu jelas
seperti pada ragi.menghasilkan sifat molekul tRNA.

Autocatalytic Splicing dari prekursor rRNA Tetrahymena

Tema umum dalam, biologi adalah bahwa metabolisme terjadi melalui serangkaian reaksi enzim-
katalis. Selain itu, semua ini-Penting enzim umumnya protein, meskipun kadang-kadang polipeptida
tunggal dan kadang-kadang kompleks heteromultimers, yang kadang-kadang
memerlukan kofaktor nonprotein untuk menjalankan fungsinya. Oleh karena itu, ketika ikatan kovalen
diubah (dikeluarkan, dipindahkan, atau dibentuk), kita harapkan bahwa reaksi tersebut dikatalisis oleh
enzim. Dengan demikian, penemuan bahwa intron pada prekursor rRNA tetrahymena termofila
dikeluarkan tanpa keterlibatan protein apapun adalah quke yang mengejutkan kebanyakan ahli biologi.
Namun, sekarang jelaslah bahwa aktivitas splicing yang mengeluarkan intron dari dalamnya.

prekursor rRNA itu bersifat intrinsik terhadap molekul RNA itu sendiri. Selain itu, aktivitas self-
splicing atau autocatalytic semacam itu telah terbukti terjadi pada prekursor rRNA beberapa eukariota
yang lebih rendah dan sejumlah besar rRNA, prekursor rRNA dan mRNA pada mitokondria dan kloroplas
dari berbagai spesies.Dalam kasus banyak intron ini (yang disebut kelompok I intron) pada molekul
prekursor RNA, mekanisme splicing sendiri sama atau sangat mirip dengan prekursor rRNA Tetrahymena
yang dijelaskan selanjutnya. Untuk orang lain (disebut kelompok il intron). Mekanisme splicing sendiri
mirip dengan mekanisme splicing yang diamati prekursor mRNA nuklir (lihat bagian berikut) kecuali
bahwa hal itu tidak memerlukan aktivitas "spliceosome".

Eksisi autocatalytic intron pada prekursor rRNA Tetrahymena (dan kelompok lain I intron) tidak
memerlukan sumber energi eksternal (tidak ada ATP, dll) dan tidak ada protein. Sebaliknya, ini
melibatkan serangkaian transfer bond phosphoester tanpa ikatan yang hilang atau diperoleh dalam
proses. Reaksi tersebut memerlukan nukleosida guanin atau nukleotida dengan kelompok 3'-OH bebas
(GTP, PDB, GMP, atau guanosin semua pekerjaan) sebagai kofaktor ditambah kation monovalen dan
kation divalen. Persyaratan untuk abrolu G-3'-OH: tidak ada basa lain yang bisa diganti dengan
nukleosida atau kofaktor nukleotida. Intron ini dipotong dengan cara dua transfer ikatan fosfat dan
Intron yang dipotong akan kemudian disirkulasikan melalui transfer ikatan fosfester lain. Reaksi ini
ditunjukkan pada Gambar 10.25. sirkularisasi autokatalitik intron yang dieksisi menunjukkan bahwa
pemaknaan diri prekursor rRNA ini berada pada kondisi prima terutama jika tidak seluruhnya, di dalam
struktur intron itu sendiri.Mungkin aktivitas autokatalitik bergantung pada struktur sekunder intron atau
setidaknya struktur sekunder dari molekul prekursor RNA. Singkatan sekunder dari RNAS spiral ini harus
membawa kelompok reaktif ke dalam penjajaran yang dekat agar memungkinkan Transgen fosfester tran
terjadi. Karena transfer ikatan fosfester self-splicing berpotensi menjadi reaksi reversibel, degradasi cepat
dari eksitasi Intron atau ekspor rRNA yang disambung ke sitoplasma dapat mendorong penyambungan
ke arah depan.

Poin utamanya adalah bahwa reaksi penyambungan autocatalytic bersifat intramolekuler dan,
oleh karena itu, tidak bergantung pada konsentrasi. Selain itu, prekursor RNA mampu membentuk pusat
aktif di yang kofaktor guanosin-3-OH berikatan Jadi, situs katalitik tidak terbatas pada protein, tetapi juga
hidungnya bahwa tidak ada aktivitas katalitik trans seperti enzim, hanya aktivitas katalitik cis.