microbiology

METHODS FOR ISOLATION, IDENTIFICATION OF

ANAEROBIC BACTERIA, AND ANAEROBIC
BACTERIA CAUSING MYONECROSIS
KENAPA BISA TERJADI GAS GANGRENE (MYONECROSIS)?
• Adanya kontaminasi kotoran (material asing) pada lesi terbuka (fraktur
compound atau luka tembak peluru) yang merusak otot.

BAKTERI YANG BERPERAN DALAM TERJADINYA MYONECROSIS?

• Clostridium perfringens type A
penyebab utama gas gangrene (clostridium
myonecrosis)
• C. Novyi
• C. Septicum
• C. Histolyticum
• C. Bifermentans
• C. Soedelli

Selain itu ada juga beberapa clostridium yang ditemukan pada pasien myonekrosis,
namun dalam mekanisme pembentukan gas gangrene masih belum jelas. Yaitu:
• C. Tertium
• C. Fallax
• C. Sporogenes

BAGAIMANA DALAM PERKEMBANGAN LESI MENJADI MYONECROSIS?

Dalam perkembangannya, lesi selalu bersama dengan infeksi campuran. Selain itu:
• Beberapa bakteri fakultatif juga berperan membuat lingkungan yang cocok untuk
pertumbuhan clostridium (sehingga clostridium akan cepat berkembang biak, dan
menghasilkan banyak toxin).

RACUN APA YANG DIHASILKAN OLEH C.PERFRIGENS?

• Alpha
• Beta
• Gamma
• Delta
• Theta
• Lambda
• Enterotoxins

BAGAIMANA CLOSTRIDIAL MYONECROSIS BISA TERJADI?

Terjadi akibat kerusakan otot yang disebabkan oleh aksi “toxin protein ekstraseluler”
dari bakteri. Khususnya:
• Alpha toxin (Fosfolipase C)
dapat menembus serabut otot, membunuh semua
sel, termasuk sel inflamasi…. Dan menyebabkan area nekrosis (tempat bakteri
tumbuh)…. Dan pada saat tumbuh, bakteri itu memfermentasikan karbohidrat
otot menimbulkan gas (hidrogen-nitrogen insoluble)

yudaherdantoproduction
 microbiology
• Theta toxin (Cytolysin)
produksi theta toxin diikuti dengan kehabisan O2
(akibat aktivitas metabolik) dapat menyebabkan peningkatan permeabilitas
vaskular, yang selanjutnya dapat menyebabkan shock!

BAGAIMANA PEMERIKSAAN DALAM MYONECROSIS?

• Palpasi! Pada jaringan subkutan, gas dapat dirasakan.
• Radiografi!

APAKAH GAS GANGRENE BISA TERJADI DI UTERUS?

Bisa, gas gangrene bisa terjadi di uterus…. Biasanya akibat:
• Aborsi ilegal
Bisa juga diakibatkan oleh:
• Aborsi spontan
• Kelahiran per vaginal
• Sectio cesaria
• Amniocentesis

GENUS CLOSTRIDIUM
SIFAT?
• Non-Motil (C.Perfringens, C. Ramosum)

BENTUK VEGETATIF?
• Rod-Shape (bulat dengan ujung yang runcing atau tumpul)
• Straight-Shape
• Curved-Shape

SUSUNAN SEL & PANJANG CLOSTRIDIUM?

Susunan sel-nya, dari:
• Single
• Berpasangan
• Merantai
Dengan panjang yang bervariasi, dari:
• Short-coccoid rod
• Long filament form

CLOSTRIDIUM TERHADAP PENGECATAN GRAM?

• Gram +
biasa dilakukan pada fase pertumbuhan awal
• Gram -

☺ Setelah sehari didalam kultur (C.Ramosum, C.Clostridioforme)
☺ Saat spora sudah terbentuk (C.Tetani)

yudaherdantoproduction
 microbiology
TOXIN YANG DIHASILKAN CLOSTRIDIUM?
Sedikitnya ada 5 tipe toxin, dengan toxin paling penting adalah tipe α dengan
fungsi:
☺ Merupakan fosfolipase
☺ Menyebabkan myonekrosis
☺ Aktif terhadap membran sel otot, Leukosit, & Platelet
Produk toxin dari beberapa bakteri clostridium, adalah:
• C. Perfringens Tipe B
☺ Memproduksi alfa-toxin
☺ Memproduksi beta-lethal (hemolisis)
☺ Memproduksi epsilon-toxin (hemolisis)
• C. Perfringens Tipe E
☺ Memproduksi alfa-toxin
☺ Memproduksi Iota-toxin
• Selain itu juga ada produk seperti:
☺ Kappa-toxin (kolagenase)
☺ Lambda-toxin (protease)
☺ Mu-toxin (hyaluronidase)
☺ Enterotoxin (merubah permeabilitas epitel intestine)

APA SAJA PENYAKIT YANG DISEBABKAN CLOSTRIDIUM YANG

MENIMBULKAN GAS GANGRENE?
• Myonecrosis
☺ Disebabkan oleh C. Perfringens
☺ Dapat ditemukan di spesimen klinik manusia kecuali feses
• Cellulitis
☺ Disebabkan oleh C. Perfringens
☺ Menyebabkan infeksi tanpa diikuti myonekrosis
☺ Terdapat crepitan selulitis yang disebabkan clostridia
☺ Dapat berkembang menjadi penyakit sistemik fulminan
• Infeksi Intraabdominal
☺ Disebakan clostridium dengan infeksi polimikrobial
☺ Infeksi ini meliputi:
 Intraabdominal abscess
 Septikemia pada pasien obstruksi
 Lesi perforasi ileum terminal / usus besar
• Enteritis Necroticans
☺ Disebabkan C. Perfringens tipe C (memproduksi beta-toxin)
☺ Memiliki karakteristik:
 Nekrosis iskemik usus halus
 Pada kasus berat, terdapat gas gangrene diseluruh usus
halus dengan perluasan ke proximal usus besar.

yudaherdantoproduction
 microbiology
BAGAIMANA PENGECATAN GRAM BAKTERI INI?
• C. Perfringens
Gram positif, Besar, Pendek.
• Jika spesimen didapat dari luka
pada bakteri tidak ditemukan kapsul…
• Apusan spesimen endometrial post-abortion
pada bakteri berkapsul…
• Pada luka dan abscess, jarang didapati sporulasi.

NB: Pengecatan khusus spora tidak memberi keuntungan untuk menentukan spora.

BAGAIMANA KULTUR TERHADAP BAKTERI INI?

• Agar darah Anaerobik
• Agar darah Phenyl Ethyl Alcohol (PEA)
inkubasi 1-2 hari
• Agar darah brucella 5% sheep
Nb: Karakteristik koloni berbeda-beda dalam tiap media

Nah, jika pada pemeriksaan kultur diatas tadi ditemukan positif clostridia, maka
dilanjutkan kultur dengan “Agar Egg Yolk”.

APA YANG DILAKUKAN SETELAH MELAKUKAN KULTUR?

• Pemeriksaan mikroskop kultur agar darah dan PEA! Amati:
☺ Pola hemolisis
☺ Struktur koloni (berkerumunan)
☺ Koloni yang motil
• Pemeriksaan mikroskop agar egg yolk! Amati:
☺ Lesitinase
diamati melalui perkembangan ketidaklarutan, opaque,
dan presipitat putih pada agar.
☺ Produksi lipase
diamati melalui tampakan minyak diatas air.
☺ Proteolisis
diamati melalui tampakan zona transluscent pada
medium disekitar koloni.

KLASIFIKASI CLOSTRIDIUM!
Ada 12 spesies yang diklasifikasikan berdasarkan “kemampuan menghidrolisis
gelatin”…
1. Proteolitik (mampu menghidrolisis gelatin)
• C. Perfringens
 Zona hemolisis
 Boxcar-shape rod
 Spora langka!
 Lesitinase positif…
 Tidak memproduksi indole
• C. Difficile
• C. Septicum
• C. Sporogenes
• C. Bifermentans
• C. Cadaveris

yudaherdantoproduction
 microbiology
2. Non Proteolitik (tidak bisa menghidrolisis gelatin)
• C. Butyricum (berbentuk oval, terletak di subterminal)
• C. Innocuum
• C. Ramosum (berbentuk bulat atau oval, terletak di terminal)
• C. Clostridioforme
• C. Tertium (tumbuh di agar darah Aerobik)
• C. Glikolikum
Untuk menentukan spesies dari klostridium dapat dilakukan pemeriksaan uji
biokimia, untuk mengetahui kemampuan memproduksi & menghidrolisis material, dan
memfermentasi karbohidrat.

EXPERIMENT!!!!!
SPECIMEN COLLECTION!
• Pengambilan spesimen
☺ Aspiration (perhatian! minimalisirkan kontak spesimen dengan O2)
☺ Irrigation (dengan salin non-bakteriostatik steril) + Aspiration
☺ Biopsy
• Daerah tempat pengambilan spesimen!
☺ Bone marrow (Aspirasi)
☺ Abscess (Aspirasi)
☺ Nasalis Sinus (Aspirasi)
☺ Uterus (Aspirasi)
☺ Fallopian Tube (Aspirasi / Biopsy)
☺ Lung (Aspirasi)
☺ Urine (Aspirasi suprapubic)
☺ Pleura (Thoracosyntesis)
• Gak boleh dilakukan, jika positif bakteri anaerob!
☺ Nasofaring swab
☺ Perineal swab
☺ Sputum
☺ Rectal swab
☺ Vaginal swab
☺ Urethral secretion
☺ Urine

PENGECATAN GRAM!
• Lakukan persiapan apusan dengan memfiksasi oleh ethanol 95%.
• Lakukan pengecatan dengan GRAM!
☺ Gram A (15 detik – 3 menit) + Cuci air
☺ Gram B (15 detik)
☺ Cuci air (15 detik)
☺ Gram C (dekolorisasi slide) + Cuci langsung
☺ Gram D (15 detik) + Cuci air + Keringkan
• Lakukan juga pengecatan terhadap kultur

yudaherdantoproduction
 microbiology
• Ditemukan bakteri anaerob bila pada pemeriksaan ditemukan bakteri polimorfik.
• Beberapa bakteri gram + dapat di-cat dengan gram negatif apabila apusan diambil
secarang langsung dari spesimen.

KULTUR PADA SPESIMEN!

• Kultur pada Agar Brucella (dengan darah)
☺ Pake loop steril, buat 2 lempeng pada agar brucella
☺ Beri antibiotik (Gentamicin & Metronidazole)
☺ Letakkan di anaerobic jar
☺ Inkubasi pada suhu 37oC selama 48 jam
Nb: Salah satu lempeng diinkubasi aerobik (sebagai kontrol)

• Kultur pada GAM (Gifu Anaerobic Medium) semisolid

☺ Disuplemen oleh Kanamycin 0,1 mg/ml
☺ Inkubasi pada 37oC selama 2-3 hari

Jika pada pemberian metronidazole, ditunjukkan hasil:

• Sensitif
maka banyak bakteri anerobik
• Resisten
bakteri anaerob mungkin resisten terhadap metronidazole (langka),
atau bisa jadi merupakan bakteri aerob.

Pada kultur anaerobik, harus dilakukan:

• Pengecatan gram
• Subkultur (inkubasi anaerobik)
• Lakukan uji biokimia & uji susceptibilitas antibiotik

TERAPI UNTUK BAKTERI ANAEROB!

• Heat treatment
☺ Panaskan tabung pada suhu 80oC dalam bak air selama 5 menit.
☺ Tambahkan 1 ml spesimen, diamkan 10 menit
☺ Dinginkan dengan air dingin
☺ Siap untuk diinokulasi ke media kultur.
• Alcohol treatment
☺ Tambahkan 1 ml spesimen pada screw cap tube
☺ Tambah ethanol absolut (95%) dengan volume yang sama
☺ Campurkan selama 1 jam
☺ Siap untuk diinokulasikan & subkultur ke media yang cocok.

Penting untuk isolasi pada

• C. Botulinum & C. Perfringens dari feses dan makanan
• Clostridium pada abscess

yudaherdantoproduction
 microbiology

Tentang Penulis
Nama:
Nama Dwi Yuda Herdanto
Nickname:
Nickname Yuda – Danto – Dantox
Agama:
Agama Islam
Jenis Kelamin:
Kelamin Laki-Laki
Golongan Darah:
Darah B
TTL:
TTL Yogyakarta, 27 Januari 1990
Alamat:
Alamat Jalan Prof. Dr. Soepomo 131 RT 35 RW 09
Warungboto UmbulharjoYogyakarta Indonesia
E-Mail:
Mail yuda27011990@yahoo.co.id ;
: yudaherdanto@gmail.com
HP + 62 8586 8 2727 87
Nomor HP:
Riwayat Pendidikan:
Pendidikan
• TK PEMBINA Yogyakarta
• TK TUNAS HARAPAN Sub Unit Dharma Wanita
Pertamina Pangkalan Susu, Sumatera Utara
• SD 2 Dharma Patra YKPP Pangkalan Susu, Sumatera
Utara
• SD Dharma Patra 1 YKPP Rantau, Aceh Timur
• SD GLAGAH 1 Yogyakarta
• SMP N 4 Yogyakarta
• SMAN 3 Yogyakarta
• UNIVERSITAS GADJAH MADA
[Fakultas KEDOKTERAN Program Studi PENDIDIKAN DOKTER]

yudaherdantoproduction